allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ Р 54354-2011 Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа

Обозначение:
ГОСТ Р 54354-2011
Наименование:
Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2013
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.120.10

Текст ГОСТ Р 54354-2011 Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ


ГОСТ Р 54354 — 2011


НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Общие требования и методы микробиологического анализа

Издание официальное

ttoana

Стандарта нфср*

2013


Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N9 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности им. 8.М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 226 «Мясо и мясная продукция»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 июля 2011 г. N9180-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о6 изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационнсм указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация. уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования— на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2013

Настоящий стандарт не мсжет быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

я

Содержание

1 Область применения..................................... 1

2 Нормативные ссылки...................................... 1


0)Nd)^0(0<P№U


3    Термины и определения.....................................

4    Средства измерений, аппаратура, лабораторная посуда, материалы и реактивы..........

5    Питательные среды........................................

6    Общие требования к проведению микробиологического анализа..................

7    Подготовка к проведению анализа.................................

8    Проведение анализа........................................

9    Требования безопасности.....................................

10    Приложение А (справочное) Перечень рекомендуемых микробиологических питательных сред . .

Библиография............................................

Ш


НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Общие требования и методы микробиологического анализа Meat and meat products. General requirements and methods of microbiological testing

Дата введения — 2013—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо (все виды убойных животных), полуфабрикаты, суб» продукты, колбасные изделия и продукты из мяса и устанавливает общие требования и методы микробиологического анализа.

Выявление и определение микроорганизмов:

•    количества меэофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ);

•    бактерий группы кишечных палочек (колиформиых бактерий — БГКП);

-    бактерий рода Proteus:

•    бактерий рода Pseudomonas:

•    дрожжей и плесневых грибов;

-    молочнокислых микроорганизмов:

-    сульфитредуцирующих клостридий;

•    энтерококков;

•    бактерий рода Salmonella

•    Listeria monocytogenes;

•    Escherichia coli:

-    Staphylococcus aureus:

•    коагулаэоположительных стафилококков:

•    Yersinia enterocolitica;

•    бактерий рода Campylobacter:

•    Bacillus cereus.

При определении количества микроорганизмов посевом на (в) агариэованные среды результаты выражают — КОЕ (колониеобразующая единица) в 1 г продукта, при определении количества микроорганизмов по методу НВЧ (наиболее вероятное число) — количеством клеток в 1 г продукта.

При выявлении микроорганизмов в определенной массе продукта результаты выражают: «обнаружены в х г продукта» или «не обнаружены в х г продукта», где х — масса продукта г.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218—2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ Р ИС011133-1—2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлениюи производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

Издание официальное

ГОСТРИСО 11133*2—2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлении: и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГОСТ Р 50454—92 (ИСО 3811—79) Мясо и мясные продукты. Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli (арбитражный метод)

ГОСТ Р 50455—92 (ИСО 3565—75) Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод)

ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100*1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ Р 51448—99 (ИСО 3100*2—88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований

ГОСТ Р 51652—2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ Р 51921—2002 Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes

ГОСТ Р 51935—2002 Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ Р 52814—2007 (ИСО 6579—2002) Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ Р 52815—2007 Прод/кты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазопо* ложительных стафилококков и Staphylococcus aureus

ГОСТ Р 52816—2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

ГОСТ Р 52830—2007 (ИСС 7251—2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количестэа презумптивных бактерий Escherichia ooli. Метод наиболее вероятного числа

ГОСТ Р 54004—2010 Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний ГОСТ 1770—74 (ИС01042-83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 3118—77 Реактивы. <ислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3145—84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия ГОСТ 3640—94 Цинк. Технические условия

ГОСТ4148—78 Реактивы. Железо (II) сернокислое 7-водное. Технические условия

ГОСТ 4172—76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двуэамещенный 12*еодный. Технические условия

ГОСТ 4233—77 Рйяктийн» Натрий хлористый Тахмичагхиа условия

ГОСТ4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5556—81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 6006—78 Реактивы. Бутанол*1. Технические условия

ГОСТ 6038—79 Реактивы. D-глкжоза. Технические условия

ГОСТ 6672—75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6700—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9284—75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9412—93 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 9792—73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 10444.1—84 Консерэы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 10444.8—88Продукгы пищевые. Методы определения Bacillus cereus ГОСТ 10444.11—89 Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов ГОСТ 10444.12—88 Продукты пищевые. Методы определения дрожжей и плесневых грибов ГОСТ 10444.15—94 Прсдухты пищевые. Методы определения количества меэофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

ГОСТ 10929—76 Реактивь. Водорода пероксид. Технические условия

ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13646—68 Термометры стеклянные ртутные для точных измерений. Технические условия

ГОСТ 13739—78 Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 14919—83 Электроплиты, электроплитки и жарочные элекгрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 16317—87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия ГОСТ 21239—93 Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний ГОСТ 21240—89 Скальпеле и ножи медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 21241—89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 21400—75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний ГОСТ 23932—90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия ГОСТ 24363—80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 24788—2001 Посуда хозяйственная стальная эмалированная. Общие технические условия ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26669—85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов ГОСТ28560—90 Продукты гищевые. Методы выявления бактерий родов Proteus. Morganella. Provxdenda ГОСТ 28566—90 Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков ГОСТ 29185—91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуци-рующих клостридий

ГОСТ 29227—91 (ИС047Э4—94) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 30726—2001 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coti

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационном системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные сандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (измэнен). то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяет в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

3.1    бактерии группы кишечных палочок (колиформныо бактории): Грэмотрицатольныо, окси

даэоотрицательныв. неспорообразующие палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре (37 ± 1) °С. принадлежащие в основном к родам — эшерихия (Escherichia). клебсиелла (Klebsiella), энтеробактер (Enterooacter). цитробактер (Citrobacter). серрациа (Serratia).

3.2    бактерии рода Campylobacter: Грамотрицательные. неспорообраэующие. микроаэрофильные. оксидазоположительные. подвижные мелкие бактерии спиралевидной S-образной или изогнутой формы.

Примечание — При культивировании более 48 — 72 ч образуют кокковые формы. Углеводы не ферментируют и не окисляют. Для человека наиболее опасен С. jejuni.

3.3    бактерии рода Proteus: Грамотрицательные палочки, обладающие свойством ползучего роста, оксидазоотрицатепьные. образующие сероводород и дезаминирующие фенилаланин.

3.4    бактерии рода Pseudomonas: Грамотрицательные. подвижные, прямые или слегка изогнутые палочковидные бактерии, оксидазоположительные. аэробы, окисляющие глюкозу.

3.5    бактерии рода Salmonella: Грамотрицательные. подвижные (кроме S. pullorum. S. gallinarum) палочки с закругленными концам»-, оксидазоотрицательные. катапазололожительные. ферментирующие глюкозу с образованием кислоты и газа, не ферментирующие лактозу (кроме S. typhi). в основном образующие сероводород, не гидролизующие мочевину, не образующие ацетоин. индол и Р-галактозидазу (кроме S. алгола), образующие L-лизиндекарбокснлазу (кроме Salmonella paratiphi А).

3.6    дрожжи: Грамположительные, неподвижные, овальной или эллипсовидной формы клетки: факультативные анаэробы, размножающиеся почкованием или спорообразованием.

3.7    запас рабочей культуры: Культура эталонного штамма в условиях временного хранения (полужидкий агар. 4 *С — 8 °С).

3.8    запас эталонной культуры: Культура эталонного штамма в условиях длительного хранения (жидкий азот, минус 70 *С).

3.9    импеданс Z: Сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал: является функцией активной проводимости, емкостного сопротивления и применяемой частоты, измеряемых в омах по формуле

где R — активное омическое сопротивление. Ом:

F —частота. Гц:

С —емкостная составляющая. пФ.

З.Юкоагулазоположитеяьные стафилококки: Грамлоложительные. каталазололожигельные микроорганизмы. которые образуют типичные и/или атипичные колонии на/или в селективно-диагностической питательной среде, дающие полсокительную реакцию на коагулазу или специфическую для кроличьей плазмы реакцию на агаре с кроличьей плазмой и фибриногеном.

3.11 культура для целевого использования: Культура эталонного штамма, прошедшая не более двух пассажей после высева сс среды временного хранения (из запасов рабочей культуры), предназначенная для использования в исследованиях.

3.12

культуральная среда: Перечень ингредиентов в жидкой, полужидкой или твердой формах, которые содержат натуральные и/или синтетические компоненты, для того чтобы поддерживать размножение или сохранять жизнеспособность микроорганизмов.

1ГОСТР ИС011133-1—2008. статья 3.3.1]

3.13    лиофилизированная культура: Культура, высушенная при низких температурах в вакууме.

3.14    молочнокислые микроорганизмы: Грамлоложительные, микроаэрофильные. неподвижные, неспорообразующие палочки, иногда кокковидной формы, или кокки, катапаэоотридательные, сбраживающие углеводы собраэоеанием молочной кислоты.

3.15    непрямой метод (косвенный) измерения импеданса: Метод регистрации изменения импеданса посредством определения количества диоксида углерода (С02). образуемого в ходе процесса обмена веществ микроорганизмов.

3.16    плесневые грибы: Гифомицеты. поскольку тело плесневых грибов состоит из тонких ветвящихся нитей — гифое.

3.17    прямой метод измерения импеданса: Метод определения изменения импеданса питательной среды, обусловленного разложением питательных субстратов в процессе метаболизма микроорганизмов.

3.18    скрининг (от англ, screening «просеивание»}: Общее название метода проверок больших групп объектов, обследований с целью выявления возбудителей заболеваний для проведения профилактических мероприятий.

3.19    сульфитредуцируюдие клостридии: Грамлоложительные. спорообразующие, сульфитреду-цирующие. каталазоотрицательные палочки, способные расти в анаэробных условиях.

3.20    тест-штаммы микроорганизмов: Микроорганизмы, типичные по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам, паспортизированные в установленном порядке.

3.21    основные методы микробиологических исследований: Методы классического анализа, лежащие в основе утвержденньх установленным порядком микробиологических исследований.

3.22    ускоренные методы микробиологических исследований: Методы микробиологических исследований. позволяющие в более короткий промежуток времени, по сравнению сословными методами, получить результаты испытаний.

3.23    энтерококки: Грамположитепьные кокки овальной или круглой формы: располагаются парами, короткими или длинными цепочшми: факультативные анаэробы, оптимальная температура роста 37 вС, кагалазоотрицательные разлагают глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа.

3.24    эталонный штамм (референтный штамм, референс-штамм): Микроорганизм, определенный. по меньшей мере, до рода и вида, включенный е каталог и описанный в соответствии с его характеристиками.

3.25    Bacillus cereus: Грамлоложительные. каталазоположигельные, спорообразующие, подвижные палочки, ферментирующие в анаэробных условиях глюкозу, нитратредуцирующие. образующие ацетилме-тилкарбинол и не ферментирующие маннит.

3.26    Escherichia coll: Грамотрицательные. оксидаэоотрицательные бактерии, ферментирующие пак* тоэу при температуре (44 ± 1) *С с образованием газа и образующие индол из триптофана, не образующие ацетоин и не утилизирующие цитрат, дающие положительную реакцию с метил-рот, ферментирующие глюкозу и сорбит.

3.27    Listeria monocytogenes: Грамположительные, неспоро образующие, тонкие, короткие палочки, подвижные при температуре (22± 1) вС и неподвижные или слабоподвижные при температуре (37 ± 1) *С. каталоэоположительные, оксидаэоотрицательные, гидролизующие эсхулик. ферментирующие с образованием кислоты рамнозу и маннозу, не ферментирующие маннит и ксилозу, обладающие p-гемолитической и лецитиназной активностью (лецигиназная активность только в присутствии активированного угля).

3.28    Staphylococcus aureus: Коагулаэоположительные стафилококки, образующие ацетоин. ферментирующие мальтозу в азробных условиях.

3.29    Yersinia enterocolltica: Грамотрицательные. полиморфные палочки, подвижные при температуре 22 ®С — 29 ®С; факультативные анаэробы, каталаэоположительные, оксидаэоотрицательные. ферментирующие большинство углеводов (исключая лактозу и рамнозу) без образования газа.

4 Средства измерений, аппаратура, лабораторная посуда, материалы

и реактивы

4.1 Средства измерений, аппаратура, лабораторная посуда, материалы и реактивы для основных методов анализа

Средства измерений, аппаратура, лабораторная посуда, материалы и реактивы — по ГОСТ Р ИСО 7218. ГОСТ 10444.1. ГОСТ 25336 со следующими дополнениями.

Анаэробные сосуды с оборудованием для генерирования анаэробной атмосферы, включая систему для проверки анаэробных условий.

Бидистиллятор.

весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г (для взвешивания реактивов) с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,01 мг.

весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 1 кг (для взвешивания продукта) с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 20.0 мг.

Баня водяная с терморегулятором по ГОСТ Р ИСО 7218 для поддержания заданной температуры с погрешностью ± 0.5 *С, кроме особо оговоренных случаев.

Генератор анаэробной атмссферы.

Генератор микроаэрофильиой атмосферы.

Гомогенизатор типа мастикатор или другие модели.

Дилютер гравиметрический — автоматизированная система для разведения образцов.

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с ГОСТ 6709.

Дозаторы переменного объема.

Дозаторы лилеточные.

Дозаторы для розлива питательных сред.

Лампа ультрафиолетовая с длиной волны 254 нм (лампа ртутная низкого давления).

Примечание — При работе с ультрафиолетовой пампой используют защитные очки и перчатки для предупреждения раздражения глаз и кожи.

Лупа.

Микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900я —1000я с иммерсионнмой системой или с приспособлением для фазовоконтрастного микроскопи-ровамия.

Шкаф морозильный.

Прибор нагревательный для варки питательных сред либо магнитные мешалки с подогревом.

Насадки к дозаторам.

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150.

Поплавки для пробирок.

Машина посудомоечная.

Прибор для подсчета колоний микроорганизмов.

Ридер (иммуноферментньм анализатор).

Ротатор 40—42 об/мин с таймером.

рН*метр. обеспечивающий измерение с допускаемой погрешностью ± 0.1.

СВЧ-печь (для расплавления питательных сред).

Система для анаэробного гультиеировамия с манометром (анаэростат).

Примечание — Материалы и лабораторная посуда, поставляемые нестерильными, стерилизуют в соответствии с установленными процедурами.

Стерилизатор суховоадуимый.

Стерилизатор паровой медицинский по ПОСТ Р 51935.

Термометр ртутный по ГОСТ 13646 с диапазоном измерения от 0 *С до 220 *С (цена деления шкалы 1 °С).

Термостаты, обеспечивающие поддержание температуры в интервале (24 ± 0,5) *С — (60 ± 0.5) вС. Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 16317 с морозильной камерой.

Центрифуга универсальная лабораторная (20000 хд) с охлаждением.

Часы механические сигнальные по ГОСТ 3145.

Тара стеклянная для химических реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ Р 51477.

Воронки из полимерных материалов, металлические.

Кастрюли эмалированные по ГОСТ 24788.

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 1770.

Колбы мерные наливные вместимостью 500 и 1000 см3.

Контейнеры для анаэробною культивирования.

Микротест системы для бюхимичесхой идентификации энтеробактерий (МТС-М-12Е).

Микротест системы для биохимической идентификации стафилококков (МТС-С).

Микротест системы для биохимической идентификации сальмонелл (МТС-Сальм).

