allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ Р 57024-2016 Рыба. Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Обозначение:
ГОСТ Р 57024-2016
Наименование:
Рыба. Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения
Статус:
Действует
Дата введения:
07/01/2017
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.120.30

Текст ГОСТ Р 57024-2016 Рыба. Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТР

57024—

2016

РЫБА

Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Издание официальное

Москва

Стандартимформ

2016

ГОСТ Р 57024—2016

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 300 «Рыбные продукты пищевые, кор* мовые. технические и упаковка»

3    УТ8ЕРЖДЕН приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 августа 2016 г. Ne 913-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (Mvw.gost.ru)

© Стандартинформ. 2016

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ Р 57024—2016

Содержание

1    Область применения..................................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................................1

3    Сущность метода.....................................................................2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений.................................2

5    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы............................2

6    Подготовка к проведению измерений....................................................4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов.........................................4

6.2    Приготовление растворов..........................................................4

6.3    Приготовление градуировочных растворов производных бенэоилмочееины.................4

7    Отбор и подготовка проб...............................................................6

7.1    Отбор проб......................................................................6

7.2    Подготовка проб..................................................................6

8    Порядок выполнения анализа..........................................................7

8.1    Условия хроматографических измерений.............................................7

8.2    Построение градуировочной характеристики..........................................9

8.3    СВЭЖХ-ВПМС/МС-иэмвренив.....................................................10

9    Обработка результатов измерений.....................................................10

10    Метрологические характеристики.....................................................11

11    Оформление результатов измерений..................................................11

12    Контроль стабильности результатов измерений..........................................11

ГОСТ Р 57024—2016

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РЫБА

Метод определения остаточного содержания производных бензоилмочевины с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Fish.

Method for determination of the residual content of derivatives benzoylureas using ultra highfy liquid chromatography — quadrupote-time-of-fUght mass spectrometry

Дата введения — 2017—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на рыбу и устанавливает метод сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-слектрометричесхим детектором высокого разрешения (далее — СВЭЖХ-ВПМС/МС) для определения остаточною содержания производных бензоилмочевины в диапазоне измерений для дифлубензурона (ДФБ) от 0.5 до 20.0 мкг/кг. тефлубензурона (ТФБ) от 1 до 20 мкг/кг. эмамектина (Эма) от 5 до 200 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042. ИСО 4788) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки. колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 5848 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 31339 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ Р ИСО 5725-6 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

Прим еча нив — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов е информационной системе общего погъзования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии е сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячно издаваемого информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год.

Издание официальное

1

ГОСТ Р 57024—2016

Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана осыпка, то эго положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Количественное определение остаточного содержания производных бенэоилмочееины (анали-тое) проводят методом внутреннего стандарта по площадям пиков идентифицированных соединений с помощью градуировочной характеристики сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектированием высокого разрешения в режиме широкодиапазонного соударения индуцированных диссоциаций (СВЭЖХ-ВПМС/МС).

4 Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007. при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят подготовку и анализ проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4    К выполнению измерений методом СВЭЖХ-ВПМС/МС допускаются лица, владеющие техникой СВЭЖХ-ВПМС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.5    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха.......от 20 до 30 °С:

-    атмосферное давление................от 84 до 106 кПа:

• напряжение в питающей электросети .... от 200 до 240 В:

-    частота переменного тока..............от 49 до 51 Гц;

-    относительная влажность воздуха........от 40 до 80%.

5 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточного содержания производных бенэоилмочееины применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и посуду:

-    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76*1 с пределами допускаемой погрешности ± 0,001 г;

•    весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 80 г. пределом абсолютной допускаемой погрешности не более ± 0,01 мг:

-    масс-спектрометр с времяпролетным детектором высокого разрешения и диапазоном измерений от 50 до 3000 атомных единиц массы (а. е. м.), массовым разрешением не менее 3000, точностью измерения массы не менее 0.5 а. е. м., режимом получения ионое фрагментов:

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3:

•    естряхиеатель (шейкер) вортексного типа с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

•    естряхиеатель (шейкер) переворачивающий орбитального типа с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин:

-    измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

-    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 20 °С до минус 40 °С;

•    колонку хроматографическую длиной 50 мм и диаметром 1 мм с обращеннофазным сорбентом, диаметром частиц сорбента не более 1.7 мкм:

2

ГОСТ Р 57024—2016

•    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

•    компрессор воздушный;

