База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных


ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана

Обозначение: ГОСТ 32201-2013
Наименование: Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана
Статус: Действует

Дата введения: 07/01/2015
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120
Скачать PDF: ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана.pdf
Скачать Word:ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана.doc


Текст ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

ГОСТ

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ


32201-

2013

(ISO 13904:2005)

КОРМА, КОМБИКОРМА

Метод определения содержания триптофана

(ISO 13904:2005, MOD)

Издание официальное

Москва

Стенда ртинформ 2014


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан» дартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКЛ»)

2    8НЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-

Дарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. Ne 44)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны

Коя страны

Сокращенное наиыеноаанне национального органа

по МК <ИСО 3166) 004-97

по МК {ИСО 3166) 004-97

по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Россия

RU

Росстандврт

Узбекистан

UZ

Узстандерт

4    Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту IS013904:2005 Animal feeding stuffs — Determination of tryptophan content (Корма для животных. Определение содержания триптофана).

Международный стандарт разработан подкомитетом ISO/TC 10 «Корма для животных» технического комитета по стандартизации 180ЯС 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (130).

Перевод с английского языка (еп).

Уточняющие отдельные слова, фразы, абзацы внесены в текст межгосударственного стандарта для приведения в соответствие с требованиями ГОСТ 1.5—2001. отраслевой терминологией и выделены курсивом. Дополнительные примечания, разделы, таблица и приложения выделены полужирным курсивом.

В настоящем стандарте заменены единицы измерения объема: «литр» на «кубический дециметр», «миллилитр» на «кубический сантиметр», для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5—2001 (пункг4.14.1).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного между* народного стандарта в соответствии с требованиями межгосударственной системы стандартизации и общепринятой отраслевой терминологией.

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.

Сравнение структуры международного стандарта со структурой межгосударственного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия — модифицированная (MOD)

5    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 201 Зг.Мв1698-ст межгосударственный стандартГОСТ32201—2013(18013904:2005)введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 8ВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2014

8 Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

in

Содержание

Приложение ДА (справочное) Сравнение структуры международного стандарта со структурой

ГОСТ 32201—2013 (IS013904:2005)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА Метод определения содержания триптофана

Feeds, compound feeds. Method for determination of tryptophan

Дата введения — 2015—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, а также на кормовые добавки, концентраты, премиксы, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения содержания свободного и общего (свободного и связанного) триптофана.

Данный метод не позволяет различить D- и L-стврвоизомеры триптофана.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 67—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118—77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4107—78 Реактивы. Бария гидроокись 8-водная. Технические условия ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 6552—80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496.0—80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 24104—2001** Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационное системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии е сети Интернет или ежегодному информационному указателю кНаииональные стандарты». который опубликован по состоянию на f января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя кНациональные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылке на него, применяется в части, не затрагивающей зту ссылку.

* в Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 6497—2011. '• в Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228—2006.

Издание официальное

3    Сущность метода

Для определения общего триптофана анализируемую пробу подвергают щелочному гидролизу в насыщенном растворе гидроксида бария и нагревают до температуры 110 *С е течение 20 ч. После гидролиза добавляют внутренний стандарт.

Для определения свободного триптофана экстракцию проводят в мягких кислых условиях в присутствии внутреннего стандарта.

Триптофан и внутренний стандарт в гидролизате или в экстракте определяют с помощью обратно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентной детекцией.

4    Лабораторное оборудование и посуда

4.1    Хроматограф жидкостный со спектрофлуоресцентным детектором.

4.2    Колонка хроматографическая размерами 125 х 4 мм, с наполнителем С с размером частиц 3 мкм или эквивалентным.

4.3    рН-мвтр.

4.4    Колба полипропиленовая вместимостью 125 см3 с широким горлышком и завинчивающейся крышкой.

4.5    Фильтр мембранный с размером пор 0.45 мкм.

