ГОСТ 32690-2014 Продукция соковая. Определение пестицидов методом тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС)

ГОСТ 32690-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

Определение пестицидов методом тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС)

Juices and Juice Products. Determination of pesticides by tandem high performance liquid mass spectrometry (HPLC-MS/MS)

МКС 67.080.01

Дата введения 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования "Московский государственный университет пищевых производств" (ФГБОУ ВПО "МГУПП")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45-2014)

За принятие проголосовали:

(Поправка. ИУС N 4-2020), (Поправка. ИУС N 2-2023).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 августа 2014 г. N 897-ст ГОСТ 32690-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 Настоящий стандарт включает в себя основные нормативные положения следующих международных документов*:

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - .

- европейских региональных стандартов EN 12393 (все части) Foods of plant origin - Multiresidue methods for the determination of pesticide residues by GC or LC-MS/MS (Продукция пищевая растительного происхождения. Мультиметоды определения остатков пестицидов методами газовой хроматографии и тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии);

- европейского регионального стандарта EN 15637:2008 Foods of plant origin - Determination of pesticide residues using LC-MS/MS following methanol extraction and clean-up using diatomaceous earth [Продукция пищевая растительного происхождения. Определение остатков пестицидов методом тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии с экстракцией метанолом на диатомовой земле (кизельгуре)];

- Технического отчета CEN/TR 15641:2007 Food analysis - Determination of pesticide residues by LC-MS/MS - Tandem mass spectrometric parameters (Исследование пищевых продуктов. Определение остатков пестицидов методом тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии) Европейского комитета по стандартизации CEN/NC 275 "Методы анализа пищевых продуктов. Горизонтальные методы"

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ВНЕСЕНЫ: поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2020 год; поправка, опубликованная в ИУС N 2, 2023 год

Поправки внесены изготовителем базы данных

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на соки и другую соковую продукцию из фруктов и овощей и устанавливает метод определения остаточных количеств пестицидов с применением тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии (далее - ВЭЖХ-МС/МС) в диапазоне измерений массовой концентрации от 0,0001 до 0,1000 мг/кг.

Примечание - Настоящий стандарт рекомендуется применять в целях апробации и накопления дополнительной информации в части его применения.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ИСО 3696-2013 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные. Типы. Основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 29030-91 Продукты переработки плодов и овощей. Пикнометрический метод определения относительной плотности и содержания растворимых сухих веществ.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835/1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32689.1-2014 Продукция пищевая растительного происхождения. Мультиметоды для газохроматографического определения остатков пестицидов. Часть 1. Общие положения

ГОСТ 32689.2-2014 Продукция пищевая растительного происхождения. Мультиметоды для газохроматографического определения остатков пестицидов. Часть 2. Методы экстракции и очистки

ГОСТ 32689.3-2014 Продукция пищевая растительного происхождения. Мультиметоды для газохроматографического определения остатков пестицидов. Часть 3. Определение и подтверждение результатов

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Сущность метода заключается в предварительной экстракции остатков пестицидов метанолом, последующей очистке экстракта дихлорметаном и количественном определении массовой концентрации остатков пестицидов с применением ВЭЖХ-МС/МС с ионизацией распылением в электрическом поле [Electrospray Ionization (ESI)] и идентификацией компонентов в режиме контроля выбранных реакций [Selected Reaction Monitoring (SRM)].

4 Средства измерений, образцы сравнения, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

Система аналитическая ВЭЖХ-МС/МС* с трехквадрупольным масс-детектором для измерения в диапазоне масс от 10 до 3000 атомных единиц массы (а.е.м.), с точностью измерения массы не ниже 0,1 а.е.м, ионизацией распылением в электрическом поле, возможностями работы в режиме контроля выбранных реакций и сканирования дочерних и родительских ионов, минимальным отношением сигнал/шум 1000:1, обеспечивающая обнаружение пестицидов в интервале от 0,0001 до 0,1000 мг/кг, включающая модуль ВЭЖХ, состоящий из бинарного насоса со смесителем; термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до 50°С; хроматографической колонки с обращенно-фазовым сорбентом зернением 5 мкм С.