•    систему сверхвысокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (5011) °С;

•    систему получения деионизованной воды высокой чистоты;

•    систему упаривания растворителей закрытого типа, обеспечивающую поддержание температуры не менее 50 °С;

•    устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

•    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 до 5 °С;

•    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 15 000 об/мин и диапазоном температур от 4 до 25 °С. с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3 и микроцен-трифужных пробирок вместимостью 1.5 см3:

•    шкаф сушильный лабораторный с рабочим диапазоном температур от 50 до 200 °С;

•    картриджи для твердофазной экстракции вместимостью не менее 3 см3, заполненные 60 мг сбалансированного гидрофильно-липофильного сорбента с размерами частиц от 30 до 60 мкм:

•    пробы, не содержащие производных бенэоилмочевины, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 6 («чистые» пробы)1);

•    фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0.2 мкм:

•    ей алы (флаконы) стеклянные для автоматического устройства ввода проб вместимостью 2 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками 9 мм;

•    колбы 1-10(1000)-1 по ГОСТ 1770;

•    пипетки одноканальные переменной вместимости 20—100 мм3. 200—1000 мм3.500—5000 ммс допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1 %;

•    пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см3.50 см3 с завинчивающимися крышками;

•    конические микроцентрифужные пробирки с крышкой вместимостью 1.5 см3:

•    шприцы одноразовые вместимостью 2 см3;

•    цилиндры 1-25 (500.1000)-1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении остаточного содержания производных бензоилмочееины применяют следующие реактивы:

•    ацетон по ГОСТ 2603;

•    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;

•    кислоту муравьиную по ГОСТ 5848. ч. д. а.;

•    метанол по ГОСТ 6995. х. ч.;

•    оксид алюминия, нейтральный для колоночной хроматографии с размером зерна от 0,050 до 0.2 мм;

•    воду деионизованную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства ультра-чистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709.

5.3    При определении остаточного содержания производных бензоилмочееины в качестве образцов сравнения применяют следующие соединения:

1)    Для приготовления исходных растворов с массовой долей основного вещества:

•    дифлубенэурон — не менее 98 %:

•    тефлубензурон — не менее 90 %;

•    эмамектин — не менее 95 %.

2)    Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов с массовой долей основного вещества:

•    дифлубензурон-04 — не менее 95 %;

•    эприномектин — не менее 90 %.

5.4    Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения. а также аппаратуры, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

1> Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 20 °С до минус 40 °С — не более 3 мес.

3

ГОСТ Р 57024—2016

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: метанолом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 до 110 *С.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление подвижных фаз А, и Б, для СВЭЖХ при отрицательном режиме ионизации

6.2.1.1    В качестве подвижной фазы А1 используют деионизованную воду.

6.2.1.2    В качестве подвижной фазы Б1 используют ацетонитрил.

6.2.2    Приготовление подвижных фаз Aj и 62 для СВЭЖХ при положительном режиме ионизации

6.2.2.1 Для приготовления подвижной фазы Aj в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают

999 см3 деионизованной воды, добавляют 1 см3 муравьиной кислоты, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2    2.2 Для приготовления подвижной фазы в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 499 см3 ацетонитрила. 500 см3 метанола, добавляют 1 см3 муравьиной кислоты.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес.

6.2.3    Приготовление вспомогательного раствора метанола с деионизованной водой в объемном соотношении 1 :1 (ВР1)

В полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3 вносят 25 см3 метанола и 25 см3 деионизованной воды, перемешивают.

6.2.4    Приготовление вспомогательного раствора ацетонитрила с деионизованной водой в объемном соотношении 1 :1 (ВР2)

В полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3 вносят 25 см3 ацетонитрила и 25 см3 деионизованной воды, перемешивают.

Срок хранения вспомогательных растворов при комнатной температуре — не более 1 нед.

6.3 Приготовление градуировочных растворов производных бенэоилмочевины

Для приготовления исходных растворов веществ С0 с концентрацией 500 мкг/см3 рассчитывают навеску т. эквивалентную 5.0 мг дифлубензурона. тефлубензурока и эмамектина. исходя из массовой доли в исходном веществе по формуле (1). после чего переносят каждое вещество по отдельности в мерные колбы вместимостью 10 см3. Доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

т в гПф

М0 • 100% Мс

(1)

где т0 — масса основного вещества, г:

М0 — молярная масса соли анализируемого соединения (для анализируемых соединений, растворы которых готовят из солей), г/моль;

М — молярная масса анализируемого соединения, г/моль: с — массовая доля анализируемого соединения в исходном веществе. %.

