allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ 33808-2016 Мясо и мясные продукты. Определение лимонной кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Обозначение:
ГОСТ 33808-2016
Наименование:
Мясо и мясные продукты. Определение лимонной кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2018
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.120.10

Текст ГОСТ 33808-2016 Мясо и мясные продукты. Определение лимонной кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

33808—

2016

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение лимонной кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Издание официальное

Москва

Стенда ртмнформ 2016

ГОСТ 33808—2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандарт тизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосудар-ственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, при» нятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности имени В.М. Горбатова» (ФГБНУ «ВНИИМП им. В.М. Горбатова»)

2    8НЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июля 2016 г. Не 89-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166] 004-9?

Код страны

по МК (ИСО 3166)004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

8Y

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

К2

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстакдарт

Россия

RU

Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 3 октября 2016 г. № 1300-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33808—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2018 г.

5 8ВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе «Национальныестандарты», а текст изменений и поправок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе *Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандартне может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 33808—2016

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение лимонной кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Meat and meat products. Determination of citnc actd uainghigh performance liquid chromatography

Дата введения — 2018—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо, включая мясо птицы, субпродукты, мясные и мясосодержащие продукты, и устанавливает метод определения массовой доли лимонной кислоты и цитратов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в ультрафиолетовой (УФ) области спектра.

Диапазон измерений массовой доли лимонной кислоты и ее солей составляет от 0.1 г/100 см3 до 3,0г/100смэ.

2 Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты.

ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие тре-бования

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79* Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76*1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИС0 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ISO 3696—2013** Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы конт*

роля

ГОСТ 4025—95 Мясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ4198—75 Реактивы. Калий фосфорнокислый одноэамещенный. Технические условия

* 8 Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробвзопвсность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

'• 8 Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501—2006 (ИСО 3696:1987) «вода для лабораторного анализа. Технические условия».

Издание официальное

1

ГОСТ 33808—2016

ГОСТ ИСО 5725-2—2003* Точность (правильностей прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ ИСО 5725-6—2003** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 6552—80 Реактивы. Кислота ортофосфоркая. Технические условия

ГОСТ 6709—72 вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ7269—79 Мясо. Методы отбора образцов иорганолептические методыопределениясевжести

ГОСТ 7702.2.0—95 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ 9792—73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 20469—95 Электромясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26272—98Часы электронно-механические кварцевые наручные и карманные. Общие технические условия

ГОСТ 26678—85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    супернатант: Жидкость, располагающаяся над твердым слоем (осадком, седименгом) после центрифугирования пробы.

3.2    гомогенат: Однородная (гомогенная) смесь пробы с экстрагирующим раствором, полученная после механического измельчения пробы на гомогенизаторе.

4    Сущность метода

Метод основан на экстракции лимонной кислоты и ее солей из гомогенизированной пробы раствором трихлоруксусной кислоты, центрифугировании с осаждением белков и последующем ВЭЖХ анализе в ультрафиолетовой (УФ) области спектра. Идентификацию лимонной кислоты и ее солей осуществляютло абсолютному времени удерживания, амассовуюдолюопределяют по площади хроматографического пика анализируемого образца, сопоставляя с ликом образца сравнения заведомо известной концентрации.

5    Требования безопасности

5.1 При подготовке и проведении испытаний необходимособлюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами поГОСТ 12.1.007.

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного методе измерений».

’* В Российской Федереции действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Честь 6. Использование значений точности на практике»

2

ГОСТ 33808—2016

5.2    Помещение, в котором проводятся испытания, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.3    При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

6 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы

и реактивы

Хроматограф высокоэффективный жидкостный, укомплектованный:

•    детектором УФ. обеспечивающим измерения при длине волны 365 нм. с относительной погрешностью спектрофотометрического определения не более *2 % с пределом определения не менее 0,1 г/100 см3 по лику лимонной кислоты;

•    иэократичвским насосом;

•    хроматографической колонкой для ВЭЖХ длиной 50—150 мм и диаметром 2.1—4.6 мм с обращенной фазой С18 размером частиц 1,8—5.0 мкм, имеющей эффективность не менее 5000 теоретических тарелок по пику лимонной кислоты;

•    блоком термостатироеания колонок с поддержанием температуры 30 *С с точностью *0,1 *С;

•    записывающим устройством с компьютерным управлением и автоматической программой обработки хроматографических данных.

