База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных

ГОСТ Р 57198-2016 Кормовой концентрат лизина (ККЛ). Технические условия

Обозначение: ГОСТ Р 57198-2016
Наименование: Кормовой концентрат лизина (ККЛ). Технические условия
Статус: Действует

Дата введения: 05/01/2017
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120
Скачать PDF: ГОСТ Р 57198-2016 Кормовой концентрат лизина (ККЛ). Технические условия.pdf
Скачать Word:ГОСТ Р 57198-2016 Кормовой концентрат лизина (ККЛ). Технические условия.doc


Текст ГОСТ Р 57198-2016 Кормовой концентрат лизина (ККЛ). Технические условия



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ    ГОСТР

стандарт    57198—

российской    2016

ФЕДЕРАЦИИ

КОРМОВОЙ КОНЦЕНТРАТ ЛИЗИНА (ККЛ)

Технические условия

Издание официальное

Москва

Стенда ртмнформ 2016

ГОСТ Р 57198—2016

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Некоммерческим партнерством «Координационно-информационный центр содействия предприятиям по вопросам безопасности химической продукции» при участии ООО «Центр промышленной биотехнологии имени княгини Е.Р. Дашковой»

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 326 к Биотехнологи и»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 1 ноября 2016 г. № 1554-от

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации е Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты». а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 57198—2016

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Технические требования................................................2

4    Приемка...........................................................4

5    Методы испытаний....................................................4

6    Транспортирование и хранение...........................................11

7    Гарантии изготовителя.................................................11

Библиография........................................................12

in

ГОСТ Р 57198—2016

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМОВОЙ КОНЦЕНТРАТ ЛИЗИНА (ККЛ) Технические условия

Fodder concentrate of tysme. Specifications

Дате введения — 2017—OS—01

1 Область применения

Настоящийстандарт распространяется на кормовой концентрат лизина, получаемый путем микробиологического синтеза с использованием культуры Br. bact. и наполнителей и предназначенный для использования при выращивании и откорме сельскохозяйственных животных.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.008 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.2.003 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности

ГОСТ 61 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2226 Мешки из бумаги и комбинированных материалов Общие технические условия ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4198 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 6006 Реактивы. Бутанол-1. Технические условия

ГОСТ 6309 Нитки швейные хлопчатобумажные и синтетические. Технические условия ГОСТ 6709 Бода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 7402 Электровентиляторы бытовые. Общие технические условия ГОСТ 8074 Микроскопы инструментальные. Типы, основные параметры и размеры. Технические требования

ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 10354 Пленка полиэтиленовая. Технические условия ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная

ГОСТ 13496.1 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания натрия и хлорида натрия

Издание официальное

1

ГОСТ Р 57198—2016

ГОСТ 13647 Реактивы. Пиридин. Технические условия

ГОСТ 13496.13 Комбикорма. Методы определения запаха, зараженности вредителями хлебных запасов

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические уело-

Маркировка грузов Планки откидные. Конструкция

Нитки льняные и льняные с химическими волокнами. Технические условия Агар пищевой. Технические условия Агар микробиологический. Технические условия Шпагаты. Технические условия

Мешки полиэтиленовые для химической продукции. Технические условия Лента клеевая на бумажной основе. Технические условия

Питательные среды. Вода мясная (для ветеринарных целей). Технические условия Питательные среды. Бульон мясо-лептонный (для ветеринарных целей). Техничвс-

Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний Реактивы. Натрий лимоннокислый 5.5-еодный. Технические условия Электрофены бытовые. Общие технические условия

Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ ГОСТ ГОСТ ГОСТ

ГОСТ

13805

вия

ГОСТ

14192

ГОСТ

14735

гост

14961

гост

16280

гост

17206

гост

17308

гост

17811

гост

18251

гост

20729

гост

20730

кие условия

ГОСТ

21239

ГОСТ

22280

гост

22314

гост

22967

25377

28950

29227

Иглы инъекционные многократного применения. Технические условия Инструменты чертежные. Общие технические требования и методы испытаний Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования Р 53228 Весынеавтоматическогодействия.Часть1.Метрологическиеитехническиетребования. Испытания

ГОСТ Р 55878 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего лопьзоаания — на официвпьном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, не который дана недатированная ссылка, го рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта сучетом всех внесенных еденную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется принять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. в котором дана ссылка на него, рекомендуется принять в чести, не затрагивающей эту ссылку.

3 Технические требования

3.1    Кормовой концентрат лизина должен изготовляться в соответствиистрвбоеаниями настоящего стандарта по технологическому регламенту, утвержденному в установленном порядке.

3.2    Характеристики

3.2.1    Кормовой концентрат лизина изготовляют с наполнителем. В качестве наполнителя используют кукурузную или пшеничную муку, пшеничные или ржаные отруби.