6.3.1 Приготовление исходных растворов С0 дифлубензурона, тефлубенэурона, эмамекти-

н® (Содф$. С0Тфб- СоЭыа)

Для приготовления исходных растворов С0 концентрации 500 мкг/см3 берут навески дифлубензурона. тефлубензурока. эмамектина в пересчете на 5 мг чистого вещества по формуле 1.

4

ГОСТ Р 57024—2016

Каждое общество переносят по отдельности в мерные колбы вместимостью 10 см3, дифлубензу-рон и тефлубенэурон доводят до метки ацетоном, а эмамектин — метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.2 Приготовление рабочих растворов дифлубензуроиа, тефлубензурона, эмамектина

6.3.2.1    Приготовление рабочих растворов С,Дф6, С,ТФ6 . С1Эма

Для приготовления рабочих растворов С1Дф6, С1Тфб, С,Эма концентрации 50 мкг/см3 в мерные колбы вместимостью 10 см3 вносят по отдельности по 1 см3 С0Дф6. С0Тф€. С0Эма и доводят до метки колбы с С1ДФ6, С1Тф6 — ацетоном, колбу с С,Эма — метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.2.2    Приготовление рабочего раствора С2

8 мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят по 1 см3 С1Дфб и С1Тф6, доводят до метки ацетоном, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензуроиа. тефлубензурона в растворе С2 — 5 мкг/см3.

6.3.2.3    Приготовление рабочего раствора С3

8 мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 0.2 см3 С2 (см. 6.3.2.2) и 0.2 см* С1Эма (см. 6.3.2.1). доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензурона. тефлубензурона в растворе С3 — 0.1 мкг/см3, эмамектина — 1 мкг/см3.

6.3.2.4    Приготовление рабочего раствора С4

8 мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 раствора С3 (см. 6.3.2.3), доводят до метки метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Концентрация дифлубензурона. тефлубензурона в растворе С4 — 0.01 мкг/см3, эмамектина — 0.1 мкг/см3.

Растворы хранят при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С.

Срок годности растворов С1Дфб. С1Тф€. С1Эыа — не более 1 года. С2—С4 — не более 6 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре е темном месте не менее 30 мин.

6.3.3 Приготовление исходных растворов О0 внутренних стандартов дифлубензурона-04 и эприномектина (О0Диф, О0Эпр)

Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов 0О концентрации 500 мкг/см3 взвешивают 0.005 г дифлубензурона-04. 0.005 г эприномектина. Каждое вещество переносят по отдельности в мерные колбы вместимостью 10 см3. Дифлубензурон-04 доводят до метки ацетоном, эпри-номекгин — метанолом, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

внутренние стандарты для производных бензоилмочевины выбирают в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 — Соответствие между аналитами и внутренними стандартами

Наименование анллита

Наименование внутреннего стандарта

Дифлубензурон

Дифлубензурон-04

Тефлубензурон

Эмамектин

Эприномектин

5

ГОСТ Р 57024—2016

6.3.4    Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов

6.3.4.1    Приготовление рабочих растворов 01Диф. 0,Эпр

Для приготовления рабочих растворов 01Диф и 0,Эпр концентрации 50 мкг/см3 в мерные колбы вместимостью 10 см3 вносят по отдельности по 1 см3 0ОДиф. £>0Эпр (см. 6.3.3) и доводят до метки колбу с 01Диф — ацетоном, колбу с Dt3np — метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.4.2    Приготовление рабочего раствора 02Диф

Для приготовления рабочего раствора £>2Д(1ф концентрации 5 мкг/см3 в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см30)Диф (см. 6.3.4.1) и доводят до метки метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

6.3.4.3    Приготовление рабочего раствора 03

Для приготовления рабочего раствора D3 в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 0.2 см3 02Диф (см. 6.3.4.2) и 1.6 см3 0,Эпр (см. 6.3.4.1), доводят до метки метанолом. Перемешивают и помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин.

Растворы хранят при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С.

