allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.080. Фрукты. Овощи

ГОСТ 34230-2017 Продукция соковая. Определение свободных аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Обозначение:
ГОСТ 34230-2017
Наименование:
Продукция соковая. Определение свободных аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2019
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.080.01

Текст ГОСТ 34230-2017 Продукция соковая. Определение свободных аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


ГОСТ 34230-2017

Группа Н69

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ



ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ


Определение свободных аминокислот методом высокоэффективнойжидкостной хроматографии


Juice products. Determination of free amino acids by highperformance liquid chromatography method



МКС 67.080.01

Датавведения 2019-01-01

Предисловие

Предисловие


Цели, основные принципы иосновной порядок проведения работ по межгосударственнойстандартизации установлены в ГОСТ1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основныеположения" и ГОСТ1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандартымежгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственнойстандартизации. Правила разработки, принятия, обновления иотмены"

Сведения остандарте

1РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Российский союзпроизводителей соков" (РСПС) при участии Акционерного общества"Мултон" (АО "Мултон") и Федерального государственного бюджетногоучреждения науки "Федеральный исследовательский центр питания,биотехнологии и безопасности пищи" (ФГБУН "ФИЦ питания ибиотехнологии")

2ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию иметрологии

3ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии исертификации (протокол от 30 ноября 2017 г. N 52-2017)

За принятиепроголосовали:

Краткоенаименование страны по МК (ИСО3166) 004-97

Код страныпо
МК (ИСО3166) 004-97

Сокращенноенаименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт РеспубликиБеларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

Украина

UA

Минэкономразвития Украины

4Приказом Федерального агентства по техническому регулированию иметрологии от 12 декабря 2017 г. N 1903-ст межгосударственныйстандарт ГОСТ 34230-2017 введен в действие в качестве национальногостандарта Российской Федерации с 1 января 2019 г.

5ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация обизменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодноминформационном указателе "Национальные стандарты", а текстизменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе"Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отменынастоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликованов ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты".Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются такжев информационной системе общего пользования - на официальном сайтеФедерального агентства по техническому регулированию и метрологии всети Интернет (www.gost.ru)

1Область применения


Настоящий стандартраспространяется на соковую продукцию из фруктов и овощей иустанавливает метод высокоэффективной жидкостной обращенно-фазовойхроматографии для определения массовой концентрации (массовой доли)свободных аминокислот:

-L-Аспарагиновой кислоты;

-L-Глутамина;

-L-Глутаминовой кислоты;

-L-Серина;

-L-Гистидина;

-L-Треонина;

-L-Аспарагина;

-L-Аланина;

-L-Аргинина;

-L-Тирозина;

--Аминомасляной кислоты;

-L-Метионина;

-L-Валина;

-L-Изолейцина;

-L-бета-Фенилаланина;

-L-Лейцина;

-L-Лизина;

-Глицина;

-L-Пролина;

-L(+)-Орнитина.

Диапазон измерениймассовой концентрации (массовой доли) свободных аминокислотсоставляет от 5,0 до 20,0 мг/дм (млн) без учета разбавления и концентрированияпроб.

Примечание - 1млн соответствует 1 мг/кг.

2Нормативные ссылки


Внастоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующиемежгосударственные стандарты:

ГОСТ12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарнаябезопасность. Общие требования

ГОСТ12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредныевещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда.Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видовзащиты
________________
*В Российской Федерации действует ГОСТ Р12.1.019-2009.


ГОСТ61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственнаясистема обеспечения единства измерений. Весы неавтоматическогодействия. Часть 1. Метрологические и технические требования.Испытания

ГОСТ199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Техническиеусловия

ГОСТ1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторнаястеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие техническиеусловия

ГОСТ ISO 3696-2013** Водадля лабораторного анализа. Технические требования и методыконтроля
________________
** В Российской Федерациидействует ГОСТ Р52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа.Технические условия".


ГОСТ4199-76 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный.Технические условия

ГОСТ4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003***Точность (правильность и прецизионность) методов и результатовизмерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
________________
*** В РоссийскойФедерации действует ГОСТ РИСО 5725-6-2002.


