База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных


ГОСТ 33482-2015 Продукты пищевые, сырье продовольственное, комбикорма. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Обозначение: ГОСТ 33482-2015
Наименование: Продукты пищевые, сырье продовольственное, комбикорма. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Статус: Принят

Дата введения: 01/01/2017
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120, 67.050, 67.120
Скачать PDF: ГОСТ 33482-2015 Продукты пищевые, сырье продовольственное, комбикорма. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.pdf
Скачать Word:ГОСТ 33482-2015 Продукты пищевые, сырье продовольственное, комбикорма. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.doc


Текст ГОСТ 33482-2015 Продукты пищевые, сырье продовольственное, комбикорма. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

ГОСТ

33482—

2015


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, СЫРЬЕ ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ, КОМБИКОРМА

Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Издание официальное

Москва

Стенда ртинформ 2016


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. № 81-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Код страны по МК (ИСО 3166)004— 97

Сокращенное наименование национального органа по станааотизаиии

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарг

Россия

RU

Роостандарт

Украина

UA

Минэкономразвития Украины

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 ноября 2015 г. No 1808-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33482—2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. СЫРЬЕ ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ. КОМБИКОРМА

Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим

детектированием

Food products, food raw materials, mixed feeds.

Method for determination of anabolic steroids and stibene derivatives by high performance liquid chromatography — mass spectrometry

Дата введения —2017—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и непереработанную пищевую продукцию животного происхождения в части мяса, в том числе из мяса птицы, субпродуктов (печень), комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — 8ЭЖХ-МС/МС) для определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена в диапазоне измерений:

•    для а-тренболона. б-тренболона в мясе — от 0.05 до 5.00 мкг/кг;

•    меленгестрола ацетата, о-нортестостерона. Р-нортестостерона. а-зеараланола. Р-зеараланола. а-зеараленола в мясе — от 0.2 до 5.0 мкг/кг;

•    а-тренболона, p-тренболона. а-зеараланола. Р-эеараланола. а-зеараленола в печени — от 0.5 до 30.0 мкг/кг;

•    а-нортестостерона. Р-нортестостерона в печени — от 2.0 до 30.0 мкг/кг.

•    гексэстрола. диэтилстильбестрола. мегестрола ацетата, медроксипрогестерока. метилболденона. метилтестостерона. Р-тестостерома. преднизолона. метилпреднизолока. дексаметазона в мясе, печени и комбикорме — от 0.5 до 30.0 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 61—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия ГОСТ 199—78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6—2003’ Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ ISO 6497—2014г Корма для животных. Отбор проб ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 726В—79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 9293—74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 22300—76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31467—2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссытку.

3    Сущность метода

Количественное определение содержания анаболических стероидов и производных стильбена (аналитое) проводят методом внутреннего стандарта по площадям пиков идентифицированных соединений с помощью градуировочной характеристики высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометричвским детектированием в режиме мониторинга выбранных реакций [MRM).

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007. при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят под тягой в вытяжном шкафу.

4.4    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.5    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха...................от 20 °С до 30 °С:

- атмосферное давление..................................от 84 до 106 кЛа;

-    напряжение в питающей электросети...............от 200 до 240 8;

-    частота переменного тока ..............................от 49 до 51 Гц;

-    относительная влажность воздуха.....................от 40 % до 80 %.


5 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения содержания аналитое применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:

•    весы специального или высокого класса точности с действительной ценой деления 0.1 мг по ГОСТ OIMLR 761 или весы лабораторные по ГОСТ 24104 специального или высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания 210 г и ценой ловерочного деления 0.1 мг:

•    весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г, с пределом абсолютной допускаемой погрешности не более ± 0,001 мг:

•    масс-спектрометр с гибридным квадрупольным анализатором с диапазоном измерений от 5 до 1200 атомных единиц массы (а. е. м.). массовым разрешением не менее 1200. точностью измерения массы не менее 0,2 а. в. м., с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

•    pH-метр или универсальный ио номер диапазоном измерения от 4 до 9 ед. pH с погрешностью измерения 10,05 ед. pH;

•    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3:

•    баню водяную лабораторную;

•    встряхиватель (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин;

•    измельчитель-гомогенизатор погружной лабораторный со скоростью измельчающей насадки от 200 до 5000 об/мин:

•    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 30 °С до минус 40 °С;

•    колонку хроматографическую длиной 150 мм и диаметром 2 мм с сорбентом на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами, диаметром частиц сорбента не более 3 мкм:

•    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

•    модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 250 °С;

•    систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, системы фильтрования и дегазации подвижных фаз. термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (50±1) °С;

•    систему получения деионизованной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм-см.