Пипетки полимерные стерильные для однократного применения.

Посуда мерная лабораторная стеклянная по ГОСТ 1770: цилиндры (вместимостью 100; 250:500 см3). мензурки, колбы, пробирки (вместимостью 10; 15; 20 см3).

Посуда лабораторная стеклянная.

Пипетки градуированные го ГОСТ 29227.

Пробирки (многоразового или одноразового пользования) по ГОСТ 25336.

Флакон-дозатор для дозирования жидкостей.

Флаконы с резьбой и крышкой стерилизуемые (500 —1000 см3).

чашки I ютри среднего размера (диаметр 90 или юи мм) и/или оольшие (диаметр 140 мм).

Биотест для контроля тепловой стерилизации.

Биотест для контроля «холодной» стерилизации.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Горелки газовые.

Дезодорант для автоклавиоования отработанного материала.

Диски индикаторные с реагтивами для идентификации микроорганизмов.

Диски с бацитрацином для идентификации стрептококков.

Зажимы для пакетов.

Индикаторы анаэробной атмосферы.

Коробка для создания анаэробной атмосферы.

Красители для окрашивания капсул.

Красители для окрашивания по Граму.

Красители для окрашивания спор.

Маркеры по стеклу.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Мешки полимерные для стерилизации и деструкции лабораторных принадлежностей.

Ножницы медицинские по “ОСТ 21239.

Пакеты гаэонепроницаемье стерильные для измельчения проб.

Пакеты газонепроницаемые стерильные различного объема для контейнеров анаэростатое. хранения и инкубации посевов в чашках Петри.

Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.

Перчатки пластиковые, рвзлноеые.

Петля бактериологическая платино-иридиевая или никвль-хромоеая диаметром около 3 мм.

Петля бактериологическая полимерная объемом 1; 10 мкл.

Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.

Пипетки пастеровские — стеклянные и пластиковые.

Пипетки по ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2.0; 5.0; 10,0 см3 с ценой деления 0.01; 0.02; 0,05; 0.1 см3 соответственно.

Подставки для пакетов.

Полоски индикаторные.

Полоски с реактивом Ковача (на индол).

Полоски с ацетатом свинца (на сероводород).

Пробки и колпачки для пробирок (силиконовые, резиновые, металлические и другие), выдерживающие стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.

Система для быстрой идентификации энтеробактерий по биохимическим признакам.

Скальпель хирургический по ГОСТ 21240.

Слайды или планшеты для иммунологических реакций.

Смесь газов 02 — 5 %, COj — 10 %. N2 — 95 % — в баллоне.

Спиртовки лабораторные.

Спиртовки лабораторные стеклянные по ГОСТ 23932.

Стандарт мутности Макфарпаида по (1].

Стандартный образец мутности по [2].

Стационарный СОг—инкубатор.

Стекла предметные для мжропрепаратое по ГОСТ 9284.

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Тампоны стерильные е индивидуальной упаковке для отбора проб с поверхностей производственных объектов методом смыва.

Термоконтейнер (сумка-холодильник).

Шпатели бактериологические.

Штативы для пробирок.

Электроплитка по ГОСТ 14919.

Ацетон по ГОСТ 2603.

Бриллиантовый зеленый.

Бромкреэол пурпурный, ьромтимоловый синий.

Ванкомициндля выявления бактерий рода Leuconostoc.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Гелгадецилсульфат натрия(терпгтол).

Гидрохлорид.

2.3.5-трифенилтетразолиум хлорин (ТТХ).

DL-триптофан.

Железо (II) сернокислое поГОСТ 4148.

Желчь бычья сухая или натуральная.

Йод кристаллический.

Калий йодистый.

Р-ди метиламин бензальдегид.

Калия гидроокись по ГОСТ24363.

Кислота б-амино-2-нафтален сульфоновая.

Кислота соляная по ГОСТ 2118.

Кислота сульфаниловая.

Креатин.

Кристаллический фиолетовый.

Лактоза по ГОСТ 6038.

Ьтриптофан.

Оксалат малахитовый зеленый.

Масло иммерсионное для иикроскопии по ГОСТ 13739.

Набор реактивов для окраски по Граму.

Натрия гидроокись, ч. д. а., по ГОСТ 4328.

Натрий гиппурат 99 %.

Натрий метабисульфит.

Натрий лаурил сульфат.

Натрий пироеинограднокислый. ч.

Натрий хлористый по ГОС- 4233.

Нингидрин 99%.

Оксидаэмые диски.

Пероксид водорода по ГОСТ 10929.

Полимиксин В сульфат.

Полимиксин М сульфат.

Раствор перекиси водорода 3 %.

Реагент Ковача.

Спирт амиловый, не содержащий органических щелочей.

Спирт бутиловый, не содержащий органических щелочей (основной).

Спирт бутиловый нормальный, ч. д. а., по ГОСТ 6006.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

Индикатор феноловый красный.

Ферментативный перевар молока и животных протеинов.

Ферментативный перевар <аэеина.

Ферментативный гидролизат сои.

Натрий фосфорнокислый двуэамещенный Na2HP04 (безводный), ч. д. а., по ГОСТ 4172.

Натрий фосфорнокислый однозамещенный NaHP04H20.

Хлористый магний 6-еоднвй (МдС1220).

Цинк-порошок по ГОСТ 3640.

4.2 Аппаратура для ускоренных методов анализа

Для ускоренных методов анализа используют следующую аппаратуру:

•    при выявлении колифориных бактерий, сальмонелл, энтерококков, дрожжей и плесневых грибов. Clostridium perfringens. листерийметодом измерения электрического сопротивления (импеданса) с использованием приборов «Рэбит» —по [3]. Бак Трак — по [4);

•    при выявлении и определении бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гетерогенной твердофазной дезоксирибонуклеиновой кислоты — рибонуклеиновой кислоты (ДНК-РНК) гибридизации с хемилюминесцентным детектированием (прибор «Люмипроб»)—по [5] со следующими дополнениями: пробирочный люминометр «Гюмлайт» или планшетный люминометр—фотомер «PhL*». инкубатор-встря-хиватель. 96-луночные и 192-луночные микропланшеты с ДНК-эондом. автоматическая пипетка на 0.04 сми наконечники, многоканальные пипетки 0,04 — 0.3 см3, кюветы для реагентов, адсорбирующие салфетки;

•    при выявлении бактерии рода Campylobacter — по [6]:

-    при выявлении возбудителя иереиниоза — по [7]:

•    при использовании анализатора Vidas/ mini Vidas для выявления бактерий рода Salmonella — по [8];

•    при идентификации микроорганизмов родов Salmonella. Campylobacter на основе ПЦР с использованием системы Бакс (Вах system Q7) — по (9):

-    при выделении и идентификации Е. coti 0157:Н7 — по [10];

-    при проведении санитарно-микробиологического контроля мясных продуктов на наличие Listeria monocytogenes с использованием анализатора Vidas/mini Vidas — по [8]. ГОСТ Р 51921:

-при идентификации микроорганизмов с использованием стриповых наборов канализатору Vidas/ mini Vidas или другим устройствам (приборам) в соответствии с прилагаемой инструкцией по их применению; иммунохроматографические экспресс-тесты для выявления бактерий рода Saknonelia. бактерий Listeria monocytogenes, Е. coli 0157:Н7. бактерий рода Campylobacter и других микроорганизмов, разрешенные к применению в пищевой промышленности.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, аппаратуры с техническими характеристиками, реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

5    Питательные среды

Рекомендуемые питательные среды для выполнения основных микробиологических анализов, разрешенные к применению в пищевой промышленности, приведены в приложении А.

Рекомендуемые питательные среды для использования при ускоренных методах анализа приведены е(3]-[16].

Допускается применение других питательных сред по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте и зарегистрированных (разрешенных) к применению при контроле продукции в пищевой промышленности.

6    Общие требования к проведению микробиологического анализа

6.1    Общие требования проведения микробиологического анализа — по Г0СТРИС0 7218.

6.1.1    Основные методы анализа применяют при получении окончательных результатов, в том числе идентификации микроорганизмсв — по ГОСТ Р ИСО 7218.

При производственном контроле вместо питательных сред, содержащихся в чашках Петри многократного или одноразового применения, разрешается использовать подложки (пластины). Для биохимической идентификации выделенной микрофлоры допускается использование тест-систем промышленного производства. разрешенных к применению в пищевой промышленности по [3] — [16].

6.1.2    Ускоренные методы предназначены для осуществления производственного контроля, идентификации культур микроорганизмов, выделенных с использованием основных методов контроля и (или) скрининговых испытаний — по [3] — [16]. При получении положительных результатов этими методами проводят подтверждающие анализы с использованием основных микробиологических и других методов (биохимических. серологических ит.д.). Окончательным результатом считают данные, полученные с использованием основных методов.

6.2    Подготовка помещений, аппаратуры, средств измерений, питательных сред, растворов, лабораторной посуды к проведению анализа — по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.3    Требования к персоналу—по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.4    Обеспечение качества проведения анализа

6.4.1    Контроль режимов паровой и суховоздушной стерилизации

6.4.1.1    Химический и термический контроля режима стерилизации — по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.4.1.2    Биологический контроль осуществляют два раза в год. используя биотесты, предназначенные для контроля паровой или суховоздушной стерилизации конкретного вида и разрешенные к применению в пищевой промышленности.

6.4.2    Контроль санитарно-микробиологических показателей воздушной среды помещений лаборатории — по ГОСТ Р ИСО 7218 с учетом 6.4.2.1.6.4.2.2.

6.4.2.1    Микробиологический контроль воздуха в боксах или в ламинарных шкафах проводят не реже одного раза в неделю перед началом выполнения анализа. Отбор пробы воздуха в количестве 100 дмпроводят согласно инструкции к используемому прибору.

Инкубируют посевы при (37 ± 1) вС в течение (24 ± 2) ч.

6.4.2.2    Допустимый уровень общего содержания микроорганизмов не более 500 КОЕ/м3 [17] при использовании аспирационного метода.

6.4.3 Контроль санитарно-микробиологических показателей поверхностей объектов производственной лаборатории — по ГОСТ Р УСО 7218 с учетом 6.4.3.1.6.4.3.2.

6.4.3.1    Контроль проводят с целью проверки эффективности саюггарной обработки поверхности объектов путем обнаружения колифориных бактерий.

6.4.3.2    Анализ выполняютне реже одного раза в месяц перед началом работы методом смыва или прямого контакта питательной среды с исследуемой поверхностью. Контролируют микробиологические боксы, помещения для проведения мик(юбиолотческих анализов.

Отбор проб выполняют со стен бокса, с поверхности рабочих столов на каждом рабочем месте, с дверных ручек, наружных деталей приборов.

При контроле мелких предметов смывы берут с поверхности всею предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят с площади не менее 100 см2.

6.4.4 Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения—по (18) с учетом 6.4.4.1.

6.4.4.1 Бактерицидную эффективность ультрафиолетового облучения помещения БЭ, %. вычисляют по формуле

S3»«NA-N„y«a>'100.

где Na — число микроорганизмов до облучения;

А/, — число микроорганизмов после облучения.

Ультрафиолетовое бактерицидное облучение помещений считается эффективным, если бактерицид* ная эффективность составляет не менее 99 %.

6.4.5    Контроль качества дистиллированной воды — по ГОСТ 6709.

6.4.6    Требования к обеззараживанию и подготовке лабораторного оборудования, материалов, инструментов и лабораторной посуды — по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.4.7    Хранение и использование эталонных культур микроорганизмов— по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.4.8    Контроль питательных сред — по ГОСТ Р ИСО 11135-1, ГОСТ Р ИСО 11133-2, ГОСТ 10444.1 (пункт 4),сучетом6.4.8.1 —6.4.8.3.

6.4.8.1    Контроль условий н сроков хранения питательных сред

Сухие питательные среды и реактивы, если не указаны особые условия хранения, хранят при температуре 10 ®С — 25 *С; готовые кприменению питательные среды (плотные, полужидкие, жидкие), доставленные с предприятия-изготовителя, хранят при температуре 2 вС — 8 вС в соответствии со сроками, указанными на этикетке.

Вскрытые упаковки со средами хранят плотно закрытыми.

Готовые питательные среды хранят при температуре 2 *С — 8 ®С. Сроки хранения готовых питательных сред определяет изготовитель.

Все питательные среды маркируют с указанием названия среды, даты приготовления и срока годности.

6.4.8.2    Контроль питательных сред на этапе приготовления

Контроль питательных сред на этапе приготовления включает в себя следующее: оценку внешнего вида готовой среды, измерение pH готовой среды, определение стерильности (отсутствие контаминации) готовой среды, постановку качественного контроля биологических свойств среды.

Расплавленные питательнее среды хранят не более 8 ч. Повторное плавление и использование плотной питательной среды не допускается.

Чашки Петри с внесенной стерильной питательной средой хранят не более одной недели при условии сохранения их состава.

7 Подготовка к проведению анализа

7.1    Отбор, транспортирование, приемка и хранение проб

7.1.1    Отбор проб — по ГОСТ 9792. ГОСТ Р 51447. ГОСТ 26668. ГОСТ 26669. (19) а также в соответствии с нормативными документами на продукты конкретных видов с учетом ниже приведенного.

Пробы отрезают стерильным ножом или другими стерильными инструментами.

Из отобранных по ГОСТ 9792 (пункт 1.3) единиц продукции отбирают объединенную пробу:

-    от туши, полутуши. четвеэтины. мясокостных отрубов, бескостных (обваленных) отрубов, жилованного мяса и от крупнокусковых бескостных полуфабрикатов —целый кусок бескостного мяса размером 8 х 10 х 10 см и массой не менее 500 г:

-    от крупкокусковых и мелкокускоеых мясокостных полуфабрикатов, порционных бескостных полуфабрикатов отбирают пробу, в юторой бескостная часть составляет не менее 500 г;

• от мясного блока, е зависимости от способа обработки мяса, отбирают целый кусок бескостного мяса массой не менее 500 г или мясо, в котором бескостная часть составляет не менее 500 г:

-    от тримминга, мяса механической обвалки (дообвалки), пищевых субпродуктов, в том числе замороженных. кишок-сырца. кишок-толуфабрикатое, кишок-фабрикатов, от мелкокусковых и порционных бескостных. порционных мясокостных, рубленых мясных (мясосодержащих), формованных кусковых (рубленых). фаршированных полуфабрикатов, мясного (мясооодержащего) фарша и от полуфабрикатов панированных. в тесте, мясного (мясозодержащего) кулинарного изделия отбирают продукт общей массой не менее 500 г:

•    от колбасных изделий отбирают не менее двух точечных проб на расстоянии 15 см от края батона и из них составляют объединенную пробу. Если длина колбасного изделия не более 15 см. то отбирают два батона целиком;

•    сосиски и сардельки (точечные пробы) отбирают из разных мест партии, не нарушая целостности единиц продукции, при этом из нескольких точечных проб составляют объединенную пробу;

•    от партии языков из двух единиц продукции, с выполнением мер стерильности по всей толщине продукта, вырезают пробы длиной не менее 8 см каждая и из них составляют объединенную пробу;

•    от продуктов из говядинь. свинины, баранины и мяса других видов животных отрезают точечные пробы по всей толщине продукта длиной не менее 10 см от двух единиц продукции и из двух точечных проб составляют объединенную пробу;

•    от окорока, изготовленно'о из тазобедренной части туши, срез делают шириной не менее 10 см и отбирают по всей толщине продукта в месте сочленения берцовой и бедренной костей;

•    от окорока, изготовленного из лопаточной части туши, срез шириной 10 см делают и отбирают по всей толщине продукта в месте сочленения лопатки и плечевой кости;

•    от изделий без оболочки (студни, паштеты и др.) точечные пробы отбирают не менее чем от трех единиц изделий массой 200 — 250 г каждая.