Наполнитель по крупности и влажности должен соответствовать значениям, установленным для кормового концентрата лизина.

3.2.2    Кормовой концентрат лизина изготовляют с содержания активного действующего начала не менее 30%.

3.2.3    По физико-биологическим показателям кормовой концентрат лизина должен соответствовать требованиям, указанным в таблице 1.

2

ГОСТ Р 57198—2016

Таблица 1 — Физико-биологические показатели кормовой концентрат лизина

Наименование показателя

Значения

внешний вид

Однородный порошок от светло-желтого до светло-коричневого

цвета

Массовая доля влаги. %. на более

9.5

Остаток на сите с отверстиями диаметром 1.00 мм. %. не более

0.5

Лизин а 1 кг препарата, г

300 х 10.0

Подлинность

Появление нингидрино-окрашенных компонентов на хроматограмме, совпадающих по положению с нингидрино-окрашенными компонентами стандартного образце лизин, а также зон задержки тест-культуры от испытуемых компонентов пробы

Безвредность в тест-дозе на одну мышь, мг

100

Зараженность вредителями и плесенью

Не допускается

Массовая доля поваренной соли. %. не более

15

3.3 Требования безопасности

3.3.1    Препарат кормовой концентрат лизина изготовляют в соответствии с правилами безопасности для производства микробиологической промышленности. [1].

3.3.2    Предельно допускаемая концентрация препарата в воздухе рабочих помещений не должна превышать 0,4 мг/мэ.

3.3.3    При работе с препаратом необходимо применять индивидуальные средства защиты: респиратор. защитные очки, резиновые перчатки, также соблюдать меры личной гигиены.

3.3.4    Производственное оборудование должно отвечать требованиям ГОСТ 12.2.003.

3.3.5    Для предупреждения опасного и вредного воздействия микроорганизмов следует соблюдать требования биологической безопасности по ГОСТ 12.1.008.

3.3.6    Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны — по ГОСТ 12.1.005.

3.4    Маркировка

3.4.1    На каждый бумажный мешок наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с изображением манипуляционных знаков «Боится сырости». «Боится нагрева», «Крюками непосредственно не брать» и с указанием дополнительных сведений:

•    наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;

•    наименования и марки препарата;

•    массы нетто;

•    номера партии:

•    даты изготовления препарата;

•    гарантийного срока хранения:

•    условий хранения;

•    предупредительных надписей «Хранитьс предосторожностью. Слисок Б». «Для ветеринарии»;

•    обозначения настоящего стандарта.

3.4.2    В каждый бумажный мешок вкладывают инструкцию поприменениюпрепаратавколичестве. равном числу полиэтиленовых мешков.

3.5    Упаковка

3.5.1    Кормовой концентрат лизина фасуют по 20 кг в мешки из полиэтиленовой пленки по ГОСТ 10354 или мешки полиэтиленовые поГОСТ 17811. Полиэтиленовые мешки термоспаивают и упаковывают в бумажные четырехслойные мешки по ГОСТ 2226.

Допускается фасовать кормовой концентрат лизина в бумажные мешки марок БМ. ВМ. ПМ. БМЛ. ВМБ.8МП по ГОСТ 2226.

3.5.2    Бумажные мешки зашивают машинным способом нитками поГОСТ 14961 или по ГОСТ 6309. или шпагатом по ГОСТ 17308. оставляя гребень по всей ширине мешка не менее 4 см.

Допускается вместо зашивания бумажных мешков их склеивание по ГОСТ 18251.

3.5.3    Масса нетто упаковочной единицы должна составлять (20 ± 0,2) кг.

з

ГОСТ Р 57198—2016

4    Приемка

4.1    Кормовой концентрат лизина принимают партиями. Партией считают любое количество пре-парата, изготовленное за один технологический цикл, однородное по показателям качества и оформленное одним документом о качестве.

В документе о качестве указывают:

-    наименование предприятия-изготовителя и (или) его товарный знак;

•    наименование и марку препарата;

-    номер партии;

-    массу нетто партии;

-    количество мест в партии:

•    дату изготовления преларата (год. месяц, число):

•    результаты испытаний, дату выдачи документа о качестве;

-    гарантийный срок и условия хранения;

•    обозначение настоящего стандарта.

4.2    Для проверки качества кормового концентрата лизина от каждой партии отбирают выборку в размере: от партии до 100 упаковочных единиц — не менее 5 упаковочных единиц; свыше 100 упаковочных единиц — 5 %.

4.3    Подлинность кормового концентрата лизина определяют в каждой 10-й партии. При изменении технологии изготовления кормового концентрата лизина, подлинность определяют в пяти партиях подряд.

4.4    При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному показателю по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве выборки, взятой от той же партии продукции.