4.6    Автоклав, способный поддерживать температуру (110±2)*С и давление [(140110) кПа (1.4 ±0.1)бар].

При использовании герметично закрывающихся емкостей (см. 4.9) допускается применение сушильного шкафа, поддерживающего температуру (110 ± 2) °С.

4.7    Шейкер механический или мешалка магнитная.

4.8    Вортекс-миксер.

4.9    Емкости герметично закрывающиеся, которые могут использоваться при температуре (11012) *С.

4.10    Колбы мерные 1(2)40(100.500.1000) — 2поГОСТ1770.

4.11    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью 10.0001 г.

4.12    Пипетки градуированные 1(2,3.5)-1(1а. 2. 2а)-1-1(2.5.10) по ГОСТ 29227.

4.13    Колбы конические Кн-2-250-ТХСпо ГОСТ25336.

4.14    Стаканы 8(Н)-1(2)-50(1000) ТХС по ГОСТ25336.

4.15    Сито с размером стороны квадратной ячейки 0.5 мм.

Примечание — Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов, по качеству не ниже указанных

5 Реактивы

5.1    Вода, дважды дистиллированная или вода эквивалентной чистоты (электропроводность менее 10 мкс/см).

5.2    Стандартный образец триптофана (с массовой долей основного вещества не менее 99 %}. высушенный в вакууме над пятиокисью фосфора.

5.3    Внутренний стандарт: а-метилтрилтофан (с массовой долей основного вещества не менее 99 %), высушенный в вакууме над пятиокисью фосфора.

5.4    Гидроокись бария 6-водная по ГОСТ 4107. х. ч.

Примечание — Следует избегать контакта 8в(ОН)г-8НгО с воздухом, чтобы исключить образование ВаСОз- который может мешать определению (см. приложение 4.3).

5.5    Натрия гидроокись по ГОСТ4328.

5.6    Кислота ортофосфорная с массовой допей 85 %.

5.7    Кислота соляная поГОСТ3116. концентрированная.р20 =1,19 г/см3.

5.8    Метанол по ГОСТ6995. степень чистоты для ВЭЖХ.

5.9    Эфир петролейный, с температурой кипения от 40 °С до 60 *С.

5.10    Кислота уксусная по ГОСТ 61.

5.11    Этаноламин с массовой долей основного вещества более 98 %.

5.f2 1.1.1 -Трихлор-2-метил-2-проланол.

Примечание — Допускается использование реактивов аналогичной или болев высокой квалификации. изготовленных по другой нормативной или технической документации, в том числе импортных.

6 Приготовление растворов

6.1    Приготовление раствора натрия гидроокиси молярной концентрации 1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) помещают 40.0 г гидроокиси натрия {см. 5.5). растворяют в воде (см. 5.1) и доводят объем раствора в колбе водой до метки.

6.2    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 6 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) вносят 492 см3 соляной кислоты (см. 5.7) и доводят объем раствора в колбе до метки водой (см. 5.1).

6.3    Приготоеление раствора соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) вносят 82 см3 соляной кислоты (см. 5.7) и доводят объем раствора в колбе до метки водой (см. 5.1).

6.4    Приготоеление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0.1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) вносят8,2 см3 соляной кислоты (см. 5.7) и доводят объем раствора до метки в колбе водой (см. 5.1).

6.5    Приготовление раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации

0.5 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) помещают 34 см3 ортофосфорной кислоты (см. 5.6) и доводят объем раствора е колбе до метки водой (см. 5.1).

6.6    Приготоеление концентрированного раствора триптофана массовой концентрации

0,5 мг/см3

6 мерную колбу вместимостью 500 см3 (см. 4.10) помещают (0.2500 ± 0.0001) г стандартного образца триптофана (см. 5.2), добавляют раствор соляной кислоты молярной концентрации 0.1 моль/дм3 (см. 6.4) и после растворения доводят объем раствора до метки в колбе этим же раствором соляной кислоты.