7.1.2 Транспортирование, приемка и хранение гроб — по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ Р 54004.

8 Проведение анализа

8.1 Подготовка проб и отбор их навесок при микробиологическом анализе

Подготовка проб и отбор их навеоок для микробиологического анализа включает в себя размораживание (при необходимости), стерильное вскрытие упаковки (при исследовании упакованных мясных продуктов), обжиг поверхности пробы или отбор навески без стерилизации ее поверхности и измельчение проб — согласно ГОСТ Р 51448, ГОСТ 26669.

Без стерилизации (обжига! поверхности продукта осуществляют отбор проб от следующих продуктов: тримминга, мяса механической обвалки (дообвалки). пищевых субпродуктов (кроме печени, почек, сердца), кишок-сырца. кишок-полуфабрикатов и кишок-фабрикатов, мелкокусковых бескостных (мясокостных) полуфабрикатов, порционных бескостных (мясокостных) полуфабрикатов, рубленых мясных (мясосодержащих) полуфабрикатов, мясного (мясосодержащего) фарша, формованных кусковых (рубленых) полуфабрикатов. фаршированных полуфабрикатов, полуфабрикатов в тесте, панированных полуфабрикатов, мясных (мясосодержащих) кулинарных изделий, колбасных изделий и продуктов из мяса в нарезке (высота до 5 см), упакованных под вакуумом или в модифицированную газовую среду.

Масса навески зависит от установленных требовании на исследуемый микробиологический показатель.

В зависимости от вида исследуемой продукции объединенную пробу массой 70 — 80 г составляют из точечных проб следующим обрезом: колбасные изделия в оболочке и продукты из свинины, баранины и говядины помещают в металлический или эмалированный лоток, тщательно протирают ватным тампоном, смоченным спиртом, и дважды обжигают пламенем (спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 или другими средствами, разрешенными для этих целей).

Затем батоны колбасных изделий разрезают продольно стерильным (фламбироеанным) ножом или скальпелем на две половинки, не рассекая оболочку противоположной стороны батона.

Из свиных, бараньих, говяжьих продуктов на костях и бекона пробы вырезают стерильным инструментом из различных участков обожженного образца на глубине 2 — 3 см от поверхности, предпочтительно ближе к кости.

Изделия без оболочки (мясные хлебы, паштеты, студни и др. изделия) исследуют с поверхности и из глубины продукта.

Для анализа поверхности изделий без оболочки, после развертывания упаковки, с поверхности исследуемых образцов делают смыв (с каждого образца новым стерильным увлажненным ватным тампоном) стех участков, с которыми могли соприкасаться руки упаковщика, и исследуют согласно ГОСТ Р 52816 на наличие БГКП.

Для анализа глубинных участков этого вида продукта образцы помещают в металлический или эмалированный лоток, смачивают спиртом и обжигают. Затем делают продольный разрез и отбирают навеску методом, указанным для колбасных изделий и продуктов в оболочке, составляя из них одну объединенную пробу, которую помещают в предварительно взвешенную стерильную бюксу или чашку Петри.

Из объединенной пробы каждого образца берут е стерильную посуду (пакет для гомогенизации) 20 г продукта с погрешностью, не превышающей 0,1 г.

Навеску помещают в стерлльную емкость (колбу, стакан, пакет) гомогенизатора для приготовления испытуемой взвеси. Для этого к навеске добавляют в четырехкратном количестве 0.1 %-ную пептоиную воду или стерильный физиологический раствор и гомогенизируют.

Для посевов на питательные среды стерильной градуированной пипеткой отбирают над осадочную жидкость после 15 мин выдержки при комнатной температуре, учитывая, что в 1 см3 исходной суспензии содержится 0.2 г продукта.

8.2    Определение количества меэофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

Подготовка исследовании, проведение и учет результатов анализа — по ГОСТ 10444.15 с учетом разделов 4 — 7.8.1 и ниже приведенного.

Ряд десятикратных разведений зависит от предполагаемой контаминации продукта.

Для подсчета количества выросших колоний микроорганизмов, кроме учета в ручном режиме, допускается использовать также приборы: счетчики микроорганизмов для ручного контроля, автоматические анализаторы различных типов, разрешенные к применению в пищевой промышленности.

При применении пластин (подложек) питательных сред [12). [13). [15) ил и других типов, разрешенных к применению в пищевой промышленности, подготовку к анализу, приготовление разведенной пробы выполняют по 8.1.

Пластины питательной среды, предназначенные для подсчета КМАФАнМ. представляют собой готовую систему для нанесения исспедуемого образца, содержащую набор питательных веществ, растворимых в холодной воде: в системуможет также быть включен тетраэопиевый индикатор, облегчающий учет микроорганизмов.

Оптимальный рост микрооэганизмое обеспечивается при анализе образца продукта и его разведений в интервале pH 3.7 —7.5.

Подготовка проб к анализу — по 8.1.

Пластины (подложки) помещают на ровную поверхность питательной среды. Из подготовленного образца или его соответствующих разведений отбирают 1.0 см3 взвеси, снимают крышку пластинчатого устройства (чашки) и в центр пластины вносят отобранный объем взвеси. Внесенная взвесь диффундирует и равномерно распределяется по поверхности матерчатой подложки, трансформируя ее в гель в течение нескольких секунд При выполнении контроля санитарного состояния поверхностей оборудования, рук персонала. упаковки и других объектов прикладывают к ним предварительно увлажненные пластины (подложки). После чего покровную пленку (крышку) пластины (подложки) закрывают и ставят ее в термостат, располагая в горизонтальном положении крышкой вниз. Допускается размещать чашки друг на друга по 20 шт. Затем посевы инкубируют 24 — 48 ч при температуре 30 *С — 35 *С.

Учет результатов анализа — по ГОСТ 10444.15.

При этом учитывают все колонии красного цвета независимо от их размера и интенсивности окраски, что облегчает получение результатов анализа.

8.3    Выявление и определение бактерий рода Salmonella

8.3.1 Основные методы анализа

Подготовка к анализу, проведение и обработка результатов анализа — по ГОСТ Р 50455. ГОСТ Р 52814 с учетом разделов 4 — 7 и ниже приведенного.

Хромогенные и фпюорогенные питательные среды являются питательными средами нового поколения. принцип действия которых основан на выявлении высокоспецифичных ферментов у искомых микроорганизмов. В состав этих сред входит хромогенный субстрат — вещество, при расщеплении которогофер-ментами, специфичными для определенного вида микроорганизмов, образуются окрашенные и/или флюоресцирующие продукты. В результате колонии искомых микроорганизмов окрашиваются в определенный цвет или приобретают сгособностъ к флюоресценции при ультрафиолетовом облучении.

В плотной хромогенной среде [11] присутствие дезоксисилата натрия ингибирует сопутствующую грамположительную микрофлор/.

Посев материала на эту сзеду осуществляют из жидкой селективной среды. Инкубируют посевы в аэробных условиях 24 — 48 ч при температуре 35 °С — 37 *С. Обработка результатов анализа — по ГОСТ Р 50455. ГОСТ Р 52814.

Сальмонеллы при культивировании на этой хромогенной среде образуют кислоту из пролиленгликоля и под воздействием изменения индикатора pH их колонии окрашиваются в красный цвет. Хромогенный субстрат, также имеющийся в составе среды, гидролизуется ферментом (i-галактозидазой. продуцируемым колиформами. в результате -tero колонии колиформных бактерий при росте на этой среде приобретают сине-зеленый или сине-фиолетовый цвет, а остальные энтеробактерии остаются бесцветны.

Плотные селективные хромогенные среды других типов (приложение А) для выделения и идентификации сальмонелл имеют питательную основу из нескольких видов пептонов и содержат три хромогенных субстрата, что обеспечивает розт всех штаммов Salmonella и позволяет определять их специфическую ферментативную активность. Дифференциация штаммов Salmonetfa. в том числе сбраживающих лактозу, от других бактерий основана на том. что продуценты эстеразы образуют розовые или розовато-лиловые колонии. Прочие бактерии образуют колонии других цветов. Селективная смесь ингибирует рост большинства грампопожительных бактерий и дрожжей.

Посев материала на эту питательную среду осуществляют из жидкой селективной среды. Инкубируют посевы в аэробных условиях 18 — 24 ч при температуре 35 вС — 37 *С.

Полужидкие агаризоеанные среды предназначены для выявления подвижных штаммов сальмонелл, диффузный рост которых в толше этих сред проявляется от центра к периферии (ГОСТ Р 52814).

В состав питательной среды пластин (подложек) для анализа сальмонелл входят питательные вещества с добавлением хромоген него субстрата и антибиотика, например, ноеобиоцика. Посев пробы выполняют из среды накопления: открывают поверхностную защитную пленку пластины (подложки), затем в центр среды вносят 1 см3 материала и термостатируют при температуре 43 *С до48 ч. При этом сальмонеллы формируют зеленые или черные колонии за счет распада хромогенного субстрата, присутствующего в среде. Среда вокруг колоний сальмонелл меняет цвет с фиолетового на желтый. При высокой концентрации колоний сальмонелл вся поверхность среды может быть желтого цвета. При выявлении на этой среде подозрительных на сальмонеллы колоний их идентифицируют по ГОСТ Р 52814.

Пластифицированные среды пластин (подложек) других типов (приложение А) могут содержать питательные вещества с добавлением хромогенного субстрата и дезоксихолата натрия, ингибирующего рост грамположительной микрофлоры. Посев пробы выполняют, как указано выше, термостатируют 24 ч при температуре 35 вС. Сальмонеллы ферментируют ксилозу и декарбоксилируют лизин до кадаверина, что сопровождается повышением pH и выделением сероводорода, который, соединяясь с железом, образует сульфит железа, придающий колониям черный цвет.

В состав пластифицированной среды подложек (пластин) для комплексного выявления сальмонелл/Enterobacteriacae входит модифицированный агар, а также субстраты Хчх-Gal (ферментируемый а-галактозидазой) и Salmon-^-Gal (ферментируемый р-галактозидазой). Посев и термостатирование пробы выполняют, как указано выше. При инкубации сальмонеллы формируют голубые или зелено-голу-оые колонии, в то время как другие энтеробактерии формируют колонии пурпурного цвета.

Результаты анализа оценивают по каждой пробе отдельно.

Интерпретацию результатов анализа выявленных культур проводят по ГОСТ Р ИСО 7218.

Если культуры предположительно отнесены к бактериям рода Salmonella, то окончательную идентификацию проводят по ГОСТ Р ИСО 7218. В этом случае результаты выявления бактерий рода Salmonella выдают после получения ответа по окончательной идентификации.

Результаты анализа записывают следующим образом: «бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в 25 смэ жидкого или 25 г сухого продукта».

8.3.2 Ускоренные методы анализа

8.3.2.1 Подготовка и выполнение анализа —в соответствии с разделами 4. 6. 7. [3] — [5]. [8].

(11). (20).

а) Метод выявления и определения бактерий рода Salmonella на основе гетерогенного твердофазного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентной детекцией — по [5].

Этот метод является осноеой функционирования микробиологического анализатора на базе пробирочного люминометра. Его применяют для ускоренного выявления сальмонелл непосредственно из продуктов питания и/или подтверждения выделенных микробиологическими методами культур этих бактерий. Общее время выявления бактерий рода Salmonella составляет 24 — 48 ч.

Сущность метода: основан и действует на принципе гибридизации участка бактериального генома с закрепленным на твердофазном -юситепе (стенке пробирки) комплементарным к определяемой последовательности ДНК сальмонелл олигонуклеотидным зондом, меченным флюоресцентным красителем, с последующей детекцией гибридов ло степени их хемилюминесценции.

Порядок выполнения метода: из точечных проб мясной продукции отбирают 25 г и вносят в обогати* тельный бульон (225 см3), если иасса пробы иная, чем 25 г. используют необходимое количество неселективной среды, исходя из соотношения 1:10; гомогенизируют пробу, выполняют посев и термостатируют его при температуре (37 ± 1) “С в течение 16 —18 ч; переносят 1 см3 из обогатительного бульона в 100 смселективного бульона и инкубируют посев 18 — 24 ч при температуре (41.5 10.5) *С для накопления сальмонелл; затем проводят обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной оболочки сальмонелл и высвобождения рибосомной РНК; выполняют гибридизацию фрагментов рибосом ной РНК с комплементарным меченым зондом; осуществляют хемилюменесцектое детектирование продуктов реакции.

Порядок ускоренной идентификации бактерий рода Salmonella: отбор трех — пяти характерных колоний с дифференциально-диагностических сред; пересев их на питательный агар и инкубирование при температуре 37 *С в течение 24 ч; обработка суточной культуры лизирующим буфером для денатурации бактериальной клетки и высвобождения рибосомальной РНК: гибридизация фрагментов рибосомной РНК с комплементарным меченым ДНК-зондом; хемилюминесцентное детектирование продуктов реакции. Общее время детекции бактерий рода Salmonella этим методом составляет 2 ч.

Описание проведения и учета результатов анализа — по [5].

При выявлении бактерий рода Salmonella результаты подтверждают в соответствии с ГОСТ Р 52814.

б)    Метод, основанный на использовании принципа импеданса

Подготовка и выполнениеэтого метода — по разделам 4.6.7,8.1, [3]. [4].

Сущность метода основана на принципе измерения сопротивления (импеданса) в жидкой питательной среде, специфической для ксследуемого микроорганизма, в зависимости от содержания в ней контролируемых микробных клеток.

Проведение и учет результатов анализа — по [3]. |4).

в)    Метод полимеразно-цепной реакции (ПЦР) для идентификации сальмонелл (9)

Сущность метода основана на обнаружении специфических целевых нуклеотидных последовательностей ДНК, присутствующих в микроорганизмах, посредством полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Используют этот метод, особенно при затруднениях в идентификации сальмонелл взамен расширенного набора биохимических тестов, в случаях отсутствия агглютинации культуры с поливалентной О-сыво-роткой (А. В. С. D. Е) и со смесыо О-сывороток редких групп при положительном результате стандартного набора биохимических тестов; при предположительном результате в случае наличия агглютинации с сыворотками редких групп сальмонелл: нетипичных результатах биохимических тестов (отклонения по двум и более признакам).

Порядок проведения энагиэа:

•    подготовка аппаратуры, материалов, реактивов и питательных сред в соответствии с установленными требованиями.

-    выявление и накопление биомассы бактериальных культур для идентификации, для чего отбирают отдельные колонии с агаризоеанных селективно-диагностических питательных сред;

-    подготовка образцов чистых культур к анализу на анализаторе (смывы с поверхности питательной среды с концентрацией клето< в 1 см3 не менее 5 106);

-    проведение лизиса и выделение ДНК;

•    подготовка к проведению ПЦР;

-ампфликация и детекция;

-    создание протокола (факта) анализа.

Полное описание проведения и учета результатов анализа — по [9].

г)    Метод иммуноферментюго анализа

Сущность метода: выявление сальмонелл основано на применении комплекса высокоспецифичных антител к антигенам О и Н. что позволяет определить как подвижные, так и неподвижные штаммы сальмонелл после предварительного неселективного обогащения проб.