Результаты испытаний распространяют на всю партию.

5    Методы испытаний

5.1    Отбор проб

5.1.1    От каждой упаковочной единицы отбирают 2—3 точечно пробы щупом вместимостью не более 50 г. погружая его на всю глубину мешка.

5.1.2    Точечные пробы объединяют, тщательно перемешивают и выделяют среднюю пробу массой не менее 600 г.

5.1.3    Среднюю пробу делят пополам и помещают в две чистые сухие банки с притертыми пробками или в полиэтиленовые мешочки.

Одну банку или мешочек передают в лабораторию для анализа качества препарата, а другую банку или мешочек хранят в течение срока годности препарата на случай разногласий в оценке качества.

5.1.4    Пробы, направляемые в лабораторию или на хранение, опечатывают иснабжаютэтикеткойс указанием:

•    наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;

•    наименования препарата;

-    номера партии;

•    массы нетто партии;

-    даты отбора пробы;

-    должности и подписи лица, отбиравшего пробу:

-    гарантийного срока хранения.

5.2    Определение внешнего вида и плесени

Навеску массой 50 г рассыпают на белую чистую поверхность, рассматривают и определяют цвет и наличие плесени при естественном освещении.

5.3    Определение массовой доли влаги

Сущность метода заключается в высушивании препарата при нагревании до постоянной массы при температуре (105 ± 2) *С и определении влаги по разности результатов взвешиваний.

5.3.1 Аппаратура и реактивы

Сушильный шкаф любого типа, обеспечивающий температуру нагрева от 100 °С до 200 вС с точностью терморегуляции £2 °С.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 532281 -го и 2-го классов точности с пределом взвешивания 200 г.

ГОСТ Р 57198—2016

Бюксы. изготовленные из не коррозируемого металла, или стаканчики СВ 14/8; 19/9; 24/10; 34-2 —ло ГОСТ 25336.

Эксикатор исполнения 2 с диаметром корпуса 100,140.190, 250 мм по ГОСТ 25336. содержащий силикагель с добавлением индикатора влажности или прокаленный хлорид кальция.

5.3.2    Проведение испытания

Открытую бюксу и крышку помещают в сушильный шкаф при температуре (105 ± 2) вС на 30 мин. Затем закрывают бюксу крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Высушивание бюксы с крышкой проводят до достижения постоянной массы.

5 г препарата помещают в бюксу. Открытую бюксу и крышку помещают в сушильный шкаф при тем* пературе(10512) вС на4ч. затем закрывают бюксу крышкой, переносят вэксикатор. охлаждают до ком* натной температуры и быстро взвешивают.

Вновь высушивают образец в течение 1 ч, охлаждают и взвешивают. Повторяют высушивание до тех пор. пока разность результатов двух последовательных взвешиваний будет не более 0.0004 г. Если после повторного высушивания масса увеличится, за результат принимают наименьшее значение.

5.3.3    Обработка результатов

Массовую долю влаги (X,) в процентах вычисляют по формуле:

Х\ -т* ~т2 • 100.

/и, -ms

где т, — масса бюксы с пробой до высушивания, г; т2 — масса бюксы с пробой после высушивания, г; т3 — масса бюксы. г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения не должны отличаться от среднего значения более чем на 5 % (отн.).

5.4 Определение крупности помола

Сущность метода заключается в гравиметрическом определении остатка на сите после просеива* ния пробы.

5.4.1    Аппаратура

Установка для рассева с ситами; с номинальными размерами ячейки 0.560 мм и 1.00 мм по [2].

Весы лабораторные общего назначения 1 *го и 2*гоклассов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г. — ло ГОСТ Р 53228.

5.4.2    Проведение испытаний

ЮОгпреларата помещают на сито, которое закрывают крышкой, укрепляют на платформе установки для рассева, включают установку и просеивают в течение 10 мин при 190—210 колебаниях в минуту.

Допускается просеивание ручным способом при 110—120 колебаниях в минуту и размахе колебаний около 10 см.

5.4.3    Обработка результатов

Остаток на сите (Х2) в процентах вычисляют ло формуле:

Хг = —-100.    <2)

Я15

где тл — масса остатка на сите, г: т5 — масса пробы, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения не должны отличаться от среднего значения более чем на 10 % отн.

5.5 Определение лизин

Сущность метода заключается в сравнении зон задержки роста тест-культуры Вас. subtilis 6633 испытуемым препаратом и стандартом лизин. Чувствительность метода 0.5 ЕД в 1 мг.

5.5.1 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

pH-метр с погрешностью измерения не более 0.1.

Весы лабораторные общего назначения 1 -го и 2-го классов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г—по ГОСТ Р 53228.

Автоклав вертикальный.