_______________

* Дополнительная информация о рекомендуемых ВЭЖХ-МС/МС системах приведена в приложении А.

Весы, обеспечивающие точность взвешивания с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,001 г по ГОСТ OIML R 76-1.

Баня ультразвуковая.

Центрифуга, обеспечивающая центробежное ускорение 3000 g (на дне стакана для центрифугирования).

Испаритель ротационный с водяной баней с возможностью регулирования температуры от комнатной до 100°С.

Устройство для перемешивания проб, обеспечивающее частоту вращения до 120 об./мин.

Шкаф сушильный, обеспечивающий температуру до 200°С.

Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

Стеклянная колонка (картридж*) вместимостью 5 см.

_______________

* Допускается использование готовых колонок (картриджей), например, картриджи ChemElut (Varian, Palo Alto, CA, USA) или аналогичные. Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Вещества пестицидов активные для использования в качестве образцов сравнения с содержанием основного вещества не менее 98%.

Ацетонитрил для градиентной ВЭЖХ, оптическая плотность при 200 нм не более 0,025 ед. относительно дистиллированной воды, массовая доля воды не более 0,03%.

Метанол для градиентной ВЭЖХ.

Аммоний муравьинокислый, ч.д.а.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, ч.д.а.

Дихлорметан, ч.д.а.

Вода для лабораторного анализа степени чистоты 1 по ГОСТ ИСО 3696.

Микрошприцы для инжекций вместимостью 0,001; 0,005 и 0,010 см точностью дозирования ±0,0001, ±0,0002 и ±0,001 см соответственно.

Шприц стеклянный вместимостью 2 см.

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1, 2 и 5 см любого исполнения по ГОСТ 29227.

Дозаторы пипеточные одноканальные переменной вместимости от 100 до 1000 мм с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311.

Стаканы для центрифугирования вместимостью 80 см.

Стаканы вместимостью 50, 100 и 200 см по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50 и 250 см любого исполнения по ГОСТ 1770.

Воронки лабораторные по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см исполнений 2 или 2а по ГОСТ 1770.

Колбы плоскодонные вместимостью 50, 100 и 250 см по ГОСТ 25336.

Колбы круглодонные вместимостью 50 см по ГОСТ 25336.

Колбы остродонные для упаривания вместимостью 10 и 50 см по ГОСТ 25336.

Пробирка для микропроб однократного применения (пробирка Эппендорфа) вместимостью 1,5 см.

Емкости стеклянные вместимостью 50, 250 и 1000 см с пришлифованными стеклянными, фторопластовыми или полиэтиленовыми пробками.

Фильтры мембранные из политетрафторэтилена (ПТФЭ) диаметром 4 мм и размером пор 0,45 мкм.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313.

Подготовка и хранение проб - по ГОСТ 26671, ГОСТ 32689.1, ГОСТ 32689.2 и ГОСТ 32689.3.

6 Подготовка к проведению испытаний

6.1 Общие требования

Перед испытанием проводят предварительную подготовку лабораторной посуды, а также проверку качества реактивов и вспомогательных материалов согласно требованиям ГОСТ 32689.1, ГОСТ 32689.2 и ГОСТ 32689.3.

6.2 Приготовление вспомогательных растворов

6.2.1 Приготовление подвижных фаз

Подвижные фазы для хроматографического разделения готовят в соответствии с рекомендациями, приведенными в приложении А. Не допускается контакт подвижных фаз с резиной и полимерными материалами (за исключением ПТФЭ).

6.2.2 Приготовление раствора хлористого натрия

В стакан вместимостью 200 см вносят 20 г хлористого натрия и добавляют 80 г бидистиллированной воды. Содержимое стакана перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения соли. Не допускается контакт раствора с резиной и полимерными материалами (за исключением ПТФЭ).

Срок хранения готового раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.

6.3 Приготовление растворов пестицидов

Все растворы пестицидов хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 20°С в стеклянных или фторопластовых сосудах.

Перед использованием растворы выдерживают до достижения комнатной температуры.

