allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ 33422-2015 Мясо и мясные продукты. Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Обозначение:
ГОСТ 33422-2015
Наименование:
Мясо и мясные продукты. Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2017
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.120.10

Текст ГОСТ 33422-2015 Мясо и мясные продукты. Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATECOUNCILFORSTANOAROI2ATION, METROLOGYANDCERTIFICATION

(ISC)

ГОСТ

33422—

2015


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2016


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности имени В.М. Горбатова» (ФГБНУ «ВНИИМП им. В.М. Горбатова»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. Ne 81-П)

За принятие проголосовали:

Краков наименование страны по МК

(ИСО31ввМ)04—97

Код страны по МК {ИСО 31вв) 004—97

Сокращенное наименование национальною органа по станлавгизаиии

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Казахстан

КZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 ноября 2015 г. № 1878-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33422—2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5    ВВЕДЕН 8ПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотре (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2018

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс*спектрометрическим детектором

Meat and meat products.

Determination of iodotyrosines using high performance liquid chromatography with mass spectrometry detection

Дата введения—2017—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо, включая мясо птицы, субпродукты, мясные и мясосодержащие продукты, и устанавливает метод измерения (анализа) массовой доли йодтирозинов (3‘йодтирозин и 3,5-дийодтирозин) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-слектрометрическим детектором (8ЭЖХ-МС/МС). Предел обнаружения йодтирозинов составляет 10 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79* Система стандартов безопасности труда. Электробеэоласность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76*1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 3118—77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4025—95 Мясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725*2—2003" Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ ИСО 5725*6—2003"' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ 5829—71 Реактивы. Ацетил хлористый. Технические условия ГОСТ 5848—73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия ГОСТ 6006—78 Реактивы. Бутанол-1. Технические условия ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7269—79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 7702.2.0—95 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

‘В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

*”В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и ngeuwjjOHHOCTbJ^MeTogoBji^es^nbTaToevraMegeHHirtj^MacTbejJIcnonbare

Издание официальное

ГОСТ 9245—79 Потенциометры постоянного тока измерительные. Общие технические условия

ГОСТ 9792—73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 20469—95 Электромясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 23042—86 Мясо и мясные продукты. Методы определения жира

ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26272—98 Часы электронно-механические кварцевые наручные и карманные. Общие технические требования

ГОСТ 26678—85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 28165—89 Приборы и аппараты лабораторные из стекла. Аквадистилляторы. Испарители. Установки ректификационные. Общие технические требования

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссытку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    йодтирозииы: Монойодтирозик (3-йодтирозин, далее — МИТ) и дийодтироэин (3.5-дийодтирозин. далее — ДИТ) — представляют собой йодсодержащие (в положении 3 — для МИТ и 3.5 — для ДИТ) производные аминокислоты тирозин, являются активной органической формой йода (I*) в организме человека.

3.2    супернатант: Жидкость, располагающаяся над твердым слоем (осадком, седиментом) после центрифугирования.

3.3    этоент: Подвижная фаза (растворитель или смесь растворителей).

3.4    аналит: Вещество, определяемое в пробе объекта аналитического контроля.

3.5    дбриват: Вещество, происходящее в процессе химической реакции из другого вещества и, таким образом, являющееся его производным.

4    Сущность метода

Метод основан на ферментативном гидролизе пробы, извлечении и очистке йодтирозинов из пробы методом твердофазной экстракции (ТФЭ). последующей дериватизации экстракта и ВЭЖХ-МС/МС анализе. Идентификацию аналитое осуществляют по абсолютному времени удерживания хроматографических пиков йодтирозинов. регистрируемых в режиме мониторинга множественных реакций (MRM). Содержание йодтирозинов определяют по площади хроматографических пиков анализируемых проб.

5    Требования безопасности

5.1    При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.2    Помещение, в котором проводятся измерения, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.3    При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

6 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Высокоэффективный жидкостной хроматограф, укомплектованный:

•    трехквадрупольным масс-спектрометрическим детектором с источником ионизации распылением в электрическом поле {ESf);

•    градиентным насосом;

•    хроматографической колонкой для ВЭЖХ длиной 50—150 мм и диаметром 2.1—4.6 мм с обращенной фазой С18 размером частиц 1.8—5.0 мкм;

•    блоком термостатирования колонок с поддержанием температуры 40 °С с точностью ± 0.1 °С;

•    записывающим устройством с компьютерным управлением и автоматической программой обработки хроматографических данных е соответствии с комплектацией хроматографа.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76*1 специального (I) класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0.001 г.

pH-метр по ГОСТ 9245 со стеклянным и хлороеребряным электродами (или комбинированным стеклянным электродом) с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.01 ед.