Весы неавтоматического действия лоГОСТ OIML R 76-1 специального или высокогокласса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,001 г.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469.

pH-метр со стеклянным и хлорсеребряным электродами (или комбинированным стеклянным электродом) с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 ед. pH.

Гомогенизатор лабораторный с частотой вращения ротора не менее 10000 об/мин.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

Баня ультразвуковая лабораторная с регулятором времени.

Часы электронно-механические ло ГОСТ 26272.

Центрифуга лабораторная с центробежным ускорением 4000 д.

Банки стеклянные вместимостью 250—500 см3 с крышкой.

Пипетки градуированные 1-2-1-5,1-2-1-10 по ГОСТ 29227 или дозаторы автоматические с переменным объемом дозирования 5 см3 и 10 см3 и относительной погрешностью дозирования не более ±1 %.

Пробирки центрифужные из полипропилена вместимостью 50 см3.

Фильтр мембранный из политетрафторэтилена с диаметром пор 0.45 мкм.

Колбы мерные 2-50-2.2-100-2.2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Флаконы — виалы хроматографические из темного стекла вместимостью 2.0 см3.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198. х. ч.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552. х. ч.

Кислота трихлоруксусная с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

Кислота лимонная с содержанием основного вещества не менее 99,5 %.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб проводят ло ГОСТ 7269. ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 9792.

7.2    Пробу измельчают, дважды пропуская через мясорубку с диаметром отверстий решетки 2—4 мм. и тщательно перемешивают.

з

ГОСТ 33808—2016

7.3 Подготовленную пробу помещаютвстеклянную банку вместимостью 250—500см3, закрывают крышкой и хранят при температуре {4 ±2) *С до окончания анализа.

Допускается хранить подготовленную пробу в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 *С не более 7 сут.

8    Подготовка к анализу

8.1    Приготовление растворов

8.1.1    Приготовление градуировочных растворов

Для определения лимонной кислоты и ее солей готовят градуировочные растворы лимонной кис-лоты массовой долей: 1.0 г/100 см3 (раствор 1); 0.5 г/100 см3 (раствор 2): 0.2 г/100 см3 (раствор 3): 0.1 г/100 см3(раствор 4); 0.05 г/100 см3(раствор 5).

Для приготовления раствора 1 взвешивают 1.00 г лимонной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 99 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до лолно-го растворения.

Для приготовления раствора 2 градуированной пипеткой отбирают 10 см3 раствора 1. переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и разбавляют 10 см3 дистиллированной воды.

Для приготовления раствора 3 градуированной пипеткой отбирают 10см3 раствора 1. переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят объем до метки дистиллированной водой.-

Для приготовления раствора 4 градуированной пипеткой отбирают 5 см3 раствора 1. переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Для приготовления раствора 5 градуированной пипеткой отбирают 10см3 раствора 4. переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и разбавляют 10 см3 дистиллированной воды.

Растворы готовят перед использованием.

8.1.2    Приготовление 2 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты

Взвешивают 2.0 г трихлоруксусной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. растворяют в дистиллированной воде, доводят объем водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре не более 1 мес.

8.1.3    Приготовление подвижной фазы хроматографической системы

В качестве подвижной фазы используют фосфатный буферный раствор с pH - б.Оед. pH (фосфатный буфер).

Для приготовления фосфатного буфера взвешивают 13.6 гфосфорнокислого калия однозамещен-ного. растворяют в дистиллированной воде, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. С помощью градуированной пипетки добавляют по каплям ортофосфорную кислоту, доводя pH доб.О ед. pH.