•    устройство вакуумное для твердофазной экстракции:

•    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от О °С до 5 °С:

•    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 6000 об/мин и диапазоном температур от 4 °С до 20°С с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3:

• шкаф сушильный лабораторный с рабочим диапазоном температур от    50 °С до 200 °С;

•    картриджи для твердофазной экстракции вместимостью не менее 15 см3, заполненные 0.5 г немодифицированного силикагеля с диаметром частиц сорбента от 63 до 100 мкм:

•    пробы контрольные с установленным значением содержания определяемого анаболического стероида или производного стильбена:

•    пробы, не содержащие анаболических стероидов и производных стильбена. подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы («чистые» пробы);

Примечание — Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 20 °С до минус 40 °С — не более трех мес.

5.3    При определении содержания аналитое в качестве стандартных веществ применяют следующие анаболические стероиды и производные стильбека:

5.3.1    Для приготовления исходных растворов с массовой долей основного вещества не менее 98,0%:

•    меленгестрола ацетат.

•    мегестрола ацетат;

•    медроксипрогестерон;

•    анортестостерон;

•    Э- нортестостерон;

•    а-тренболон;

•    Э'Тренболон;

•    0-тестостерои;

•    метилтестостерон;

•    метилболденон:

•    триамцинолона ацетонид;

•    преднизолон;

•    метилпреднизолон;

•    дексаметаэон;

•    дизтилстильбэстрол;

-    диенэстрол:

•    гескэстрол;

•    а -зеараланол;

•    0-зеараланол;

•    а-зеараленол.

5.3.2    Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов с массовой долей основного вещества не менее 98,0 %:

•    меленгестрола-ОЗ ацетат:

•    медроксипрогестерон-ОЗ;

-    мегестрола-ОЗ ацетат;

•    0-тренболон-ОЗ;

•    болденон-ОЗ;

-    0-тестостерон-О2;

•    0-мортестостерон-ОЗ:

•    триамцинолона ацетон ид-06;

•    диэтилстильбэстрол-06;

-    6-зеараланол-04.

5.4    Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также аппаратуры, реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей лоспедовательной промывкой органическими растворителями; этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 вС.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0.2 моль/дм3 и pH 5,2

8 мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 16.4 г ацетата натрия, приливают 900 см3 деионизованной воды, перемешивают. Измеряют pH и устанавливают его значение до (5.2 ± 0.1) концентрированной уксусной кислотой и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при температуре 4 °С — не более 1 мес.

6.2.2    Приготовление раствора ацетона в гексане в объемном соотношении 1:9

8 коническую колбу вместимостью 250 см3 вносят 20 см3 ацетона и 180 см3 гексана, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.2.3    Приготовление раствора ацетона в гексане в объемном соотношении 1:4

8 коническую колбу вместимостью 250 см3 вносят 40 см3 ацетона и 160 см3 гексана, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.2.4    Приготовление раствора метанола в деионизированной воде в объемном соотношении 4:1

6 коническую колбу вместимостью 250 см3 вносят 200 см3 метанола и 50 см3 деионизированной воды, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

6.3.1    Приготовление градуировочных растворов меленгестрола ацетата, а*нортестостерона, Э*нортестостерона, а-тренболона, (5-тренболона, а-зеараланола, Э'Зеараланола. а-зеараленола

6.3.1.1    Приготовление исходных растворов Со и исходных растворов внутренних стандартов Do Для приготовления исходных растворов Со концентрацией 200 мкг/см3 взвешивают по 5.0 мг а*

нортестостерона. p-нортестостерона, а-тренболона. Р-тренболона. а-зеараланола. Р-зеараланола, а* зеараленола. меленгестрола ацетата: для приготовления исходных растворов внутренних стандартов Do концентрацией 200 мкг/см3 взвешивают по 5.0 мг Р-нортестостерона-ОЗ, Р-зеараланола>04. меленгестрола-ОЗ ацетата. Р-тренболона-ОЗ и переносят каждое вещество по отдельности в мерные колбы вместимостью 25 см3. Доводят до метки раствором метанола (см. 6.2.4). перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более одного

года.

Перед применением растворы выдерж>вают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин. Внутренние стандарты для анаболических стероидов и производных стильбена выбирают в соответствии с таблицей 1.

Т а блица 1 — Соответствие между аналитами и внутренними стандартами_

Наименование эмалита

Наименование енутоеннею ciaitaaoia аиалита

Мепенгестола аиетат

Меленгестоола-ОЗ аиетат

о-Нортестостерон 8- Нортвсгостерон

Р-Нортестосгерон-О3

а —Тренболон 8—Тоенболон

р-Тренболон-ОЗ

а —Зеарэланол

р-Зеараланол

Р-Зварзланол-04

а —Зваоалвнол

6.3.1.2 Приготовление рабочих растворов Ci, D«. Сг

Рабочие растворы Ci. D>. Сг готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3 в соответствии с

Рабочий раствор С, с массовой концентрацией каждого аиалита 1 мкг/см9

Рабочий раствор внутренних стандартов D- с массовой концентрацией каждого аналита 0.5 мкг/см9

Рабочий раствор С с массовой концентрацией каждого аналита 0.025 мкг/см9

Берут по 0,050 см9 каждого

Берут по 0.025 см9 каждого

Берут 0.250 см9 раствора Ci

раствора Со

раствора О:

по 6.3.1.1

по 6.3.1.1

*

I

I

2oeo£2T_go^|emjj>acTBO£OMj;!2a«naJcfcr_6;2;42;j>0£eMemH8aioT

noMewa>or^^nbT£a3B2<be2)o^aj«_HaJj£M4

Рисунок 1 — Приготовление рабочих растворов Ci. D^, Сг Растворы Ci. D\ хранят при температуре от минус 20 °С до минус 40 °С. Срок хранения раствора Ci — не более одного года. D\ — не более 6 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

Срок хранения раствора Сг в холодильнике при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1

мес.