Баня водяная лабораторная, имеющая диапазон температур от 20 °С до 100 °С с точностью поддержания температуры ± 0.5 °С.

Баня ультразвуковая лабораторная.

Вакуумная установка для твердофазной экстракции с регулировкой скорости потока.

Испаритель роторный по ГОСТ 28165.

Аппарат Сокслета.

Шкаф сушильный, способный поддерживать температуру (103 ± 2) *С.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

Часы электронно-механические по ГОСТ 26272.

Центрифуга лабораторная, с центробежным ускорением 15000 д.

Банки стеклянные вместимостью 250—500 см3.

Пипетки градуированные 1-2-1-0.5; 1-2-1-1; 1-2-1-5 по ГОСТ 29227 или дозаторы автоматические с переменным объемом дозирования и относительной погрешностью дозирования не более ± 1 %. Пробирки центрифужные из полипропилена вместимостью 15 и 50 см3.

Пробирки микроцентрифужные вместимостью 2,0 см3.

Фильтр мембранный из политетрафторэтилена с диаметром пор 0.45 мкм.

Колбы круглодонныв К-1-10-14/23. К-1-50-14/23 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2*100-2. 2-1000*2 по ГОСТ 1770.

Чашка Петри по ГОСТ 25336.

Флаконы — виалы хроматографические из темного стекла вместимостью 2.0 см3.

8ода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Гексан, х. ч.

Эфир петропейный.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848. ч. д. а.

Патрон ТФЭ с обращенной фазой типа С18'.

Метанол, ос. ч.

Ацетонитрил, ос. ч.

Бутанол по ГОСТ 6006, ч. д. а.

Ацетил хлористый по ГОСТ 5829, ч. д. а.

ТрисЧоксиметил)-аминометан (ТрисНО). с массовой долей основного вещества не менее 99.9 %. З-йод-Ьтирозин с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %.

3.5-дийод-Ьтироэин дигидрат с массовой долей основного вещества не менее 99.9 %.

Протеаза из Streptomyces griseus, тип XIV, >3.5 Ед/мг. порошок.

Примером патрона с обращенной фазой типа С18 может быть патрон ТФЭ с обращенной фазой на основе октадецила 200 мг/3 см3 типа Strata С1В-Е (Phenomenex № 00M-S039-B0-CB). Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования другой аппаратуры с аналогичными свойствами.

7    Отбор проб

7.1    Отбор проб по ГОСТ 9792. ГОСТ 7269. ГОСТ 7702.2.0.

7.2    Пробу измельчают, дважды пропуская через мясорубку с диаметром отверстий решетки 2—4 мм. и тщательно перемешивают.

7.3    Подготовленную пробу помещают в стеклянную банку вместимостью 250—500 см3 и закрывают крышкой.

Допускается хранить подготовленную пробу в замороженном состоянии без доступа кислорода при температуре не выше минус 18 °С не более 7 сут.

8    Подготовка к измерению

8.1    Приготовление градуировочных растворов йодтирозинов

Для определения йодтирозинов готовят градуировочные растворы индивидуального йодтирозина (МИТ или ДИТ) с массовой концентрацией 100 нг/см3 (раствор 1). 10 кг/см3 (раствор 2), 1 нг/см3 (раствор 3).

Взвешивают 10 мг индивидуального йодтирозина (МИТ или ДИТ). переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 20 %-ный раствор ацетонитрила до метки, помещают на 20—2S мин на ультразвуковую баню до полного растворения.

Для приготовления раствора 1 градуированной пипеткой или автоматическим дозатором отбирают 1 см3 приготовленного раствора индивидуального йодтирозина (МИТ или ДИТ). переносят в круглодонную колбу вместимостью 10 см3, упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 60 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси бутанола с хлористым ацетиленом, плотно закрывают пробкой со шлифом и ставят на водяную баню при температуре 60 °С в течение 15 мин. Упаривают растворитель досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 10 см20 %-ного раствора ацетонитрила.

Для приготовления раствора 2 градуированной пипеткой или автоматическим дозатором в стеклянную виалу переносят 0.1 см3 раствора 1 и 0.9 см3 20 %-ного раствора ацетонитрила. Раствор тщательно перемешивают.

Для приготовления раствора 3 градуированной пипеткой или автоматическим дозатором в стеклянную виалу переносят 0,1 см3 раствора 1 и 0.9 см3 20 %-ного раствора ацетонитрила. Раствор тщательно перемешивают.

Растворы хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 7 сут.