Порядок проведения анализа: подготовка проб — по 8.1; предварительное неселеюгивное обогащение сальмонелл — ло8.3.1; процедура иммуноконцентрации с использованием анализатора для автоматизированного определения сальмонелл; интерпретация результатов; биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных микроорганизмов к бактериям рода Salmonella: оценка результатов анализа.

Проведение и учет результатов анализа — по [8].

При положительном результате анализа его подтверждают по ГОСТ Р 52814.

д)    Твердофазный иммуноферментный анализ с использованием полистирольных планшет

Сущность метода основана на выявлении сальмонелл путем постановки иммуноферменгной реакции

(20).

Анализ выполняют с использованием полистирольных планшетов, покрытых моноклональными анти* телами к термостабильному антигену сальмонелл. Использование твердой фазы позволяет надежно раз* делять компоненты реакции за счет специфичной иммунной сорбции сальмонелл и коньюгатое на поверх* ности планшета.

Результатом проведения ИФА является образование легко детектируемого комплекса антиген* антитело (сэндвича) в лунках с положительными исследуемыми пробами и положительным контролем. При наличии сальмонелл раствор в лунках окрашивается в синий цвет. Для фиксации результатов реакции в лунки добавляют останавливающий реагент, что сопровождается изменением синего цвета на желтый.

Процедура проведения анализа: предобогащение 25 г пробы в 225 смэ забуференной пептонной воды в течение 18 —24 ч при температуре 37 *С; обогащение в течение 18 —24 ч при температуре (45.0 ± 0,5) *С 1 смэ жидкой фазы из среды предобогащения в 10 см3 бульона Раппопорта*Вассилиадиса; перенос по 1 см3 культуральной жидкости после селективного обогащения в отдельную пробирку, каждая из которых содержит 10смэ модифицированного GN-бульона (с добавкой 10 мкг/смэ новобиоцина); инкубирование 4 — 6 ч при температуре (45.010.5) *С; автоклавирование смеси бульонов (по 1 см3) при температуре 120 *С или на кипящей водяной бане 20 мин: охлаждение бульона для последующего исследования методом ИФА; подготовка рабочнх разведений растворов, входящих в комплект тест-системы; извлечение из пакетов необходимого количества стрипов; внесение по 0.1 см3 исследуемых бульонов положительного и отрицательного контролей в соответствующие лунки: инкубирование планшета при комнатной температуре в течение 30 мин; промывание лунок; добавление по 0.1 см3 конъюгата моноклональных антител с пероксидазой; инкубация планшета при комнатной температуре в течение 30 мин: промывание лунок: добавление субстрата и выдержка планшета при комнатной температуре в темноте 30 мин; визуальный учет, остановка реакции и интерпретация результатов.

Подтверждение положитегьных результатов—по ГОСТ Р 50455. ГОСТ Р 52814.

При использовании тестовой системы для выявления сальмонелл процедура проведения анализа состоит из следующих этапов: предобогащение 25 г пробы в 225 см3 забуференной пептонной воды 16—20 ч при температуре (35 ± 1) *С — (37 ± 1 )*С; иммунохимическое связывание на планшете в течение 30 мин при температуре (35 ± 1)*С — (37 ± 1) *С; отмывка планшета, реактивация поврежденных клеток сальмонелл в лунках планшета е течение 4 ч при температуре (35 ± 1) вС—(37 ± 1) *С; добавление в лунки по 0.1 см3 коньюгата; инкубация в течение 30 мин при температуре (35 ± 1) *С— (37 ± 1) *С: вторая отмывка планшета: добавление в лунки 0.1 см3 субстрата/хромогена; инкубация в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте; добавление стоп-раствора.

С помощью 96-луночного ИФА-планшета можно выполнять анализы от одного до 94 образцов одновременно как при визуальной, так и автоматической оценке результатов.

При положительных результатах анализа на наличие сальмонелл проводят биохимическое и серологическое тестирование и окончательно оценивают результаты анализа по ГОСТ Р 50455.

е)    Биохимическая идентификация микроорганизмов рода Salmonella с применением тест-систем (стри-пов) промышленного производства, зарегистрированных в Российской Федерации

Для биохимической идентификации признаков бактерий рода Salmonella допускается использовать наборы тест-систем, зарегистрированных в Российской Федерации.

Порядок использования тел-систем и учет результатов анализа — по ГОСТ Р 52814 (пункт 8.5).

ж)    Метод выявления патогенных микроорганизмов с использованием экспресс-тестов — по [11].

Иммунохроматографичесхие экспресс-тесты предназначены для выявления патогенных микроорганизмов и представляют собой диагностическую тест-панель с лункой для внесения образца, окном с тестовой и контрольной зонами. Экспэесс-тест содержит иммобилизованные на подложке меченные золотом антитела, обладающие высокой специфичностью к определяемым микроорганизмам.

Сущность действия экспресс-тестов основана на методе визуальной иммунохроматографии — разновидности иммунофермент ноге анализа. Антигены определяемых бактерий, присутствующие в исследуемом образце, взаимодействуют с меченными золотом антителами с образованием комплекса антиген-антитело. При прохождении по подложке теста комплекс антиген-антитело связывается с иммобилизованными антителами, образуя краоые линии в тестовой и контрольной зонах, свидетельствующих о наличии искомого микроорганизма в исследуемом образце.

Процедура проведения анализа состоит из следующих этапов.

Неселективное обогащение: навеску анализируемого образца массой (25.0 ±0.1) г или объемом (25.0 ± 0.1) см3 вносят а 225 см3 забуференной пептонной воды. При необходимости анализа других масс (объемов) образца их посев проводят в забуференную пелтонную воду в соотношении 1:9 по объему. Твердью образцы измельчают в гомогенизаторе. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (21 ±3)ч.

Селективное обогащение: 0.1 см3 обогащенной культуры после неселективного обогащения пере* носят в 9.9 см3 среды Раплолорт-Василиадиса. Посевы инкубируют при температуре (41 ± 1)®С в течение (21 ±3)ч.

Инактивация сальмонелл: 1 —2см3 культуры, полученной после селективного обогащения, переносят в пробирку. Инактивируют обогащенную культуру на водяной бане при температуре 80 'С в течение 20 мин. Оставшуюся после селективного обогащения культуру используют для подтверждения положительных результатов.

Тестирование сальмонелл: инактивированную культуру охлаждают до комнатной температуры. Переносят 0,16 см3 инактивированной культуры в лунку для внесения образца теста.

Учет результатов анализа учитывают результаты через 20 мин после внесения инактивированной исследуемой культуры в тестовую лунку. При этом выявляют наличие линий в тестовой (Т) и контрольной (С) зонах. Результат теста считается положительным, если красная линия присутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне. Результат теста считают отрицательным, если красная линия присутствует только в контрольной (С) зоне. Результат теста считается недействительным, если красная линия отсутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне.

Положительный результат под твержда ют по ГОСТ Р 52814.

8.4 выявление и определение Listeria monocytogenes

8.4.1    Основные методы анализа

8.4.1.1    Подготовка, проведение и обработка результатов исследований — по ГОСТ Р 51921 со следующим дополнением.

Хромогенные и флюорогенные питательные среды — по 8.3.1.

В хромогенной среде Оттазиани-Агости (приложение А) наличие ингибиторов подавляет рост некоторых видов листерий (L. seeligeri. L. grayi. L. welshimeri). грамположителькых и грамотрицательных бактерий. а также дрожжей и плесневых прибое. Рост L. monocytogenes и L. нтпосиа не подавляется, а рост L. ivanovii — задерживается. Все листерии обладают активностью фермента p-D-глюкозидаэы и образуют

при вгяимплййгггпии г. хрлмлгАмным субстратом пима.аапамыа колонии I morwioytngAOAS ймяапяАтса по

наличию фермента фосфатидилинозит-фосфолипазы С. Фосфолипазная активность выявляется по наличию зоны просветления вокруг колоний L. monocytogenes. Кроме L. monocytogenes только L. ivanovii проявляет фосфолипазную активность.

Посев на поверхность хроиогенной среды выполняют микробиологической петлей со сред обогащения. приведенных в разделе 5.

Инкубируют посевы 24 ч при температуре 37 вС. При отрицательном результате продлевают инкубацию еще на 24 ч. Все сине-зеленые колонии с зоной просветления среды вокруг колоний учитывают предположительно как наличие Listeria monocytogenes. Для получения окончательных результатов подозрительные колонии изучают по ГОЗТ Р 51921.

В хромогенной питательной среде «Основа диагностического агара для листерий» (приложение А) дифференциация L. monocytogenes от других видов листерий основана на выявлении активности фосфати-дилинозит-специфичной фосфолипазной С активности и ферментации «-метил-О-манмозида. Фермент фосфолипаза С является важным специфическим ферментом и встречается только у L. monocytogenes и L. ivanovii. Он гццролизует очищенный субстрат (FD227), добавляемый в среду, в результате чего вокруг колоний листерий формируется зона помутнения среды. Дифференциация колоний L. monocytogenes и L. ivanovii при этом основана на утилизации «-метил-О-маннозида. L. monocytogenes ферментирует этот субстрат, формируя желтый ореол вокруг колоний, который отсутствует вокруг колоний L. ivanovii.

При получении положительных результатов на наличие L. monocytogenes с использованием хромогенных и флюорогенных питательных сред результаты подтверждают анализом колоний этих микроорганизмов по ГОСТ Р 51921. в том числе системы биохимической идентификации.

8.4.2 Ускоренные методы анализа

8.4.2.1 При подготовке к анализам и их выполнении руководствуются разделами 4. в. 7. [4]. {5]. [9].

а)    Метод выявления и определения L. monocytogenes на основе гетерогенного твердофазного гибри-диэационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием

Его применяют для ускоретого выявления и/или подтверждения принадлежности к L. monocytogenes культур бактерий, выделенных микробиологическими методами [5].

Процедуре выполнения метода: из точечных проб мясной продукции отбирают навеску 25 г, вносят в 225 см3 среды первичного накогления, и инкубируют посевы при температуре 37 *С в течение (24 ± 2) ч; затем из этого посева отбираю* 0,1 см3 суспензии и вносят в 10 см3 бульона Фразера для вторичного обогащения; термостатируют посев при температуре (37 ± 1) ®С в течение 48 ч; обрабатывают культуральную жидкость лизирующим буфером для денатурации бактериальной клетки и высвобождения рибосомной РНК: осуществляют гибридизацию фрагментов рибосомной РНК с комплементарным меченым ДНК-зон-дом и хемилюминесцентное детектирование продуктов реакции.

Ускоренная идентификация культур, выделенных из мясных продуктов, и определение их принадлежности к L. monocytogenes предусматривает следующее: получение суточной культуры микроорганизма; обработку суспензии суточной культуры клеток лизирующим буфером для денатурации бактериальной клетки и высвобождения рибосомной РНК: гибридизацию фрагментов рибосомной РНК с комплементарным меченым ДНК-эондом; хемилюминис^ектное детектирование продуктов реакции. Общее время идентификации 1. monocytogenes — 2 ч.

Описание проведения и учета результатов анализа—по [5].

б)    Метод измерения электрического сопротивления (импеданса)

Подготовка к проведению анализа — по 4.2. разделам 6.7.

Сущность метода — по 8.3.2.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа с использованием экспресс-анализатора — по (4).

в)    Метод ПЦР при идентификации Listeria monocytogenes с использованием тест-систем, разрешенных к применению в пищевой промышленности, допускается использовать одновременно с определением лецитиназной и ^гемолитической активности [9].

Сущность метода — по 8.3.2.

Порядок проведения анализа — по 8.3.2. Первичный посев для выявления Listeria monocytogenes осуществляют по ГОСТ Р 51921.

Для определения принадлежности характерных колоний к Listeria monocytogenes отбирают отдельные (3—4) колонии с селективно-диагностических сред после их инкубирования и пересевают штрихами на поверхность плотных питательных сред или в пробирки с жидкими средами (триптонсоевый бульон с дрожжевым экстрактом) и инкубируют 24 ч при температуре (37 ± 1) *С.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [9].

г)    Метод иммуноферментного анализа с использованием анализатора.

Сущность метода — по 8.3.2.

Проведение и учет результатов анализа — по ГОСТ Р 51921 (разделы 7.8).

д)    Метод твердофазного иммуноферментного анализа

Сущность метода основана на выявлении бактерий рода Listeria, в том числе L. monocytogenes, путем постановки иммуноферментной реакции с помощью тест-систем [21]. Анализ выполняют на полисти-рольных планшетах, покрытых моноклональными антителами к антигену этих бактерий. Результатом проведения ИФА является образование легко детектируемого комплекса антиген-антитело (сэндвича) в лунках с положительными исследуемыми пробами и положительным контролем. В отсутствие листерий. а также в лунке сотрицательным контролем, иммунокомплекс не образуется. При наличии листерий раствор в лунках окрашивается в синий цвет; для оиксации результатов реакции в лунки добавляется фиксирующий реагент, при этом цвет раствора меняется на желтый.

Процедура проведения анализа: лредобогащение 25 г пробы в 225 см3 бульона Фразера в течение 24 ч при температуре 30 °С; обогащение 0.1 см3 предобогащениого бульона Фразера путем его внесения в 10 см3 бульона Фразера и культивирования 24 ч при температуре 30 вС; инактивирование жизнеспособных бактерий путем тепловой обработки при температуре 100 вС в течение 20 мин после их инкубации в среде обогащения: подготовка рабочих разведений растворов, входящих в комплект тест-системы; извлечение из пакетов необходимого количества стрипов; внесение по 0.1 см3 исследуемых растворов, положительного и отрицательного контролей в соответствующие лунки; инкубирование планшета при температуре 37 вС

30 мин; промывание лунок: добавление е лунки по 0,1 см3 конъюгата моноклональных антител с пероксида* эой; инкубация планшета при температуре 37 °С в течение 30 мин: промывание лунок, добавление субстрата и выдержка планшета при коинатной температуре в темноте 30 мин; визуальный учет, остановка реакции. Учет результатов и подтверждение положительных результатов — по ГОСТ Р 51921.

е) Иммумохроматографический экспресс-тест [11]

Сущность и принцип метсда основаны на выявлении Listeria monocytogenes с использованием им-мунохроматографического теста, представляющего собой диагностическую тест-панель с лунками для внесения образца и окном с тестовой и контрольной зонами — по 8.3.2.

Процедура проведения анализа.

Предварительное селективное обогащение: навеску анализируемого образца массой (25.0 ± 0.1) г или объемом (25.0 ± 0.1) см3 вносят в 225 см3 бульона Фразера половинной концентрации или в селективный бульон для листерий (ЮВМ), При необходимости анализа других масс (объемов) образца их посев проводят в селективную среду Бульон ЮВМ в соотношении 1:9 по объему. Твердые образцы измельчают в гомогенизаторе. Посевы инкубируют при температуре (30 ± 1) *С в течение (21 ± 3) ч.

Селективное обогащение:0,1 см3 культуры после предварительного селективного обогащения переносят в 9.9 см3 бульона Фразера или бульона для обогащения листерий (ЮВМ). Посевы инкубируют при температуре (37± 1)*Сетечение<21 ±3)ч.

Инактивация листерий: 1—2 см3 культуры, полученной после селективного обогащения, переносят в пробирку. Инактивируют обогаценную культуру на водяной бане при температуре 80 "С в течение 20 мин.

