allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.080. Фрукты. Овощи

ГОСТ 32709-2014 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов

Обозначение:
ГОСТ 32709-2014
Наименование:
Продукция соковая. Методы определения антоцианинов
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2016
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.080, 67.050

Текст ГОСТ 32709-2014 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

32709—

2014

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ Методы определения антоцианинов

Издание официальное

Москва

Стакдартикформ

2014

ГОСТ 32709-2014

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан* дартиэации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосу* дарственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией «Российский союз производителей соков» (РСПС) при участии Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно* исследовательский институт питания» Российской академии медицинских наук (ФГБУ «НИИ питания» РАМН)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. Ne 45*П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

Ш

Минэкономики Республики Армения

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстакдарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

Украина

UA

Минэкономразвития Украины

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 июля 2014 г. № 777*ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32709-2014 введен в действие в качестве на* ционального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5    В настоящем стандарте учтены отдельные положения метода IFUMA71 (1998) «Anthocyanins by HPLC» International Federation of Fruit Juice Produces (ИФУ 71:1998 «Определение антоцианинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» Международной федерации производите* лей фруктовых соков) в части качественного определения антоцианинов

6    Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53773-2010

7    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информаци• онном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок - е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация. уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 32709—2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ Методы определения аитоцианинов Juice products. Methods for determination of Anthocyanins

Дата введения — 2016—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые соки и нектары, фруктовые концентрированные соки, фруктовые пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки, из фруктов, имеющих красную, синюю и фиолетовую окраску, включая соковую продукцию обогащенную и для детского питания (далее - соковая продукция) и устанавливает следующие методы определения аитоцианинов:

- метод высокоэффективной обращенно-фазовой жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для качественного определения аитоцианинов в соковой продукции:

• метод pH-дифференциальной спектрофотометрии для определения массовой концентрации (массовой доли) суммы аитоцианинов в соковой продукции.

Диапазон измерений массовой концентрации (массовой доли) суммы аитоцианинов в пересчете на циаиидин-3-глюкозид - от 5 мг/дм3 (млн1) до 5000 мг/дм3 (млн'1).

Предел обнаружения метода - 1 мг/дм3 (млн'1).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005-68 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрыво-безопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезо-пасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83. ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ ИСО 3696-2013 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

Издание официальное

1

ГОСТ 32709—2014

ГОСТ 9245-79 Потенциометры постоянного тока измерительные. Общие технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора

проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. 8 котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1    антоцианины: Водорастворимые растительные пигменты, обусловливающие красную, синюю и фиолетовую окраску фруктов, относящиеся к классу флавоноидов и представляющие собой окрашенные растительные гликозиды антоцианидинов.

Примечание - Структура основных антоцианидинов. входящих в состав природных антоцианинов. приведена на рисунке А.1 приложения А.

3.2    профиль антоцианинов (профиль): Набор основных специфических, индивидуальных антоцианинов и соотношение между их содержанием, характерные для конкретного вида фруктов.

4    Отбор и подготовка проб

4.1    Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671. ГОСТ 31643 (раздел 6.2).

5    Метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной

хроматографии (ВЭЖХ)

5.1    Сущность метода

Метод основан на определении индивидуальных антоцианинов путем их разделения на твердом носителе Cig. привитом на высокочистую силикагелевую основу по обращенно-фазовому механизму с последующим фотометрическим детектированием при длине волны 518 нм.

Полученные хроматограммы сравнивают с профилями антоцианинов аутентичных фруктовых соков и данными, приведенными в таблице Б.2 приложения Б.

5.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

5.2.1    Хроматограф жидкостный высокоэффективный с насосом высокого давления и спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) с относительным среднеквадратическим отклонением выходных сигналов не более 5 % (по площади и времени выхода пиков), снабженный программно-аппаратным комплексом для сбора и обработки данных.

5.2.2    Колонка для ВЭЖХ длиной 250 мм и внутренним диаметром 4.6 мм. заполненная обра

2

ГОСТ 32709—2014

щенной фазой - октадецилсиликагелем С)9, размером частиц 5 мкм’.

5.2.3    Микрошприцы хроматографические вместимостью 10 мм3, ценой деления 0.1 мм3 и вместимостью 20 мм3, ценой деления 0.2 ммэ.

5.2.4    Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г со значением среднеквадратического отклонения (СКО). не превышающим 0.05 мг и пределом допускаемой абсолютной погрешности ± 0,005 г.

5.2.5    Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0.45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.

5.2.6    pH-метр по ГОСТ 9245 с диапазоном измерений от 2 до 14 ед. pH. погрешностью измерений не более 0.05 ед. pH. снабженный комбинированным стеклянным электродом.

5.2.7    Пипетки градуированные 1-2-1.1-2-2.1-2-5,1-2-10 и 1-2-25 по ГОСТ 29227.

5.2.6 Колбы мерные 2-25-2 и 2-100-2 по ГОСТ 1770.