Срок хранения растворов О, Днф. 0,Эпр не более 1 года, растворов 02 Диф, 03 — не более 3 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.5    Приготовление матричных градуировочных растворов Gt — Ge

Матричные градуировочные растворы G, — G6 готовят в полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3 из чистых проб массой 1.0 г. в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов и рабочий раствор определяемых аналитое в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G, — Ge

Обозначение и

массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного раствора (а соотношении Дфб.Тфб/Эи а)

вносимый объем рабочего раствора, см3

с3

(в.3.2.3)

С*

(в.3.2.4)

о3

(6.3.4.3)

G, (20/200 нг/см3)

0.2

0.05

Gj (10/100 нг/см3)

0.1

0.05

G3 <5/50 нг/см3)

0.05

0.05

G4 (2/20 нг/см3)

0.02

0.05

G5 (1/10 нг/см3)

0.1

0.05

Ge (0.5/5 нг/см3)

0.05

0.05

Пробирки встряхивают в шейкере 1 мин. и проводят последующую обработку образца согласно разделу 7.

Растворы G, — G6 хранят при температуре от 2 до 4 °С. Срок хранения — не более 1 сут.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб рыбы — по ГОСТ 31339.

7.1.2    Отобранные пробы при отсутствии возможности испытания в день отбора замораживают и хранят при температуре минус 25 °С до проведения исследования, но не более 90 сут.

7.2    Подготовка проб

7.2.1 Экстракция проб

Пробу мышечной ткани измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку проводят в соответствии с рисунком 1.

6

ГОСТ Р 57024—2016

Взвешивают 1,00 г гомогенизированной гкани и помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3. Вносят 0.05 см3 рабочего раствора внутренних стандартов О3 (6.3.4,3). перемешивают в шейкере 5 с и выдерживают в темноте при комнатной температуре 5 мин.

_X_

Приливают 6 см3 ацетонитрила, закрывают крышкой и устанавливают на 30 мин. на переворачивающий шейкер для экстракции при 45 об/мин .

Центрифугируют при 4000 об/мин и температуре 20    в течение 15 мин.

I

В новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 вносят 1,0 г оксида алюминия

и приливают надое ад оч кую жидость

I

Экстрагируют на переворачивающем шейкере при 45 об/мин в течение 5 мин.

Затем центрифугируют при 4000 об/мин и температуре 10 °С в течение 10 мин.

I

Органический слой, расположенный сверху, переносят в новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3, упаривают до 1 см3 в токе азота при температуре 40 °С

I

К остатку добавляют 2 см3 деионизованной воды, перемешивают на шейкере в течение 10 с и центрифугируют при 4750 об/мин и температуре 10 °С в течение 15 мин.

1

Верхний слой раствора очищают методом твердофазной экстракции (ТФЭ) по 7.2.2

Рисунок 1 — Экстракция проб

7.2.2 Очистка подготовленных проб методом ТФЭ

Для очистки подготовленных проб используют картридж, установленный в блок вакуумного устройства, предварительно активированный 2 см3 метанола и уравновешенный 2 см3 деионизированной воды. Пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с 7.2.1. Промывают картридж, последовательно пропуская 2 см3 деионизированной воды. 3 см3 вспомогательного раствора ВР1 (6.2.3) и сушат его в вакууме компрессора. Элюируют определяемые вещества в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 с помощью 3 см3 ацетонитрила. Упаривают элюат досуха при температуре 40 °С. Перерасгворяюг в 1 см3 вспомогательного раствора ВР2 (6.2.4), перемешивают на шейкере вортексного типа, помещают е ультразвуковую баню при комнатной температуре на 5 мин. и снова перемешивают.

Содержимое переливают в микроцентрифужную пробирку и центрифугируют е течение 20 мин. при 15000 об/мин при температуре 10 °С. При необходимости фильтруют шприцем через мембранный фильтр в виалу для СВЭЖХ-ВПМС/МС-анализа.

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Масс-спектрометр включают е соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем хроматографических колонок. Например. для колонки диаметром 1 мм. длиной 50 мм. с обращеннофазным сорбентом и размером частиц 1.7 мкм применяют следующие хроматографические условия:

•    температура колонки — 30 °С;

•    скорость потока подвижной фазы — 0.1 см3/мин:

•    объем вводимой пробы — 10 мм3;

•    температура в отсеке устройства ввода проб — 20 °С.

7

ГОСТ Р 57024—2016

8.1.2    Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элю» ентов в соответствии с 6.2.1).

8.1.3    Хроматографическое разделение в отрицательном режиме ионизации

8.1.3.1 Условия хроматографического разделения в отрицательном режиме ионизации приведены в таблице 3.