ГОСТ5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья.Технические условия

ГОСТ6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO7886-1-2011 Шприцы инъекционные однократного применениястерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования

ГОСТ12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Техническиеусловия

ГОСТИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентностииспытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования.Методы испытаний

ГОСТ22967-90 Шприцы медицинские инъекционные многократногоприменения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы,основные параметры и размеры

ГОСТ26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правилаприемки и методы отбора проб

ГОСТ28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие техническиетребования и методы испытаний

ГОСТ29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипеткиградуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - Припользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действиессылочных стандартов в информационной системе общего пользования -на официальном сайте Федерального агентства по техническомурегулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодномуинформационному указателю "Национальные стандарты", которыйопубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускамежемесячного информационного указателя за текущий год. Еслиссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящимстандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным)стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, тоположение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, незатрагивающей эту ссылку.

3Сущность метода


Метод основан на переводесвободных аминокислот во флуоресцирующие соединения предколоночнойдериватизацией и количественном анализе полученных производных спомощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) наобращенно-фазовых хроматографических колонках, заполненныхсорбентом С18 с размером частиц менее 5 мкм с использованиемфлуориметрического детектора.

4Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы иматериалы

4.1 Хроматографжидкостный с флуориметрическим детектором (диапазон длин волнвозбуждения 200-890 нм, эмиссии 210-900 нм), относительнымсреднеквадратическим отклонением выходного сигнала, не более:

-по площади пика - 1%;

-по времени удерживания - 0,3%;

-по площади пика за 8 ч непрерывной работы - 2%;

-по времени удерживания за 8 ч непрерывной работы - 2%.

4.2 Колонкахроматографическая С18* длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом С18 с энд-кэпингом сразмером частиц менее 5 мкм.
________________
*Примером является хроматографическая колонка Zorbax SB С18 компанииAgilent. Информация приведена для удобства пользователей настоящегостандарта и не является поддержкой указанного продукта.

4.3 Колонка защитная(предколонка), размеры защитной колонки - 104,6 мм, заполненная тем же обращенно-фазовымсорбентом.

4.4 Весынеавтоматического действия специального класса точности по ГОСТOIML R 76-1, пределом допускаемой абсолютной погрешностиизмерения массы ±0,001 г.

4.5 Мономер (рН-метр) спределом абсолютной погрешности измерения ±0,1 ед. рН.

4.6 Пипеткиградуированные лабораторные стеклянные 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-1-2-5 и1-1-2-10 по ГОСТ29227.

4.7 Посуда мернаялабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ1770:

-цилиндр 1-1000-2;

-колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2.

4.8 Посуда лабораторнаястеклянная по ГОСТ25336:

-воронки В-56-80 ХС, В-75-80 ХС, В-75-110 ХС, В-100-150 ХС;

-стаканы любого типа исполнения 1 вместимостью 50, 100, 1000см;

-пробирки вместимостью 10 и 20 см.

4.9 Пробирки полимерныецентрифужные конические с завинчивающейся крышкой вместимостью 15см.

4.10 Палочки стеклянныедлиной 220 мм и диаметром 5 мм, выполненные из химически стойкогостекла любого класса по ГОСТ21400.

4.11 Фильтры мембранные снасадкой на шприц с размером пор 0,20 и 0,45 мкм.

4.12 Фильтры мембранныедиаметром 47 мм с размером диаметра пор мембраны 0,20 и 0,45мкм.

4.13 Бумагафильтровальная лабораторная по ГОСТ12026.

4.14 Установка дляфильтрации и дегазации жидкостей.

4.15 Виалы вместимостью 2см для автоматического ввода проб и вставки ввиалы для микроколичеств проб.

4.16 Микрошприцвместимостью 250 мм.

4.17 Шприц медицинскийвместимостью 5 см многократного применения по ГОСТ22967 или однократного применения по ГОСТ ISO7886-1.

4.18 Микродозаторыпипеточные одноканальные переменного объема от 20 до 200мм с соответствующими наконечниками (безвоздушного промежутка) по ГОСТ28311.

4.19 Склянки из темногостекла с завинчивающейся крышкой.

4.20 Центрифуга,обеспечивающая фактор разделения (g-фактор) не менее800.