6.3.1.3 Приготовление матричных градуировочных растворов Gm — Gm меленгестрола ацетата, а-нортестостерона. (3-нортестостерока. а-тренболока. р-тренболона, а-зеараланола. |3*зеараланола. а-звараленола для проб мяса

Матричные градуировочные растворы Gi* — G*« готовят в виалах или пропиленовых пробирках вместимостью 50 см3 путем обработки «чистых» проб мяса массой 10,0 г согласно разделу 7. в которые одновременно с добавлением рабочего раствора внутренних стандартов D\ вносят рабочие растворы определяемых аналитов Ct и Сг в соответствии с таблицей 2.

Та6лица2 — Приготовление матричных градуировочных растворов Gm — Gm

Наименование и массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного раствора

Вносимый объем рабочего раствора, см’

С.

С*

D.

Gt« (50 нг/см1)

0.05

0.05

Gj* (10 нг/см’)

043

(ГЗЗ

Gi. (2 нг/см5)

0.08

0.05

G*v (0.5 нг/см1)

0.02

0.05

Виалы (пробирки) встряхивают в шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.

Раствор Gtu используют свежеприготовленным.

Срок хранения растворов G*- — Gu. при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1 сут.

6.3.1.4 Приготовление матричных градуировочных растворов Gm— Gjn меленгестрола ацетата, а-нортестостерона, Р-нортестостерона, а-тренболона, 3-трен-болона, а-зеараланола. Р-зеараланола. о-эеараленола для проб печени

Матричные градуировочные растворы Gm — Gm готовят в виалах или пропиленовых пробирках вместимостью 50 см3 путем обработки «чистых» проб печени массой 5.0 г согласно разделу 7. в которые одновременно с добавлением рабочего раствора внутренних стандартов Di вносят рабочие растворы определяемых аналитов Ct и Сг в соответствии с таблицей 3.

ТаблицаЗ — Приготовление матричных градуировочных растворов Gm — G<n

Наименование и массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного оаствооа

Вносимый объем оабочего Dacreooa. см1

С,

Си

D,

Gi., (150 нг/см*)

0.15

0.05

G.- (40 нг/см1)

0.04

0.05

СмООнг/см1)

0.4

0.05

6<* (2.5 нг/см»)

0.1

0.05

Виалы (пробирки) встряхивают в шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.


Срок хранения растворов Gm — Gm при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1 сут.

6.3.2 Приготовление градуировочных растворов триамцинолона ацетонида, мегестрола ацетата, медроксипрогестерона, метилболденона, ({«тестостерона, диэтилстильбэстрола, диенэстрола, гескэстрола, преднизолона, метилпреднизолона, дексаметазона, метилтестостерона

6.3.2.1 Приготовление исходных растворов СЬи исходных растворов внутренних стандартов Со

Для приготовления исходных растворов Со с концентрацией 200 мкг/см3 взвешивают по 5.0 мг триамцинолона ацетонида. мегестрола ацетата, медроксипрогестерона. метилболденона. Р-тестостерона, диэтилстильбэстрола. диенэстрола. гескэстрола. преднизолона. метилпреднизолона. дексаметазона. метилтестостерона: для приготовления исходных растворов внутренних стандартов Сое концентрацией 200 мкг/см3 взвешивают по 5.0 мг медроксипрогестерона-ОЗ. мегестропа-ОЗ ацетата. В*тестостерона>02. триамцинолона ацетонида-06. диэтилстильбэстрола-06 и переносят каждое вещество по отдельности в мерные колбы вместимостью 25 см3. Доводят до метки раствором метанола (см. 6.2.4), перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С — не более одного

года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре, в темном месте, не менее 30 мин.

Внутренние стандарты дпя анаболических стероидов и производных стильбена выбирают в соответствии с таблицей 4.

6.3.2.2 Приготовление рабочих растворов С\ D\ Сз

Рабочие растворы C'i. D\ СЪ готовят в мерных пробирках вместимостью 10 смэ в соответствии с рисунком 2.