Таблица 3 — Условия хроматографического разделения в отрицательном режиме ионизации

Время.мин

Подвижная фаза «А(». %

Подвижная фаза «В]». Ч

0.0

50

50

1.0

50

50

4.0

100

8.0

100

8.1

50

50

15.0

50

50

8.1.3.2    Параметры настройки масс-спектромвтричвского детектора в отрицательном режиме ио» низации:

-    напряжение в источнике — 400 В;

•    напряжение на капилляре — 1000 В;

•    давление азота в распылителе — 400 кПа;

-    скорость газа осушения — 4 дм3/мин;

•    температура газа осушения — 200 °С:

•    температура распылителя — 350 °С;

» высокочастотное напряжение на воронке — 400 В:

•    амплитуда напряжения ВЧ — 400 В:

•    амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений — 550 В.

8.1.3.3    Параметры источника электрораспыления в отрицательном режиме ионизации приведены е таблице 4.

Таблица 4—Параметры источника элекгрораслыления

временной интервал, ыин

Амплитуда напряжения ВЧ охладителя хонов. Vpp

время

транспортирования,

МКС

Время

накопления ионов.

МКС

Скорость

скан и роеакия/режим сканирования

0.5—7.0

45—55 1/1

35—40 1/1

12

2 Гц/ЬЬСЮ

8.1.3.4 Параметры воздействия на ионы в режиме широкодиапазонного соударения индуцированных диссоциаций (ЬЬСЮ) приведены в таблице 5.

Таблица 5 — Параметры работы масс-спектрометра в режиме ЬЬСЮ

Аиалит

Ион предшественник. mtz

Дочерние ионы, mSz

Время удерживания, мин

Энергия соударений. э8

Тефлубекэурон

378.967

338.957/358.964

4.3 ±0.2

13-10 1/1

Дифлубензурон

309.024

289.019

Э.б ± 0.2

13-10 1/1

Дифлубензурон-04

313.024

293.044

Э.б ± 0.2

13-10 1/1

Примечание — Приведенные выше параметры хромагографичесхого разделения и масс-спектрометрического детектирования могут оттчаться в зависимости от используемой аппаратуры.

8

ГОСТ Р 57024—2016

8.1.4 Хроматографическое разделение в положительном режиме ионизации

8.1.4.1 Условия хроматографического разделения в положительном режиме ионизации приведе* ны в таблице 6.

Таблица 6 — Условия хроматографического разделения в положительном режиме ионизации

время, нин

Подвинмая фаза «А2». %

Подвижная фаза «6г».Ч4

0.0

70

30

1.0

70

30

1.1

20

80

2.0

20

80

3.0

100

7.0

100

7.1

70

30

15.0

70

30

8.1.4.2    Параметры настройки масс-слектрометрического детектора в положительном режиме ионизации по 8.1.3.2 кроме параметра:

• амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений — 600 В.

8.1.4.3    Параметры источника электрораспыления в положительном режиме ионизации приведены в таблице 7.

Таблица 7 — Параметры источника электрораспыпения

Временной интервал. мин

Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов. Vpp

Время

транспортирования. мкс

время накопления ионов, мкс

Скорость сканирования^ режим сканирования

0.5—7

50—150 1/1

45—65 1/1

13

ЗГц/ЬЬСЮ

8.1.4.4 Параметры воздействия на ионы в режиме широкодиапаэонного соударения индуцированных диссоциаций (ЬЬСЮ) приведены в таблице 8.

Таблица 8 — Параметры работы масс-спектрометра в режиме ЬЬСЮ

Аналит

Ион-лредшест еетнх.

mil

Дочерние ионы, mtz

Время удерживания, мин

Экершя соударений. эВ

Эмамвктин

888.531

152.119/302.195

3.95 ± 0,20

45/50/55 цикл

Элриномекгин

936.508

490.276/352.171

4.35 ±0.20

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.1.5 Контроль чувствительности масс-спектрометра осуществляют введением 10 мм3 градуировочного раствора G4 (6.3.5) в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 50.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят методом внутреннего стандарта в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения масс-спектрометра в автоматическом режиме.

8.2.1 Проводят измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5, в порядке возрастания их концентраций.