5.2.9    Емкости для жидких проб (виалы) вместимостью 2-10 см3.

5.2.10    Центрифуга лабораторная с фактором разделения не менее 1000 д.

5.2.11    Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

•    воронки лабораторные.

•    стаканы 6-1-50. В-1-100 и Н-1-1000.

5.2.12    Вода по ГОСТ ИСО 3696. 2-й степени чистоты.

5.2.13    Ацетонитрил для градиентной ВЭЖХ. массовой долей основного вещества не менее

99 %.

5.2.14    Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552. ч. д. а.

5.2.15    Пробирки полимерные центрифужные с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3.

5.2.16    Установка лабораторная для вакуумной фильтрации жидкостей с мини-насосом.

5.2.17    Соковыжималка бытовая, блендер бытовой или гомогенизатор, любой конструкции.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также реактивов, посуды и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

5.3 Подготовка к проведению определений

5.3.1    Подготовка проб для измерений

Для качественного определения антоцианинов в концентрированных соках и пюре взвешивают 1 г пробы, подготовленной по разделу 4. с записью результата до третьего десятичного знака. Пробу разбавляют в 5 см3 воды (пюре и соковую продукцию с высоким содержанием растворимых сухих веществ разбавляют водой в массовом соотношении от 1:2 до 1:5). Подготовленную пробу для удаления мутной взвеси центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0.2 мкм.

Для качественного определения антоцианинов в другой соковой продукции, а также в соках прямого отжима 1 г пробы, подготовленной по разделу 4. без предварительного разбавления центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром лор 0.45 мкм.

При суммарном содержании антоцианинов в соке менее 0.1 % пробу, подготовленную по разделу 4. фильтруют через мембранный фильтр, не разбавляя.

Примечание - Подготовку проб сока из свежих и (или) сохраненных свежими фруктов проводят с применением вспомогательного оборудования {см. 5.2.17) и последующим центрифугированием.

5.3.2    Приготовление подвижной фазы

Готовят раствор ортофосфорной кислоты с кислотностью (2,0 ± 0,1) ед. pH. Для этого в стакан с водой по каплям добавляют концентрированную ортофосфорную кислоту, регистрируя показания pH-метра.

Для приготовления подвижной фазы полученный раствор ортофосфорной кислоты смешивают с ацетонитрилом в соотношении 88:12 в процентах по объему. Подвижную фазу фильтруют под вакуумом через мембранный фильтр с диаметром пор 0.45 мкм.

Срок хранения раствора подвижной фазы в плотно укупоренной посуде в холодильнике при температуре не более 10 °С при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ и помутне-

' Колонки марок Phenomenex Luna и Hypersil С18 обеспечивают требуемую эффективность. Данная информация не является рекламой указанных колонок и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

3

ГОСТ 32709-2014

ния - одна неделя.

5.3.3 Порядок проведения определений

5.3.3.1    Подготовка хроматографа к работе

Включение и подготовку прибора к работе, вывод его на режим и выключение по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.

Перед проведением определений хроматографическую систему кондиционируют подвижной фазой до установления стабильной базовой линии в условиях и порядке, рекомендованных производителем.

5.3.3.2    Условия проведения хроматографических измерений:

•    температура термостата колонки. еС - 35 ± 1;

•    детектирование - фотометрический детектор с длиной волны 518 нм:

•    объем вводимой пробы, мм3 - 10- 20:

•    элюент - раствор ортофосфорной кислоты (см. 5.3.2);

•    скорость подачи элюента. смчмин - 1.0;

•    режим элюирования - градиентный, в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1- Состав подвижной фазы

Время, мин

Состав подвижной фазы (элюента). об. %

Ортофосфорная

Кислота

Ацетонитрил

Тип градиента

0

90

10

20

75

25

Линейный

30

60

40

S.3.3.3 Проведение измерений

В инжектор хроматографа микрошприцем вводят по 10-20 мм3 пробы, подготовленной по 5.3.1, и проводят измерения в условиях, указанных в 5.3.3.2.

Регистрируют на хроматограммах соответствующие пики. Порядок элюирования основных специфических. индивидуальных антоцианинов приведен в таблице Б.1 приложения Б.

5.4 Обработка и оформление результатов определений

Идентификацию ликов основных специфических, индивидуальных антоцианинов осуществляют по абсолютным временам удерживания, путем сравнения полученных хроматограмм соковой продукции с профилями антоцианинов сока, полученного из одноименных фруктов, или с профилями антоцианинов, приведенных в приложении Б.

Примеры хроматограмм с профилями антоцианинов для некоторых ягодных соков приведены на рисунках Б.1-Б.5 приложения Б.

Систематизированные данные, характеризующие порядок выхода основных специфических, индивидуальных антоцианинов и состав таких антоцианинов в соковой продукции из фруктов, приведены в таблице Б.2 приложения Б.