5

ГОСТ Р 57198—2016

Микроскоп — по ГОСТ 8074.

Термостат любого типа, обеспечивающий температуру нагрева < 37 (± 1) *С.

Ватерпас.

Столике горизонтальной пластиной вертикального стекла.

Сушильный шкаф любого типа, обеспечивающий температуру нагрева от 100 *С до 200 *С с погрешностью терморегуляции ±2 ®С.

Термометр с ценой деления ГС и диапазоном измерения от 0 *С до 100 вС.

Баня водяная любого типа, обеспечивающая температуру нагрева от20 ®С до 100 вС с погрешностью терморегуляции ±3 вС.

Бур или пробочное сверло с внутренним диапазоном 8 мм.

Капельница, представляющая собой инъекционную иглу, впаянную в стеклянную трубку диамет-ром 5—7 мм. на конец которой одета резиновая пруша.

Колбы мерные вместимостью 100.1000 см3 — по ГОСТ 1770.

Колбы конические вместимостью 100 см3 — по ГОСТ 25336.

Чашки бактериологические (чашки Петри) типа ЦБН исполнения 2. номинальным диаметром 100 мм — по ГОСТ 25336.

Пипетки вместимостью 5.10 и 20см3 исполнения 6.7 — по ГОСТ 29227.

Пробирки типа П1 диаметром 16 мм. высотой 150 мм из химически стойкого стекла группы ХС — по ГОСТ 25336.

Спиртовки стеклянные — по ГОСТ 25335.

Матрацы стеклянные.

Воронка типа 8 диаметром 100 мм высотой 150 мм — по ГОСТ 25336.

Петля микробиологическая.

Бумага фильтровальная — поГОСТ 12026.

Образец стандартный стеклянный для визуального определения мутности бактериальных взвесей. мутность которого равна 1.66 см-1 и эквивалента 10 международным единицам мутности.

Цилиндры мерные вместимостью 50 см3 — по ГОСТ 1770.

Лизин сульфат стандартный с активностью, указанной на этикетке.

Тест-микроорганизм Вас. subtilis 6633.

Натрий лимоннокислый трехзамещенный — по ГОСТ 22280.

Натрия гидроокись — по ГОСТ 4328.

Натрий хлористый — по ГОСТ 4233.

Кислота соляная, растворы концентрации 0,01 моль/дм3 (0.01 к.) и 0.2 моль/дм3 (0.2 к.) — поГОСТ 3118.

Кальций фосфорнокислый однозамещенный — по ГОСТ 4198.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей — поГОСТ 13805.

Бульон Хоттингера.

Агар микробиологический — по ГОСТ 17206 или агар пищевой — поГОСТ 16280.

Раствор буферный лимоннокислый с pH 3—3,2; готовят смешением двух растворов; 62 см3 раствора А и 100 см3 раствора Б.

Растворы А и Б готовят следующим образом:

•    раствор А — 22.6 г цитрата дигидрата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 сми доливают воду до метки;

•    раствор Б — 8.2 см3 концентрированной соляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и разбавляют водой до метки.

Растворы для окраски по Г раму.

Вода мясная — по ГОСТ 20729.

Бульон мясо-пептонный (МПБ) — по ГОСТ 20730.

Среда агаровая голодная; готовят следующим образом:

15гагара.езвешениогослогрешностъю неболее0,01 г. помещают в колбу вместимостью 1000 см3, содержащую900см3 воды. Колбу ставят на водянуюбаню и нагревают дополногораеллаеления агара.

Зг дигидроортофосфата калия, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г. растворяют в 100 см3 воды, затем выливают в расплавленный агар, доводят объем водой до 1000 см3 и перемешивают. Устанавливают pH 8.0 при помощи 30 %-ного раствора гидрооксида натрия. Агаровую среду кипятят до образования осадка, затем фильтруют через толстый слой ваты и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при темлвратуре(110 ± 1) ®С. pH среды поля стерилизации должна быть 7.8—6.0. Среду хранят при температуре 20—22 *С не болев двух месяцев.

6

ГОСТ Р 57198—2016

Среда агаровая питательная: готовят аналогично приготовлению агаровой голодной среды, при этом взамен воды берут МПБ с содержанием аминного азота 50—60 мг в 100 см3 бульона. Питательную среду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при температуре (11011) °С. После стерилизации pH раствора должна быть 7.8—8.0. Раствор хранят в течение месяца лри комнатной температуре.

Раствор физиологический.

Агар мясо-пептонный (МПА) — среда для культуры Вас. subtilis 6633; готовят следующим образом: МПБ разбавляют водой в соотношении 1:2. К1000 см3 разбавленного МПБ добавляют 20 г агара, взвешенногос погрешностью не более0.01 г. Для набухания агара смесь выдерживают в течение 40—60 мин при комнатной температуре.