Оставшуюся после селективного обогащения культуру используют для подтверждения положительных результатов.

Тестирование L. monocytogenes: инактивированную культуру охлаждают до комнатной температуры. Переносят 0.18 см3 инактивированной культуры в лунку для внесения образца экспресс-теста.

Результаты анализов учитывают через 20 мин после внесения инактивированной исследуемой культуры в тестовую лунку, для чего выявляют наличие линий в тестовой (Т) и контрольной (С) зонах экспресс-теста. Результат теста считается положительным, если красная линия присутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне. Результат тестирования считается отрицательным, если красная пиния присутствует только в контрольной (С) зоне. Результат тестирования считают недействительным, если красная линия отсутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне.

Положительный результат подтверждают, используя дифференциально-диагностические среды по ГОСТ Р 51921.

8.5 Выявление и определение энтерококков (E.faecalis, E.faecium)

8.5.1    Основные методы анализа

8.5.1.1    Подготовка, проведение и учет результатов анализа — по ГОСТ 28566 (пункты 4.5) с учетом разделов 4 — 7 и ниже приведенного.

Ряд десятикратных разведений выполняют в зависимости от предполагаемой контаминации продукта.

Хромогенная среда типа «основа хромогенного агара» для выделения и дифференциации Е. faecalis и Е. faecium. кроме питательных веществ, содержит арабинозу и хромогенный субстрат, который окрашивает колонии этих микроорганизмов в различный цвет. Е. faecalis не ферментирует арабинозу и формирует колонии синего цвета. Е. faecium ферментирует арабинозу и образует колонии зеленой окраски.

На хромогенных агаровыхсредах. в составе которых имеется эсхулик и предназначенных для выявления энтерококков и Д-стрептококков, эти микроорганизмы гидролизуют эскулии с почернением среды. Селективность среды обеспечивается наличием в ней канамицина и азида натрия (ингибирование грамот-рицательной микрофлоры), и желчных кислот (ингибирование грамположительных микроорганизмов).

Энтерококки и стрептококки группы Д образуют характерные бесцветные или серые колонии, окруженные черным ореолом. Окончательная идентификация этих микроорганизмов с изучением их биохимических свойств — по ГОСТ 28566.

Для контроля качества среды используют штамм согласно ГОСТ Р ИСО 11133-2. На данной среде может наблюдаться рост листерий и стафилококков.

8.5.2 Ускоренный метод анализа путем измерения электрического сопротивления (импеданса)

8.5.2.1    Подготовка к анализу и сущность метода — по 8.3.2.

8.S.2.2 Порядок проведения анализа: подготовка прибора к анализу; внесение в ячейку прибора с питательной средой 1 см3 из соответствующих разведений образца; перемешивание содержимого ячейки; внесение в отдельную ячейку контрольного образца питательной среды; начало измерений; учет результатов.

Полное описание проведения и учета результатов анализа — по [4].

8.6    Выявление бактерий группы кишечных палочек (БГКП)

8.6.1    Основные методы анализа

8.6.1.1    Подготовка, проведение, обработка и учет результатов анализа—по ГОСТ Р 52816 (разделы 8 —10), ГОСТ Р 50454 (разделы 8 —10) с учетом разделов 4 — 7 и ниже приведенного.

Для приготовления гомогената при проведении анализа используют стерильные полимерные пакеты, а гомогенизацию осуществляют : применением аппарата перильстатического или других типов.

Когда исследуемый объем 1 см5 < х £ 10 см3 (х. см3 жидкой пробы, х, см3 исходной суспензии при использовании других продуктов), используют одну из обогатительных селективных сред двойной концентрации в объеме 10смэ. Пробирж с посевами в среде двойной концентрации инкубируют при температуре 37 *С в течение (24 ± 2) ч, после чего из этих пробирок инокулируют посевы петлей в селективную среду нормальной концентрации. Затем эти посевы инкубируют в термостате при температуре 37 *С в течение (24 ± 2) ч. Если в них не отмечено образование газа, то продолжают наблюдение до (48 ± 2) ч. Посевы, в которых отмечено образование аза после (24 ± 2)ч или после (48 ± 2) ч инкубирования, считают положительным.

Если исследуемый объем х£ 1 см3, то его вносят в пробирку, содержащую 10 см3 одной из обогатительных селективных сред нормальной концентрацией. Пробирки с посевами инкубируют при температуре 37 *С в течение (24 ± 2) ч. Если в этих пробирках не отмечено образование газа или помутнения, затрудняющего выявление газа, продолжают инкубацию еще (24 ± 2) ч. После чего из пробирок, в которых отмечено образование газа или помутнение, инокулируют посевы петлей в селективную среду. Эти посевы инкубируют в термостате при температуре 37 *С в течение (24 ± 2)ч. Если в них не выявлено образование газа, то продолжают термостатную вь держку до (48 ±2) ч. Посевы, в которых отмечено образование газа после (2412) ч или после (48 ± 2) ч инкубирования, считают положительным.

Принцип действия хромогенных основных питательных сред, а также пластик (подложек) по выявлению колиформных бактерий основан на реакции вырабатываемого ими фермента р-галактозидазы. который расщепляет хромогенный субстрат питательной среды, формируя цвет колоний этих микроорганизмов. 8 зависимости от состава индикатора колонии БГКП формируют определенный цвет, например, голубой или зеломо голубой (12], (13). розовый (до красного) (16).

В состав питательной среды пластин (подложек) входит растворимый в холодной воде гелеобраэую-щий агент.

Подготовка образцов, внесение испытуемых взвесей на поверхность хромогенных питательных сред, етом числе пластин (подложек) — по8.1,8.2.

Для подавления роста граылоложительных микроорганизмов в составе среды имеется ингибиторное вещество.

Инкубируют посевы 24 ч при температуре 35 *С— 37 вС. Учет результатов анализа — по ГОСТ Р 52816. ГОСТ Р 50454.

Для автоматическою учета колоний и регистрации результатов анализа на наличие колиформных бактерий допускается использовать устройства, разрешенные для этих целей.

8.6.2 Ускоренный метод анализа на принципе импеданса {3}, [4]

8.6.2.1    Подготовка проб к анализу и отбор их навесок — по 8.1.

8.8.2.2    Сущность метода — no 8.3.2.2.

8.6.2.3    Процедура проведения и учета результатов анализа — по [3). (4).

8.7    Выявление Escherichia coli

8.7.1    Основные методы анализа

8.7.1.1    Подготовка, проведение, обработка и оформление результатов анализа — по ГОСТ Р 52830. ГОСТ 30726, ГОСТ Р 50454 с учетом разделов 4 — 7 и ниже приведенного.

Действие хромогенных питательных сред для выявления Е. coli основано на обнаружении специфического фермента |*-глюкуронидазы у этих микроорганизмов с образованием продуктов, окрашивающих их колонии в специфический цвет, а флюорогенных —в расщеплении флюорогвнного субстрата ферментом Р-глюкуронидаза, содержащиеся в клетках Е. coti, с образованием флюоресцирующего (под воздействием УФ-света) продукта в питательной среде.

Порядок проведения анагиза с использованием хромогенных и флюорогенных питательных сред: подготовка к анализу — по разделу 7.8.1: посев суспензии (твердых образцов) или жидких образцов на поверхность плотной хромогенной или в жидкую питательную среду — по (16]; термостатироеание при температуре 37 *С в течение (21 ± 3) ч; учет и оценка результатов анализа; после термосгатирования на хромогенной плотной питательной среде колонии Е. coli приобретают темно-синий или фиолетовый цвет, колиформные бактерии — розовый, красный; при использовании флюорогенной среды у Е. ooli отмечается наличие флюоресценции при облучении ультрафиолетовой лампой.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа с использованием хромогенных и флюорогенных питательных сред—по [16].

8.7.2    Выявление и идентификация энтерогемморагической кишечной палочки Е. coli 0157:Н7

Выявление Е. coli 0157:Н7с применением дифференциально-диагностического метода основано на использовании биохимических особенностей данного микроорганизма—отсутствии способности ферментировать сорбитол и наличии продукции веротоксиное VT1. VT2.

Порядок анализа при выявлении Е.со(Ю157:Н7: подготовка к анализу — по разделу 7.8.1; отбор 25 г из навески пробы и внвоениэ в селективную питательную среду; инкубирование посева в селективной питательной среде при температуре 37 вС в течение 18 —24 ч; посев из селективной среды на плотную питательную среду, обладающую селективными свойствами для Е. coli 0157:Н7; термостатироеание посева 24 ч при температуре 37 *С; просмотр посевного материала и выявление [10] на питательной среде колоний, характерных для Е. coti 0157:Н7; биохимическая и серологическая идентификация выявленных микроорганизмов; изучение томсигенных свойств (при положительном результате исследований); учет и оценка результатов анализа.

Полное описание процедуры проведения идентификации Е. coli 0157:Н7 и учета результатов анализа—по (10).

8.7.3    Выявление Е. coli с использованием пластин (подложек) [12], (13] или их аналогов

Подготовка образцов, внесение исследуемой взвеси на поверхность этих пластин (подложек)—по

8.1. 8.2.

Пластины (подложки) для выявления Е. coli — готовые стерильные системы с пластифицированной средой, содержащей модифицированный питательный состав с желчью и другими селективными компонентами. ингибирующими рост гэамположительных микроорганизмов.

Принцип действия основан на выявлении у Е. coli специфического фермента p-глюкуронидазы. Хромогенный субстрат Х-глюкуронид. используемый в питательной среде, позволяет выявить глюкуронидаз-ную активность. Клетки Е. coli сорбируют Х-глюкуронид. внутриклеточная глюкуронидаза расщепляет связь между глюкуронидом и хромофором, который, высвобождаясь в присутствии хромогенного субстрата, окрашивает колонии Е. ooli в пурпурный цвет. При использовании другого хромогенного субстрата колонии Е. coli могут приобретать иной цвет, например, синий.

Проведение анализа — по 8.1.8.2.

Инкубируют посевы 24 ч пои температуре 35 *С — 37 "С.

Рост микроорганизмов проявляется в виде колоний пурпурного (синего) цвета.

Учет результатов анализа — по ГОСТ Р 50454.

Для автоматического учета и регистрации результатов анализа на наличие Е. coli разрешается использовать устройства, допущенные для применения в этих целях.

8.7.4    Ускоренные методы анализа

8.7.4.1 Организация проведения анализа — по разделу 6. подготовка к проведению анализа — по разделу 7. подготовка проб и отбор их навесок при проведении анализа — по 8.1.

а) Метод выявления Е. col, основанный на принципе импеданса

Сущность и этапы выполнения метода — no 8.3.2.2.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [3]. (4) с учетом раздела 7.8.1.

б)    Метод ПЦР для идентификации Е. coli 0157:Н7

Сущность метода — по 8.3.2.3.

Порядок анализа: подготовка к проведению анализа, в том числе приготовление растворов и реактивов. питательных сред—по 5.1.5.2. [8]; выделение и накопление биомассы бактериальной культуры путем отбора отдельных колоний (не менее трех сорбитолотрицагелькых или пакгозоположительных), характерных для Е. coli 0157:Н7 с агаризированных селективно-диагностических сред (сорбитол-агар Е. coti 0157:Н7- агар и др.) и пересеве на поверхность агара Клиглера или Олькеницкого. или Ресселя. или в триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом: инкубирование посевов при температуре 37 *С 18—24 ч; подготовка образцов чистых культур к анализу: проведение лизиса и выделения ДНК: подготовка к проведению ПЦР. амплификация и детекция; оценка результатов идентификации на основе протокола (файлов) анализа.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [9).

в)    Иммунохроматографический экспресс-тест для выявления Е. coli 0157:Н7 [11)

Сущность метода — это диагностическая тест-панель, содержащая иммобилизованные на подложке меченные золотом антитела, обгадающие высокой специфичностью к Е. coli 0157:Н7 или веротоксинам.

Принцип действия экспресс-теста основан на методе визуальной хроматографии — разновидности иммунофермектного анализа.

Антигены Е. coli 0157:Н7 или верогоксикое. присутствующих в исследуемом образце, взаимодействуют с меченными золотом антителами собразованием красных линий в тестовой и контрольной зонах. Исследуют предварительно обогащенные образцы.

Процедура проведения анализа.

Селективное обогащение Навеску анализируемого образца массой (25±0,1) г или объемом (2510.1) см3 вносят в 225 смэ модифицированного бульона с новобиоцином (мЕС-бульон). При необходимости анализа других масс (объемов) образцов их посев проводят в селективный бульон в соотношении 1:9 по объему. Твердые образцы измельчают в гомогенизаторе. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) *С а течение (21 ±3)ч.

Инактивация исследуемой культуры микроорганизма.

1—2 см3 культуры, полученной после селективного обогащения, переносят в пробирку. Инактивируют обогащенную культуру на водяной бане при температуре 100*С 15 мин.

Тестирование инактивированной культуры.

Инактивированную культуру охлаждают до комнатной температуры. Переносят 0,16 см3 инактивированной культуры в лунку для внесения образца тестового устройства.

Учет результатов. Учитывают результаты через 20 мин. Проверяют наличие линий в тестовой (Т) и контрольной (С) зонах. Результат теста считается положительным, если красная линия присутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне. Результат теста считается отрицательным, если красная линия присутствует только в контрольной (С) зоне. Результат теста считается недействительным, если красная линия отсутствует как в тестовой (Т), так и в контрольной (С) зоне.

Положительные результаты необходимо подтвердить, используя агар Мак-Конки с сорбитолом (СМАК-агар) или агар Мак-Конкиссорбитолом усиленной селективности (ЦТ-СМАК-агар) с последующей идентификацией по 8.7.1 с использованием основного метода анализа, предназначенного для выявления Е. coli0157:H7.

г)    Метод иммуноферментного анализа для выявления Е. ooli 0157:Н7 с использованием анализатора

Сущность метода и порядок проведения анализа — по 8.3.2.4.

Описание проведения и учэта результатов анализа - по 8.4.2.4.

8.8 Выявление и определение количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus

8.8.1    Основные методы анализа

8.8.1.1    Подготовка к проведению, проведение, обработка и оформление результатов анализа — по ГОСТ Р 52815 с учетом разделов 4 - 7.8.1 и ниже приведенного.

При проведении анализа применяют отечественные и зарубежные питательные среды, в том числе хромогенные. — по разделу 5. Принцип действия хромогенной питательной среды для выявления S. aureus заключается в подавляющем воздействии на большинство сопутствующей микрофлоры за счет наличия в этой среде хлорида лития и теллурита калия и в специфическом окрашивании колоний стафилококков.

Коагулаэоположителькые стафилококки и S. aureus образуют коричнево-черные колонии с непрозрачной зоной по их периметру, a S. epidermidis — коричневые. L. monocytogenes образуют колонии голубоватого цвета. Bacillus spp. Е. coli и Micrococcus spp. — бесцветные.

Пластины (подложки) для выделения стафилококков содержат хромогенную среду на основе питательной среды Байрд-Паркера или пластифицированной питательной среды, содержащей модифицированный солевой агар с теллуритом (приложение А).

При проведении анализа с использованием среды Байрд-Паркера в центр пластины вносят 1 см3 жидкой пробы или исходной суспензии других видов продуктов, или его разведения. Затем добавляют 0.3 см3 суспензии стерильного яичного желтка (7—8 капель на чашку среды Компакт Драй) и термостати-руют при температуре (35 ± 2) *С в течение 48 ч. S. aureus формирует на данной среде желтые колонии с непрозрачной зоной вокруг.