Относительное содержание индивидуальных антоцианинов. X. %. вычисляют как отношение площади хроматографического пика индивидуального антоцианина к сумме площадей пиков всех идентифицированных антоцианинов по формуле

X = -^-100.

■ я

■•1

(1)

где S> - площадь пика /*го антоцианина на хроматограмме, у. е-с;

а - количество пиков идентифицированных компонентов на хроматограмме.

6 Метод pH-дифференциальной спектрофотометрии

6.1 Сущность метода

Метод основан на применении pH-дифференциальной спектрофотометрии. Массовую концентрацию (массовую долю) суммы антоцианинов в пересчете на цианидин-3-глюкозид в соковой продукции определяют на основе изменения поглощения света с длиной волны 510 нм при изменении

4

ГОСТ 32709—2014

кислотности растворов соковой продукции от 1 до 4,4 ед. pH.

6.2 Сродства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

6.2.1    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения е диапазоне длин волн от 200 до 900 нм. с допустимой абсолютной погрешностью измерения коэффициента пропускания ± 1 %.

6.2.2    Кюветы кварцевые для спектрофотометрии с длиной оптического пути 10 мм.

6.2.3    Установка ультразвуковая с частотой ультразвука 43-45 кГц.

6.2.4    Аппарат для встряхивания проб.

6.2.5    Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76*1 специального (1-го) класса точности с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г со значением среднеквадратического отклонения (СКО). не превышающим 0,03 мг и пределом допускаемой абсолютной погрешности ± 0,001 г.

6.2    Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г со значением средне квадратического отклонения (СКО). не превышающим 0,05 мг и пределом допускаемой абсолютной погрешности ± 0,005 г.

6.2.7 pH-метр по ГОСТ 9245 с диапазоном измерений от 2 до 14 ед. pH. погрешностью измерений не более 0,05 ед. pH и снабженный комбинированным стеклянным электродом.

6.2.6    Фильтры мембранные с диаметром пор 0,45 мкм.

6.2.9    Центрифуга лабораторная с фактором разделения не менее 1000 д.

6.2.10    Пробирки полимерные центрифужные с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3.

6.2.11    Колбы мерные 2-50-2,2-100-2,2-250-2 по ГОСТ 1770.

6.2.12    Пипетки 4-1-2 или 5-1-2.4-2-10 или 5-2-10,4-2-25 или 5-2-25 по ГОСТ 29227.

6.2.13    Вода по ГОСТ ИСО 3696. не ниже 2-й степени чистоты.

6.2.14    Циакидин-З-О-глюкозид (куромаин) хлористый для ВЭЖХ Сгг,СЮ1|. массовой долей основного вещества не менее 95 %.

6.2.15    Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199. ч. д. а.

6.2.16    Калий хлористый по ГОСТ 4234. ч. д. а.

6.2.17    Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также посуды, реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

6.3    Проведение измерений

6.3.1    Условия проведения измерений

Измерения проводят при следующих лабораторных условиях:

•    температура окружающего воздуха. °С - 25 ± 5;

•    атмосферное давление. кЛа - 97 ± 10;

•    относительная влажность. % - 65 ± 25:

•    частота переменного тока, Гц - 50 ± 5:

- напряжение в сети. В - 220 ±10.

Помещение, в котором проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточновытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

6.3.2    Подготовка к проведению измерений

6.3.2.1    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 0,2 моль/дм1

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 75 см3 воды, осторожно приливают 1.7 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят до метки водой и тщательно перемешивают.

Раствор устойчив в течение трех месяцев при хранении в герметично закрытой емкости.

6.3.2.2    Приготовление буферных растворов

а)    Приготовление буферного раствора с (1.0 ±0,1) ед. pH

Взвешивают (1.49 ± 0.1) г хлористого калия, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки водой и тщательно перемешивают. Затем в стакане вместимостью 100 см3 смешивают 25 см3 полученного раствора с 67 см3 раствора соляной кислоты молярной концентрации 0.2 моль/дм3. При необходимости доводят значение pH раствора до (1,0 ± 0,1) ед. pH концентрированной соляной кислотой, регистрируя показания pH-метра.

Раствор устойчив в течение трех месяцев при хранении в герметично закрытой емкости.

б)    Приготовление буферного раствора с (4.5 ± 0.1) ед. pH

5

ГОСТ 32709—2014

Взвешивают (1.64 ± 0.1} г уксуснокислого натрия, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки водой и тщательно перемешивают. При необходимости доводят значение pH раствора до (4.5 ± 0.1) ед. pH концентрированной соляной кислотой, регистрируя показания pH* метра.

Раствор устойчив в течение трех месяцев при хранении в герметично закрытой емкости.

6.3.2.3 Измерение проб

а)    Измерение массовой концентрации суммы антоцианинов в соковой продукции, не содержа* щей нерастворимые в воде вещества

В две мерные колбы, вместимостью 50 см3 каждая, помещают по 2.5 см3 аликвоты пробы, под* готовленной по разделу 4 и доводят до метки буферными растворами с 1.0 и 4.5 ед. pH. (см. 6.3.2.2), содержимое в двух колбах перемешивают, выдерживают в течение 15 мин и проводят измерение on* тической плотности каждого раствора при длинах волн 510 и 700 нм соответственно. Измерение on* тической плотности растворов при 700 нм проводят для установления величины поглощения света посторонними примесями.