8.2    Приготовление растворов

8.2.1    Приготовление 20 %-ного раствора ацетонитрила

В мерную колбу вместимостью 100 см3 добавляют 20 см3 ацетонитрила и доводят до метки дистиллированной водой

8.2.2    Приготовление буферного раствора трис-(гидроксиметил)-аминометана молярной концентрации 0,1 моль/дм3 (раствор ТрисНС!)

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 12.11 г трис-(гидроксиметил)-аминометана и доводят объем до метки дистиллированной водой. По каплям добавляют соляную кислоту, доводя активную кислотность до 8.0 ед. pH. контролируя pH-метром.

8.2.3    Приготовление смеси ацетонитрила с раствором соляной кислоты молярной концентрации c(HCI) * 0,1 моль/дм3 (4:1,8)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 добавляют 70—80 см3 дистиллированной воды, с помощью механического дозатора приливают 0.85 см3 концентрированной соляной кислоты (р = 1.188 г/см3) и доводят объем до метки дистиллированной водой. Ацетонитрил смешивают с раствором соляной кислоты молярной концентрации 0.1 моль/дм3в соотношении 4:1.8.

8.2.4    Приготовление смеси бутанола с хлористым ацетилом (4:1)

В 4 объема бутанола по каплям приливают один объем хлористого ацетила. Приготовление раствора проводят под вытяжной вентиляцией (в вытяжном шкафу), с охлаждением раствора проточной водой или льдом. Раствор готовят в небольших количествах перед анализом.

8.2.5    Приготовление подвижной фазы хроматографической системы

Для проведения хроматографического анализа используется двухкомпокектная подвижная фаза:

- элюент А: ацетонитрил — метанол (1:1);

• элюент В: 1 %-ный раствор муравьиной кислоты (в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 900 см3 дистиллированной воды и добавляют 10 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят объем до метки дистиллированной водой).

Перед проведением анализа элюеиты дегазируют на ультразвуковой бане.

Готовые растворы хранят в колбах с притертыми пробками, при температуре (4 ± 2) °С не более

1    мес.

8.3 Подготовка пробы

8.3.1    Предварительная подготовка пробы

Перед проведением анализа пробу предварительно высушивают на чашке Петри в сушильном шкафу при температуре (103 ± 2) °С в течение 1 ч. Затем высушенную пробу обезжиривают по ГОСТ 23042 гексаном или петролейном эфиром в экстракционном аппарате Сокслета. Пробу взвешивают до и после предварительной подготовки с записью результата взвешивания в граммах до третьего десятичного знака.

8.3.2    Ферментативный гидролиз пробы

Пробу переносят в центрифужную пробирку и растворяют в буферном растворе Трис<НС1 до массовой концентрации 2 мг/см3 (плохо растворимые пробы рекомендуется предварительно термостатировать на ультразвуковой бане с прогревом при 37 °С до полного растворения), затем добавляют ферментный препарат (протеаза из Streptomyces grissus) в количестве, составляющем 1/10 от массы пробы белка. Инкубируют 16 ч при 37 °С на водяной бане.

Гидролизат центрифугируют в течение 5 мин при 15000 об/мин для осаждения нерастворимых продуктов. Супернатант пропускают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

8.3.3    Очистка гидролизата методом твердофазной экстракции (ТФЭ)

Патрон ТФЭ предварительно кондиционируют пропусканием последовательно 2 см3 метанола и

2    см3 дистиллированной воды. Отбирают 0.4 см3 гидролизата пробы, приливают 0.1 см3 ацетонитрила, смесь наносят на патрон. Экстракцию с патрона осуществляют в две стадии: последовательным элюированием 1 см3 метанола и 1.5 см3 смеси ацетонитрила с соляной кислотой, собирая смывы. Элюент переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3 и упаривают досуха при 60 °С.

8.3.4    Дериватизация йодтирозинов (МИТ и ДИТ)

Сухой остаток растворяют в 0.3 см3 смеси бутанола с хлористым ацетилом и термостатируют 15 мин при 60 °С.

Растворитель упаривают досуха при 60 °С и растворяют сухой остаток в 0.4 см3 20 %-ного раствора ацетонитрила. Перед анализом подготовленный дериват пропускают через мембранный фильтр с диаметром лор 0. 45 мкм.

Если нет возможности провести анализ в тот же день, то подготовленные к анализу пробы хранят е холодильнике при температуре от 4 *С до 6 *С не более 3 сут.

9 Проведение измерений

9.1 Хроматографические условия измерений

Условия проведения ВЭЖХ-МС/МС анализа подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа, масс-слектрометрического детектора и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия определения йодтирозинов (МИТ и ДИТ). выполненные на системе ВЭЖХ*МС/МС с хроматографической колонкой С18, 4.6 х 50 мм. 1.8 мкм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элюентое по 8.2.5). Объем вводимой пробы — 0,01 см3.

