allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ Р ИСО 13720-2011 Мясо и мясные продукты. Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.

Обозначение:
ГОСТ Р ИСО 13720-2011
Наименование:
Мясо и мясные продукты. Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.
Статус:
Действует
Дата введения:
01.01.2013
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.120.10, 07.100.30

Текст ГОСТ Р ИСО 13720-2011 Мясо и мясные продукты. Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.

>

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ


НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТ Р исо

13720-гои


МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.

ISO 13720:2010 Meat and meat products — Enumeration of presumptive Pseudomonas spp. (IDT)

Издание официальное

Москва Стандартинформ 2014


ГОСТ РИСО 13720—2011

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

  • 1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности им. В.М. Горбатова» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИМП им. В.М. Горбатова» Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

  • 2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 226 «Мясо и мясная продукция»

  • 3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. № 943-ст

  • 4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 13720:2010 «Мясо и мясные продукты. Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.» (ISO 13720:2010 «Meat and meat products — Enumeration of presumptive Pseudomonas spp.»).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

  • 5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информаций об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2014

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

  • 1 Область применения

  • 2 Нормативные ссылки

  • 3 Термины и определения

  • 4 Сущность метода........................

  • 5 Приготовление разведений, питательных сред и реактивов

  • 6 Оборудование .........................

  • 7 Отбор проб...........................

  • 8 Подготовка проб........................

  • 9 Порядок проведения испытаний................

  • 10 Обработка результатов

  • 11 Оформление протокола испытаний

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

ссылочным межгосударственным стандартам

Библиография

ГОСТ Р ИСО 13720—2011

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Подсчет количества презумптивных Pseudomonas spp.

Meat and meat products. Enumeration of presumptive Pseudomonas spp.

Дата введения — 2013—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты, включая мясо птицы, и устанавливает метод подсчета количества презумптивных Pseudomonas spp.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ИСО 6887-1—1999 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений (ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions)

ИСО 6887-2—2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для подготовки мяса и мясных продуктов (ISO 6887-2:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products)

ИСО 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям (ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for microbiological examinations)

ИСО 11133-1 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 1. Общие правила по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории (ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory)

ИСО 11133-2 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 2. Практическое руководство по определению эффективности питательных сред (ISO/TS 11133-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением: презумптивные Pseudomonas spp. (presumptive Pseudomonas spp.}: Бактерии, образующие колонии на цефалотин-фуцидин натрия-цетримидном агаре (CFC агар) при температуре культивирования 25 °C и дающие положительную реакцию в тесте на наличие оксидазы при проведении исследования в соответствии с настоящим стандартом.

Издание официальное

4 Сущность метода

Метод основан на высеве определенного количества исходной суспензии, ее десятикратных раз-ведений на CFC агар и в последующем подсчете количества презумптивных Pseudomonas spp.

Посевы инкубируют при температуре 25 ’С в течение (44 ± 4) ч.

Наличие на агаре колоний презумптивных Pseudomonas spp. подтверждается тестом на оксидазу (оксидазоположительные).

Количество презумптивных Pseudomonas spp. в 1 г (см3) исследуемой пробы рассчитывается исходя из количества подтвержденных колоний на чашке с CFC агаром.

5 Приготовление разведений, питательных сред и реактивов

  • 5.1 Общие требования

Общие правила проведения лабораторных исследований должны удовлетворять требованиям ИСО 7218; подготовка и тестирование питательных сред — ИСО 11133-1 и ИСО 11133-2.

  • 5.2 Приготовление разведений

Десятикратные разведения готовят в соответствии с ИСО 6887-1 и ИСО 6887-2.

  • 5.3 Цефалотин-фуцидин натрия-цетримидин агар (CFC агар) [1]

    • 5.3.1 Основа среды

      • 5.3.1.1 Состав:

  • - желатин ферментативно гидролизованный......16,0 г;

  • - казеин ферментативно гидролизованный.......10,0 г;

  • - сульфат калия (K2SO4).................10,0 г;

  • - хлорид магния (MgCI2).................1.4 г;

-агар1...........................от 12,0 до 18,0 г;

  • - дистиллированная вода................ 1000 см3.

  • 5.3.1.2 Приготовление

    Компоненты или сухую готовую среду растворяют в дистиллированной воде при нагревании.

    При необходимости устанавливают pH среды (см. 6.4) так, чтобы после стерилизации его значение составляло 7,2 ± 0,2 при температуре 25 °C. Разливают основу питательной среды в колбы или флаконы соответствующего объема (см. 6.6) и стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) при температуре 121 °C в течение 15 мин.

    5.3.2 Растворы селективных добавок

    Растворы хранят при температуре (5 ± 3) °C не более 7 сут.

    5.3.2.1 Раствор цефалотина


  • 5.3.2.1.1 Состав:

цефалотина натриевая соль...............0.1 г;

дистиллированная вода.................100 см3.