б)    Измерение массовой концентрации суммы антоцианинов в соковой продукции, содержащей мякоть или нерастворимые в воде вещества

Пробы предварительно гомогенизируют, а затем центрифугируют в течение 20 мин или фильт* руют через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм.

После этого в две мерные колбы, вместимостью 50 см3 каждая, отбирают по 2.5 см3 аликвоты прозрачного слоя или фильтрата и доводят до метки буферными растворами с 1.0 и 4.5 ед. pH. (см. 6.3.2.2), содержимое в двух колбах перемешивают, выдерживают в течение 15 мин и проводят измерение оптической плотности каждого раствора при длинах волн 510 и 700 нм соответственно. Измерение оптической плотности при 700 нм проводят для установления величины поглощения света посторонними примесями.

в)    Измерение массовой доли суммы антоцианинов в концентрированных соках проводят после их предварительного разбавления водой весовым методом в соотношении 1:5.

При вычислении по 6.4.3 учитывают коэффициент разбавления F.

Затем проводят процедуры как указано в 6.3.2.3а.

г)    Измерения оптической плотности подготовленных проб проводят на спектрофотометре при длинах волн 510 и 700 нм. Результатом измерений является разность оптической плотности SA растворов с 1.0 и 4.5 ед. pH при длинах волн 510 и 700 нм соответственно, которая пропорциональна массовой концентрации (массовой доле) антоцианинов в растворе.

Значения оптической плотности растворов должны находиться в пределах 0,2-1.0.

Если значения оптической плотности растворов, приготовленных по 6.3.2.3а. 6.3.2.36 более 1.0. то уменьшают объем аликвоты (Уг) при разбавлении в мерной колбе (V,). Для растворов, имеющих значения оптической плотности менее 0.2. увеличивают объем аликвоты.

6.4 Обработка и оформление результатов измерений

Измерения проб проводят два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725*1 (подраздел 3.14) и ГОСТ ИСО 5725*2.

6.4.1 Разность оптической плотности SA вычисляют как разность оптических плотностей растворов при разных длинах волн и соответствующих значениях pH по формуле

где А$ю - оптическая плотность раствора пробы при длине волны 510 нм. е. о. п.;

А?м - оптическая плотность раствора пробы при длине волны 700 нм, е. о. л.

6.4.2 Массовую концентрацию антоцианинов в соковой продукции (см. 6.3.2.3а и 6.3.2.36) С. мг/дм3. в пересчете на цианидин*3*глюкозид. вычисляют по формуле

(1)

(2)

где \А - разность оптической плотности раствора, е. о. п.:

М - молекулярная масса цианидин*3*глюкозида. равная 449.2 г/моль; V, - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, см3:

Vi - объем аликвоты, взятой на определение, см3:

6

ГОСТ 32709—2014

с - молярный коэффициент экстинкции цианидин-3-глюкозида, е = 26900 дм3моль'’-см'1;

/ - длина оптического пути юоееты. см.

6.4.3 Массовую долю антоцианиное в концентрированной соковой продукции (см. 6.3.2.3е) X. млн1, в пересчете на цианидин-3-глюкозид. вычисляют по формуле

x_.\AMVtFW3 y.-l V2 т

где \А - разность оптической плотности раствора, е. о. л;

М - молекулярная масса цианидим-3-глюкозида. равная 449.2 г/моль;

Vi - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, см3;

F-величина фактора разбавления;

е - молярный коэффициент экстинкции цианидин-3-глюкозида, е = 26900 дм^моль'см’;

/ - длина оптического пути кюветы, см;

V2 - объем аликвоты, взятой на определение, см3; т - масса пробы, взятой для определения, г.

Все вычисления проводят с точностью до третьего десятичного знака.

Расхождение между двумя параллельными определениями (в процентах от среднего значе-ния). выполненными в условиях повторяемости, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) r4m. приведенного в таблице 2. при вероятности Р - 0.95.

Таблица 2 - Основные метрологические характеристики метода определения массовой концентрации или массовой доли суммы антоцианиное при доверительной вероятности Р = 0.95

Наименование показателя {при Р- 0.95 и л = 2)

Значение показателя при диапазонах измерений массовой концентрации (массовой доли), мг/дм1 {млн- )

От 5 до 100

ВКЛЮЧ.”

Св. 100до1000

ВКЛЮЧ.*1

Се. 10ОО до 5000

ВКЛЮЧ.*1

Предел повторяемости (сходимости) л.... %

14

9

8

Предел воспроизводимости К,ги. %

19

14

10

Граиицы относительной погрешности -S. %

14

10

7

Предел обнаружения метода, мг/ дм* (млн-’)

1.0

‘ Исследования проводились на образцах клубники, выращенной в средней полосе Российской Федерации.