Раствор хранят при температуре минус 18 °С не более четырех недель.

6.7    Приготоеление концентрированного раствора внутреннего стандарта массовой

концентрации 0,54 мг/см3

8 мерную колбу вместимостью 500 см3 (см. 4.10) помещают (0.2700 ± 0.0001) г внутреннего стандарта (ы-метилтрипгофана) (см. 5.3). добавляют раствор соляной кислоты молярной концентрации 0.1 моль/дм3 (см. 6.4) и после растворения этим же раствором соляной кислоты доводят объем раствора в колбе до метки.

Раствор хранят при температуре минус 18 ‘С не более четырех недель.

6.8    Приготовление градуировочного раствора стандарта образца триптофана и

внутреннего стандарта

2.00см3концектрироеанного раствора триптофана (см. 6.6)и 2,00 см3 концентрированного раствора внутреннего стандарта (сс-метилтриптофан) (см. 6.7) разбавляют в смеси воды (см. 5.1) с метанолом (см. 5.8) при мерно втаком же объемеиконцентрацииметанола(10%—30%)кэкв готовом гидролизате.

Раствор готовят только перед использованием.

Во время подготовки необходимо защищать раствор от прямых солнечных лучей.

6.9    Приготовление раствора 1.1,1-трихлор-2-метил-2-пропанол е метаноле

В мерную колбу вместимостью 100 см3 (см. 4.10) помещают 1 г 1.1,1-трихлор-2-метил-2-пропа* нол (см. 5.12) и доводят объем раствора в колбе до метки метанолом (см. 5.8).

6.10    Приготоеление подвижной фазы для ВЭЖХ

В стакан вместимостью 1000 см3 (см. 4.14) наливают 900 см3 воды (см. 5.1), растворяют в ней

3.00 г уксусной кислоты (см. 5.10) и добавляют 50 см3 раствора 1.1.1-трихлор-2-метил-2-лроланола (см. 6.9). Доводят значение pH до 5,00 этаноламином (см. 5.11), переливают раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 4.10) и доводят объем раствора в колбе до метки водой.

з

7    Отбор Проб

Отбор проб — по ГОСТ 13496.0.

8    Подготовка проб

Пробу тщательно перемешивают и измельчают до прохода через сито (см. 4.15). Перед измельчением пробы с высокой влажностью должны быть высушены при температуре не выше 50 *С или лиофи-лизированы. а пробы с высоким содержанием жира — обезжирены петролейным эфиром (см. 5.9).

9    Проведение испытания

9.1    Определение свободного триптофана (экстракция)

На еесах (см. 4.11) взвешивают от (1.000 ± 0,001) г до {5.000 ± 0,001) г пробы, подготовленной в соответствии с разделом 6. и количественно переносят в коническую колбу (см. 4.13).

Добавляют 100 см3 соляной кислоты (см. 6.4) и 5.00 см3 концентрированного внутреннего стандарта (см. 5.5). Встряхивают или перемешивают в течение 60 мин с помощью механического шейкера или магнитной мешалки (см. 4.7). Раствору дают отстояться, затем переносят пипеткой (см. 4.12) 10.0 смнадосадочной жидкости в стакан (см. 4.14). Добавляют 5 см3ортофосфорной кислоты (см. 5.5) и доводят значение pH до 3.0 ед. pH раствором гидроксида натрия (см. 6.1). Добавляют достаточное количество метанола (см. 5.8), чтобы получить концентрациюот 10 % до 30 % метанола в конечном объеме. Переио* сятв мерную колбу соответствующей вместимости и разбавляют водой (см. 5.1) до объема, необходимого для хроматографии [приблизительно тот же объем, как в градуировочном растворе стандарта (см. 6.5)).

Перед введением в колонку высокоэффективного жидкостного хроматографа несколько кубических сантиметров раствора следует профильтровать через мембранный фильтр (см. 4.5). Хроматографию проводят в соответствии с 9.3.