4.21 Водадистиллированная по ГОСТ6709 или вода по ГОСТ ISO 3696 1-й степени чистоты.

4.22 Ацетонитрил, ос.ч.,имеющий оптическую плотность не более 0,02 при 200 нм.

4.23 Кислота уксуснаяледяная по ГОСТ61, х.ч.

4.24 Тетрагидрофуран(далее - ТГФ) для хроматографии, с массовой долей основноговещества не менее 99,9% и показателем преломления в пределах от 1,3439 до 1,3440.

4.25 Спирт этиловый поГОСТ5962.

4.26 о-Фталевый альдегидс массовой долей основного вещества не менее 97%.

4.273-Меркаптопропионовая кислота с массовой долей основного веществане менее 99%.

4.289-Флуоренилметоксикарбонилхлорид с массовой долей основноговещества не менее 97%.

4.29 Натрийтетраборнокислый 10-водный по ГОСТ4199, х.ч.

4.30 Натрия гидроокись поГОСТ4328, х.ч.

4.31 Натрий уксуснокислый3-водный по ГОСТ199, ч.д.а.

4.32 Аминокислоты:

-L-Аспарагиновая кислота, массовая доля основного вещества не менее98,0%;

-L-Глутамин, массовая доля основного вещества не менее 99,0%;

-L-Глутаминовая кислота, массовая доля основного вещества не менее99,0%;

-L-Серин, массовая доля основного вещества не менее 99,0%;

-L-Гистидин, массовая доля основного вещества не менее 99,0%;

-L-Треонин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Аспарагин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Аланин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Аргинин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Тирозин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

--Аминомасляная кислота, массовая доляосновного вещества не менее 99,0%;

-L-Метионин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Валин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-изо-Лейцин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-бета-Фенилаланин, массовая доля основного вещества не менее98,0%;

-L-Лейцин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-L-Лизин, массовая доля основного вещества не менее 98,0%;

-Глицин, массовая доля основного вещества не менее 98,5%;

-L-Пролин, массовая доля основного вещества не менее 99,0%;

-L-Орнитин моногидрохлорид, массовая доля основного вещества99,0%.

Допускается применениедругих средств измерений с метрологическими характеристиками нениже вышеуказанных, вспомогательного оборудования, материалов стехническими характеристиками не ниже вышеуказанных и химическихреактивов аналогичной или более высокой квалификации.

5Отбор проб


Отбор проб соковойпродукции проводят по ГОСТ26313.

6Подготовка к проведению измерений

6.1 Подготовкахроматографа к работе

Включение и подготовкухроматографа к работе, вывод его на режим и выключение по окончанииработы выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации.

6.2 Общиеположения

Для дериватизацииаминокислот используют смесь реагентов: о-фталевого альдегида(далее - ОРА) в присутствии нуклеофильного реагента(3-меркаптопропионовой кислоты) и 9-флуоренилметоксикарбонилхлорида(далее - FMOC).

Разделение аминокислотпроисходит при температуре 40°С в градиентном режиме сиспользованием следующих подвижных фаз:

-ацетатный буфер с рН 7,2 ед. рН с добавкой тетрагидрофурана;

-смесь: ацетатный буфер/ацетонитрил/этанол.

Для продления срокаслужбы и более эффективной работы колонки используют систему защиты(in-line фильтры на выходе из насоса и предколонку), периодическуюпромывку (не реже одного-двух раз в неделю) колонки с ацетонитрилом(в зависимости от числа проведенных анализов и концентрацииорганических веществ, прошедших через колонку) в течение 1-3 ч соскоростью 1,0 см/мин с предварительной промывкой всейсистемы водой. После проведения анализа и промывки колонки воизбежание образования кристаллов соли вся система также промываетсяводой.

Операции заполнениясистемы растворителями и промывка отдельных частей и системы вцелом выполняют в соответствии с соответствующими руководствами поэксплуатации оборудования.

Детектированиеразделенных производных аминокислот осуществляют с помощьюфлуориметрического детектора:

-при длине волны возбуждения 266 нм и длине волны испускания 305 нм- для производных о-фталевого альдегида;

-длине волны возбуждения 340 нм и длине волны испускания 420 нм -для производных пролина и орнитина с FMOC.