2> Исследования проводились на образцах клюквы, выращенной в Российской Федерации. э> Исследования проводились на образцах черной смородины, выращенной в средней полосе Российской Федерации.

За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Границы относительной погрешности определения массовой концентрации (массовой доли) суммы антоцианиное ± 6. %. при соблюдении условий, регламентированных настоящим методом, не должны превышать значений, приведенных в таблице 2.

Окончательные результаты определений в документах, предусматривающих их использование, представляют согласно ГОСТ ИСО/МЭК 17025 с указанием метода определения и настоящего стандарта в виде

С±0,01-5-С и Х±0,01-6-Х,приР = 0.95

где С. X - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

выполненных в условиях повторяемости, мг/дм3 (млн1);

±5 - границы относительной погрешности измерений. %, (см. таблицу 2).

Числовое значение окончательного результата определения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение границы абсолютной погрешности. Значение границы абсолютной погрешности приводят с двумя значащими цифрами.

В случае, если результат определения менее нижней границы диапазона измерений, то приводят следующую запись: «Массовая концентрация (массовая доля) антоцианиное. в пересчете на цианидин-3-глюкозид, менее 5мг/дм3 (млн-1)».

7

ГОСТ 3270^-2014

6.5 Контроль качества результатов измерений при реализации метода в лаборатории

6.5.1 Контроль повторяемости результатов измерений

Контроль повторяемости результатов измерений массовой концентрации или массовой доли антоцианинов проводят при получении каждого результата путем сравнения расхождения между результатами двух параллельных определений с пределом повторяемости (сходимости), приведенным в таблице 2.

Повторяемость результатов признают удовлетворительной при условии

где С). Сг - результаты параллельных определений массовой концентрации суммы антоцианинов в

пробе, подготовленной по 6.1. мг/дм3;

X,. Х2 - результаты параллельных определений массовой доли суммы антоцианинов в пробе.

подготовленной по 6.2 и 6.3, млн'1:

'em._ значение предела повторяемости (см. таблицу 2). %.

При превышении предела повторяемости (сходимости) определение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам. устраняют их и определение повторяют.

6.5.2 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

6.5.2.1    Проверку приемлемости результатов параллельных определений в условиях воспроизводимости проводят:

•    при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

•    проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях.

6.5.2.2    Для проведения проверки приемлемости результатов параллельных определений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует контрольные пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов параллельных определений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью СО095 по формуле

где С„С2-среднеарифметические значения массовой концентрации суммы антоцианинов в пересчете на цианидин-3-глюкозид. полученные е первой и второй лабораториях, мг/дм3;

Х,,Х2- среднеарифметические значения массовой доли суммы антоцианинов в пересчете на цианидин-З-глюкозид. полученные в первой и второй лабораториях, млн'1.

СОод» - значение критической разности, вычисляемое по формулам

где 2,77 - коэффициент критического диапазона для двух параллельных определений, полученных в условиях воспроизводимости по ГОСТ ИСО 5725*6;

0.01 - множитель для перехода от процентов к абсолютным значениям:

С 1,2 - среднеарифметическое значение результатов определений, полученных в первой и второй лабораториях. мг/дмэ;

X 1.2 - среднеарифметическое значение результатов определений, полученных в первой и второй лабораториях, млн-1;

(5)

(6)

8

ГОСТ 32709—2014

aR - показатель воспроизводимости. %. (см. таблицу 2);

о, - показатель повторяемости. %, (см. таблицу 2}:

л- число параллельных определений.

6.5.2.3    Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата определений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их средне* арифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры в соот* ветствии с ГОСТ ИСО 5725*6 (пункт 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ ИСО 5725*6 (пункт 5.3.4).

6.5.3    Оперативный контроль погрешности (точности) результатов измерений

Оперативный контроль погрешности (точности) результатов измерений осуществляют методом

добавок на рабочих пробах продукции.

Организацию и оценку результатов контроля осуществляют в соответствии с рекомендациями

[1].

6.5.3.1    Для проведения оперативного контроля погрешности (точности) определение проводят в пробах, объем или масса которых должны соответствовать удвоенному их количеству, необходимому для проведения определения. Пробу делят на две равные части. 8 одну из них добавляют цианидин* З'Глюкозид в таком количестве, чтобы величина добавки в 0.5-1.5 раза отличалась от исходного содержания компонента в пробе, но не превышала верхней границы диапазона определения массовой концентрации или массовой доли компонента с учетом границ погрешности определения (см. таблицу 2). 8 обеих частях пробы проводят определение в соответствии с требованиями настоящего стандар* га.