Рабочий раствор Ci с массовой концентрацией каждого анапита 1 мкг/см’


Берут по 0.050 см1 каждого раствора Со по 6.3


Рабочий раствор внутренних стандартов с массовой концентрацией каждого а налита 0.5 мкг/см1


Берут по 0.025 см5 каждого раствора 0« по <


iy.2.1


Рабочий раствор С» с массовой концентрацией каждого а налита 0.025 мкг/см1


Берут 0.250 см’ раствора Ci


4


<^ово^ят^о^1вш<_£аство£ом^втанрла^^_б;2;42л>в£емешив^


анрле

^коа^


^^ёшаю™^льт£азв£ков^^^^^^^мйн


Рисунок 2 — Приготовление рабочих растворов С\. О). С'г


Таблица4 — Соответствие между аналитами и внутренними стандартами

Наименование аналита

Наименование внутреннего стандарта аналита

Мегестоола ацетат

Мегестоола-ОЗ ацетат

0-Тестостерон

Метилтестостерон

0-Тестостером-О2

Метилболденон

Бопденон-ОЗ

Триамцинопок ацегомид Преднизолон Метиллрвднизолон йексаметаэон

Триамцинолона ацегокид-Об

Диэгилсгильбэстрол

Диенэсгрол

Диэтилстильбэстрол-Об

Гесхэстоол

Медооксипоогесгеоон

Медооксипоогестаоон-ОЭ

Растворы Ci. Ci хранят при температуре от минус 30 °С до минус 40 °С. Срок хранения раствора C'i — не более одного года. D\ — не более 6 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

Срок хранения раствора С? при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1 мес.

6.3.2.3 Приготовление матричных градуировочных растворов G'i — Од триамцинолона ацетонида. мегестроп ацетата, медроксипрогестерона. метилболденона, ^«тестостерона, диэтилстильбэстрола, диенэстрола. гескэстрола. предниэолона. метиллредниэолона. дексаметаэока. метилтестостерона для проб мяса, печени и комбикорма

Матричные градуировочные растворы GS — (Уд готовят в виалах или пропиленовых пробирках вместимостью 50 см3 путем обработки «чистых» проб массой 5.0 г согласно разделу 7. в которые одновременно с добавлением рабочего раствора внутренних стандартов Ci вносят рабочие растворы определяемых аналитоз Ci и С? в соответствии с таблицей 5.

Таблица5 — Приготовление матричных градуировочных растворов G'i — (Уд

Наименование и массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного оаствооа

Вносимый объем оабочего оаствооа. см1

С,

сг

с,

G"t М50 нг/см-Ч

0.15

0.05

С/(40 нг/смЧ

0.04

0.05

<7, (10 нг/см5)

6.4

0.05

С< (2.5 нг/см1)

0.1

0.05

Виалы (пробирки) встряхивают в шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.

Раствор G'i используют свежеприготовленным.

Срок хранения растворов (Зг — G\ при температуре от 2 ®С до 4 °С — не более 1 сут.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб мяса — по ГОСТ 7269. печени — по нормативным документам государства, принявшего стандарт.

7.1.2    Отбор проб мяса и печени птицы — по ГОСТ 31467.

7.1.3    Отбор проб комбикормов — по ГОСТ ISO 6497.

7.1.4    Пробы, отобранные по 7.1.1. 7.1.2, при отсутствии возможности анализа в день отбора замораживают и хранят при температуре минус 25 °С до проведения анализа, но не более 90 сут.

7.2 Подготовка проб

7.2.1    Подготовка проб мяса, включая мясо птицы, при определении мелеигестрола ацетата, а-нортестостерона, (J-нсртестостерона, а-тренболона, p-тренболона, о-зеараланола, Р'зеараланола, а-зеараленола

7.2.1.1    Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани и

измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку пробы проводят в соответствии с рисунком 3.

__А_

Центрифугируют при 2800 об/мин в течение 20 мин при температуре 4 °С


_4_

Пипеточным дозатором переносят верхний (эфирный) слой в новую виалу (пробирку) вместимостью _50 см3 и упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С_

К полученному остатку приливают 3 см3 раствора ацетона (см. 6.2.2)

1

Помещают на 1 мин в ультразвуковую баню, затем на 1 мин в шейкер

Полученный экстракт очищают методом твердофазной экстракции (ТФЭ) по 7,2.1.2

Рисунок 3 — Подготовка проб мяса, включая мясо птицы


7.2.1.2 Картриджи для твердофазной экстракции кондиционируют на вакуумном устройстве для ТФЭ. пропуская 8 см3 раствора ацетона (см. 6.2.2). Затем пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с 7.2.1.1, промывают картридж 10 см3 раствора ацетона (см. 6.2.2) и сушат в вакууме водоструйного насоса в течение 10 мин. Элюируют определяемые вещества 10 смраствора ацетона (см. 6.2.3) в новую виалу. Упаривают элюат досуха в токе азота при температуре не более 40 °С. Остаток перерастворяют в 1 см3 раствора метанола (см. 6.2.4), помещают в ультразвуковую баню при комнатной температуре на 1 мин. затем фильтруют через мембранный фильтр в еиалу вместимостью 2 см3 и используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа.