аблица 1— Параметры и условия ВЭЖХ

Врсып.

мни

Соотношение компонентов подвижной фазы

Скорость

потока.

cmVmhm

Температура колонки. 'С

А. %

В. %

о

©

20

80

0.6

30

2.0

90

10

0.6

30

5.0

90

10

0.6

30

9.2 Параметры настройки масс-спектромвтрического детектора

Для анализа подобраны следующие параметры масс-спектрометрического детектирования:

Температура источника — 100 °С;

Температура газа десольаации — 320 °С:

Скорость потока газа десольаации — 8 дм3/мин;

Давление иглы распылителя — 2,07 Бар (30 pst).

Условия регистрации аналитических сигналов в режиме мониторинга множественных реакций (MRM) представлены в таблице 2.

Таблица 2 —Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условия ионизации

распылением в электрическом поле (

ES/} с регистрацией положительных ионов

Аиалнт

Ион предшественник, mtz

Дочерние ионы, ml*

Напряжение на фрагыеиторе в

Энергия диссоциации <С£). В

3-йодгирозин

(МИТ)

364.0

364.0

134.9

261.9

112

112

30

13

3.5-

дийодтирозин

(ДИТ)

489.9

489.9

387.8

260.9

116

116

17

30

Условия детектирования оптимизируют в ручном режиме. Для этого используют градуировочные растворы индивидуальных йодтироэинов {МИТ или ДИТ) концентрации 100. 10 и 1 нг/см5. приготовленные по 8.1.

При этом, соотношение сигнал/шум (S//V) молекулярного иона должно быть не менее 1:10. Напряжение на фрагменторе оптимизируют с шагом 10 У по максимальному отклику прокотированного молекулярного иона. Энергию диссоциации (СЕ) оптимизируют с шагом 5 V по максимальному отклику характерного дочернего иона.

9.3    Градуировка ВЭЖХ-МС/МС системы

Приготовленные по 8.1 градуировочные растворы подвергают ВЭЖХ-МС/МС анализу в условиях, выбранных в соответствии с 9.1—9.2. Проводят по три параллельных измерения для каждой концентрации градуировочных растворов. Полученные хроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системы обработки данных хроматографа. Определяют абсолютное время удерживания йодтирозина (МИТ или ДИТ). С использованием средств программного обеспечения строят градуировочную зависимость площади пика определяемого йодтирозина (МИТ или ДИТ) от концентрации йодтирозина (МИТ или ДИТ) в пробе.

Коэффициент линейной корреляции полученной градуировочной зависимости должен быть не менее 0,99. При невыполнении этого условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. В случае необходимости готовят новые градуировочные растворы.

Хроматограмма и калибровочные кривые градуировочных растворов йодтирозинов представлены в приложении А.

Проведение градуировки обязательно при замене хроматографической колонки, а также при систематическом получении неудовлетворительных результатов контроля, выполняемого по 12.

9.4    Контроль аналитической системы

Контроль выполняют с использованием приготовленных по 8.1 градуировочных растворов. Полученный результат анализа не должен отличаться от действительного значения концентрации определяемых йодтирозинов (МИТ и ДИТ) в градуировочном растворе более чем на 3 %. относительное стандартное отклонение времени удерживания аналитов не более чем на 5 %. В случае невыполнения указанного критерия стабильности градуировочной характеристики, проводят новую градуировку.

Контроль аналитической системы осуществляется при условиях, указанных в 9.1—9.2.перед началом проведения измерений, а также при смене хроматографической колонки, чистке блоков аналитического прибора и т.д.

9.5    Выполнение измерений

Для контроля фона прибора, перед началом серии измерений, между анализами проб в хроматограф вводят 10 мкл подвижной фазы (А — 20 %, 8 — 80 %).

В виалы вносят подготовленную пробу по 8.3 и анализируют на системе ВЭЖХ-МС/МС при условиях, указанных в 9.1—9.2.

По значению площади хроматографического пика с использованием установленной градуировочной характеристики и программы обработки данных находят массовую концентрацию йодтироэинов в анализируемой пробе.

вычисление массовой доли йодтироэинов в анализируемой пробе экстракта проводят для каждого из двух параллельных определений по формуле 1.

10 Обработка результатов

8 соответствие с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, создают таблицу пиков с использованием программного обеспечения. Расчеты содержания йодтироэина (МИТ или ДИТ) и площадь пика выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

вычисление площади пика проводят для двух дочерних ионов для каждого соединения (см. таблицу 2).