Стандартные растворы и экстракты необходимо защищать от прямых солнечных лучей. Если полученный экстракт невозможно проанализировать ВЭЖХ в тот же день, его хранят не более трех дней при температуре ниже 5 ®С.

9.2    Определение общего триптофана (гидролиз)

В полипропиленовую колбу вместимостью 125 см3 (см. 4.4) помещают от (0.1000 ± 0.0002) г до (1,0000 ±0.0002) г подготовленной пробы. Взятая анализируемая проба должна содержать около О.ОЮОгазота.

В колбу добавляют 8.4 г гидроокиси бария (см. 5.4) и 10 см3 воды (см. 5.1). Перемешивают с помощью миксера (см. 4 8) или магнитной мешалки (см. 4.7), магнит которой должен быть покрыт тефлоном. Обмывают стенки сосуда 4 см3 воды (см. 5.1). плотно закрывают крышкой и помещают в автоклав или сушильный шкаф (см. 4.6), прогретый в течение 30—60 мин. Закрывают автоклав или сушильный шкаф и выдерживают пробу при температуре (110 ± 2) “С в течение 20 ч.

Лередоткрытием автоклава температуру необходимоснизить до 100 *С. Для того чтобы избежать кристаллизации гидроокиси бария, добавляют в теплую смесь 30 см3 воды (см. 5.1) комнатной температуры. встряхивают или осторожно перемешивают. В полученный распзвор добавляют 2.00 см3 концентрированного внутреннего стандартного раствора («-метилтрилтофэн) (см. 6.7). Охлаждают сосуд в воде или на ледяной бане в течение 15 мин.

В охлажденный гидролизат добавляют 5 см3 ортофосфорной кислоты (см. 5.6). На охлаждающей бане нейтрализуют раствор с помощью раствора соляной кислоты молярной концентрации 6 моль1дм(см. 6.2) при перемешивании и доводят значение pH до 3.0 ед. pH с помощью раствора соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм3 (см. б.З).Добавляютметанолдо получения концентрацииот 10% до 30 % метанола в конечном объеме. Переносят в мерную колбу соответствующей вместимости и разбавляют водой (см. 5.1) до объема, необходимого для хроматографии (например. 100 см*). При добавлении метанола не должен образовываться осадок.

Перед введением в колонку высокоэффективного жидкостного хромалк>графа несколько кубических сантиметров раствора следует профильтровать через мембранный фильтр (см. 4.5).

Стандартныерастворыиэкстракты необходимо за щищатьот прямых солнечныхлучей. Если полученный экстракт невозможно проанализировать ВЭЖХ в тот же день, его следует хранить не более трех дней при температуре ниже 5 ®С.

Хроматографию проводят в соответствии с 9.3.

9.3 Хроматография

Рекомендуемые условия для изократическогоэлюирования приведены втабпице 1. Допускается применение других параметров, приведенных в приложении А (А.1. А.2). при условии, что получаемые результаты будут не хуже.

Таблице 1

Наименование параметра

Значение и характеристика параметра

Хроматографическая колонка

См. 4 2

Температура колонки

Комнатная температура

Подвижная фаза

См. б. ГО

Скорость потока

1 cmVmuh

Общее время работы

Около 34 мин

Длина волны

Возбуждения: 280 нм. эмиссии: 356 нм

Объем инжекции

20 мм3

10    Обработка результатов

Содержание триптофана w. %, вычисляют по формуле

... _ А*г»/ А'У.«»»'Чт

W ■    (1)

А. Ay,«i'V|jt,i 'М

где A,s СЛ1 — площадь пика внутреннего стандарта в градуировочном стандартном растворе;

AUf мп| — площадь пика триптофана в экстракте или гидролизате;

V1 —объем концентрированного раствора триптофана, добавленный в градуировочный стандартный раствор, см3 (2.00 см3}:

с1(>, —молярная концентрация концентрированного раствора триптофана, добавленного в градуи-ровочный стандартный раствор, г/см3 (2.50 г/см3);

V, 4А01 — объем концентрированного раствора внутреннего стандарта, добавленный в экстракт или гидролизат, см3 (5,00 или 2.00 см3 соответственно);

100 — коэффициент пересчета е проценты;

А* *«» — площадь пика внутреннего стандарта в экстракте или гидролизате;

А, , — площадь пика триптофана в стандартном растворе;

Vu cal — объем концентрированного раствора внутреннего стандарта, добавленный е градуировочный стандартный раствор, см3 <2.00 см3);

m — масса анализируемой пробы (с поправкой на первоначальную массу, для сухих и/или обезжиренных образцов), г.

11    Прецизионность

11.1    Межлабораторные испытания

Результаты межлабораторных испытаний прецизионности метода приведены в приложении Б. Значения, полученные в этих межлабораторных испытаниях, не могут быть применимы к диапазонам концентраций и пробам, отличающимся от описанных в настоящем стандарте.

11.2    Повторяемость

Абсолютноерасхождение между результатами двух отдельных независимых испытаний, полученными одним и тем же методом на одной испытуемой пробе в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же экземпляре оборудования в течение короткого промежутка времени, не должно превышать предел повторяемости (г), указанный в таблицах Б. 1—5.3. более чем в 5 % случаев.

11.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных испытаний, полученными одним и тем же методом на одной испытуемой пробе в разных лабораториях разными операторами на различных экземплярах оборудования, не должно превышать предела воспроизводимости (R). указанного в таблицах Б.1— 6.3. более чем в 5 % случаев.

12 Протокол испытания

Протокол испытания должен содержать следующую информацию:

-    всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

-    используемый метод отбора проб, если известен;

•    используемый метод определения со ссылкой на настоящий стандарт;

-    все детали испытаний, нб указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несу-щественные, которые могли повлиять на реэультаг(ы) испытания;

•    полученный результат испытания или среднеарифметическое значение результатое двух испытаний, если проверена повторяемость.

Уточнения по выполнению измерений

А.1 Лучшее разделение между триптофаном и а-метилтрилтофаном могут дать специальные условий хроматографии.

Условий иэократического элюирований с последующим градиентом промывки колонки приведены в таблице А.1.

Таблица А.1

Наименование параметра


Значение о характеристика параметра


Жидкостная хроматографическая колонка


125 «4мм. с наполнителем С>«. с размером частиц 5мкм


Температура колонки Подвижная фаза


или эквивалентным

32 ‘С_

А: раствор калия фосфорнокислого однозамещенного молярной концентрации 0.01 моль/дм*/метанол в объемном соотношении 95:5;


Б: метанол


Программа градиента


0 мин

100% А

0% Б

15 мин

100 % А

0% Б

17 мин

60% А

40% 6

19 мин

60% А

40% 6

21 мин

100% А

0% 6

33 мин

100% А

0% 6


Скорость потока Общее время работы


1.2 си*/мин


Около 33 мин


А.2 Хроматографий будет варьироваться взависимости от типа используемого наполнителя 6ЭЖХ колонки, выбранная система должна давать достаточное разделение между триптофаном и внутренним стандартом. Кроме того, важно, чтобы продукты гидролиза хорошо отделялись от триптофана и внутреннего стандарта. Для подтверждения правильности выбора основного пика должен быть проанализирован гидролизат без внутреннего стандарта. Важно, чтобы время выполнения анализа было достаточно длительным для элюирования всех продуктов разложения, иначе поздно элюированные пики могут помешать при последующих запусках хроматографии.