7.2.2 Подготовка проб печени, включая печень птицы, при определении меленгестрола ацетата, а-нортестостерока, Э*нортестостерона, а-тренболона, p-тренболона, а-зеараланола, Р'зеараланола, а>зеараленола

Обработку пробы печени проводят в соответствии с рисунком 4.


Охлаждают до комнатной температуры


Добавляют 15 см4 трет-бутилметилового эфира, закрывают крышкой и перемешивают в шейкере в

течение 20 мин

__I_

Центрифугируют при 2800 об/мин в течение 20 мин при температуре 4 °С

_4_

Пипеточным дозатором переносят верхний (эфирный) слой в новую виалу вместимостью 15 см3 и _упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С_

_I_

К полученному остатку приливают 3 см3 раствора ацетона (см. 6.2.2)

_I_

_Помещают на 1 мин в ультразвуковую баню, затем на 1 мин в шейкер_

_4_

_Полученный экстракт очищают методом ТФЭ по 7.2.1.2_

Рисунок 4 — Подготовка проб печени, включая печень птицы

7.2.3 Подготовка проб мяса, включая мясо птицы, и комбикормов при определении триамцинолона ацетонида. мегестрола ацетата, медроксипрогестерона, метилболденока, {{•тестостерона, диэтилстильбэстрола, диенэстрола, гескэстрола, преднизолона, метилпреднизолона, дексаметазона, метилтестостерона

Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку пробы проводят в соответствии с рисунком 5.

Взвешивают 5.00 г (результат взвешивания записывают с точностью до второго десятичного знака) гомогенизированной мышечной ткани или комбикорма и помещают анализируемую пробу в еиалу или

полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3


Центрифугируют при 2800 об/мин в течение 20 мин при температуре 4 °С


Пилеточным дозатором переносят верхний (эфирный) слой в новую еиалу (пробирку) вместимостью 15 см3 и упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С


K^l


[


К полученному остатку приливают 1 раствора метанола (см. 6.2.4) Помещают на 1 мин в ультразвуковую баню, затем на 1 мин в шейкер

Пилеточным дозатором удаляют гексановый слой и центрифугируют пробу при 5200 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 *С


Переносят центрифугат в еиалу и используют для ВЭЖХ-МСУМС анализа

Рисунок 5 — Подготовка проб мяса, включая мясо птицы, и комбикормов

7.2.4 Подготовка проб печени, включая печень птицы, при определении триамцинолона ацетонида, мегестрола ацетата, медроксипрогестерона, метилболденона, р-тестостерона, диэтилстильбзстрола, диенэстрола, гескэстрола, преднизолона, метилпреднизолона. дексаметазона, метилтестостерона

Обработку пробы печени проводят в соответствии с рисунком 6.

взвешивают 5,00 г печени (результат взвешивания записывают с точностью до второго десятичного знака) и помещают анализируемую пробу в виалу или полипропиленовую пробирку

вместимостью 50 см3

I

Вносят 50 мм3 рабочего раствора внутренних стандартов £Л (см. 6.3.2.2) и перемешивают в _шейкере в течение 1 мин_

__i_

Приливают 6 см3 ацетатного буферного раствора (6.2.1) и гомогенизируют в гомогенизаторе в

течение 30 с

I

Добавляют 40 мм3 пищеварительного сока виноградной улитки Helix pomatia. закрывают крышкой и помешают на нагревательный модуль на 4 ч при температуре 52 °С для гидролиза

_I_

_Охлаждают до комнатной томпоратуры_

_{_

Добавляют 15 см3 трет-бутилметилового эфира, закрывают крышкой и перемешивают в шейкере в

течение 20 мин

-1-

Центрифугируют при 2800 об/мин в течение 20 мин при температуре 4 °С

Добавляют 3 см3 гексана и перемешивают в шейкере в течение 1 мин

Пипеточным дозатором удаляют гексановый слой и центрифугируют пробу при _5200 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °С_


_Переносят центрифугат в виалу и используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа    |

Рисунок 6 — Подготовка проб печени, включая печень птицы

7.2.5 Приготовление «холостой пробы»

Приготовление «холостой» пробы проводят в условиях подготовки проб, где вместо матрицы используют 1,0 см3 деионизованной воды.

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем хроматографических колонок. Например, для колонки диаметром 2 мм. длиной 150 мм. с обращен но-фазным сорбентом С18. с размером частиц 3,0 мкм. применяют следующие хроматографические условия:

•    температура колонки — 40 °С;

•    скорость потока подвижной фазы — 0.2 см3/мин:

•    объем вводимой пробы — 20 мм3.

8.1.2    Разделение проводят в режиме градиентного элюирования. В качестве подвижной фазы А используют деионизованную воду, подвижной фазы Б — метанол) в соответствии с таблицами 6 и 7.