  • 5.3.2.1.2 Приготовление

Натриевую соль цефалотина растворяют в дистиллированной воде и стерилизуют раствор путем фильтрования.

  • 5.3.2.2 Раствор фуцидина натрия

    5.3.2.2.1 Состав:

    фуцидин натрия.....................0.1 г;

    дистиллированная вода.................100 см3.


  • 5.3.2.2.2 Приготовление

Фуцидин натрия растворяют в дистиллированной воде и стерилизуют раствор путем фильтрования.

  • 5.3.2.3 Раствор цетримида

    5.3.2.3.1 Состав:

    цетримид2........................0,1 г;

    дистиллированная вода.................100 см3.


  • 5.3.2.3.2 Приготовление

Цетримид растворяют в дистиллированной воде и стерилизуют раствор путем фильтрования.

5.3.3 Готовая среда

  • 5.3.3.1 Состав среды

Объем, см3 Концентрация, мг/см3

Основа питательной среды (см. 5.3.1).........100

Раствор цефалотина (см. 5.3.2.1)............5

Раствор фуцидина натрия (см. 5.3.2.2).........1

Раствор цетримида (см. 5.3.2.3).............1

  • 5.3.3.2 Приготовление


В основу питательной среды, охлажденную на водяной бане (см. 6.3) до температуры (47 = 2) ’С, добавляют растворы ингибиторов и тщательно перемешивают.

  • 5.3.4 Приготовление чашек с CFC агаром

В стерильные чашки Петри (см. 6.8) разливают готовую среду примерно по 15 см3 и дают агару затвердеть.

Непосредственно перед применением среду в чашках подсушивают в соответствии с ИСО 11133-1.

Среду в чашках Петри хранят не более четырех недель при температуре (5 ± 3) °C.

  • 5.3.5 Определение эффективности питательной среды

Определение продуктивности и селективности среды проводят в соответствии с ИСО 11133-1. Эффективность CFC агара должна быть проверена по методам и критериям ИСО 11133-2.

  • 5.3.5.1 Определение продуктивности

Инкубация: при температуре 25 °C в течение (44 ± 4) ч.

Штаммы: Pseudomonas fluorescens WDCM 001153 или Pseudomonas flagi WDCM 001163.

Эталонная среда: трипказо-соевый агар (TSA).

Метод контроля: количественный.

Критерий: коэффициент продуктивности PR > 0,5.

  • 5.3.5.2 Определение селективности

Инкубация: при температуре 25 ’С в течение (44 ± 4) ч.

Штаммы: Escherichia со//WDCM 000133.

Метод контроля: количественный.

Критерий: полное ингибирование роста.

5.4 Реактив для определения оксидазы

  • 5.4.1 Состав:

N. N. N'. N' — тетраметил-р-фенилендиамин дигидрохлорид — 1,0 г; дистиллированная вода — 100 см3.

  • 5.4.2 Приготовление

Реактив растворяют в дистиллированной воде непосредственно перед применением. Могут быть использованы готовые (имеющиеся в продаже) диски или пластинки. В этом случае следуют рекомендациям изготовителя.

6 Оборудование

Используют следующее лабораторное оборудование для микробиологических исследований в соответствии с ИСО 7218, в частности:

  • 6.1 Термостат для сухой стерилизации или автоклав для влажной стерилизации.

  • 6.2 Термостат, поддерживающий температуру (25 ± 1) °C.

  • 6.3 Баня водяная, поддерживающая температуру (47 ± 2) °C.

  • 6.4 pH-метр с точностью измерения ± 0,05 единиц.

  • 6.5 Петли, изготовленные из платиново-иридиевого сплава или эквивалентные стерильные одноразовые петли.

  • 6.6 Пробирки, бутылки или колбы необходимого объема.

  • 6.7 Пипетки градуированные, стерильные, вместимостью 1 см3, с ценой деления 0,1 см3 по [2] класса А или автоматические пипетки по [3], с использованием стерильных наконечников.

  • 6.8 Чашки Петри стеклянные или полимерные диаметром от 90 до 100 мм.

  • 6.9 Шпатели стеклянные или пластиковые, например шпатель стеклянный в форме хоккейной клюшки, диаметром 3,5 мм, длиной 200 мм, имеющий изгиб под прямым углом приблизительно 30 мм от одного конца, с оплавленными концами.

7 Отбор проб

Метод отбора проб не входит в настоящий стандарт. При отсутствии стандарта, описывающего отбор проб исследуемого продукта, пробы отбирают по специальному соглашению между заинтересованными сторонами.

Следует обеспечить условия, чтобы лаборатория получила пробы, которые были бы представительными и не были бы повреждены или изменены при транспортировании или хранении (см. ИСО 7218).

8 Подготовка проб

Подготовку проб к исследованию проводят в соответствии с ИСО 6887-1 и ИСО 6887-2 и/или по определенным стандартам, разработанным для рассматриваемых групп продукции, или по специальному соглашению между заинтересованными сторонами.

