База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных

ГОСТ 34140-2017 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Обозначение: ГОСТ 34140-2017
Наименование: Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Статус: Принят

Дата введения: 07/01/2018
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120, 67.050, 67.060
Скачать PDF: ГОСТ 34140-2017 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.pdf
Скачать Word:ГОСТ 34140-2017 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.doc


Текст ГОСТ 34140-2017 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

34140-

2017

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Издание официальное

СШ1ЛТТМ1фП[М

2И7

ГОСТ 34140—2017

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан* дартизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, при* нятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 1 июня 2017 г. Ne 51*2017)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны

по мк (исо 31 ее) ооа-97

Код страны по МК (ИСО 31М> 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргыэстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Уэстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 июля 2017 г. № 719-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34140—2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публинуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены наслюящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2017

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ 34140—2017

Содержание

1    Область применения..................................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................................1

3    Сущность метода.....................................................................2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений.................................2

5    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы..............2

6    Подготовка к проведению измерений.....................................................4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов.........................................4

6.2    Приготовление растворов..........................................................5

6.3    Приготовление градуировочных растворов............................................5

7    Отбор и подготовка проб...............................................................9

7.1    Отбор проб......................................................................9

7.2    Подготовка проб..................................................................9

8    Порядок выполнения анализа.........................................................10

8.1    Условия хроматографических измерений............................................10

8.2    Построение градуировочной характеристики..........................................12

8.3    ВЭЖХ-МС/МС измерение.........................................................12

9    Метрологические характеристики......................................................12

10 Обработка результатов измерений....................................................18

11 Оформление результатов измерений...................................................18

12    Контроль правильности и прецизионности результатов измерений..........................18

ГОСТ 34140—2017

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Food products, feed, food raw materials. Method for determination of mycotoxins by high performance liquid

chromatography — mass spectrometry

Дата введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевую продукцию, продовольственное сырье в части зерновых культур, корма, кормовое сырье в части зерновых и масличных культур, комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания микотоксинов.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79* Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085—2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ 61—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6—2003** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ ISO 6497—2014 Корма. Отбор проб ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496.0—2016 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3—2015 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

‘ В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатуре видов зашиты».

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

Издание официальное

1

ГОСТ 34140—2017

ГОСТ 13979.0—86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 22300—76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 26312.1—84 Крупа. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 27668—88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национатъные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочньы стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на экстракции микотоксинов из анализируемой пробы, идентификации и количественном определении их по площадям пиков ион-продуктов с помощью градуировочной характеристики методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга выбранных реакций (МРМ).

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые е работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007. при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085.

4.5    Применяемые средства измерений должны иметь свидетельства о поверке, вспомогательные устройства — свидетельства об аттестации, оформленные в соответствии с требованиями национального законодательства а области обеспечения единства измерений.

4.6    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой 8ЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.7    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха...................от 15*С до 30 ®С:

* относительная влажность воздуха.....................от 20 % до 80 %.

5 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и

реактивы

5.1 Для измерения содержания микотоксинов применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и посуду:

•    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой погрешности не более ± 0.001 г;

•    весы высокого (II) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.02 мг:

- масс-спектрометр с квадрупольиым анализатором с диапазоном измерений от 50 до 800 атомных единиц массы (а. е. м). массовым разрешением не менее 1.0 а. е. м на полувысоте пика, с погрешностью измерений массы не более ± 0.5 а. е. м. с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС):

•    систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из градиентного насоса. системы фильтрования и дегазации подвижных фаз. термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (40 ± 1) вС;

2

ГОСТ 34140—2017

•    колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фаэовым сорбентом С18 с размером частиц не более 5 мкм. длиной 150 мм и внутренним диаметром 2.1 мм:

•    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений:

•    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3;

•    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 15 *С до минус 25 °С;

•    мельницу лабораторную:

•    сито лабораторное металлическое с ячейкой 0.5 мм:

-    систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;

•    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 2 *С до 8 *С;

•    центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 3500 g и с адаптерами для пробирок вместимостью 50 см3;

•    центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 15 000 g и с адаптерами для микроцентрифужкых пробирок;

•    шейкер вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин:

•    шейкер качающийся с частотой встряхивания от 2 до 50 об/мин;

•    шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 200 ®С и погрешностью поддержания заданной температуры не более ± 5 *С;

•    пробы, не содержащие микотоксинов, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы («чистые» пробы)*;

-    фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0,45 мкм;

•    виалы (флаконы) полипропиленовые или пробирки полипропиленовые вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками;

•    колбы 2—10—1 с пришлифованными пробками по ГОСТ 1770:

-    колбы 1—100(1000)—2 по ГОСТ 1770;