' аблица 6 — Условия хроматографического разделения при регистрации положительных ионов

Время, мин

Подвижная фаза А. %

Подвижная фаза Б.%

0.0

100

25.0

20

60

30.0

20

80

30.1

100

40.0

100

'аблица 7 — Условия хроматографического разделения пои регистрации отрицательных ионов

Воемя. мин

Подвижная (Раза А. %

Подвижная Фаза Б.%

0.0

60

40

4.0

30

70

4.1

25

75

13.1

60

40

23.0

60

40

8.1.3 Параметры воздействия на ионы в режиме мониторинга нескольких реакций (MRM) при определении меленгестрола ацетата, а-нортестостерона. 8*нортестостерона. а-тренболона. 8-тренболона. а-зеараланола. 8-зеараланола. а-зеараленола приведены в таблице 8.

Таблицав — Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электрораспыления с регистрацией положительных или отрицательных ионов

А на пит

Ион-

предшественник.

т)г

Ион-продукт.

т/г

Потенциал

декластеризацнн.

в

Эмершя соударений, эв

Ускоряющее юпряжснис на выходе из ячейки столкновений. 6

Леленгестроп ацетат

397.1

279.1

337.1

100

27

21

14

энортестостероя.

i'HOpiCCTOCICpOM

276.2

109.2

14S.2

100

3S

30

14

э-тренболои.

i-тоонболом

271.0

16S.I

199.1

100

27

27

14

)-нортестостерои-03'

278.2

242.1

-

100

24

-

1S

Иелеигестроп-ОЭ

ацетат

400.2

282.1

-

100

28

-

15

J-тренболон-ОЭ'

274.1

199.1

-

100

27

-

16

Э'Эеаралаиеп

)'Эеаоаламоп

321.2

277.2

303.2

— 110

— 30

— 30

— 20

э -шевроле иол

319.1

1в0.«

130.1

— 165

— 40

— 40

— 20

) ->еаралаиол-Р4'

326.1

281.1

307.1

— too

— 35

— 32

— 20

внутренний стандарт

8.1.4 Параметры метода воздействия ка ионы в режиме мониторинга нескольких реакций (MRM) при определении триамцинолона ацетонида. мегестрола ацетата, медроксипрогестерона. метилболденона. Р-тестостерона, диэтипстильбэстрола. диекэстрола. гескэстрола. преднизолона. метилпреднизолона. дексаметазона. метилтестостерока приведены в таблице 9.

ТаблицаЭ — Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях элвктрораспылвния с регистрацией положительных или отрицательных ионов

Анапит

Ион-

предшественник.

л»/*

Ион-продукт.

miz

Потенциал декластериаа-цин. В

Энергия

соударений.

эВ

Ускоряюще* напряжение не выходе ю ячейки столкновений. 6

Гриамцииолоиа

1ЦС'ОН*Д

435.2

213.2

171.0

100

37

37

18

Легес1ролз ацетат

335.1

267.1

325.1

100

25

25

12

йедрочеиерогегтерон

345,2

97.3

123,t

100

31

31

6

йетилболдснон

301.2

149.1

121.1

too

21

21

14

1-тестостерон

28В.2

97. t

109.1

too

29

29

16

Лет илтестостерон

303.2

97.1

109.1

100

37

за

13

Зс'СЗмеиэом

373.1

t47.1

171.1

too

32

35

15

йедроосипрогестерон-ОЗ*

348.2

126.1

-

too

30

-

15

йегестропз-ОЗ ацетат’

388.3

270.1

-

too

24

-

15

1-тестостерон-02*

291.2

99. t

111.0

100

27

30

15

Гриамцниолоиа

тиеюнид-Об’

441.2

2t3.1

-

100

34

-

1S

Эиенастрол

285.0

234.6

92.9

-115

-31

-30

-20

'ексэстрол

269.2

118.9

133.9

-100

-SO

-21

-20

Зиэтилстильбзстрол

287.2

221.9

236.9

-115

-47

-35

-20

Тредниаолон

405.2

29S.1

260.1

-10

-45

-SO

-20

Летплпредмиаслсн

419.2

343.3

309.2

•40

-23

-43

-20

тазом

437.1

361.2

34S.3

•50

•24

•34

•20

^лэтигстнльбэотдо:' 5в‘

273.2

240.9

223.0

-100

-32

-35

-20

' Внутренний стандарт.

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и ы асе-спектрометрического детектирования могут отличаться а зависимости от используемой аппаратуры.

8.1.5 Параметры источника ионизации и квадрупольного анализатора:

•    напряжение на распыляющем капилляре (IS) 5500 В при регистрации положительных ионов и минус 4500 В при регистрации отрицательных ионов;

•    разрешение квадрулолей Q1/Q3 единичное;

•    давление газа для фрагментации (САО) 41 кПа.

8.1.8 Контроль чувствительности хромато-масс-слектрометра осуществляют введением 20 мм3 градуировочного раствора G*« G«« или G*4 (см. 6.3.1.3. 6.3.1.4, 6.3.2.3) в зависимости от типа анализируемой матрицы в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигкал/шум для каждого аналита должно быть не менее 20.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения хромато-масс-слектрометра.