6.3.1 Приготовление основных растворов пестицидов номинального значения массовой концентрации 1000 мг/дм

(100±10) мг соответствующего активного вещества пестицида вносят в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем до метки метанолом.

Срок хранения приготовленных растворов пестицидов при температуре не выше минус 20°С - 6 мес.

6.3.2 Приготовление смесей растворов пестицидов

Для проведения испытания в зависимости от его задач из исходных растворов (см. 6.3.1) готовят смеси соответствующих пестицидов. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см помещают соответствующие объемы необходимых градуировочных растворов пестицидов (см. 6.3.1), затем доводят объем в колбе до метки метанолом. Массовая концентрация пестицидов в смесях растворов пестицидов должна быть достаточной для приготовления требуемых стандартных растворов.

Срок хранения смесей растворов пестицидов при температуре не выше минус 20°С - не более 3 мес.

6.3.3 Приготовление градуировочных растворов пестицидов в ацетонитриле

Необходимый объем смеси растворов пестицидов по 6.3.2 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем в колбе метанолом. Требуемый объем смеси растворов пестицидов выбирают таким образом, чтобы соответствовать градуировочному интервалу концентраций пестицидов от 0,001 до 0,100 мг/дм. Как правило, используют пять градуировочных растворов с массовыми концентрациями пестицидов 0,001, 0,025, 0,050, 0,075 и 0,100 мг/дм. Примеры приготовления растворов приведены в таблице 1.

Таблица 1

Примечание - Массовая концентрация пестицида 0,001 мг/см соответствует остаточному количеству пестицида в пробе 0,4 мг/кг (млн) в случае использования 10 г пробы. Градуировочные растворы готовят непосредственно перед проведением серии испытаний.

6.4 Подготовка ВЭЖХ-МС/МС системы

Подготовку ВЭЖХ-МС/МС системы к испытаниям проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации оборудования и информацией, приведенной в приложении А. При настройке режимов работы масс-спектрометра рекомендуется использовать МС/МС параметры активных веществ пестицидов, приведенные в приложении Б.

При этом должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающего воздуха от 20°С до 25°С;

- атмосферное давление от 84 до 106 кПа;

- напряжение в электросети (220±10) В;

- частота тока в электросети от 49 до 51 Гц;

- относительная влажность воздуха от 40% до 80%.

6.5 Градуировка ВЭЖХ-МС/МС системы

Процедуру установления градуировочной характеристики проводят в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Рассчитывают коэффициент корреляции и отклонения рассчитанных значений массовых концентраций пестицидов в каждой градуировочной точке от фактического значения в соответствии с процедурой приготовления градуировочных растворов (см. 6.3.3).

Градуировку считают приемлемой, если коэффициент корреляции составляет не менее 0,995, а относительное отклонение рассчитанного значения массовой концентрации от фактического значения не более ±10%.

Вместо относительного отклонения приемлемость градуировочной характеристики может быть оценена по относительному стандартному отклонению, которое не должно превышать 5%.

7 Проведение испытаний

7.1 Экстракция

10 г предварительно тщательно перемешанного сока или другого сокового продукта вносят в стакан (пробирку) для центрифугирования вместимостью 80 см с винтовой укупоркой*.

_______________

* Не допускается использование укупорки из резины или полимерных материалов, за исключением ПТФЭ.

В стакан добавляют 1,0 см воды по ГОСТ ИСО 3696 (в случае осветленных соков и другой осветленной соковой продукции) или 1,5 см (в случае соков и другой соковой продукции с мякотью). Перемешивают содержимое стакана стеклянной палочкой, затем вносят 20 см метанола.

Смесь интенсивно перемешивают в течение 2 мин с помощью высокоскоростной мешалки. После перемешивания от 30 см полученного экстракта отбирают не менее 10 см и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 g.

В сухую мерную колбу вместимостью 10 см вносят 2,5 см раствора хлористого натрия. Объем раствора в колбе доводят до метки с помощью надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования экстракта. Полученную разбавленную надосадочную жидкость используют для очистки.