МПА расплавляют на водяной бане, устанавливают pH 7,2—7.4 при помощи 30 %-ного раствора гидрооксида натрия, дают среде отстояться в течение 30 мин. после чего среду фильтруют через толстый слой ваты, затем разливают в колбы и стерилизуют при температуре (110 ± 1) *С в течение 30 мин. pH среды после стерилизации должен быть 7.2—7.4.

Среду для выращивания спор Вас. subtilis 6633 в матрицах готовят следующим образом:

25 г агара, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г. добавляют на 1000 см3 бульона Хоттинге-рас содержанием 30—35%аминногоаэота. Полученную среду разливают по матрицам и стерилизуют в течение 30 мин при температуре (110 ± 1) *С. pH после стерилизации должен быть 6.0—6,2.

Суспензию тест-культуры Вас. subtilis 6633 готовят следующим образом:

тест-культуру Вас. subtilis 6633 переносят микробиологической петлей в пробирку сфизиологичес-ким раствором, затем пипеткой каплю полученной суспензии переносят в чашки Петри со средой МПА. растирают ее по чашке стеклянным шпателем, после чего этим же шпателем переносят оставшуюся на кем культуруиз чашки ачашкусвышеукаэанной средой путем растирания (5—7чашек), добиваясь таким образом в последующем роста отдельных характерных колоний.

Тест-культуру выращивают при температуре 37 *С в течение 18—24 ч. Затем отбирают типичные колонии — мелкие, сероватые с зубчатым краем и пересевают бактериальной петлей на скошенный МПАв пробирку и выращивает при температуре 37 *С в течение 18 ч. после чего культуру со скошенного агара смывают 5—10 см3 стерильной дистиллированной воды и смыв переносят в матрацы. Засеянный матрац выдерживают при температуре 37 *С в течение &—7 суток, после чего производят микроскопический контроль и. если в мазках, окрашенных по Г раму, имеется в поле зрения 80—90 % спор, делают смыв культуры стерильной дистиллированной водой.

Полученную взвесь спор прогревают при температуре 60—70 еС на водяной бане в течение 30 мин. затем взвесь спор промывают не менее трех раз стерильной дистиллированной водой при центрифугировании до полной прозрачности надосадочной жидкости. Промытую взвесь спор хранят в стерильной дистиллированной воде в запаянных ампулах или пробирках в течение двух лет при температуре от 4 *С до 10 вС.

Лизин основной стандартный раствор концентрации 1000 ЕД в 1 см3; раствор готовят следующим образом: 20 мг стандартного образца лизин, взвешенные с погрешностью не более 0.0002 г. растворяют в рассчитанном объеме раствора соляной кислоты концентрации 0,01 моль/дм3.

Объем раствора соляной кислоты (Хэ) в кубических сантиметрах вычисляют по формуле

=    •*    (3)

юоо

где тв — масса стандартного образца сульфата лизин, мг;

А — активмостьстандартногообразца сульфата лизин. ЕД в 1 мг (весовое выражение 1 ЕД активности сульфата лизин зависит от активности действующего в настоящее время стандартного образца);

1000 — активность основного стандартного раствора сульфата лизин. ЕД в 1 см3.

Полученный раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4 °С в защищенном от света месте не более одного месяца.

Лизин рабочий стандартный раствор концентрации 3 ЕД в 1 см3; готовят следующим образом:

1 см3 основного стандартного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки лимоннокислым буферным раствором, получая разведение 1:100(10 ЕД в 1 см3). Затем берут пипеткой 3 см3 этого разведения, помещают в пробирку, добавпяют 7 см3 лимоннокислого буферного раствора.

5.5.2 Подготовка к испытанию

5.5.2.1 Приготовление раствора испытуемого препарата

5 г пробы, взвешенной с погрешностью не более 0.01 г. помещают в ступку, заливают 25 см3 соляной кислоты концентрации 0.2 моль/дм3 и растирают пестиком. Затем взвесь переносят в колбу или ста

7

ГОСТ Р 57198—2016

кан. а ступку смывают 25 см3 раствора соляной кислоты концентрации 0.2 моль/дм3 и смыв добавляют в колбу.

Взвесь препарата выдерживают в течение 2—3 ч при комнатной температуре для экстракции лизин, периодически взбалтывая, после чего содержимое колбы центрифугируют при 2000 мин'1 в течение 10—15 мин и фильтруют через бумажный фильтр, получая таким образом разведение 1:10. Затем из этого раствора готовят следующие разведения с помощью лимоннокислого буферного раствора (с учетом предыдущего разведения 1:10):

-    для кормовой концентрат лизина-10 — 1:1000; 1:2000:1:4000;

-    для кормовой концентрат лизина-40 — 1:4000; 1:8000:1:16000.