Перед использованием раствор дегазируют на ультразвуковой бане в течение 10—15 мин.

Готовый раствор хранят в колбах с притертыми пробками при комнатной температуре не более 7 сут.

8.2 Приготовление экстракта пробы

Пробу массой 10 г взвешивают с записью результата до второго десятичного знака, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, добавляют 30 см3 2 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты и гомогенизируют. Гомогенат выдерживают на ультразвуковой бане при температуре 20 вС в течение 15 мин. а затем центрифугируют 5 мин с центробежным ускорением 4000 д. Полученный супернатант пропускают через мембранный фильтр с диаметром лор 0.45 мкм в хроматографическую еиалу вместимостью 2 см3.

9    Проведение анализа

9.1    Условия проведения и выполнение анализа

9.1.1    Условия проведения анализа

Условия проведения анализа подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа и хроматографической колонки.

ГОСТ 33808—2016

Например, для жидкостного хроматографа с обращенно-фазной хроматографической колонкой С184.6х 150 мм. 5мкм применяют следующие хроматографические условия: элюирование проводят в иэократических условиях в течение 15 мин: состав элюента: фосфатный буфер (pH - 6.0 ед. pH); скорость подачи элюента — 0.8см3/мин; температура колонки — 30 *С; длина волны детектирования — 365 нм.

9.1.2    Выполнение анализа

0.02 см3 экстракта анализируемой пробы вводят в подготовленный к работе жидкостный хроматограф.

9.2    Идентификацию пиков хроматограммы анализируемой пробы проводят сравнением с хроматограммой градуировочного раствора по двум параметрам: времени удерживания и спектральному отношению ft (отношение высот хроматографического пика на разных длинах волн — 210,254.280.320. 365 нм).

9.3    Если время удерживания и спектральные отношения пиков хроматограммы анализируемой пробы совпадают в пределах допускаемых отклонений (Aft £0.05. Afft £3 %) с временем удерживания и спектральными отношениями соответствующих им пиков хроматограммы градуировочного раствора, результат идентификации считают положительным.

9.4    Если спектральные отношения совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница времени удерживания пиков хроматограммы анализируемой пробы и хроматограммы градуировочного раствора больше допускаемого отклонения, проводят хроматографический анализ соответствующего градуировочного раствора по 9.1 и сравнивают время удерживания. В случае совпадения в качестве образца используют новую хроматограмму.

8 случае повторного несовпадения времени удерживания используют метод добавок, для чего к анализируемой пробе добавляют лимонную кислоту с массовой долей, сравнимой с массовой долей «сомнительных» пиков, и анализируют по 9.1.

Если на хроматограмме пробы с добавкой площади «сомнительных» пиков увеличились на величину. соответствующую величине добавки, то эти пики относятся копрвделяемым компонентам.

Если на хроматограмме пробы с добавкой наряду с «сомнительными» пиками присутствуют пики, время удерживания и спектральные отношения которых совпадают с соответствующими параметрами добавленных веществ, то сомнительные пики не относятся к определяемым компонентам.

9.5    Если время удерживания соответствующих пиков хроматограммы анализируемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница спектральных отношений больше допускаемого отклонения, настоящий метод не применим к данной пробе.

9.6    Массовая доля лимонной кислоты и ее солей в анализируемой пробе не должна превышать предельных значений массовой доли градуировочных растворов.

8 случае превышения анализируемую пробу, содержащую лимокнуюкислотуиее соли, с помощью автоматического дозатора разбавляют дистиллированной водой и проводят хроматографический анализ разбавленных растворов.

Если массовая концентрация лимонной кислоты и ее солей в анализируемой пробе ниже предельного значения градуировочного раствора, необходимо увеличить массу пробы, но не более чем в два раза.