•    пипетки одноканальные переменной вместимости 20—200 мм3 с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ± 1.5 %;

•    пипетки одноканальные переменной вместимости 100—1000 мм3 с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ± 1 %;

•    пробирки микроценгрифужные полипропиленовые вместимостью 1.5 см3;

-    цилиндры 1—10(100.1000)—1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении содержания микотоксинов применяют следующие реактивы:

•    ацетат аммония с массовой долей основного вещества не менее 99.0 %;

-    ацетон по ГОСТ 2603;

•    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %:

•    воду деионизированную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства уль-трачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709:

•    кислоту уксусную по ГОСТ 61;

-    метанол по ГОСТ 6995. х. ч;

•    эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300, ч. д. а.

5.3    При измерении содержания микотоксинов в качестве образцов сравнения для приготовления исходных растворов применяют соединения с массовой долей основного вещества не менее 97.0 %:

•    З-ацетил-деэоксиниваленол;

•    15-ацетил-дезоксиниваленол;

•    агроклаеин;

-    альтернариол:

•    альтернариола-метиловый эфир;

•    Допускается в «чистых» пробах присутствие микотоксинов на уровне не более 0.2 % от нижнего градуировочного уровня для каждого мжотоксина.

3

ГОСТ 34140—2017

•    афлатоксин В,;

•    афлатоксин В2;

•    афлатоксин G,;

•    афлатоксин G2;

•    боверицин;

•    еортманнин:

•    глиотоксин;

•    гризеофульвин:

-    деэоксиниааленол;

•    деэоксиниваленол-3-гпюкоэид;

-    деэлоксидезоксиниваленол;

-    диацетоксисцирпенол:

•    эеараленон;

•    койевая кислота;

•    мелеагрин.

•    микофеноловую кислоту;

•    монилиформин;

-    НТ-2 токсин;

•    неосоланиол;

•    ниваленол;

•    охратоксин А;

•    охратоксин В;

•    паксиллин;

-    патулин;

•    пенициллиновая кислота;

-    рокфортин С;

-    popидин А;

•    стахиботрилактам;

•    стеригматоцистин:

-    Т-2 тетраол;

-    Т-2 токсин;

-    Т-2 триол;

-    тектоксин;

•    тенуазоновая кислота;

-    фу заре мои X;

•    фузариевая кислота;

•    фумагиллин;

-    фумонизин В,;

•    фумонизин В2:

•    фумонизин Вэ;

-    циклоп иазоновая кислота:

•    цитреовиридин:

•    цитринин;

-    эргокоркин.

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также вспомогательных устройств, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

4

ГОСТ 34140—2017

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной лосуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 ‘С до 110 ®С.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление растворов подвижных фаз А и В

6.2.1.1    Подвижная фаза А

Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 890 см3 деионизированной воды, добавляют 100 см3 метанола. 10 см3 уксусной кислоты и 0.2 г ацетата аммония. перемешивают.

6.2.1.2    Подвижная фаза Б

Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 970 см3 метанола, добавляют 20 см3 деионизированной воды. 10 см3 уксусной кислоты и 0,2 г ацетата аммония, перемешивают.

Срок хранения растворов при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.2.2    Приготовление раствора для экстракции

6 мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 790 см3 ацетонитрила. 200 см3 деионизированной воды и 10 см3 уксусной кислоты, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

Для приготовления исходных растворов С0 с массовой концентрацией 1000 мкг/см3 или С0' с массовой концентрацией 100 мкг/см3 для каждого микотоксина рассчитывают необходимую массу /-го вещества. мг. с точностью до первого десятичного знака, с учетом содержания основного вещества по формуле

т> в%^"10°1    О)

где С0 — концентрация исходного раствора, мкг/см3;

V — объем мерной колбы, см3;

Pj — массовая доля основного вещества. %.

6.3.1    Приготовление исходных растворов С0 фумонизина В,, фумонизина В2, фумокизи-на В3, фузариевой кислоты, койевой кислоты

Для приготовления исходных растворов С0 с массовой концентрацией 1000 мкг/см3 в мерные колбы вместимостью 10 см3 вносят по отдельности рассчитанные массы фумонизина B1t фумонизина В2. фумонизина Вэ. фузариевой кислоты, койевой кислоты. Добавляют 8 см3 ацетонитрила, перемешивают. помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

6.3.2    Приготовление исходных растворов Сф

Для приготовления исходных растворов с массовой концентрацией 100 мкг/см3 в мерные колбы вместимостью 10 см3 вносят по отдельности рассчитанные массы микотоксинов, перечисленных в

5.3 (за исключением микотоксинов, указанных в 6.3.1). Добавляют 8 см3 ацетонитрила, перемешивают, помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Срок хранения растворов С0 и Q, при температуре от минус 15 *С до минус 25 ‘С — не более 12 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.3    Приготовление рабочего раствора микотоксинов С,

Для приготовления рабочего раствора С, в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят исходные растворы С0 и Сф в объемах, указанных в таблице 1. и доводят до метки ацетонитрилом.