5.5.2.2    Подготовка чашек Петри с питательной средой и тест- культурой

Чашки Петри тщательно моют, стерилизуют е сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 160 вС.

В 6 чашек Петри заливают пипеткой по 15 см3 расплавленной голодной агаровой среды, получая нижний слой. 8100 см3 расплавленной иохлажденной до 60—65 °С питательной агаровой среды вносят 1 см3 (10 международных единиц мутности) тест-культуры бас. subtilis 6633 и разливают в чашки Петри на застывший нижний слой голодной агаровой среды по 7—8 см3.

После застывания агара в чашках делают по 6 лунок буром, которые располагают по радиусам на расстоянии 2.6 см от центра чашки с интервалом около 60 *С. 8 6 лунок каждой из двух подготовленных чашек Петри вносят капельницей около 0.1 см3 рабочего стандартного раствора лизин. Чашки помещают в термостат при температуре 37 *С и выдерживают в течение 16—18 ч, а затем измеряют диаметры зон задержки роста тест-микроба.

Для проведения испытаний препарата на содержание в них лизин используют партию питательной агаровой среды, обеспечивающей после действия рабочего стандартного раствора лизин зоны задержки диаметром от 17 до21 мм. 8 случае получения зон задержки диаметром менее 17 мм илиболее21 мм готовят новую партию среды, подбирая новые серии компонентов, или увеличивают (уменьшают) количество тест-микроба, вносимого в питательную среду, с целью достижения оптимального размера диаметра зон задержки роста тест-микроба.

5.5.2.3    Построение градуировочного графика для определения активности лизин

Для построения градуировочного графика из раствора, содержащего 10 ЕД в 1 см3, готовят 5 растворов концентрациями 1.6; 2.4; 3,0; 3.8; 4.5 ЕД в 1 см3. Раствор, содержащий 3 ЕД в 1 см3, является контрольным.

Полученные стандартные растворы, за исключением контрольного, капельницей вносят в 3 лунки (по 3 чашки на каждую концентрацию). Контрольный раствор вносят в остальные 3 лунки всех 15 чашек. Объем вносимых растворов (стандартного и контрольного) должен быть равным и составлять около 0.1 см3. Перед работой капельницу тщательно ополаскивают буферным раствором, а затем раствором, который следует вносить в каждую лунку. Чашки выдерживают в течение 16—18 ч в термостате при температуре 37 "С, затем измеряют диаметры зон задержки роста тест-культуры.

Для каждой концентрации рассчитывают среднее арифметическое диаметров зон задержки роста по 3 чашкам. Для контрольной концентрации подсчитывают среднее арифметическое диаметров зон задержки роста отдельно по 3 чашкам и по всем 15 чашкам, находят поправку, которая представляет собой разность между средними арифметическими контрольных зон задержки роста, вычисленных по 15 и по 3 чашкам.

Полученные поправки прибавляют к средним значениям диаметра зон задержки роста стандартных растворов концентрации 1.8; 2.4; 3.0; 3,8; 4.5 ЕД в 1 см3, вычисленных по 3 чашкам.

По полученным данным на полулогарифмической сетке строят градуировочный график. На ось абсцисс наносят средние значения диаметра зон задержки роста стандартных растворов, полученных после внесения поправки, а также среднее значение диаметра зоны контрольного раствора, вычисленное по всем 15 чашкам. На оси ординат наносят соответствующие концентрации растворов.

Градуировочным графиком пользуются в течение двух месяцев, периодически проверяя угол наклона кривой по двум концентрациям на 3—5 чашках.

5.5.3    Проведение испытания

На каждую пробу испытуемого препарата используют не менее 3 чашек.

Капельницей в три лунки каждой изчашек вносят рабочий стандартный раствор, а в три другие лунки — один из растворов испытуемого препарата. Объем вносимых растворов рабочего стандартного раствора и испытуемого препарата должен быть равным и составлять около 0.1 см3. Чашки выдерживают втечение 16—18 ч в термостате при температуре 37 *С. затем измеряют диаметр зон задержки роста

8

ГОСТ Р 57198—2016

тест-культуры. При этом е расчет берут одну концентрацию, при которой диаметр зоны роста тест-куль* туры в испытуемых образцах ближе к диаметру зон задержки стандартного раствора.

5.5.4 Обработка результатов

Измеряют зоны задержки роста тест-культуры, образуемые контрольным раствором стандарта и испытуемым раствором. Находят среднее арифметическое результатов диаметра зон задержки роста по 3 чашкам. Вычитают разность значений диаметров зон задержки роста контрольной концентрации стандартной кривойиконтрольной концентрации вислытании. Эту разность прибавляютксреднему значению диаметра зон задержки испытуемого раствора препарата, если она положительная, или вычитают, если она отрицательная.