7.2 Очистка

5 см разбавленной надосадочной жидкости наносят на стеклянную колонку (картридж) вместимостью 5 см, содержащую диатомовую землю (кизельгур). При необходимости содержимое колонки активируют в соответствии с указаниями его изготовителя. Картридж с внесенной пробой оставляют при комнатной температуре на 5 мин, затем проводят элюирование путем внесения в картридж 12,5 см дихлорметана. Элюат собирают в круглодонной колбе вместимостью 50 см. Элюирование повторяют, добавляя следующие 12,5 см дихлорметана. Элюат добавляют в колбу к первой фракции.

С помощью ротационного испарителя объединенные элюаты концентрируют до объема 0,5-2,0 см, затем отгоняют оставшийся дихлорметан в токе азота до получения сухого остатка.

В колбу с сухим остатком вносят 0,5 см метанола. Колбу закрывают чистой стеклянной пришлифованной пробкой. Определяют массу колбы с содержимым и пробкой. Укупоренную колбу переносят в ультразвуковую баню и осторожным покачиванием (для предотвращения потерь метанола) растворяют остаток. После растворения повторно определяют массу колбы. Если он уменьшился из-за испарения метанола, первоначальную массу восстанавливают путем добавления необходимого количества метанола.

0,5 см полученного раствора анализируемой пробы в метаноле фильтруют через мембранный одноразовый фильтр из ПТФЭ. Прозрачный фильтрат используют для инжекции в ВЭЖХ-МС/МС систему.

7.3 Приготовление анализируемой пробы из концентрированной соковой продукции

Концентрированную соковую продукцию восстанавливают бидистиллированной водой до минимального уровня растворимых сухих веществ, предусмотренного нормативными документами на конкретную соковую продукцию.

Концентрированную соковую продукцию, минимальные уровни растворимых сухих веществ для которой не предусмотрены, восстанавливают бидистиллированной водой до содержания растворимых сухих веществ 11,2%. Содержание растворимых сухих веществ контролируют по ГОСТ 29030.

Экстракцию и очистку восстановленных проб проводят по 7.1-7.2.

7.4 Проведение испытаний

7.4.1 Общие условия

Инжекцию подготовленных по 7.1 и 7.2 анализируемых проб и градуировочных растворов пестицидов проводят в выбранной последовательности. Наиболее распространен способ, когда инжекция градуировочных растворов начинает и завершает серию инжекций проб.

ВЭЖХ-МС/МС система должна быть настроена на режим контроля выбранных реакций с переходами, обеспечивающими селективное детектирование анализируемых пестицидов. Примеры ВЭЖХ/СВЭЖХ-МС/МС систем, условия разделения и масс-спектрометрического детектирования приведены в приложении А.

7.4.2 Идентификация остатков пестицидов

Для идентификации остатков пестицидов, полученных на растворах анализируемых проб, их времена удерживания сравнивают со временем удерживания соответствующих пестицидов из градуировочных растворов. Для подтверждения присутствия остатков пестицидов проводят сравнение соотношения интенсивностей сигналов из первого и второго SRM (MRM)-перехода с соотношением интенсивностей сигналов остатков пестицидов из градуировочных растворов. Соотношение пиков для одного пестицида не должно отличаться более чем на 20% от ожидаемого соотношения интенсивностей сигналов.

Для количественного определения пестицидов в анализируемой пробе используют градуировочные растворы по 6.3.3. Данный способ рекомендуется, если в ходе определения не выявляются существенные эффекты влияния матрицы пробы.

В случае если предполагается наличие значимых концентраций пестицидов, в том числе превышающих максимально допустимые уровни, количественное определение проводят по способу добавленного пестицида (см. 8.2).

8 Обработка и оформление результатов испытаний

8.1 Количественное определение без добавленного пестицида

Остаточное содержание , в мг/кг, одного пестицида в анализируемой пробе сока или другой соковой продукции рассчитывают на основе площади (высоты) соответствующего пика по формуле

, (1)

где - площадь пика, высота пика или соотношение пиков одного измеренного перехода при контроле выбранных реакций, выраженные в безразмерных единицах;

- отрезок на соответствующих градуировочных прямых, в безразмерных единицах;

- наклон соответствующих градуировочных прямых, в безразмерных единицах;

- общий объем растворителя, использованного для экстракции, и воды, содержащейся в анализируемой пробе (30 см);

- масса анализируемой пробы, г;

- конечный объем экстракта после очистки (0,5 см).