Учет и обработка реэультагое анализа — по ГОСТ Р 52815.

При использовании пластин (подложек) с наличием в них солевого агара стеллуритом восстановление теллурита в процессе роста стафилококков приводит к образованию колоний черного цвета [12]. Ферментация. связанная с кислотнофосфотазной активностью S. aureus, в присутствии хромогенногосубстра-та сопровождается окрашиванием колоний в голубой цвет, в результате формируются черные колонии S. aureus с голубым ореолом.

Проведение анализа — по 8.1.8.2.

Инкубируют посевы 24 —48 ч при температуре 35 *С. Рост S. aureus проявляется в виде колоний черного цвета с металлическимоттенком. окруженных голубым ореолом.

Учет и обработка результатов анализа — по ГОСТ Р 52815.

8.8.2 Ускоренные методы анализа

Сущность метода и порядок проведения анализа —по [3]. [4].

Описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [3]. [4].

8.9    Выявление Bacillus cereus

Подготовка, проведение, обработка и оформление результатов анализа —по ГОСТ 10444.8 (разделы 4.5); разделы 4 — 7.8.1.

8.10    Выявление и определение количества сульфитредуцирующих клостридий

Проведение, обработка и оформление результатов анализа — поГОСТ 29185 (рааделы4, 5); разделы 4 — 7.8.1.

8.11    Выявление бактерий рода Proteus

Проведение, обработка и оформление результатов анализа — по ГОСТ 28560 (разделы 4. 5); разделы 4 — 7.8.1.

8.12    Выявление Yersinia enterocolitica

8.12.1 Основные методы анализа

Аппаратура, лабораторная посуда, материалы — пораэделу4.1.

Питательные среды — по разделу 5.

Организация и проведение микробиологического анализа—по разделу 6.

Подготовка к проведению анализа — по разделу 7.

Подготовка проб и отбор и.< навесок при проведении микробиологического анализа — по разделу 8.1.

Порядок анализа: отбор, транспортирование и хранение проб: подготовка к исследованиям; посев пробы в селективную среду и инкубирование посева 24 ч при температуре 30 *С - 32 *С; пересев из селективной среды на плотную селективную среду и инкубирование 24 —28 ч при температуре 30 "С — 32 °С; учет реэультатовс идентификацией выросших колоний, характерных для Y. enterocolitica.

Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [7] с учетом раздела 7.8.1.

Свойства энтеропатогенных иерсиний приведены в таблице 1.

Таблица 1

Тесты

Результаты

Y. enlerocoMica

Y pseudotuberculosis

Оксидаза

Глюкоза

К

К

Цитрат Симонса

Мочееиза (уреаза)

4

4

Сахароза

4

4

Салицин

—/+

Сорбит

4

Рамноза

4

Глицерин

4

+/—

Мальтоза

4

4

Биовар

Л

II

ш

IV

Индол

4

Ксилоза

4

' Биовары отсутствуют.

Примечание — Знак <+» — положительный результат: знак «—» — отрицательный результат: К — образование кислоты.

8.13 Выявление бактерий рода Campylobacter

8.13.1 Основные методыанализа

Сущность метода заключается в выявлении и определении бактерий рода Campylobacter при использовании жидких селективных сред с наличием антибиотиков и аэротолерантных добавок с пересевом на твердые селективные питательные среды и дальнейшей инкубацией в микроаэрофильных условиях с последующей идентификацией этих микроорганизмов.

Аппаратура, материалы, лаьораторная посуда, реактивы, питательные среды — по разделам4. ьс учетом [6].

Организация проведения анализа—по разделу 6. подготовка к проведению анализа—по разделу 7. подготовка проб и отбор их навесок при проведении микробиологического анализа — по 8.1 с учетом (6].

Порядок анализа: приготовление навески; посев в обогащенный бульон: предварительное обогащение в жидкой среде (бульоне) в микроаэрофильных условиях 4 ч при температуре 37 *С или 3 ч при температуре 32 “С, 2 ч при температуре 32 °С (для замороженных или хранившихся более 10 дней продуктов); обогащение в жидкой среде (бульоне) 18 — 24 ч при температуре 42 *С в микроаэрофильных условиях; пересев на поверхность селективного агара; инкубация 24 — 48 ч в микроаэрофильных условиях; учет результатов с подтверждением родовой и видовой идентификации (таблица 2); получение окончательного результата.

Полное описание процедуры проведения и учет результатов анализа — по [6].

Свойства бактерий рода Campylobacter приведены в таблице 2.

Таблица 2

Признак

вид

C-jejuni

С. cola

С. lari

С. hyomtesliabs

С. upsabensis

Рост при 25 *С

V

Гидролиз гиппурата

4

Продукция H2S (на ТСА)

V

+

Окончание таблицы 2

Признак

виа

С. jejuni

C.coli

C. tan

C hyo*nles)ialis

C. upsabensis

Продукция каталазы

+

+

+

+

Продукция оксидазы

+

+

+

+

+

Устойчивость: к налидиксовой кислоте

s«»

S

R

R

S

к цефалотину

R

R

R

S

s

Примечание — Зна< «+» — 90 % и более штаммов положительные; знак «—» — 90 % и более штаммов отрицательные; V — от 11 % до 89% штаммов положительные: S — чувствительные: R — устойчивые; (с) — незначительное образование H2S на свежем {менее 3 дней) ТСА; — есть сообщение о штаммах, чувствительных к налидиксовой кислоте.

8.13.2 Ускоренные методы анализа

8.13.2.1    Метод ПЦР для идентификации кампилобактерий

Сущность метода — no 8.3.2.3.

Подготовка к проведению анализа — по разделам 4.6.7.8.1 и [9).

Порядок анализа при идентификации бактерий рода Campylobacter: отбор отдельных (3—4) колоний с авизированной питательной среды; посев материалов из этих колоний на поверхность кровяного Колумбийского агара или бульона для бруцелл; инкубирование посевов (42 ± 1) °С в течение 48 ч в микроаэро-фильной атмосфере; подготовка образцов чистых культур к лизису; проведение лизиса и выделение ДНК; подготовка к проведению ПЦР; амплификация и детекция; оценка результатов идентификации.

Описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по (9].

8.13.2.2    Иммунохроматографичвский экспресс-тест для выявления кампилобактерий [11]

Подготовка к лроеедениюаналиэа — по 4.2. разделам 6.7.8.1.

Сущность метода — по 8.3.2.7.

Проведение анализа

Селективное обогащение. Навеску анализируемого образца массой (25 ±0.1) г или объемом (25 ±0.1) см3 вносят в 225 см3 селективного бульона Болтона. При необходимости анализа других масс (объемов) образца их вносят в селективный бульон Болтона в соотношении 1 ; 9 по объему. Твердые ибразцы измельчаю! ыимишнизаюре. Обьем воздуха но флаконе (пробирке) после посева не должен превышать 10 % — 15 %. Если объем воздушного пространства превышает 15 %, то культивирование проводят в микроаэрофильных условиях, используя для этого гаэогенерирующие пакеты. Посевы инкубируют в два этапа: первый этап — при температуре (37 ± 1) ”С в течение 4 ч; второй этап — при температуре (41 ± 1) ®С в течение (44 ± 2) ч.

Инактивация исследуемой культуры микроорганизма. 1 — 2 см3 культуры, полученной после селективного обогащения, переносят в пробирку. Инактивируют обогащенную культуру на водяной бане при температуре 100 ®С в течение 15 мин. Оставшуюся после обогащения культуру используют для подтверждения положительных результатов.

Тестирование инактивированной культуры. Инактивированную культуру охлаждают до комнатной температуры. Переносят 0.16 см3 инактивированной культуры в лунку для внесения образца.

Учет результатов. Через 20 мин после внесения образца в лунку учитывают результаты. Проверяют наличие линий в тестовой (Т) и контрольной (С) зонах тестового устройства. Результат теста считают положительным. если красная линия присутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне. Результат теста считается отрицательным.если красная линия присутствует только в контрольной (С)эоне. Результат теста считают недействительным, если красная линия отсутствует как в тестовой (Т). так и в контрольной (С) зоне.

Положительные результаты подтверждают по 8.13.1.

8.13.2.3    Метод иммуноферментного анализа

При проведении иммуноферментного анализа используют анализатор Vidas/mini Vidas.

Сущность метода — по 8.3.2.4.

Подготовка и порядок анатиэа — по [6].

Полное описание проведения и учет результатов анализа — по [6].

8.14    Выявление молочнокислых бактерий

8.14.1    Основные методыанализа

Проведение, обработка и оформление результатов анализа — по ГОСТ 10444.11 (разделы 4.5): раз» делам 4 — 7,8.1 и с учетом ниже приведенного.

8.14.2    Ускоренный метод анализа лактобактерий

Сущность метода и порядок анализа — по 8.3.2.

Полное описание проведения и учета результатов анализа - по (4).

8.15    Выявление дрожжей и плесневых грибов

8.15.1    Основные методыанализа

Проведение и учет результатов анализа — по ГОСТ 10444.12 с учетом разделов 4 —7.8.2.1 и ниже приведенного.

Пластины (подложки) готовой питательной среды для выявления дрожжей и плесневых грибов содержат растворимый в холодной воде гелеобразующий агент, краситель, антибиотики, препятствующие развитию другой микрофлоры, содержащейся в исследованном образце.

Подготовка образцов, внесение исследуемой взвеси на поверхность пластины — по 8.1.8.2.

8.15.2    Ускоренный метод анализа

Сущность и порядок анализа — по 8.3.2.

Метод основан на принципе изменения импеданса в процессе культивирования микроорганизмов.

Подготовка анализа, его выполнение и учет результатов — по разделам 4.6.7. [3]. [4].

8.16    Выявление бактерии рода Pseudomonas

Подготовка к анализу, подготовка проб и отбор их навесок при проведении микробиологического анализа — по разделам 4 — 7.8.1.

8.16.1 Процедура проведения анализа

Исходную суспензию или соответствующее разведение пробы вносят в одну из жидких питательных сред, предназначенных для культивирования бактерий рода Pseudomonas — по разделу 5.

Если концентрация бактерии рода Pseudomonas предполагается достаточно высокой, то этап посева в жидкую среду исходной суспензии или соответствующего разведения можно не проводить, а выполнять непосредственно посев 0.1 см3 исходной суспензии или ее разведений на поверхность одного из селективных агаров, указанных в разделе 5.

Термостатируют эти посевы при 25 "С в течение 24 — 48 ч. после чего из жидкой питательной среды с помощью микробиологической петли проводят пересев на поверхность одного из селективных агаров по разделу 5. Термостатируют чаш<и с посевами при 25 *С в течение 48 ч.

При наличии роста на селективном агаре с поверхности чашки отбирают произвольно пять изолированных колоний и пересевают на скошенный питательный агар каждую из них для проведения биохимического подтверждения свойств бактерий рода Pseudomonas. Термостатируют эти посевы при 25 *С в течение 24 ч.

До определения биохимических свойств бактерий, выросших на селективном агаре, и установления их принадлежности к роду Pseudomonas исследуют их на оксидазный тест и способность ферментировать глюкозу.

Оксидаэный тест. Этот тестяапяется дифференциальным, т. к. все бактерии рода Pseudomonas являются оксидазололожительными.

Присутствие оксидазы у исследуемой культуры определяют нанесением бактериальной культуры полимерной (при использовании петель из других материалов возможно искажение результатов) петлей на фильтровальную бумагу с оксидазным реагентом или оксидазный диск. При наличии оксидазы у исследуемой культуры в течение 5 —10 с изменяется цвет бумаги или диска до фиолетового или пурпурного. Если цвет не изменился после 10 с. то тест считается отрицательным.

8.16.2 Тест на ферментацию глюкозы

Бактерии рода Pseudomoras не ферментируют глюкозу. Анализ способности анализируемой культу» ры ферментировать глюкозу выполняют следующим образом.

В пробирки с 10 см3 глюковного агара уколом засевают исследуемую культуру.

Термостатируют посевы при 25 *С в течение 24 ч.

Тест считается отрицательным, если пурпурный цвет агара не изменяется на желтый во всем содержимом пробирки, т. е. отсутствует ферментация глюкозы и не происходит обесцвечивания бромкреэолоеого пурпурного индикатора. Некоторые штаммы Pseudomonas могут образовывать желтый цвет, но только на поверхности агара в результате окисления глюкозы.

Бактерии из колонии, показывающие положительную оксидазкую реакцию и отсутствие ферментации глюкозы, считают микроорганизмами рода Pseudomonas.

Бактерии рода Pseudomoras представляют собой грамотрицательные. оксидазоположительные, не окисляющие глюкозу и формирующие при 25 *С колонии на селективном агаре.

Учет результатов анализа: при выявлении микроорганизмов с указанными выше свойствами результаты считают положительными.

9 Требования безопасности

При мифобиологическом анализе пищевых продуктов руководствуются ГОСТ Р ИСО 7218. (22].

Приложение А (справочное)

Перечень рекомендуемых микробиологических питательных сред

А.1 Перечень рекомендуемых микробиологических питательных сред приведен в таблице А.1 Таблица А.1

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Мезофильные аэробные и факультативные анаэробные бактерии (КМАФАнМ)

Питательная среда № 1 ГРМ для кошчесгвенного определения микробной загрязненности.

Питательная среда № 1 для контроля микробной загрязненности.

Среда для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизме»: КМАФАнМ.

ПД-arap (питательный агар для культивирования микроорганизмов).

Среда Рингвра для разведения образцов — RINGER tablets for the preparation of RINGER’S solution.

Питательный агар для подсчета микроорганизмов — Plate count agar Casein-peptone glucose yeast extract agar for microbiology.

Триптиказо-соееый агар — Tryptic soy agar Casein-peptone soymeal-peptone agar for microbiology USP.

Триптон-дрозкжевой агар с глюкозой — Tryptone Glucose Extract Agar (Tryptone Glucose Yeast Extract Agar).

Стандартный агар для определения микробного числа — Plate Count Agar (Standard Methods Agar).

Дрожжевой тритон-соевый агар — Tryptone Soya Yeast Extract Agar.

Соевый агар с казеиновым переваром (триптон-соевый агар) — Soyabean Casein Digest Agar (Tryptone Soya Agar) (Antibiotic Assay Medium No. 36).

Агар для подсчета бактерий, дрожжей и плесеней — Standard methods agar (РСА).

Трипкаэо-соевый агар для выделения непритязательных микроорганизмов — Trypcase Soy agar.

Среда Компакт Драй ТК (Compact Dry ТС)

Дрожжи и плесневые грибы

Питательная среда № 2 ГРМ (Сабуро) для выращивания грибов.

Бульон Сабуро (готовый во флаконах).

Агар Сабуро (готовый во флаконах).

Питательная среда для выделения грибов рода Кандида сухая (Кандида-агар).

Среда для определения дрожжей и плесеней.

Питательная среда № 2 для контроля микробной загрязненности (Агар Сабуро).

Агар Сабуро.

Агар Сабуро в комплекте с антибиотиком пввомицетином.

Бульон Сабуро (сухая питательная среда).

Бульон Сабуро в комплекте с антибиотиком левомицетином.

Среда Чапека (сухая питательная среда).

Питательная среда № 2 ПД (для выращивания грибов — Сабуро).

Бульон Сабуро 2 % — SABOURAUD-2 % dextrose broth for microbiology. Солодовый бульон — Malt extract broth for microbiology.