Затем по кривой находят концентрацию, соответствующую найденной величине зон. Умножая полученную концентрацию на степень разбавления, получают содержание антибиотика в ЕД в 1 см3.

1 условная ЕД лизин соответствует 1 мкг антибиотика в товарном препарате.

Содержание лизин (Х4) в г в 1 кг препарата определяют по формуле:

Х4 =    И)

т7-103

где N — содержание лизин в испытуемом растворе, мкг/см3;

V — объем соляной кислоты, используемой для приготовления взвеси препарата, см3; т, — навеска препарата, г:

103 — переводной коэффициент мкг/г в г/кг.

За результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, которые не должны отличаться от среднего значения более чем на 10 % (отн.).

5.6 Определение подлинности (идентичности)

Сущность метода заключается в хроматографическом разделении на бумаге лизин на компоненты и проявлении хроматограммы нингидриноеым красителем и биоавтографическим методом и последующем сравнении полученной хроматограммы с хроматограммой стандартного образца лизин, проявленной аналогичным способом.

5.6.1    Аппаратура, материалы, реактивы, растворы

Весы лабораторные общего назначения 1 -го и 2-гоклассов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г — по ГОСТ Р 53228.

Аппарат для встряхивания жидкостей.

Камера или эксикатор для хроматографии диаметром 2832 см.

Элекгровентилятор бытовой — по ГОСТ 7402 или электрофен бытовой — по ГОСТ 22314. Пипетка исполнения 8.2-го класса точности вместимостью 0.1 см3 — по ГОСТ 29227.

Колбы конические вместимостью 100 см3 — по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные вместимостью 100 см3 — по ГОСТ 1770.

Ступка фарфоровая — по ГОСТ 9147.

Бумага хроматографическая — по ТУ 13-7308001-778—89(3] (ИУС 12—89).

Мензурки стеклянные вместимостью 50 см3 — по ГОСТ 1770.

Воронки диаметром 36.56 мм. высотой 80 мм — по ГОСТ 25336.

Циркуль — по ГОСТ 28950.

Ножницы — по ГОСТ 21239.

Линейка — по ГОСТ 14735.

Лоток стеклянный из оргстекла или чашки Петри — по ГОСТ 25336.

Кислота соляная — по ГОСТ 3118. растворы концентраций 0.01 и0.2моль/дмэ.

Кислота уксусная — по ГОСТ 61.

Бутанол-1 — поГОСТ 6006.

Спирт этиловый — по ГОСТ Р 55878 или — по ГОСТ 5962.

Пиридин — по ГОСТ 13647.

Нингидрин. 0,25 %-ный раствор в этаноле, содержащем 1 % уксусной кислоты.

Лизин стандартный образец, раствор с активностью 1000ЕД в 1 см3 в соляной кислоте концентрации 0.01 моль/дм3.

5.6.2    Подготовка к испытанию

5.6.2.1 Приготовление испытуемой пробы

9

ГОСТ Р 57198—2016

5 г препарата помещают е ступку и растирают при добавлении 25 см3 раствора соляной кислоты концентрации 0.2 моль/дм3. Суспензию переносят в колбу, ступку обмывают 25 см3 раствора соляной кислоты концентрации 0.2 моль/дм3 и также сливают в колбу. Колбу закрывают пробкой, ставят на аппарат для встряхивания на 30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр.

Фильтрат используют для проведения испытания.

5.6.2.2    Подготовка хроматографической камеры

В камеру или эксикатор ставят стаканчик со смесью растворителей, состоящей из бутанола-1, пиридина, уксусной кислоты и воды в соотношении 15:10:3:12. На дно камеры кладут фильтровальную бумагу, смоченную этой же смесью.

5.6.2.3    Подготовка хроматографической бумаги

Из листа хроматографической бумаги вырезают круги диаметром 28—32 см (в зависимости от размера камеры). Из центра круга циркулем проводят окружность радиусом 2 см. Круг делят на шесть разных секторов, в центре круга делают отверстие диаметром 0.5 см для фитиля, который скручивают из кусочка фильтровальной бумаги.

5.6.2.4    Подготовкагазонадлябиоавтографии

В стеклянный лоток наливают 100 см3 голодной агаровой среды х и 80 см3 питательной агаровой среды стест-культурой Вас. subtilis 6633.

5.6.3 Проведение испытания

5.6.3.1    На два противоположных сектора круга (на отрезок дуги внутренней окружности) микроли-петкой наносят раствор стандартного образца лизин в соляной кислоте концентрации 0,01 моль/дм3 в количестве 0.1 см3. Таким же образом наносят растворы двух испытуемых проб. Для кормовой концентрат лизина-40 объем наносимой пробы составляет 0.025 см3, для кормовой концентрат лизи-на-10 — 0.1 см3. При нанесении проб хроматограммы периодически просушивают феном. После нанесения проб в отверстие в центре диска вставляют фитиль и хроматограмму помещают в камеру так. чтобы фитиль был погружен в растворитель.