6.5.3.2    Результаты контрольных определений признают удовлетворительными, если логреш* кость определения массовой концентрации (массовой доли) цианидина-3*глюкоэида в добавке не превышает норматива оперативного контроля погрешности (точности), то есть выполняется условие

|Саео ~С - С««| £ Кяс0    \ХЯС0 -X- Ха<л\ £ Км6 •    <7)

где См. Х006- среднеарифметические значения параллельных определений массовой концентра* ции (массовой доли) общего диоксида серы в пробе с добавкой, мг/дм3 или млн-1:

С . X - среднеарифметические значения параллельных определений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы в пробе без добавки, мг/дм3 или млн-1 Сде или Хд<*- величина добавки, мг/дм3 или млн-1:

Ядов - норматив контроля погрешности, мг/дм3 или млн'1.

При проведении внутрилабораторного контроля (Р - 0.90) значение Кло6 вычисляют по формулам:

Каов=0,84.0,01.8.1/С^ + Сг    (8)

ИЛИ

К ж = 0,84 • 0,01 • й • ijXl6 + X2 .    (9)

где 0.84 - коэффициент, учитывающий вид контроля:

± 3 - границы относительной погрешности измерений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы (см. таблицу 3), %.

При проведении внешнего контроля (Р - 0.95) значение вычисляют по формулам:

K^o.oi.fvVcL+c*

(10)

или

км = о,о1й-1/Зс7Тхг.

(11)

При превышении норматива оперативного контроля погрешности проводят повторные контрольные определения. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Периодичность контроля погрешности (точности) устанавливает сама лаборатория с учетом

фактического состояния работ. При замене оборудования, колонок, реактивов или при построении

9

ГОСТ 32709—2014

новой градуировочной зависимости проведение оперативного контроля погрешности обязательно.

6.5.4 Контроль стабильности результатов измерений при реализации метода в лаборатории

Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6. используя метод контроля стабильности стандартного отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ ИСО 5725-6 с применением контрольных карт Шухарта.

При неудовлетворительных результатах контроля: превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения - выясняют и устраняют причины этих отклонении.

Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025 (пункт 4.2).

7 Требования, обеспечивающие безопасность

7.1    Условия безопасного проведения работ

При работе с химическими реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.1.007. При подготовке проб к определению и выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила пожаровэрывобезоласности по ГОСТ 12.1.016. по элек* тробезопасности - по ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

7.2    Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженер-химик, техник или лаборант, имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в химической лаборатории и изучившие инструкцию по эксплуатации метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Первое применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в лаборатории следует проводить под руководством специалиста, владеющего теорией метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.

10

Приложение А (справочное)

ГОСТ 32709—2014

Структура основных антоциакидиное, входящих я состав природных антоцианинов

А. 1 Общая структурная формула ангоцианидинов приведена на рисунке А1.

OR:

ОН

Рисунок А. 1 - Общая структурная формула антоцианидинов

Примечание - Конкретный вид антоцианидина зависит от состава радикалов Rn R}, приведенных в таблице А.1.

Таблица А-1- Виды антоцианидиноэ 8 зависимости от состава радикалов

Вид антоцианидина

Состав радикалов

Сокращенное найме-нование

R,

R--

Пеласг онидин

Н

Н

Pad

иианидин

ОН

Н

Cvd

Пеонидин

ОСИ,

Н

Pnd

ОельФинидин

ОН

он

Dpd

Петунидин

осн.

он

Ptd

Малье идин

оси-

осн,

Mvd

Примечание - Rj и R< - Н или тикоэиды.

11

ГОСТ 32709—2014

Приложение Б (справочное)

Систематизированные данные* по порядку выхода основных антоцианинов

фруктов и их составу

Б.1 Порядок выхода индивидуагъных ангоцианиное, их сокращенное и полное наименования приведены в таблице Б.1.

Таблица Б.1- Порядок выхода индивидуальных антоцианинов. их сокращенное и полное наименования

На

Наименование антоцианинов

N9

Сокоашенное

Полное

1

Dpd-3.5-diglu

Двльфинидин-3.5-дигпюкозид

2

Cyd-3.5-diglu

Цианидин-3.5-диглюкозед

Э

Dpd-3-samb

Дельфинидин-3- самбубиозид

4

Dpd-3-gal

Дельфинидин-З-галактозид

5

Dpd-3-glu

Дельфинидин-З-глкжозид

6

Cyd-3-sop

Цианидин-З-софорозид

7

Cyd-3-glu-rut

Цизнидин-З-гликорутинозид

8

Dpd-3-rut

Дельфинидин-З-рутинозид

9

Cyd-3-gal

Цианид ин-3-галакгозид

10

Opd-3-ara

Дельфинидин-З-арабинозид

11

Cyd-3-samb

Цианидин-З-самбубиозид

12

Cyd-3-glu

Циа нидин-3-гл юкозид

13

Cyd-3-xyl-rut

Цианидин-З-ксилозорутинозид

14

Cyd-3-rut

Циатдин-З-рутинозид

15

Rd-3-gal

Петунидин-З-галактозид

16

Cyd-3-ara

Цианидин-З-арабинозид

17

Rd-3-glu

Петунидин-З-глкжоэид

18

Pgd-3-gkj

Пеларгонедин-З-глюкозид

19

Pnd-3-gal

Пеонидин-З-галактозид

20

Pgd-3-агз

Пеларгонядин-З-эрабинозид

21

Pnd-3-glu

Пеонидин-З-глюкозид

22

Mvd-3-glu

Мальвидин-З-глюкозид

23

Pnd-3-ara

Пеонидин-З-аоабинозид

Б.2 Состав основных индивидуальных, специфических антоцианинов фруктов приведен в таблице Б.2

12

' Приведены данные - по материалам исследований ФГБУ «НИИ питания* РАМН.