9

ГОСТ Р 57024—2016

8.2.2    В целях контроля стабильности градуировочной характеристики вместе с градуировочными растворами проводят дополнительное измерение «чистой» пробы с добавкой анализируемых соединений на градуировочном уровне G5

8.2.3    Вычисление площади пика проводят для наиболее интенсивного, дочернего иона анализируемых соединений и их внутренних стандартов. Для подтверждения наличия рассчитывают отношения площади пика двух дочерних ионов для каждого аналита в градуировочном растворе.

8.2.4    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у - ах. при атом коэффициент корреляции должен быть не менее 0.98.

8.2.5    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации производных бен-эоилмочевины в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 СВЭЖХ-ВПМС/МС>измерение

8.3.1    Для определения остаточного содержания производных бензоилмочевины проводят СВЭЖХ-ВПМС/МС-аналиэ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования в условиях хроматографических измерений с параметрами, указанными в 8.1.

8.3.2    СВЭЖХ-ВЛМС/МС-анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

-    экстракты «чистых» проб, приготовленных по 7.2:

-    градуировочные растворы (см. 6.3.5):

• экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

Результаты измерений округляют до первого десятичного знака и выражают в микрограммах на килограмм.

8.3.3    Время удерживания производных бензоилмочевины определяют при анализе градуировочных растворов.

8.3.4    Отклонения относительных ионных интенсивностей в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 9.

Таблица 9 — Допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей

Относительная ионная интенсивность, от основного пика

Махсиыапьио допустимые отклонения для СВЭЖХ-МС>'МС-детектиро»аиия, %

Св. 50

±20

Св. 20 до 50 включ.

±25

Св. 10 до 20 включ.

±30

Менее 10

±50

9 Обработка результатов измерений

9.1    В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения концентрации аналитое в анализируемой пробе.

9.2    Содержание У-го аналита Х(> мкг/кг, вычисляют по формуле:

С, V,

т,

(2)

где С- — концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику, нг/см3; V, — объем, до которого разбавлена проба, см3: т1 — масса анализируемой пробы, г.

9.3 За окончательный результат измерений содержания производных бензоилмочевины принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в

ю

ГОСТ Р 57024—2016

условиях повторяемости, округленное до первого десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

10 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания производных бензоилмочевины с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к- 2. указанной в таблице 10.

Таблица 10 — Показатели точности методики при проведении измерений содержания производных бензоил-мочевины

Амэлм

Диапазон

измерении

содержания

соединений,

мкг/кг

Значение относительной раширенной неопределенности t U при

соаффициеите

охвата *» 2. К

Показатель поет орле мости (относительное средне коадратиче • с кое отклонение повторяемости) сг %

Показатель еоспро-нзввдиыости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) Or- %

Предел повторяемости г. % (при P-0.BS. о « 2)

Дифггубензурол

От 0.5 до 5.0 включ.

25

5

10

14

Се. 5,0 до 20.0 включ.

20

3

8

8

Тефлубензурол

Ог 1.0» 5.0 вхлюч.

70

26

33

72

Се. 5.0 до 20.0 включ.

33

10

15

28

Эмамвктин

От 5.0 до 100.0 включ.

80

32

46

73

Св. 100.0 до 200.0 включ.

55

14

26

39

11 Оформление результатов измерений

Содержание ьго производного бензоилмочевины. мкг/кг. представляют в виде:

Х±0,01 U, X.    (3)

где X — среднее арифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания /•го аналита в анализируемой пробе по 9.2, 9.3, мкг/кг;

U — значение относительной расширенной неопределенности содержания ьго аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицей 10).

12 Контроль стабильности результатов измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6 с использованием контрольных карт Шухарта.

11

ГОСТ Р 57024—2016

УДК 639.38:614.31:543.06:006.354

ОКС 67.120.30

Ключевые слове: рыба, производные бенэоилмочевикы. сверхеысокоэффектиеная жидкостная хрома* тография с еремяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения, дифлубем-зурон, тефлубенэурон. эмамектин

Редактор Н.Н. Мигунова Корректор Е.Р. Ароян Компьютерная верстка Ю.В. Поповой

Сдано в набор 22.03.2016.    Подписано а печать 12.00.2010. Формат 60 * 64 Vg. Гарнитура Ариап.

Усп. печ. п. 1.66 Уч.*иэд. л. 1.65. Тираж 31 эм Зак. 2231.

Подготовлено на основ» электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Набрано в ИД «Юриспруденция». 115419. Москва, ул. Орджоникидзе. И. wwwjuneizdat.ru

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995, Москва. Гранатный пер.. 4.