10 Обработка результатов

10.1    8 соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, создают таблицу пиков с использованием программного обеспечения хроматографа. Расчеты площади пиков и массовой доли лимонной кислоты выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

10.2    Массовую долю лимонной кислоты Х^.г/100 см3, вычисляют по формуле

V -Ссг-УЧ    (1)

где Сст — массовая доля лимонной кислоты в градуировочном растворе, г/100 см3;

S

ГОСТ 33808—2016

Sx — площадь пика лимонной кислоты в анализируемой пробе, уел. ед.;

Vp — объем экстрагирующего раствора, см3:

SCT — площадь пика лимонной кислоты е градуировочном растворе, уел. ед.; т — масса анализируемой пробы, г.

10.3    Массовую долю цитратов Х2, г/100 см3, вычисляют по формуле

Х2=Х, К,    (2)

гдеХ, — массовая доля лимонной кислоты, г/100 см3:

К — коэффициент пересчета содержания лимонной кислоты на цитраты (для цитрата натрия К-1.343; для цитрата калия К- 1.594; для цитрата кальция К-1.239).

10.4    За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если удовлетворяются условия повторяемости (сходимости). Числовое зна* чение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности, содержащее не более двух значащих цифр.

11 Метрологические характеристики

11.1 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р-0.95 приводе* ны в таблице 1.

Таблице 1

Наименование определяемого показателя

Диапазон измерений массовой доли лимонной кислоты,Ч

Показатели точности

Границы относительной погрешности i it. Ч

Предел

повторяемости

(сходимости)

Ч

Предел

воспроизводимости

Я»™-*

Массовая доля лимонкой кислоты и цитратов

От 0.1 до 3.0 еключ.

15

12

20

11.2 Расхождение между результатами двух параллельных измерений, выполненных одним one* ратором при испытании одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, недолжно превышать предела повторяемости (сходимости)г01н. значения которого приведены в таблице 1.

J*i - *2! S'om.

(3)

где х, и х2 — результаты двух параллельных измерений. %;

'о™ — предел повторяемости. %.

11.3 Расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух разных лаборатори* ях. не должно превышать предела воспроизводимости Яоти, значения которого приведены в таблице 1.

IX.-jysfl^.    (4)

гдеХ, иХ2 — результаты двух измерений, выполненных в разных лабораториях. %;

R01H — предел воспроизводимости. %.

11.4 Границы относительной погрешности результатов измерений (±8), находящиеся с доверительной вероятностью Р - 0.95. при соблюдении условий настоящего стандарта, не должны превышать значений, приведенных в таблице 1.

6

ГОСТ 33808—2016

12 Контроль точности результатов измерений

12.1    Контроль стабильности результатов измерений (повторяемости, промежуточной прецизионности и погрешности) проводят в соответствии с порядком, установленным в лаборатории, по ГОСТ ИСО 5725*6 (подраздел 6.2) с периодичностью 1 мес.

12.2    Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости), осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725*2. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предела повторяемости (гс>тн). Значения г0Гн приведены в таблице 1.

12.3    Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимое* ти. проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-2. Расхождение между результатами измерений, полученными двумя лабораториями, не должно превышать предела воспроизводимости (Яоти). Значения /?01н приведены е таблице 1.

7

ГОСТ 33808—2016

УДК 637.5.04.07:006.354    МКС67.120.10

Ключевые слова: мясо, мясо птицы, субпродукты, мясные продукты, мясосодержащие продукты, лимон* ная кислота, высокоэффективная жидкостная хроматография, метод, определение, массовая доля

8

Редактор ДА. Мезимове Технический редактор В.Н. Прусамоаа Корректор И.А. Королева Компьютерная верстка А.Н. Зопатареаой

Сдано в набор 05.10.2016. Подписано в печать 11.10.2016. Формат 60*64^ Гарнитура Ариап. Уел. печ. п. 1,40. Уч.-изд. п. 1.30. Тираж 06 экэ. Зак. 2497.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано ао ФГУП яСТАНДЛРТИНФОРМх. 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. www.90stinfo.1u