- вместимость мерной колбы (10 см);

- объем раствора хлорида натрия (2,5 см);

- объем растворителя, использованный для очистки экстракта (5 см).

При расчете учитывают коэффициент разбавления анализируемой пробы, определяемый в зависимости от условий ее приготовления согласно 7.1-7.3. В случае, если полученный результат показывает, что остаточное содержание пестицида превышает верхнюю границу диапазона градуировочной характеристики, подготавливают новую анализируемую пробу с большим разбавлением и проводят повторное испытание.

За результат измерений принимают среднеарифметическое результатов трех параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

, (2)

где , - максимальное и минимальное значения из полученных трех результатов параллельных измерений, мг/кг;

, , - результаты трех параллельных определений, мг/кг

- значение критического диапазона, %.

Расхождение между тремя параллельными измерениями (в процентах от среднего значения), выполненными в одной лаборатории, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) , равного 3,6хRSD (приложение Г), при вероятности 0,95. При соблюдении этого условия за окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение трех параллельных определений, округленное до третьего десятичного знака.

Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний согласно ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

8.2 Количественное определение с добавленным пестицидом

В случае, если в пробе присутствуют значимые количества пестицидов, в том числе превышающие максимально допустимые уровни, а также если матрица пробы содержит вещества, оказывающие влияние на результат, испытание проводят с добавлением в пробу различных количеств соответствующего пестицида. Данный способ требует предварительной информации об остаточном количестве пестицида(ов), рассчитанном согласно 8.1.

Растворы пестицидов для применения по способу добавленного пестицида должны быть схожи по своему составу с растворами анализируемых проб в отношении растворителя. В случае, если при испытании анализируемой пробы в 10 г определен остаточный уровень пестицида , равный 0,8 мг/кг, применяют схему дозирования пестицида в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3

В случае обнаружения другого остаточного уровня используют соразмерную концентрацию градуировочного раствора пестицида и (или) более подходящий объем стандартного раствора пестицида и растворителя.

Количество пестицида в анализируемой пробе рассчитывают из графика линейной регрессии, описывающего зависимость площади пика пестицида от его массы в пробе (см. приложение В).

При использовании способа добавленного пестицида остаточное содержание , в мг/кг, одного пестицида в анализируемой пробе сока или другой соковой продукции рассчитывают на основе площади (высоты) соответствующего пика по формуле

, (3)

где - отрезок на оси на прямой линейной регрессии, в безразмерных единицах;

- наклон соответствующих градуировочных прямых, в безразмерных единицах;

- общий объем растворителя, использованного для экстракции, и воды, содержащейся в анализируемой пробе (30 см);

- начальная масса анализируемой пробы (5 или 10 г);

- конечный объем экстракта после очистки (0,5 см);

- вместимость мерной колбы (10 см);

- объем раствора хлорида натрия (2,5 см);

- объем растворителя, использованный для очистки экстракта (5 см);

- аликвотный объем экстракта после очистки (0,1 см).

При расчете учитывают коэффициент разбавления анализируемой пробы, определяемый в зависимости от условий ее приготовления согласно 7.1-7.3.

За результат измерений принимают среднеарифметическое результатов трех параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

, (4)

где , - максимальное и минимальное значения из полученных трех результатов параллельных измерений, мг/кг;

, , - результаты трех параллельных определений, мг/кг;

- значение критического диапазона, %.

Расхождение между тремя параллельными измерениями (в процентах от среднего значения), выполненными в одной лаборатории, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) , равного 3,6xRSD (приложение Г), при вероятности 0,95. При соблюдении этого условия за окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение трех параллельных определений, округленное до третьего десятичного знака.