ГОСТ 32709—2014

Таблица Б.2 - Состав основных индивидуальных, специфических антоцианинов фруктов

Наиме-

нование

фрукта

Относительное содержание антоцианинов. %

*

«о

со'

•б

8

2

9

uS

«?

*

Dpd-3-gal

а

*?

5

£

<*>

б

&

Cyd-3-sop

3

i

<?

5

V

ч

8

«7*

S

*

«?

о

Cyd-3-samb

2

9*

*?

*

1

£

б

$

1

<?

ъ

•»

<?

£

Cyd-3-агз

2

*

<7

•о

£

5

91

9

*

0.

те

91

<?

*

0.

<9

S

$

•о

г

3

9*

«?

0.

э

*

1

<9

%

т>

£

Гранат

1

о

1

О

»

1

Ч

1

1

1

'

<

Ч

IA

1

t

»

1

'

1

1

1

1

Гиби

скус

»

'

1

1

1

1

ч

8

С

Л

1

1

»

1

«

1

1

1

1

'

1

Черника

1

«Л

t

О

1

*>

о

1

1

«л

о

V)

1

о

1

«

Ч

>

«Л

1

1

о

1

О

1

о

*

1

1

«Л

<

о

1

Красный

вино

град

1

»

1

ю

ч

1

1

1

1

1

»

1

«Л

*

О

1

1

1

о

ч

о

t

'

1

*>

Т

о

ч

ф

ф

1

14

1

Черная

сморо

дина

1

»

1

ч

1

1

1

IA

Ч

W)

1

»

»

■л

*

о

1

«Л

ч

«о

1

1

*

1

1

1

1

Красная

сморо

дина

'

1

'

'

1

О

«Л

о

1

1

1

»

1

о

ч

9

Z

2

1

о

»

1

1

1

'

»

1

Слива

1

1

'

1

1

1

1

1

»

«л

ч

ф

ф

с

о

14

1

ч

ф

0

Б

0

14

»

\

1

1

1

1

1

1

1

Клюква

1

'

'

'

1

1

1

«г

«л

1

1

«

о

1

»

»

ч

»

«л

1

1

ч

1

¥>

1

о

1

ч

1

V)

Клубни

ка

'

1

1

1

1

1

1

1

1

1 1Л

о —

1

1

1

t

1

ч

ф

%

2

1 «л в *-

1

1

Череш

ня

»

1

1

1

*

1

IA

1

1

'

1

f

ч

ф

ф

с

2

'

ч

1

1

»

1

1

1

1

1

Вишня

1

*

'

1

1

О

«л

*

9

с

е

14

»

1

»

»

«л

1

о

1

«л

ч

б

1

I

1

1

1

1

1

1

13

ГОСТ 32700-2014

Окончание таблицы Б. 2

Наиме

нование

фрукта

Относительное содержание антоцианинов. %

9

о.

СО

СП

6.

<&

£

О

г

и»

6.

9

9-

V

из

а.

Cyd-3-samb

9

а

а>

сД

£

Cyd-3-sop

«

i)

ii

2

9

9-

V>

2

V

f

8

&

2

8

t

S

«

V

S

i

&

о

г

V

s.

TJ

C

w

(6

QL

Cyd-3-ara

-o

C

w

9-

V>

¥

3

9-

«

"O

£

CO

d>

3

3

9

V

S

«6

£

TJ

&

ii

3

Малина

Cl

1

ft

9

U)

4

1

1

Vi

t

*

VI

9

Vi

1

4

1

4

1

1

i

Ежевика

1

t

1

1

01

c

a

ft

ft

а»

VI

1

1

1

4

1

<

1

1

o

Vi

1

Брусни

ка

1

'

4

4

*

6

a

4

а

»

1

1

0

1

Vi

'

1

'

О

VI

'

1

'

*

1

Бузина

<

1

4

1

0>

о

a

ft

ft

*

Vi

4

1

1

1

1

1

4

4

1

4

1

i

Черно

плодная

рябина

1

4

4

1

1

1

<n

0

3

ft

*

Vi

1

i

о

t

VI

1

1

1

VI

1

ft

VI

1

4

4

1

О

t

VI

1

i

Кры

жовник

черный

4

1

'

1

1

«

О

Ul

1

i

0

1

Vi

1

0>

О

a

ft

ft

«

1

4

1

4

4

1

4

1

i

Калина

'

'

1

'

4

<n

0

a

ft

ft

ft

Vi

О

Vi

i

'

1

'

1

«

1

«

1

i

Ирга

'

<n

0

a

ft

ft

&

1

i

Vi

4

*

Vi

1

1

1

©

Vi

'

l

1

'

1

i

Б.З Примеры хроматограмм с профилями актоцианинов для некоторых ягодных соков приведены на рисунках Б.1-Б.5

14

ГОСТ 32709—2014

Величина сигнала, у.е.