Основа сусло-бульона — Wort broth (base) for microbiology.

Агар Сабуро A % глюкозы — SABOURAUD 4 % dextrose agar for microbiology. Селективный агар с хлорэмфенмсолом на дрожжи и плесневые грибы -YGC agar Yeast extract glucose chloramphenicol agar FIL-IDF for microbiology. Картофельный глкжозный агар — Potato dextrose agar for microbiology. Сусло-агар — Wort agar for microbiology.

Агар с солодовым экстрактом — Malt extract agar for microbiology.

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Дрожжи и плесневые грибы

Селективный агар розовый бенгальский с хлорамфениколом — Rose-Bengal Chloramphenicol Agar (RBC) for microbiology.

Основа селективного агара OGYE для выделения и подсчета плесневых грибов и дрожжей — OGYE agar. Base асе. to (SO for microbiology.

Селективная добавка OGY — OGY selective supplement for microbiology. Агар Сабуро с глюкозой и хлорамфениколом - Sabouraud Chloramphenicol Agar.

Агар с хлорамфениколом и бенгальским розовым — Rose Bengal Chloramphenicol Agar.

Агар с дрожжевым экстрактом, глюкозой и хлорамфениколом — YGC

agar.

Агар Сабуро с хлорамфениколом — Sabouraud Chloramphenicol agar 2. Сабуро агар для выделения грибов — Sabouraud agar 2.

Бульон Сабуро для выделения и культивирования дрожжей и плесеней — Sabouraud liquid medium.

Среда Компакт Драй ЮМ (Compact Dry YM).

Питательная среда для выделения энтерококков сухая (Энтерококхагар)

Энтерококки

Питательная среда для выделения энтерококков сухая (Энтерококкагар). Сухая питательная среда для выделения и учета энтерококхов — Азидно-глюкозный бульон.

Азидная среда.

Полимиксиновая среда.

Агар с канамицином. зек улином и азидом натрия — Kanamydn esculin azide agar for microbiology.

Азид глюкозный бульон — Azide dextrose broth for microbiology

Хромогенная среда

ХайХром агар для дифференциации Enterococcus faecium — HiCrome Enterococcus faecium Agar Base.

Основа агара для стрептококков KF — KF Streptococcal Agar Base. Селективная добавка для Enterococcus faecium — Enterococcus faecium Selective Supplement.

Среда для селективного выделения энтерококков и D стрептококков — D-Coccosel Agar {ДСО-Т}

Salmonella

Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (железо-глюкозо-лакгозный агар с мочевиной).

Питательная среда N9 14 ГРМ (цитратный агар Симмонса).

Питатегъная среда для идентификации энтеробактерий сухая (среда Гисса-ГРМ).

Питательная среда для переи’-ыой идентификации энтеробактерий сухая (среда Ресселя-ГРМ).

Питательная среда № 11 ГРМ (пакгозиый бульон для накопления бактерий семейства Enterobacteriaceae).

Питательная среда N9 13 ГРМ {трехсахарный агар с солями железа для выявления сероводорода и определения ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы).

Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Агар Кпигпера-ГРМ).

Питательная среда для выделения сальмонелл и шигелл сухая (SS-arap).

Питательная среда для выделения и идентификации энтеробактерий сухая (SDS-бульон).

Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (агар Плос-кирева-ГРМ).

Питательная среда для накопления сальмонелл сухая (Селенитовый бульон).

Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (агар Эцдо-ГРМ).

Питательная среда N9 15 ГРМ (для определения индола).

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Salmonella

Среда Клиглера.

Среда Ресселя.

Среды Гисса с индикатором ВР и углеводами (дульцит, глюкоза, лактоза, сахароза, маннит, мальтоза, сорбит).

Сухая питательная среда типа SIM-arapa.

Питательная среда для выделения сальмонелл-ПД (питательная среда с бриллиантовым зеленым и феноловым красным).

Пептонная вода забуференная — Peptone water (buffered).

Селенитовый накопительный бульон — Selenite enrichment broth асе. to LEIFSON for the selective enrichment of Salmonetlae.

Селенит-цистиновьм накопительный бульон — Selenite cystine enrichment broth for the enrichment of salmonel.

Тетрагионагный бульон — Tetrathionate enrichment broth base acc. to MUELLER-KAUFFMANN for microbiology.

Тетратионатный бульон с новобиоцином — Muller-Kauffmann Tetrathionate Novobiocine enrichment broth acc. to ISO for microbiology.

Магниевая среда Ралпапорта — Salmonella enrichment broth acc. to RAPPAPORT for the selective enrichment of Salmonella.

Хромогенная среда

Магниевая среда Раппапорта-Вассилиэдиса — Salmonella enrichment broth acc. to RAPPAPORT and VASSILIADIS (RVS broth) for microbiology.

Основа среды MSRV (Модифицированная среда Раллалорга-Вассилиа-диса) — MSRV Medium (Base) modified for microbiology.

Селективная добавка MSRV — MSRV selective supplement for microbiology.

Основа среды по Ван-Нетгену и Ван-Дер-Зи — OIASALM Base acc. to VAN NETTEN and VAN DER ZEE for microbiology.

Селективная добавка MSRV — MSRV selective supplement for microbiology.

Основа среды Salmosyst — Salmosyst Broth base for microbiology.

Селективная добавка Salmosyst — Salmosyst6 selective supplement tablets for microbiology

PAMBAX-arap — RAMBACH® agar for the identification of Salmonella.

PAM5AX агар (готовая среда 8 чашках)—RAMB АСН г agar for the identification of Salmonella Merckoplate&.

XLT4 arap — XLT4 agar (Base) for microbiology.

Селективная добавка к среде XLT4 агар — XLT4 Agar Supplement 4.6 ml supplement solution to 1 litre of XLT4 Agar (Base).

Висмут-сульфиткый агар — Bismuth sulfite agar acc. to WILSON-BLA1R for the isolation and differentiation of Salmonella typhi.

Ксилозо-лизиновый агар с дезоксихолатом — XLD agar Xylose lysine deoxychotate agar for microbiology.

Гектоеновый arap — Hekloen enteric agar for the detection and isolation of

Salmonella Хромогенная среда

pathogenic intestinal bacteria

Селенитовый бульон — Selenite Broth (Selenite F Broth) (Twin Pack).

Дифференцирующий агар для сальмонелл (двойная упаковка) — Salmonella Differential Agar. Modified.

Ксилоэо-тэим-дезоксихолатный агар (КЛД-агар) — Xylose Lysine Deoxy-cholate Agar (XLD Agar).

Среда Ралпапорта-Вассилиадиса — Rappaport-Vassiliadis Medium.

Забуференная лелгонная вода — Buffered Peptone Water.

Бульон Ралпапорта-Вассилиадиса — Rappaport-Vassiliadis soya broth.

Бульон Мюллера-Кауфмана — Muller-Kauffman broth (MKTTn-T).

Селективная хромогенная среда для вьщеления и дифференциации сальмонелл — SM 102 agar.

Агар XLD Селективная среда для выделения сальмонелл и шигелл — XLD agar (Xylose Lysine Oeoxycholate).

Селективная среда для выделения сальмонелл и шигелл — Hektoen agar.

Модифицированный агар с бриллиантовым зеленым — Brilliant Green agar modified.

Сальмонелла-Шигелла агар — SS agar.

Среда Компакт Драй СЛ (Compact Dry SL)

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Listeria monocytogenes

Питательный агар для культивирования и выделения листерий (ПАЛ).

Питательный бульон для культивирования и выделения листерий (ПБЛ).

Основа бугьона Фразера — FRASER Listeria Selective Enrichment Broth (base) for microbiology.

Добавка к среде Фразера — FRASER Listeria selective supplement for microbiology (2x8 vials for preparation of FRASER broth}.

Селективный бульон Ю8М для обогащения листерий — UVM-Listeria selective enrichment broth modified for microbiology.

Селективная добавка ЮВМ II — UVM II supplement for microbiology (1 vial with 13 mg of acrtflavme hydrochloride).

Основа среды ПАЛКАМ для листерий — PALCAM Listeria Selective agar (Base) acc. to Van Netten et al. for microbiology.

Добавка к среде ПАЛКАМ — PALCAM Listeria Selective Supplement acc. to Van Netten et al. for microbiology.

Основа Оксфордского агара для листерий — Oxford-Listeria-Selective-Agar (Base) for microbiology.

Добавка для Оксфордского агара — Oxford Listeria selective supplement for microbiology (2 vials for 1 litre of culture medium).

Основа кровяного агара — Blood agar (base) no. 2 for the cultivation of fastidious pathogens and other microorganism.

Хромогенная среда

Среда SIM для идентификации (сероводород, индол, подвижность) — SIM medium (or microbiology

Хромогенный агар на Listeria monocytogenes no Оттавиани-Агосги — Chromocult* Listeria Selective Agar. Base acc. Ottaviani and Agosti

Listeria monocytogenes Хромогенная среда

Селективная добавка — Listeria-Selective SupplemenL

Обогатительная добавка — Listeria — selective Agar Enrichment Supplement.

Хромогенный агар на листерии по Оттавиани-Агосги (готовая среда 8 чашках) — Listeria selective-Agar acc. to Ottaviani and Agosti (ISO 11290) for microbiology Chromoplate®.

Основа бульона Фразера для обогащения листерий (Основа бульона Фрезера) — Fraser Enrichment Broth Base.

Основа бульона вторичного обогащения для листерий — Fraser Secondary Enrichment Broth Base.

Селективная добавка Фразера — Fraser Selective Supplement.

Хромогенная добавка

Агар для идентификации листерий (ПАЛКАМ) — Listeria Identification Agar (RALCAM)

Селективная добавка для листерий (PALCAM) — Listeria Selective Supplement (PALCAM).

Основа Оксфордской среды для листерий — Listeria Oxford Medium Base. Селективная добавка для листерий — Oxford Listeria Supplement. Modified. Селективная добавка L. mono I — L. mono Selective Supplement I. Селективная добавка L.mono II — L mono Selective Supplement II. Обогатительная добавка L. mono I — L. mono Enrichment Supplement I.

Хромогенная среда

Основа диагностичеосого агара для листерий — L. Mono Confirmatory Agar Base. Набор (питательных сред) для подтверждения идентификаций Listeria spp. с помощью латекс-теста — HiListeria Latex Test Kit.

Бульон для определения сахаролитической активности листерий —

Listeria monocytogenes

Carbohydrate Consumption Broth Base.

Бульон Фразера в половинной концентрации - Half Fraser broth.

Бульон Фразера - Fraser broth.

Агар Оксфорд для выделения листерий — Oxford agar.

Агар Палкам для выделения листерий — Palcam agar.

Агар Огтавиани Агости, хромогенная среда для выделения и предварительной идентификации Listeria Monocytogenes — Ottaviani Agosti Agar.

Трипказо-соевый агар с 5 %-ной бараньей кровью — Trypcase Soy Agar + 5 % sheep blood

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Колиформные бактерии и Е. coli

Питательная среда № 11 ГРМ (пакгозмый бульон для накопления бактерий семейства Enterobacteria свае).

Питательная среда № 3 ГРМ (среда обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae).

Питательная среда N9 6 ГРМ (для определения ферментации глюкозы). Питательная среда № 1 ГРМ для кошчественного определения микроб-

Хромогенная среда

ной загрязненности.

Питательная среда для обнаружения бактерий группы кишечной палочки сухая (среда Квсслера-ГРМ).

Питательная среда для выделения и идентификации энтеробактерий сухая (SDS-бульон).

Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (агар Эндо-ГРМ).

Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар).

Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон).

Питательная среда № 7 ГРМ для контроля микробной загрязненности (для определения восстановления нитратов в нитриты)

Питательная среда № 1 для контроля микробной загрязненности.

Питательная среда N9 3 для контроля микробной загрязненности.

Сухая питательная среда Кесслер.

Сухая питательная среда Кода.

Сухая питательная среда Эндо.

Буферный бульон Мак Конки.

Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий (агар Клигпера).

Трехсахарный агар с железом.

Агар Эндо-ПД (питательная среда для выделения энтеробактерий).

Питательная среда для выделения и дифференциации энтеробактерий селективная (Мак Конки агар).

Лактозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью — BRILA broth Brilliant-green bite lactose broth for microbiology

Хромогенная среда LMX (бульон) по Манафи и Осмеру на колиформы и Е. ооК — LMX broth modified асе. to MANAFl and OSSMER for microbiology Floor ocult".

Колиформные бактерии и Е. coli

Селективный бульон Мозеля для энтеробактерий — MOSSEL broth Enterobacteriaceae enrichment broth acc. to MOSSEL for microbiology. Лаурил-сульфагный бульон — Lauryl sulfate broth for microbiology.

Мак Конки бульон — MacConkey broth for microbiology.

Глкжоэный згэр с кристаллическим фиолетовым и желчью — VRBO agar Crystal-violet neutral-red bile glucose agar acc. to MOSSEL for microbiology.

Лактозный агар с кристаллическим фиолетовым и желчью — VRB Agar Crystal-violet neutral-red bile agar for microbiology.

Агар Эндо — ENDO agar (contains C.l. Basic Red 9) for microbiology . Агар Мак Конки — MacConkey agar for the isolation of Salmonella. Shigella and ooliform bacteria.

Хромогенная среда

Хромогенный агар для определения колиформ и Е. coli - Coliform Agar for microbiology Chromocult8.

Хромогенный агар для определения колиформ и Е. coli усиленной селективности —Coliform Agar ES (Enhanced Selectivity) for microbiology Chromocult8.

Оксидазный реагент — BacUdent6 Oxidase 50 test strips for the testing of cytochromoxidase in microorganisms.

Мак Конки агар с кристаллическим фиолетовым. NaCl и солями желчных кислот (0.15 %) — MacConkey Agar w/(0.15 %) Bile Salt. CV & NaCl.

Жидкая пастозная среда — Lactose Broth.

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Хромогенная среда

ХайХром агар ЕСС для дифференциации Е. coli и колиформкых бактерий — HiCrome ЕСС Agar.

Глюкозо-желчный агар с кристаллвиолетом и нейтральным красным — Violet Red Bile Glucose Agar w/o Lactose.

Хромогенная среда для выделения и подсчета Е. coli и колиформных бактерий — Сой ID medium.

Агар с фиолетовым (фасным, желчью и лактозой для выделения колиформных бактерий — Violet Red Bile Lactose agar.

Агар с фиолетовым красным, жетью и глюкозой — VRBG agar.

Агар Эндо — Endo agar.

Колиформные бактерии и Е. coli

Деэоксихолат лактозный агар — Desoxycholate lactose agar.

Мах Конки агар — Mac Conkey agar.

Бульон с желчью и бриллиантовым зеленым — Brilliant green bite broth. Агар Клиглера — Kligler agar.

Трехсахарный агар — Triple Sugar Iron Agar (TSI).

Агар с лактозой и бромкрезоловым пурпурным — Purple Lactose Agar (BCP). Агар с эозином и метиленовым синим — Eosin methylene blue agar. Среда Компакт Драй ЕЦ {Compact Dry ЕС).

Среда Компакт Драй КФ для определения количества колиформных бак-

Е. coli 0157:Н7

терий (Compact Dry CF).

Питательная среда для выделения и дифференциации E.coli 0157:Н7 (Сорбитол Е. coli 0157:Н7 агар).

Питательная среда для выделения и дифференциации E.coli 0157:Н7 (ЭДКС-агар) порошок для микробиологических целей.