Результаты измерений регистрируют в протоколе в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

8.3 Оформление результата определений

Результат определения по 8.1 и 8.2 представляют в виде , мг/кг, где - среднеарифметическое значение трех параллельных определений, - расширенная неопределенность измерений. При этом расширенная неопределенность определяется с учетом относительного стандартного отклонения для соответствующего пестицида, его количества (приложение Г) и коэффициента охвата 2 (при 0,95).

9 Метрологические характеристики

Результаты эксперимента по оценке точности метода определения остаточных количеств пестицидов, проведенного в рамках межлабораторного исследования, приведены в приложении Г в соответствии с ГОСТ 32689.1, ГОСТ 32689.2 и ГОСТ 32689.3, [1] и [2].

10 Контроль качества результатов измерений

Контроль показателей качества результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с использованием проверки стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения промежуточной прецизионности. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта. Периодичность контроля стабильности результатов выполняемых измерений регламентируют во внутрилабортаорных документах системы качества. При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

11 Требования безопасности

11.1 Условия проведения работ

При проведении анализов следует соблюдать условия:

- электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и технической документации на масс-спектрометр;

- взрывобезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.010;

- пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004;

- безопасности при работе с вредными веществами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.

11.2 Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженер-химик, техник или лаборант, имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в химической лаборатории и изучившие инструкцию по эксплуатации масс-спектрометрического оборудования. Первое применение метода ВЭЖХ-МС/МС в лаборатории следует проводить под руководством специалиста, владеющего теорией метода и имеющего практические навыки в этой области.

Приложение А
(справочное)

Примеры ВЭЖХ-МС/МС систем* для определения остаточных количеств пестицидов в соках и другой соковой продукции

_______________

* Данные примеры являются рекомендуемыми и приведены для удобства пользователей настоящего стандарта.

А.1 ВЭЖХ система N 1 (для большинства пестицидов)

Насос для ВЭЖХ: НР1100 Binary Pump (G31312A).

Автоматический податчик проб: НР1100 (G1313А).

Программа работы инжектора: загрузка в микрошприц 0,003 см подвижной фазы А, загрузка 0,002 смпробы, промывка иглы микрошприца метанолом, загрузка 0,002 см подвижной фазы А, загрузка 0,002 см пробы, промывка иглы метанолом, загрузка 0,002 см подвижной фазы А, загрузка 0,002 см пробы, промывка иглы метанолом, загрузка 0,002 см подвижной фазы А, загрузка 0,002 см пробы, промывка иглы метанолом, загрузка 0,003 см подвижной фазы А.

Хроматографическая колонка: Phenomenex Aqua С18 с размером зерна сорбента 5 мкм, 125 , длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм.

Подвижная фаза А: смесь метанола и бидистиллированной воды в объемном отношении 2:8 с добавленным муравьинокислым аммонием концентрацией 5 ммоль/дм.

Подвижная фаза Б: смесь метанола и бидистиллированной воды в объемном отношении 9:1 с добавленным муравьинокислым аммонием концентрацией 5 ммоль/дм.

Температура хроматографической колонки: 20°С.

Скорость подвижной фазы и градиент приведены в таблице А.1.

Таблица А.1 - Скорость подвижной фазы и градиент

А.2 ВЭЖХ система N 2 (для большинства пестицидов)

Объем пробы для инжекции: 0,005 см.

Хроматографическая колонка: Zorbax XDB С18 с размером зерна сорбента 3,5 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм.

Подвижная фаза А: раствор муравьинокислого аммония в бидистиллированной воде молярной концентрации 5 ммоль/дм.

Подвижная фаза Б: раствор муравьинокислого аммония в метаноле молярной концентрации 5 ммоль/дм.

Температура хроматографической колонки: 40°С.

Скорость подвижной фазы и градиент приведены в таблице А.2.

Таблица А.2 - Скорость подвижной фазы и градиент

А.3 ВЭЖХ система N 3 (для полярных пестицидов, которые проявляют низкое удерживание на обращенно-фазовых колонках)

Объем пробы для инжекции: 0,003 см (автоматическое разбавление с 0,003 см подвижной фазы А во время инжекции)*.