Рисунок Б.1 - Пример хроматограммы с профилем ангоцианиное сока черной смородины (происхождение - Рос-

сия. 2013 год, исследования ФГБУ «НИИ питания» РАМН)

1 - Dpd-3-glu (дельфинидин-3-глюкозид). 2 - Dpd-3-rut (дельфи нидин-3-ругинозид). 3 - Cyd-3-glu (цианидин-3-

глкжоэид). 4 - Cyd-3-rut (цианидин-3-рутинозид)

Величина сигнала, у.е.

Рисунок Б.2 - Пример хроматограммы с профилем антоцианиное сока вишни (происхождение - Россия, 2013 год,

исследования ФГБУ «НИИ питания» РАМН)

1 - Cyd-3-soph (циа ни дин-3-софорозид). 2 - Cyd-3-glu-rut (цианидин-3-глкжозилрутинозид). 3 - Cyd-3-glu (циани-

дин-3-глюкоэид). 4 - Cyd-3-rut (цианидин-3-рутинозид)

15

ГОСТ 32709—2014

Величина сигнала, у.е.

7

6

5

4

3

2

1

О

*

3,4

5

1213

О    5    10    15    20    25    30

Время удерживания, мин

Рисунок Б.З - Пример хроматограммы с профилем антоцианинов сока черники (происхождение - Россия. 2013

год, исследования ФГБУ «НИИ питания» РАМ-1)

1 - Dpd-gat (дельфиющин-З-галактозид), 2 - Gpg-3-glu (дельфинидин-3-глюкозид). 3.4- Cyd-3-gal (цианидин-3-галактозид) + Dpd-3-ага (цегъфинидин-3-эрабинозид). 5 - Cyd-3-glu (цианидин-3-глкжозид). 6 - Ptd-3-glu (петуми-дин-3-глкжозид), 7 - Cyd-3-ага (цианидин-3-арабинозид). 8 - Ptd-3-ага (петунидин-З-арабинозид). 9. 10 - Pnd-3-glu (пеонидин-3-глюкознд) + Mvd-3-gal (мал ьаидин-3-галактоз ид). 11 - Mvd-3-glu (мальвидин-3-глюкозид). 12- Pnd-3-ага (пеонидин-3-арабимозид). 13 - Mvd-3-ага (Магъвидин-З-зрабинозид)

Величина сигнала, у.е.    4

Рисунок Б.4 - Пример хроматограммы с профилем антоцианинов сока клюквы болотной (происхождение - Россия. 2013 год. исследования ФГБУ «НИИ питания» РАМН)

1 - Cyd-З-gal (цианидин-З-галактозид). 2 - Cyd-3-glu (цианидин-З-гпюкозид). 3 - Cyd-3-ага (цианидин-3-арабинозид). 4 - Pnd-3-gal (пеонидин-3-галахгозид). 5 - Pnd-3-glu (лвонидин-3-глюкозид). б - Pnd-3-ara (пвони-

дин-3-арабинозид)

16

ГОСТ 32709—2014

Величина сигнала, у.е.

Рисунок Б.5 - Пример хроматограммы с профилем ангоцианинов сока ежевики (происхождение - Россия. 2013

год, исследования ФГБУ «НИИ гмтания» РАМН)

1 - Cyd-3-glu (цианидин-3-глкжоэид). 2 - Cyd-3-rut (цианидин-3-рутинозид). 3 - Cyd-3-xyt (цианидин-3-ксилоэид), 4 - Суй-3-{6‘'та1опу4)д1и-(цианидин-3-{в"-мапонил)-глюкозид). 5 - Cyd-3-dioxaytglu (цизнидин-3-

диоксаилглюкозид)

17

ГОСТ 32709—2014

Библиография

[1] РМГ 76-2004    Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль

качества результатов химического анализа

УДК 664.863.001.4:006.354    МКС 67.080.67.050

Ключевые слова: продукция соковая, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. ме-тод pH-дифференциальной спектрофотометрии, качественное определение, хроматографический анализ, стандартный раствор, элюент, антоцианины. антоцианидины. предел повторяемости, предел воспроизводимости, границы относительной погрешности

Подписано в печать 01.12.2014. Формат 60х847в.

Уел. леч. л. 2,33. Тираж 46 экз. Зак. 4953

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» 123995 Москва. Гранатный пер.. 4.