8.2.1    Проводят измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.1.3.

6.3.1.4 или 6.3.2.3. в порядке возрастания их концентраций. Каждый градуировочный раствор измеряют два раза.

8.2.2    Вычисление площади лика проводят для каждого иона-продукта анализируемых анаболических стероидов и производных стильбена и их внутренних стандартов. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, иону-продукту. Для подтверждения наличия анаболических стероидов и производных стильбена рассчитывают отношения площади пика двух ионов-продуктов для каждого аналита в градуировочном растворе.

8.2.3    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у -ах, при зтом коэффициент корреляции должен быть не менее 0.98.

8.2.4 Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации анаболических стероидов и производных стильбена в анализируемых пробах выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение

8.3.1    Для определения содержания аналитов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2    ВЭЖХ-МС/МС анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

-    подвижную фазу А;

-    «холостую» пробу (см. 7.2.5):

-    «чистую» пробу:

-    градуировочные растворы (см. 6.3.1.3,6.3.1.4.6.3.2.3);

-    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3    8 инжектор хроматографа вводят 20 мм3 пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. и проводят измерения.

8.3.4    Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов-продуктов каждого аналита. соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов по 8.1.1.

8.3.5    Отклонения относительных ионных интенсивностей в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 10.

Таблицею — Допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей

Относительная ионная интенсивность. % от основного пика

Максимально допустимые отклонения для ВЭЖХ-МС/МС детектирования. %

Св. 50

±20

Се. 20 до 50 в ключ.

±25

Св. 10 до 20 вхлюч.

±30

Менее 10 включ.

±56

9 Обработка результатов измерений

9.1    8 соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения концентрации аналитов в анализируемой пробе.

9.2    Содержание /-го аналита X. мкг/кг. вычисляют по формуле

где С> — концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику, нг/см3;

Vi— объем, до которого разбавлена проба, см3;

т— масса анализируемой пробы, г.

9.3 За окончательный результат содержания анаболических стероидов и производных стильбена принимают среднеарифметическое значение результатов вычислений двух параллельных измерений, выполненных в условиях повторяемости, округленное до второго десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

10 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение определения содержания анаболических стероидов и производных стильбе на с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к-2. указанной в таблицах 11—13.

Т з 6 л и и а 11 — Показатели точности метода при определении содержания меленгесгрола ацетата, а-нортестостерона. Р-нортестостерона. а-тренболона. р-тренболона. а-эеараланола. Р-эеараланола. о-зеаралеиола е пробах печени__


Аналит

Диапазон измерений содержания анапига. мкг/кг

Значение относительной расширенной неопределенности.

{/. при коэффициенте охвата

к-2.%

Предел

повторяемости, г, % {при Р- 0.95. п -2)

а-Нортестостерок

От 2.0 до 30.0 еключ.

70

50

Р-Норгестостерон

От 2.0 до 30.0 еключ.

16

15

а-Тренболон

От 0.5 до 2.0 включ.

24

17

Св. 2.0 до 30.0 включ.

16

11

Р-Трвнболон

От 0.5 до 2.0 включ.

26

19

Св. 2.0 до 8.0 включ.

20

14

Св. 8.0 до 30.0 вкпсн.

12

8


Таблица12 - Показатели точности метода при проведении измерений содержания меленгестрола ацетата, а-нортестостерона. p-нортвстостерона. а-тренбопона. Р-тренболона, а-эеараланола. Р-зеараланопа.

Аналит

Диапазон измерений содержания аналита. мкг/кг

Значение относительной расширенной неопределенности.

U,. при коэффициенте охвата

к-2.%

Предел

повторяемости, г. % (при Р = 0.95. п - 2)

Мепвкгестрол

ацетат

От 0,2 до 5,0 включ.

20

14

а-Нортвстостврон

От 0.2 до 0.5 включ.

45

30

Се. 0.5 до 5.0 включ.

20

14

р-Нортестостерон.

а-Зеараланол

От 0.2 до 1.0 включ.

20

14

Св. 1.0 до5,0 включ.

16

5.5

Р-Зеараланол

От 0.2 до 5.0 включ.

12

8

а-Зеарапенол

От 0.2 до 0.5 включ.

20

14

Св. 0.5 до 5.0 включ.

14

8

а-Тренболон.

р-Тренболон

От 0.05 до 0,10 включ.

35

3

Св. 0.1 до 1.0 включ.

22

8

Св. 1.0 до 5,0 включ.

10

7


Тзблица13- Показатели точносги метода при определена содержания триамцинолона ацетомида. мегестрола ацетата, медроксипрогестерона. мегилболденона. 0-тестостерона. диэтилстильбэстрола. диенэстрола. гескэсгрола. лреднизопона. метиллреднизолона. дексаметаэона. метилтестостерона в пробах мяса, печени и комбикормов_

Амалит

Диапазон измерений содержания аналита. нш/о

Значение относительной расширенной

неопределенности. U . при коэффициенте охвата к « 2. %

Предел

повторяемости, г. % {при Р ■ 0.35. о • 2)

Гексэсгрол

От 0.5 до 30.0 вкпюч.