_______________

* Если конструкция системы не предусматривает автоматическое разбавление пробы в инжекторе, то проводят ее ручное разбавление подвижной фазой А в соотношении 1:1. Разбавленную анализируемую пробу вводят в систему в количестве 0,006 см.

Хроматографическая колонка: Phenomenex Aqua С18 с размером зерна сорбента 3 мкм, 125 , длиной 150 мм, внутренним диаметром 2 мм.

Подвижная фаза А: раствор муравьинокислого аммония в бидистиллированной воде молярной концентрации 5 ммоль/дм.

Подвижная фаза Б: раствор муравьинокислого аммония в метаноле молярной концентрации 5 ммоль/дм.

Температура хроматографической колонки: 40°С.

Скорость подвижной фазы и градиент приведены в таблице А.3.

Таблица А.3 - Скорость подвижной фазы и градиент

А.4 ВЭЖХ система N 4 (для кислых пестицидов)

Объем пробы для инжекции: 0,005 см.

Хроматографическая колонка: Zorbax XDB С18 с размером зерна сорбента 3,5 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм.

Подвижная фаза А: раствор концентрированной уксусной кислоты в бидистиллированной воде массовой концентрации 0,1 см/дм.

Подвижная фаза Б: раствор концентрированной уксусной кислоты в ацетонитриле массовой концентрации 0,1 см/дм.

Температура хроматографической колонки: 40°С.

Скорость подвижной фазы и градиент приведены в таблице А.4.

Таблица А.4 - Скорость подвижной фазы и градиент

А.5 СВЭЖХ (сверхпроизводительная) система N 5 (для большинства пестицидов)

Аппаратная платформа: Waters Aquity UPLC System.

Объем пробы для инжекции: 0,002 см.

Хроматографическая колонка: Waters HSS Т3 с размером зерна сорбента 1,8 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм.

Подвижная фаза А: смесь метанола и бидистиллированной воды в объемном отношении 1:20 с добавленным муравьинокислым аммонием молярной концентрации 5 ммоль/дм.

Подвижная фаза Б: метанол.

Температура хроматографической колонки: 60°С.

Скорость подвижной фазы и градиент приведены в таблице А.5.

Таблица А.5 - Скорость подвижной фазы и градиент

А.6 Масс-спектрометр (МС/МС система N 1)

Аппаратная платформа: Applied Biosystems API 2000.

Ионный источник: Turbo Ion Spray (ионизация распылением в электрическом поле).

Параметры настройки ионного источника и общие параметры масс-спектрометра приведены в таблице А.6.

Таблица А.6

А.7 Масс-спектрометр (МС/МС система N 2)

Аппаратная платформа: Micromass Quattro LC.

Ионный источник: ионизация распылением в электрическом поле.

Параметры настройки ионного источника и общие параметры масс-спектрометра приведены в таблице А.7.

Таблица А.7

А.8 Масс-спектрометр (МС/МС система N 3)

Аппаратная платформа: Applied Biosystems API 5500.

Ионный источник: Turbo Ion Spray (ионизация распылением в электрическом поле).

Параметры настройки ионного источника и общие параметры масс-спектрометра приведены в таблице А.7.*

_______________________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: в таблице А.7. - .

Таблица А.8

А.9 Допускается использовать другие аналитические системы ВЭЖХ-МС/МС и подготовки проб, находящиеся в продаже, например, Agilent 1260 Infinity Binary LC или 1290 Infinity LC system, Agilent 6400 Series Triple Quadrupole LC-MS system, Agilent Pesticide Test Mix, PIN 5190-0469 acid and base diluted separately as instructed to 10 ppb in 10% acetonitrile-90% water*. Системы для проведения аналитического измерения и подготовки проб должны обеспечивать соблюдение условий определения, установленные настоящим стандартом.

_______________

* Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Приложение Б
(рекомендуемое)

Примеры МС/МС параметров для определения активных веществ пестицидов

Б.1 Специфичные параметры масс-спектрометрии активных веществ пестицидов приведены в таблице Б.1.

Таблица Б.1