9 Порядок проведения испытаний

  • 9.1 Навеска, исходная суспензия и разведения

Приготовление исходной суспензии и ее десятикратных разведений проводят в соответствии с ИСО 6887-2.

  • 9.2 Посев и инкубация

    • 9.2.1 Для посева каждого разведения используют одну чашку с агаром и не менее двух последовательных разведений в соответствии с ИСО 7218.

При посеве только одного разведения используют не менее двух чашек Петри с агаром.

  • 9.2.2 0,1 см3 исходной суспензии вносят в чашку с CFC агаром (см. 5.3.4). В другую чашку с CFC агаром вносят 0,1 см3 из первого десятикратного разведения.

Эту процедуру повторяют с каждым из последующих десятикратных разведений, используя каждый раз чистую стерильную пипетку.

  • 9.2.3 Посевной материал растирают по поверхности агара шпателем (см. 6.9) до тех пор, пока его поверхность не станет сухой.

  • 9.2.4 Чашки с посевами инкубируют вверх дном в термостате (см. 6.2) при температуре 25 °C в течение (44 ±4)ч.

  • 9.3 Подсчет и отбор колоний

После инкубирования отбирают чашки, содержащие не более 150 колоний.

С каждой такой чашки произвольно отбирают не менее пяти колоний различных типов.

  • 9.4 Идентификация

    • 9.4.1 Оксидазный тест

Часть фильтровальной бумаги увлажняют оксидазным реактивом (см. 5.4.2). Затем на фильтровальную бумагу с помощью пластмассовой петли или петли из платиново-иридиевого сплава по 6.5 (никель-хромовая петля дает ложноположительные результаты) наносят отобранную колонию.

Если через 5—10 с фильтровальная бумага окрашивается в фиолетовый цвет, тест на оксидазу считается положительным.

Если в течение 30 с цвет фильтровальной бумаги не изменился, тест на оксидазу считается отрицательным.

Результаты подтверждают, используя положительные и отрицательные контрольные штаммы микроорганизмов. Примерами контрольных штаммов могут быть Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025 (положительный контроль), Escherichia coli WDCM 00013 (отрицательный контроль).

  • 9.4.2 Оценка результатов

Оксидазоположительные микроорганизмы оценивают как лрезумтивные Pseudomonas spp.

10 Обработка результатов

Обработку результатов проводят в соответствии с ИСО 7218.

11 Оформление протокола испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

  • a) информацию, необходимую для полной идентификации образца;

  • b) метод исследования со ссылкой на настоящий стандарт;

  • c) полученные результаты;

  • d) все подробности проведения испытаний, не предусмотренные настоящим стандартом или считающиеся необязательными, но которые могут повлиять на результат.

Приложение ДА (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов ссылочным межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

ИСО 6887-1

ИСО 6887-2

«

ИСО 7218

ЮТ

ГОСТ ISO 7218—2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям»

ИСО 11133-1

ЮТ

ГОСТ ISO 11133-1—2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории»

ИСО 11133-2

ют

ГОСТ ISO 11133-2—2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культурапьных сред»

* Соответствующий национальный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Примечание — В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:

- ЮТ — идентичный стандарт.

Библиография

  • [1] MEAD. G.C., ADAMS. B.W. A selective medium for the rapid isolation of pseudomonads associated with poultry meat spoilage. Br. Poult. Sci. 1977,18. pp. 661—670

  • [2] ИСО 835 Посуда лабораторная стеклянная. Мерные градуированные пипетки (ISO 835 Laboratory

glassware — Graduated pipettes)

(3| ИСО 8655*2 Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 2. Пипетки, приводимые в действие поршнем (ISO 8655-2 Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: Piston pipettes)

УДК 637.5.075:006.034 ОКС 67.120.10 Н19 ОКСТУ 9209

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, мясо птицы, презумптивные Pseudomonas spp., CFC агар, оксидазный тест

Редактор И.В. Алферова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка ОД. Черепковой

Сдано в набор 23.12.2013. Подписано в печать 15.01.2014. Формат 60x84%. Гарнитура Ариал. Усл. печ. л. 1,40. Уч.-иэд. л. 0.95. Тираж 163 экз. Зак. 36.

Издано и отпечатано во , 123995 Москва. Гранатный пер.. 4.

1

Используемая масса зависит от прочности агарового геля.

2

Смесь состоит в основном из тетрадецилтриметиламмония бромида с небольшим количеством додецил-триметиламмония бромида и цетримония (гексадецилтриметиламмония) бромида.

3

Справочный каталог штаммов, доступный на http://www.wfcc.ntg.ac.jp/WDCM Reference Strain Catalogue, для информации о коллекции культур ряда штаммов и детали контактов.

Допускаются к использованию и другие штаммы указанных в настоящем стандарте видов микроорганизмов с аналогичными свойствами.