Идентификацию разделенныхпроизводных аминокислот проводят путем сравнения времен удерживанияи коэффициентов удерживания со стандартной смесью аминокислот (см.приложение А).

6.3 Приготовлениевспомогательных растворов

6.3.1 Приготовлениераствора уксусной кислоты с массовой долей 2%

Вмерную колбу вместимостью 50 см приливают ориентировочно 20 см воды, затем приливают 0,95 см ледяной уксусной кислоты и доводят водой дометки.

Раствор используютсвежеприготовленным.

6.3.2 Приготовлениеподвижной фазы А

(4,080±0,001) гуксуснокислого 3-водного натрия взвешивают в стакане вместимостью100 см, растворяют в приблизительно 80 см воды, количественно переносят в мернуюколбу вместимостью 1000 см, доводят водой до метки и перемешивают.Раствор переносят в мерный стакан вместимостью 1000 см и доводят рН до значения 7,2 ед. рНраствором уксусной кислоты, приготовленным по 6.3.1, регистрируяпоказания рН-метром. К полученному раствору добавляют 2 см тетрагидрофурана. Полученный раствордегазируют на установке для фильтрации и дегазации жидкостей (см.4.15) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрациейчерез фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора -не более трех дней при температуре 4°С.

6.3.3 Приготовлениеподвижной фазы В

Вцилиндр вместимостью 1000 см приливают 200 см ацетатного буфера (подвижной фазы А),приготовленного по 6.3.2, 640 см ацетонитрила и 160 см этилового спирта. Полученную смесьперемешивают и дегазируют на установке для фильтрации и дегазациижидкостей (см. 4.15) под вакуумом в течение 15 мин с одновременнойфильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения смеси - неболее трех дней при комнатной температуре.

6.3.4 Приготовлениесмеси дериватизирующих реагентов о-фталевого альдегида (ОРА) и3-меркаптопропионовой кислоты

(0,025±0,001) го-фталевого альдегида растворяют в 2 см этанола и добавляют 20 мм 3-меркаптопропионовой кислоты.

Срок хранения смеси - неболее 1 мес при температуре от 2 до 8°С в склянке из темногостекла.

6.3.5 Приготовлениераствора дериватизирующего реагента 9-метилхлороформиатфлуорена(FMOC)

(0,05±0,001) г9-флуоренилметоксикарбонилхлорида растворяют в 10 см ацетонитрила.

Срок хранения раствора -не более 1 мес при температуре от 2 до 8°С в склянке из темногостекла.

6.3.6 Приготовлениераствора гидроксида натрия молярной концентрации 5моль/дм

20,0 г гидроксида натриярастворяют в 50 см воды, переносят в мерную колбу вместимостью100 см и доводят водой до метки.

Срок хранения раствора -не более 1 мес в сосуде из полимерного материала.

6.3.7 Приготовлениеборатного буферного раствора молярной концентрации 0,05моль/дм

4,77 г тетраборнокислогодесятиводного натрия растворяют в 150 см воды, переносят раствор в мерную колбувместимостью 250 см и доводят водой до метки. Приготовленныйраствор переносят в стакан вместимостью 1000 см и доводят до 10,4 ед. рН растворомгидроксида натрия, приготовленного по 6.3.6, регистрируя показаниярН-метром.

Срок хранения раствора -не более 1 мес.

6.4 Приготовлениеградуировочных растворов

6.4.1 Приготовлениеисходных градуировочных растворов аминокислот

Основной (раствор N 6),промежуточный (раствор N 5) и градуировочные растворы аминокислот(растворы N 1-4) готовят в соответствии с таблицей 2.

Примечание - Прииспользовании в качестве солей аминокислот (например, лизина) дляприготовления основного раствора необходимо пересчитывать массунавески на свободную аминокислоту.


Таблица 1

N раст-
вора

Компонент

Вместимостьмерной колбы, см

Способприготовления

Массоваяконцен-
трация, мг/дм

6

L-Аспарагиноваякислота

100

(0,100±0,001) гкаждой аминокислоты взвешивают в одном стакане вместимостью 50см. Содержимое стакана растворяютприблизительно в 30 см воды, количественно переносят в мернуюколбу и доводят до метки водой

1000

L-Глутамин