16

13

Диэтилстильбестрол

От 0.5 до 30.0 вкпюч.

34

15

Диенэстрол

От 2.0 до 30.0 вкпюч.

32

13

Мвгестрола ацетат

От 0.5 до 8.0 вкпюч.

54

50

Се. 8.0 до 30,0 8ключ.

26

29

Мед рокот рот естерон

От 0.5 до 30.0 вкпюч.

16

12

Метилболденон

От 0.5 до 2.0 включ.

20

10

От 2.0 до 30.0 включ.

17

15

Мегилгестостерон

От 0.5 до 2.0 включ.

64

28

Св. 2.0 до 30.0 включ.

44

37

0-Тестостерон

От 0.5 до 8.0 включ.

42

42

Се. 8.0 до 30,0 8ключ.

36

25

Триамцинолона ацетонид

От 2.0 до 3.0 включ.

21

13

Предниэолон

От 0.5 до 30,0 вкпюч.

65

15

Мегилпреднизопои

От 0.5 до 6.0 включ

46

13

Св. 8.0 до 30,0 включ.

54

50

Дексамвгазон

От 0.5 до 3.0 включ.

27

29

11    Оформление результатов измерений

Содержание йо анаболического стероида и производных стильбена. мкг/кг. представляют в виде

x,±o.oi u. х..    (2)

Где Л', — среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания но аналита в анализируемой пробе по 9.2. мкг/кг;

U, — значение относительной расширенной неопределенности содержания йо аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицами 11—13).

12    Контроль правильности результатов измерений

12.1    Для соблюдения требований настоящего стандарта рекомендуется в ходе анализа каждой серии проб проводить анализ контрольных проб с установленным значением содержания йо определяемого аналита с использованием стандартной процедуры подготовки проб (см. раздел 7).

12.2    Результаты измерений признают удовлетворительными при выполнении следующего неравенства

jx -x,|sx и, 0.01,    (3)

где х. — среднеарифметическое значение содержания йо определяемого аналита в анализируемой пробе, мкг/кг

х. — установленное значение содержания определяемого аналита в контрольной пробе, мкг/кг и — значение относительной расширенной неопределенности содержания определяемого аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицами 11—13).

12.3    Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6. используя контроль стабильности стандартного отклонения промежуточной прецизионности рутинного анализа с изменяющимися факторами «время» и «оператор» с использованием контрольных карт Шухарта.

УДК 637.638:614.3:006.354    МКС 65.120

67.050

67.120

Ключевые слова:    пищевые продукты, комбикорма, анаболические стероиды и производные

стильбена. метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-слектрометрическим детектированием

Редактор А.Э. Попова Корректор Л.С. Лысенко Компьютерная верстка Е.К. Кузиной

Подгмсано в печать 08.02.2016. Формат 60х84'/а.

Уел. пвч. л. 2,33. Тираж 42 экз. Зак. 59.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ»

123995 Москва. Гранатный пер.. 4.     

В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность {правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике». ^_^_^_В_Рос»1ЙС1ЮЙ_Фе2е£а1ЩИ>двйсте^етГОСТ_Р_ИС0^497—2011^!|^£ма£Г2^Ю18Огных;_Отбо£>п£об»^^^_

Издание официальное

' В Российской Федерации не действует.

   фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0.2 мкм;

•    виалы (флаконы) стеклянные вместимостью 2 см3 с завинчивающимися крышками:

•    виалы (флаконы) полипропиленовые или пробирки полипропиленовые вместимостью 15 и 50 см3 с завинчивающимися крышками;

•    колбы 1— 25<1000>-2 по ГОСТ 1770;

•    колбы конические Кн—1—250—29/32 ТС по ГОСТ 25336;

•    пипетки 2—2—1—5(10. 25) по ГОСТ 29227;

•    пипетки одноканальные переменной вместимости 5—25. 20—100. 200—1000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1 %;

-    пробирки П—2—10—14/23ХС по ГОСТ 1770:

-    цилиндры 1—25(50.1000)—1 по ГОСТ 1770.

5.2 При определении содержания аналитов применяют следующие реактивы:

•    ацетон по ГОСТ 2603;

•    натрий уксуснокислый (натрия ацетат) по ГОСТ 199, ч. д. а.;

•    кислоту уксусную по ГОСТ 61;

•    метанол, по ГОСТ 6995. х. ч.;

•    н-гексан. х. ч.;

•    эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетэт) по ГОСТ 22300. ч. д. а.;

•    азот газообразный марки 60 по ГОСТ 9293. ос. ч.;

•    сок пищеварительный виноградной улитки Helix pomatia. ч. д. а.;

•    эфир метил-третбутиловый для хроматографии;

. воду деионизованную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства ультрачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709.