Массовую долю йодтироэинов X. мкг/кг, вычисляют по формуле

О)


д, ^СТ‘£^.у'*/р

£Sct ‘0*85 ■/я

где С« — массовая концентрация индивидуального йодтироэина (МИТ или ДИТ) в градуировочном растворе, нг/см3;

ISx — сумма площадей пиков двух дочерних ионов индивидуального йодтироэина (МИТ или ДИТ) в анализируемой пробе, уел. ед.;

V„— объем буфера ТрисНС< молярной концентрацией 0.1 моль/дм3. используемый для экстракции. см3;

ISCr — сумма площадей пиков двух дочерних ионов индивидуального йодтироэина (МИТ или ДИТ) в градуировочном растворе, уел. ед.;

0.85 — эмпирический коэффициент, учитывающий потери йодтироэинов на стадии пробоподготовки:

т— масса анализируемой пробы, г.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, округленное до второго десятичного знака.

Примечание — Массовую долю йодтироэинов выражают в мкг/кг. чго равнозначно получаемой по формуле (1) размерности нг/г.

11 Метрологические характеристики

11.1 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р - 0.95 приведены в таблице 3.

Таблица 3

Наименование

показателя

Границы относительной погрешности <о.%

Предел

повторяемости

г, мкгйсг

Предел воспроизводимости R. мкг/кг

З-йодтироэин

(МИТ)

20

0.15х«с>

0.25Хгр

3.5-дийодтироэин

_шп_

12

0.10Х.Н

0.15Х,о

<редне арифметическое значение результатов двух параллельных измерений, мкг.'кт К.. - соеанеаоиФметнческое значение результатов двух измерений, выполненных о разных лабораториях, мкг/кг.

11.2 Расхождение между результатами двух параллельных измерений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) г. значения которого приведены в таблице 3.

Условия приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, при доверительной вероятности Р = 0.95. должны удовлетворять условию:

|х«— хг| S г.    (2)

где XI и Х2— результаты двух параллельных измерений, мкг/кг. г— предел поетоояемости. мкг/кг.

11.3    Расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R. значения которого приведены в таблице 3.

Условия приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, при доверительной вероятности Р = 0.95. должны удовлетворять условию:

|Xi—Хг| SR    (3)

Где Xi и Хг— результаты двух измерений, выполненных в разных лабораториях, мкг/кг;

R — предел воспроизводимости, мкг/кг.

11.4    Границы относительной погрешности, находящиеся с доверительной вероятностью Р = 0,95. при соблюдении условий настоящего стандарта не должны превышать значений, приведенных в таблице 3.

12 Контроль точности результатов измерений

12.1    Процедуру контроля стабильности показателей качества результатов измерений {повторяемости, промежуточной прецизионности и погрешности) проводят в соответствии с порядком, установленным в лаборатории, по ГОСТ ИСО 5725-6.

12.2    Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости), осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725*2. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предела повторяемости (г). Значения г приведены в таблице 3.

12.3    Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725*2. Расхождение между результатами измерений, полученными двумя лабораториями, не должно превышать предела воспроизводимости (Я). Значения R приведены в таблице 3.

Приложение А (справочное)

Хроматограмма и калибровочные кривые градуировочных растворов йодтироэинов

А.1 Хроматограмма градуировочных растворов йодтирозииое (общий ионный ток и MRM переходы МИТ и ДИТ) приведена на рисунке А.1.

Высота лика, уел. ед.



Время удерживания, мин

Рисунок А.1 — Хроматограмма градуировочных растворов йодтироэинов (общий ионный ток и

MRM переходы МИТ и ДИТ)

А.2 Калибровочные кривые градуировочных растворов йодгирозинов в диапазоне концентраций 1.0— 2000.0 нг/см* приведены на рисунке А.2.

Время удерживания, мин    Заряд * массе (гл/х)    Концентрация, иг/мл

Рисунок А.2 — Калибровочные кривые градуировочных растворов йодтироэинов в диапазоне

концентраций 1.0—2000.0 нг/см3

УДК 637.5.04/.07:006.354    МКС 67.120.10

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, йодтирозины. высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектором

Редактор Д.А. Мединовэ Корректор М.С. Квбашовэ Компьютерная верстка Д. М. Кульчицкого

Подписано в печать 26.02.2016. Формат 60x84%.

Усл.печ.п. 1.40. Тираж 50 экз. Зак.4308.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

ФГУП еСТАНДАРТИНФОРМ»

123995 Москва. Гранатный пер.. 4. wvmv.goebnfo.ru    

10