Сорбитол Мак Конки агар для обнаружения и выделения Е. coli 0157:Н7.

Модифицированный бульон ЕС с новобиоцином для исследования — mEC-broth with Novobiocin lor microbiology.

СМАК агар для дифференциации энтерогеморрагических штаммов Е. coli 0157:Н7 — SMAC agar base for direct isolation and differentiation of entero-hemorrhagi с (EHEC) E.coli 0157:H7-strains.

Селективная добавка к СМАК агару — CT-Supplement for microbiology.

Флюорогенная среда

Флюорогенная среда для выделения Е. coli 0157 — Е. coli 0157:H7-Agar for microbiology Fluorocult®.

Е. чиб 0107.Н7

EC 0157 агар с МУГ — MUG EC 0157 Agar.

Хай Хрим at dp дли надо) >епии и дифференциации Е. culi 0157.Н7 — HiCrome ЕС 0157 : Н7 Agar.

Хромогенная среда

Основа Хай Хром агара Мак Конки с сорбитом для энтеротоксигвнных Е. coli — HiCrome MacConkey Sorbitol Agar Base.

Хай Хром селективный агар для выделения и дифференциации Е. coli 0157:Н7 {основа)— HiCrome ЕС 0157:Н7 Selective Agar Base.

Селективная хромогенная среда для выделения Е. сой 0157:Н7 — 0157:Н7 ID Agar.

Агар Мак Конки с сорбитолом для выделения Е. Сой 0157:Н7 — SMAC agar.

Селективная добавка для выделения E.Coli 0157:Н7 — Cefixime-Teilunte selective mixture.

Хромогекный агар для селективного выделения и лредваритегъной идентификации Е. coli 0157.Н7

Staphylococcus aureus

Питательная среда для выделения стафилококков.

Питательная среда № 10 ГРМ (для идентификации Staphylococcus aureus). Питательная среда № 10 для контроля микробной загрязненности.

Агар типа Байрд-Паркера.

Агар солевой.

Бульон солевой.

Молочно-солевой агар для выделения S. aureus.

Питательная среда для выделения стафилококков (элективный солевой агар).

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Staphylococcus aureus

Питательная среда № 10 ПД (маннит-солевой агар-ПД).

Основа селективного бульона Жиолитти-Кантони для обогащения стафилококка — GlOUTTI-CANTONI-broth Staphylococcus-enrichment broth (base) асе. lo GIOLITTI and CANTONI for microbiology.

Бульон Байрда для сепехтианого обогащения стафилококков — Staphylococcus enrichment broth base acc. to BAIRO for microbiology.

Агар Байвда-Паркера — BAIRD-PARKER agar Staphylococcus selective agar base acc. to BAIRD-PARKER for microbiology.

Стерильная желточно-теллуритная эмульсия — Egg yolk tellurite emulsion sterile, for microbiology.

Селективная добавка теллурита калия — Potassium tellurite-trihydrate for microbiology.

Основа ХайХром агара для выделения и идентификации стафилококков — HrCrome Aureus Agar Base.

Эмульсия яичного желтка с теллуритом (для бактериологии) — Egg Volk Tellurite Emulsion.

Основа агара Байрд-Парк ера — Baird Parker Agar Base.

Агар Байрда-Паркера с лиофилизированной кроличьей плазмой и фибриногеном для подсчета стафилококков — Baird Parker.

Агар Байрд-Паркер — Baird Parker agar.

Солевой агар с манитолом — Manitol Salt Agar.

Сердечно-мозговой бульон Brain-heart infusion.

Среда Компакт Драй СА — Compact Dry SA

Bacillus cereus

Питательная среда № 1 ГРМ для количественного определения микробной загрязненности.

Питательная среда № 1 для контроля микробной загрязненности.

Сухая литатегъная среда Донована с селективным агентом хлорида лития.

Сухая питательная среда с полимиксином и 2.3,5-трифвнилтетразолия хлоридом.

МИП-arap для Вас. cereus — Cereus selective agar base acc. to MOSSEL (MVP agar) for microbiology.

Свптггияыяя дпбавхя к МИП-ягару — Rant lies гягяив solerJive supplement (or microbiology.

Желгочная эмульсия сгерильная к МИП-агару — Egg yolk emulsion stenie. for microbiology.

Основа агара для Bacillus cereus — Bacillus Cereus Agar Base.

Селективная добавка с полимиксином В — Polymyxin-B Selective Supplement.

Эмульсия яичного желтка (для бактериологии) - Egg Yolk Emulsion.

Основа Хай Хром селективного агара для обнаружения и идентификации Bacillus cereus — HiCrom Bacillus Agar

Кампилобактерии

Питательная среда для выделения и культивирования кампилобактерий сухая (Камлилобакагар).

Основа селективного бульона Болтона — Bolton Selective Enrichment Broth (Base) for microbiology.

Селективная добавка к бульону Болтона — Bolton Broth Selective Supplement.

Селективный агар для камлилобактера (без добавления крови) — (Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base (modified CCDA) for microbiology.

Селективная добавка для агара CCDA — CCDA Selective Supplement 16 vials Selective Supplement for preparation of Campylobacter Blood-Free Selective Agar (modified CCDA).

Основа селективного агара для камлилобактера — Campylobacter selective agar (base) for the isolation of Campylobacter.

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Хромогенная среда

Селективная добавка для Кампипобактер агара — Campylobacter Selective Supplement for preparation of 3.2 1 Campylobacter Selective Agar.

Селективная среда для выделения бактерий рода Campylobacter — Campyloset agar.

Агар для подсчета бактерий рода Campylobacter — Campy Food ID agar. Селективная добавка для выделения бактерий рода Campylobacter — Campylosel mixture

Сульфигредуцирующие

клостридии

Питательная среда для контроля стерильности сухая {тиоглихолевая среда).

ЖСС-1 — желеэосульфитная среда.

ЖСС-2 — желеэосульфитная среда.

Питательная среда для контроля стерильности сухая {тиоглихолевая среда).

Дифференциальный улучшенный клостридиальный бульон — Differential reinforced clostridial broth (DRCM) for microbiology.

Улучшенный клостридиальный бульон — Reinforced clostridial medium (RCM) for microb*ok>gy.

Тиоглихолевая среда — Fluid thioglycofate medium for microbiology.

Дифференциальный клостридиальный агар — DCA agar acc. to Weenk et a), for microbiology.

TCH лерфрингенс агар — TSN agar Perfringens selective agar acc. to MARSHALL for microbiology.

Улучшенный клостридиальный агар — Reinforced clostridial agar (RCM) for microbiology.

Селективный СПС-агар сульфит-лолимиксин-сульфадиазин — SPS agar Perfringens selective agar acc. to ANGELOTT1 for microbiology.

Основа желеэо-сульфитного агара — Suffite iron agar base for microbiology.

Основа TCH агара — TSC agar Tryptose sulfite cycloserine agar {base) for microbiology.

Селективная флюороген кая добавка для определения С. perfringens — Clostridium perfringens selective supplement for microbiology.

Основа агара М-СП для клостридий — М-СП Agar Daee.

Селективная добавка для среды М-СР (I) — М-СР Selective Supplement-!.

Селективная добавка для среды М-СР (II) — М-СР Selective Supplement-il.

Обогащенный агар для клостридий — Reinforced Clostridial Agar.

Основа агара для Clostridium perfringens — Perfringens Agar Base (T.S.C./S.F.P.).

Добавка С.Ф.П. с канамицином и полимиксином для С. perfringens — S.F.P. Supplement (Perfringens S.F.P. Supplement).

Добавка Т.С.Ц. с циклосерином для С. perfringens — T.S.C. Supplement (Perfringens T.S.C. Supplement).

Желеэосульфитный агар — Iron Sulfite agar.

Селективная добавка к железосульфитному агару для выделения С. perfringens O-cycloserine Supplement

Агар TCH для селективного выделения С. Perfringens — TSN agar

Иерсинии

Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

Селективный накопительный бульон для иерсиний — Yersinia Selective Enrichment Broth acc. to OSSMER for microbiology.

Селективный агар для иерсиний — Yersinia selective agar(base) acc. to SCHIEMANN (CIN-agar) for the selective cultivation of Yersinia.

Селективная добавка для ЦИН-агэра — Yersinia selective supplement (CIN) for preparation of Yersinia selective agar acc. to SCHIEMANN.

Вид микроорганизмов

Наименование среды

Иерсинии

Основа селективного агара для иерсиний - Yersinia Selective Agar Base. Селективная добааха для иерсиний - Yersinia Selective Supplement.

Агар ЦАЛ (с целпобиоэой. аргинином и лизином) - CAL Agar (Celiobiose Arginine Lysine Agar).

Бульон ЦАЛ (с целпобиоэой, аргинином и лизином - CAL Broth (Celiobiose Arginine Lysine Broth)

Молочно-кислые бактерии

Питательная среда дпя выделения и культивирования лахтобацилл сухая (Лахгобакагар).

Питательная среда для хультивироеания и выделения бифидобактерий (Бифидум-среда).

МРС бульон — MRS broth Lactobacdlus broth acc. to DE MAN. ROGOSA and SHARPE, for microbiology.

MPC arap — MRS agar Lactobacillus agar acc. to OE MAN. ROGOSA and SHARPE for microbiology.

Рогоза агар — ROGOSA agar Lactobacillus selective agar for microbiology. Агар с апельсиновой вытяжкой — Orange-serum agar for microbiology. Бульон M17 — M17 broth acc. to TERZAGHI for microbiology.

Агар M17 — Ml 7 agar acc. to TERZAGHI for microbiology.

Основа селективного агара для лактобактврий — Lactobacillus Selection Agar Base w/o Oxgall.

Агар Рогоза (СП) — Rogosa SL Agar.

Бульон Рогоза (СЛ) — Rogosa SL Broth.

Агар MPC (Ман. Рогоза. Шарп) — MRS Agar.

MPC Arap — MRS agar

Псевдомонас

Питательная среда Me 8 ГРМ (для выращивания Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus).

Питательная среда N9 9 ГРМ (для выявления пигмента пиоцианина).

Питательная среда для выделения синегнойной палочки сухая (ЦПХ-агэр).

Питательная среда для идентификации синегнойной палочки.

Цетримидный агар — Cetrimide agar Pseudomonas selective agar base for microbiology.

Огнпея гяпвктияыпгл агара дпя Psanrtnmnrtac — Pceirlnmnnae Selorhva agar (base) for microbiology.

Селективная добавка к среде Pseudomonas selective agar — Pseudomonas CFC Selective Supplement for the preparation of Pseudomonas CFC Selec-

Флюорогенная среда

live agar.

Псевдомонас arap Ф — Pseudomonas agar F base for microbiology.

Псевдомонас агар П — Pseudomonas agar P base for microbiology

Основа ХайФлюоро агара для Pseudomonas aeruginosa — HiFluoro Pseudomonas Agar Base.

Псевдомонадный arap

(для пиоцианина — Pseudomonas Agar (For Pyocyanin).

Псевдомонадный arap (для флуоресцеина) — Pseudomonas Agar (For Fluorescein).

Основа агара с цетримидом — Cetrimide Agar Base.

Селективная добавка (налидиксовая кислота) — Nalidixic Selective Supplement.

Цетримид агар, среда дпя выделения Pseudomonas aeruginosa — Cetrimide agar

Библиография

[1]    Стандарт мугности МакФарланда. Регистрационное удостоверение N» ФС № 2006/1177, зарегистрированное Росздравнадзором 01.08.2006 г.

[2] ОСО 42-2845—10 и    Отраслевые стандартные образцы мугности. Утверждены ФГУН ГИСК


ОСО 42-28-86—10 [3] МУК 4.2.581—96

им. Л. А. Тарасовича Роспотребнадзора

Метеды контроля. Биологические и микробиологические факторы. Проведение санитарно-бактериологического анализа продоаотъсгвенного сырья, пищевых продуктов. воды и смывов с поверхностей с использованием бактериологического

[4J МУК 4.2.2578—10 [5] МУК 4.2.1955—05

экспресс-анализатора

Сан/тарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса Метеды контроля. Биологические и микробиологические факторы. Метод выделения и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибрпдиэационного ДНК-РНК анализа

[6] МУК 4.2.2321—08

Метеды контроля. Биологические и микробиологические факторы. Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

[7] МУК 5-1-14/971—2005

По лабораторной диагностике иерсиниоза животных и обнаружению возбудителя болезни в мясном сырье, молоке и растительных кормах

[8] МР 11-3/278—09

Метеды выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах с использованием анализатора Vtdas/mini V>das производства фирмы «BioMerieux»

[9] МР 032.036—08

Идентификация патогенных бактерий, выделенных при контроле пищевых продуктов с применением Система Вах™ Q7

[10] МУК 4.2.992—2000

Метеды контроля. Биологические и микробиологические факторы. Методы выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной папочки Е. colt 0157-Н7

[11] МР 24ФЦ/976—2004

Метеды выявления патогенных микроорганизмов с использованием иммунохрома-тогргфических экспресс-тестов производства Merk (Германия)

[12] МР 02.011—06

Ускоренные методы выявления санитарно-показательных микроорганизмов с использованием подложек «RIDA COUNT» производства Chisso Corporation. Япония

[13] МР ФЦ 05.03—2004

Метеды определения колиформных бактерий, бактерий вида Е. coti с применением пластин «Петрифильмв производства компании ЗМ

[14]    МР 02.014—06

[15]    МР 24 ФЦ/6290—2003

Се ретинирование бактерий рода Salmonella методом латексной агглютинации Метеды определения количества мезофниъных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, количества дрожжей и плесневых грибов с применением пластин «Петрифильм» компании ЗМ

[16] МР 24 ФЦ/513—2004

Определение колиформных бактерий и E.coli с использованием хромогенных и флю-рогенных индикаторных сред производства Merk (Германия)

[17] МУ 2.1.4.1057—01

Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований возы

[18] Р 3.5.1904—04

Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззаражива

[19J ИСО 6887-2:003*

ния воздуха в помещениях

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для дслытаний. исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для приготовления мяса и

[20] МР 02.013—06

мясных продуктов

Определение бактерий рода Salmonella методом твердофазного иммуноферменг-ного анализа

[21] МР 02.012—06

Определение бактерий рода Listeria методом твердофазного иммуноферментного анализа

[22] СП 1.3.2322—08

Санитарно-эпидемиологические правила. Безопасность работы с микроорганизмами 111 и IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней


’Действует до введения в действие ГОСТ Р. разработанного на основе соответствующего ИСО.


УДК 637.5.075:579.67:006.354    ОКС67.120.Ю    Н19    ОКСТУ9202

9209

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, микроорганизмы, методы, микробиологические анализы, питательные среды. аппаратура, лабораторная посуда, материалы, реактивы, подготовка, проведение исследований. пробы, тесты, идентификация, выявление, учет, результаты

Редактор Л. В. Корвтникова Технический редактор 8. И. Прусакова Корректор Л. Я. Митрофанова Компьютерная верстка 8. Н. Романовой

Сдано е набор 03.12.2012. Подписано а печать >6.01.2013. Формат 60x84'/a Бумага офсетная Гарнитура Арнал. Печать офсетчая. Уел. печ. л. 4,65. Уч.-иад. л. 4.40. Тираж 143 эм. Зек. 1032.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 12309S Москва. Гранатный лер.. 4.     

Набрано и отпечатано а Калужской типографии стандартов. 24802t Калуга, уп. Московская. 256