Хроматография должна давать линейную зависимость во всем диапазоне измерений. Линейность следует проверять с постоянной (нормальной) массовой концентрацией внутреннего стандарта и различными массовыми концентрациями триптофана. Важно, чтобы размер пиков триптофана и внутреннего стандарта были в пределах линейного диапазона ВЭЖХГфлуоресцвнции системы. Если один из пиков триптофвна иГили внутреннегостандар-та(ов), слишком мел или слишком велик, анализ следует повторить с другой массовой концентрацией и/или с измененным конечным объемом.

А.З Со временем гидроксид бария растворяется хуже. 8 результате неочищенный раствор для определения ВЭЖХ может привести к ухудшению результатов определения триптофана.

Результаты межлабораторных испытаний

Межлабораторные испытания были организованы в рамках Европейского союза, в которых определение общего триптофана, извлеченного с помощью гидролиза, было проведено на трех пробах в 12 лабораториях. Для каждой пробы было проведено пять повторных анализов. Результаты приведены а таблице 6.1.

Таблица 6.1

Наименование полазатвп»

Проба 1. Корм дпя свиней

Проба 2.

Корм для сеинеи. обогащенный L-трилтофаноы

Проба 3.

Концентрированный коры для свиней

Количество лабораторий, представивших результаты

12

12

12

Количество приемлемых результатов испытаний лабораторий

50

55

50

Среднее значение х. г/кг

2.42

3.40

4.22

Стандартное отклонение повторяемости $„ г/кг

0.05

0.0S

0.06

Относительное стандартное отклонение повторяемости. %

1.9

1.6

1.9

Предел повторяемости г (a 2.8s,). г/кг

0.14

0.14

0.22

Стандартное отклонение воспроизводимости $,. г/кг

0.15

0.20

0.09

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости. %

6.3

6.0

2.2

Предел воспроизводимости. R (« 2.8s*). г/кг

0.42

0.56

0.25

в других межлабораторных испытаниях определение свободного триптофана с помощью экстракции было проведено на двух пробах в 13 аккредитованных лабораториях. Для каждого образца было проведено пять повторных анализов. Результаты приведены в таблице 6.2.

Таблица 6.2

Наименование лоха допел*

Проба 4.

Смесь пшеницы и сои

Проба 5.

Сыесь пшеницы и сои (образец 4) с добавлением триптофане <0,45? г/м)

Количество лабораторий, представивших результаты

12

12

Количество приемлемых результатов испытаний лабораторий

55

60

Среднее значение х. г/кг

0.391

0.931

Стандартное отклонение повторяемости $„ г/кг

0.005

0.012

Относительное стандартное отклонение повторяемости. %

1.34

1.34

Предел повторяемости г(« 2.8$,). г/кг

0.014

0.034

Стандартное отклонение воспроизводимости г/кг

0.016

0.048

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости. %

4.71

5.11

Предел воспроизводимости R (* 2.8$*). г/кг

0.05

0.134

В-третьих ыежлебореторных испытаниях определение общего триптофана с помощью гидролизе было проведено на четырех пробах в семи аккредитованных лабораториях. Для каждого образца было проведено пять повторных анализов. Результаты приведены в таблице 6.3.

Таблица Б.З

Наименование показателя

Проба 1. Комбикорма для свиней (CRM 11?)

Проба 2. Корм для нежирной рыбы (CRM Ив)

Проба 3. Кори из сои (CRM 119)

Проба 4. Сухое

обезжиренное молоко (CRM 120)

Количество лабораторий, представивших результаты

7

7

7

7

Количество приемлемых результатов испытаний лабораторий

25

30

30

30

Среднее значение х. г/кг

2.064

6.601

6.662

5.236

Стандартное отклонение повторяемости в» г/кг

0.021

0.101

0.089

0.040

Относительное стандартное отклонение повторяемости. %

1.04

1.1S

1.30

0.76

Предел повторяемости г{■ 2.6s,). г/кг

0.OS9

0.263

0.249

0.112

Стандартное отклонение воспроизводимости а,, г/кг

0.031

0.413

0.263

0.221

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости. %

1.46

4.69

4.11

4.22

Предел воспроизводимости R (■ 2.63*). г/кг

0.087

1.156

0.792

0.619

Сравнение структуры международного стандарта со структурой межгосударственного стандарта