Для лучшего разделения компонентов гризинового комплекса хроматографирование проводят в течение 15—16 ч. После окончания процесса хроматограмму вынимают из камеры и высушивают в вытяжном шкафу. Затем хроматограмму разрезают по диаметру на две части, так чтобы в каждой из них был сектор со стандартным образцом и секторы с двумя исследуемыми образцами.

5.6.3.2    Одну половину хроматограммы проявляют биоавтографическим способом, для чего из каждого сектора хроматограммы в радиальном направлении вырезают полоски шириной 0.5 см и накладывают их на газон стест-культурой параллельно одна другой на расстоянии 2 см. совмещая их стартовую линию. На обратной стороне лотка отмечают стартовую линию и положение каждой полоски. Через 3—5 мин полоски снимают пинцетом.

Лоток с газоном помещают в термостат с температурой 37 *С на 18—20 ч.

5.6.3.3    Вторую половину хроматограммы опрыскивают 0,25 %-ным раствором нингидрина в эталоне с 1 %-ным раствором уксусной кислоты и высушивают в вытяжном шкафу. Из нингидриноокрашен-ных полосок хроматограммы стандартного образца и соответствующих им полосок хроматограммы испытуемых проб в радиальном направлении вырезают квадраты размером 0,5 х 0.5 см и накладывают их на газон с тест-культурой. Лоток с газоном помещают в термостат с температурой 37 'С на 18—20 ч.

5.6.4 Обработка результатов

Появление нингидриноокрашенных компонентов на хроматограмме, совпадающих по положению с нингидриноокрашснными компонентами стандартного образца лизин, а также зон задержки роста тест-культуры от испытуемых компонентов пробы свидетельствует о подлинности препарата.

5.7 Определение токсичности

5.7.1    Аппаратура

Ступка фарфоровая по ГОСТ 9147.

Шприц по ГОСТ 22967.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.7.2    Проведение испытания

Препарат тщательно растирают в ступке при непрерывном добавлении воды с таким расчетом, чтобы 1 см3 суспензии содержал 200 мг препарата.

Отбирают пять мышей массой 18—20 г и вводят перорально каждой мыши по 0,5 см3 суспензии (из расчета 100 мг препарата на мышь) с помощью инъекционной иглы, на которую направляют оливу диаметром не более 1 мм.

10

ГОСТ Р 57198—2016

5.7.3 Обработка результатов

Препарат считают нетоксичным, если все мыши остаются живыми в течение трех последующих дней наблюдения. При гибели хотя бы одной мыши в повторном опыте препарат бракуют.

Каждую мышь используют в опыте один раз.

5.8    Определение зараженности вредителями— по ГОСТ 13496.13.

5.9    Определение поваренной соли — по ГОСТ 13496.1.

6    Транспортирование и хранение

6.1    Транспортирование

6.1.1    Кормовой концентрат лизина транспортируют всеми видами транспорта в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок грузов, действующими на каждом виде транспорта.

6.2 Хранение

6.2.1    Кормовой концентрат лизина храняте сухих, защищенных от атмосферных осадков помещениях при температуре не выше плюс 28 вС и не ниже минус 28 *С.

6.2.2    Не допускается хранение кормовой концентрат лизина вместе с ядохимикатами.

7    Гарантии изготовителя

7.1    Изготовитель гарантирует соответствие кормовой концентрат лизина требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий хранения.

7.2    Гарантийный срок хранения кормовой концентрат лизина — 1 год со дня изготовления препарата.

11

ГОСТ Р 57198—2016

Библиография

[1]    НПАОП 24.4*1.01—79

(2)    ТУ 14-4-1561—69

[3J ТУ 13-7308001-776—89

Прввила безопасности для производстве микробиологи ческой промышленности Сетке тканая, саржевая с квадратными ячейками 056-МУ-П-1. Технические условия

Бумага для медицинских и физико-химических анализов

УДК 579.66.663:006.354    ОКС65.120

Ключевые слова: кормовой концентрат лизина, тест-культура, пробы

Редактор Р.8. Старшиной Технический редактор 8 И. Прусакова Корректор Ю.М Прокофьева Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Сдано е набор 10.11.2016. Подписано а печать 08.12.2016. Формат 60 » 84^.    Гариитура Ариал.

Уел. печ. л. 1.66. Уч.-иад. л. 1.68. Тираж 29 эха Зак. 3049.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный лер., 4. www.90slinfo.1u