Таблица ДА. 1

Структура иеждународного стандарта

Структура ые* государственного стандарта

подраздел

пункт

подраздел

пункт

Раздал 1

Раздел f

Раздел 2

Раздал 2

Раздел 3

Раздел 3

Разделы 5. 6

3.1

5.1

3.2

5.2

3.3

5.3

5.4

3.4

5.5

3.5

5.6

3.6

5.7

3.7

5.8

3.8

5.9

5.10

3.9

5.11

3.10

6.1

3.11

6.2

3.12

6.3

3.13

6.4

3.14

6.5

3.15

6.6

3.16

6.7

3.17

6.8

3.18

5.11

3.19

6.9

3.20

6.10

Раздел 4

Раздел 4

4.1

4.1

4.2

4.2

4.3

4.3

4.4

4.4

4.5

4.5

4.6

4.6

4.7

4.7

Окончание таблицы ДА.1

Структура международного стандарта

Структура межгосударственного стандарта

подраздел

пункт

подраздел

пункт

4. а

4.8

4.9

4.10

4.11

4.12

4.13

4.14

Раздел 7

Раздел 5

Разделы 8. 9

5.1

Раздел 8

5.2

9.1

5.5

9.2

5.4

9.3

Раздел б

Раздел 10

Раздел 7

Раздел 11

Раздал 8

Раздел 12

Приложение ДА (справочное) Сравнение структуры международного стандарте со структурой межгосударственного стандарте

Примечания

1    в соответствиис ГОСТ 1.8—2001 а настоящий стандарт добавлен раздел 2 «Нормативные ссылки».

2    Раздел 3 международного стандарта «Реактивы и материалы» представлен е настоящем стандарте разделом 5 «Реактивы» и разделом 6 «Приготовление растворов».

3    8 раздел 5 настоящего стандарта введены подразделы с неуказанными в международном стандарте реактивами.

4    Раздал 4 настоящего стандарта дополнен подразделами с указанием используемого оборудования.

5    В раздел 4 настоящего стандарта добавлены подразделы 4.9—4.14 с учетом требований к используемому дополнительному оборудованию для проведения испытания в России.

6    В соответствии с ГОСТ 1.6—2001 е настоящий стандарт добавлен раздел 7 «Отбор проб».

7    В соответствии с ГОСТ 1.8—2001 подраздел 5.1 международного стандарта «Подготовка образцов» в настоящем стандарта представлен разделом 7 «Подготовка проб».

8    В соответствии с ГОСТ 1.5— 2001 и ГОСТ 1.3—2008 в настоящий стандарт добавлено приложение ДА (справочное) «Сравнение структуры международного стандарта со структурой межгосударственного стандарта».

Библиография

[1] Commission Directive 2000/45/ЕС of 6 July 2000. establishing Community methods of analysis for the determination of vitamin A. vitamin E and tryptophan In feedmgstuffs

УДК 636.085.3:006.354    МКС 65.120    C19    MOD

Ключевые слова: корма, комбикорма, метод, триптофан, экстракция, щелочной гидролиз, обратно* фазная ВЭЖХ

Редактор U.E. Никулина Технический редактор £.в Беспроблемная Корректор е.И. верениоеа Компьютерная верстка ИА. Нзлейтнои

Сдано е набор 17 10.2014. Подписано в печать 0в.11.2014. Формат 80*&4^£. Гарнитура Ариел. Усп. печ. л. 1.86. Уч.'изд. л. 1.40. Тирах 50 эо. Зек 4433.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДЛРТИНФОРМ». 12399S Москва, Гранатный пер.. 4. wtvw.gottinro.iu