5

ГОСТ 34140—2017

Таблица 1 — Вносимый объем исходных растворов С0 и Cq

Микоюхсин

Массовая концентрация ыикотохсииа а исходном растворе С0 или Cg. mit/cw*

Вносимым объем исходных растворов Cg ИЛИ Cg. см*

Массовая концентрация микотоксниа в рабочем растворе С,, мкг/см*

З-Ацетл-деэоксиниваленол

100

100

1.0

15-Ацетил-дезоксикиааленол

too

100

1.0

Агроклавин

100

100

1.0

Альтернариол

100

100

1.0

Альтернариола-метиловый эфир

100

100

1.0

Афлатоксин В,

100

10

0.1

Афлатоксин В2

100

10

0.1

Афлатоксин G,

100

10

0.1

Афлатоксин G2

100

10

0.1

Боверицин

100

500

5.0

Вортманнин

100

100

1.0

Глио токсин

100

100

1.0

Гриэеофульвин

100

100

1.0

Деэоксиниваленол

100

500

5.0

Деэоксиниваленол-З-глюкозид

100

500

5.0

Деэпокси-деэоксиниваленол

100

100

1.0

Диацегоксисцирпенол

100

100

1.0

Зеэраленон

100

200

2.0

Койевая кислота

1000

100

10.0

Мелеагрин

100

100

1.0

Микофеноловая кислота

100

100

1.0

Монилиформин

100

100

1.0

НТ-2 токсин

100

100

1.0

Неосоланиол

100

100

1.0

Ниаапенол

100

500

5.0

ОхратоксинА

100

10

0.1

Охрэтоксин В

100

10

0.1

Паксиллин

100

10

0.1

Пагулин

100

100

1.0

Пенициллиновая кислота

100

100

1.0

Рокфортин С

100

100

1.0

Роридин А

100

100

1.0

Стахиботрилактам

100

100

1.0

Стеригматоцистин

100

100

1.0

б

ГОСТ 34140—2017

Окончание таблицы 1

Микотоксии

Массовая концентрация мнхотоксииа в исходном растворе Cqvmih Cq, мкг/см3

Вносимый объем исходных растворов СфИли Сд, сы3

Массовая концентрация михоюксииа в рабочем расгеоре С,, мм/см3

Т-2 тетраол

100

100

1.0

Т-2 токсин

100

100

1.0

Т-2 триол

100

100

1.0

Тентоксин

100

100

1.0

Тенуазоновая кислота

100

100

1.0

Фузаренон X

100

500

5.0

Фуэариевая кислота

1000

100

10.0

Фумагиллим

100

100

1.0

Фумонизин В,

1000

100

10.0

Фумонизин В2

1000

100

10.0

Фумонизин В3

1000

100

10.0

Циклопиазоновая кислота

100

100

1.0

Цитреовиридин

100

100

1.0

Цитринин

100

500

5.0

Эргокорнин

100

100

1.0

6.3.4    Приготовление рабочего раствора микотоксинов С2

8 мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1.0 см3 рабочего раствора С,, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

Растворы Ci и Сохранят при температуре от 2 °С до 8 вС не более 6 мес.

6.3.5    Приготовление матричных градуировочных растворов микотоксинов G1—GМатричные градуировочные растворы G,—Ge готовят в микроцектрифужных пробирках путем

обработки экстрактов «чистых» проб согласно разделу 7. в которые вносят рабочие растворы определяемых микотоксинов С, и С2 в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G,—G6

Матричный градуировочный рос теор

Вносимый объем

подвижной фам А. мм3

рабочею раствора Су мм3

рабочею раствора Cj. мм3

экстракта «чистой» пробы, мм3

G1

490

10

500

G2

480

20

500

G3

400

100

500

g4

480

20

500

400

100

500

G6

300

200

500

Массовые концентрации микотоксинов в матричных градуировочных растворах приведены в таблице 3.

7

ГОСТ 34140—2017

Таблица 3 — Массовые концентрации михотоксиное в матричных градуировочных растворах

Микотоксин

Массовая концентрация микотоксина. нтГсм3

«т

б2

«3

б4

б5

З-Ацетил-деэоксиниваленол

1.0

2.0

10

20

100

200

15-Ацетил-двзоксинивапвнол

1.0

2.0

10

20

100

200

Агроклавин

1.0

2.0

10

20

100

200

Альтернариол

1.0

2.0

10

20

100

200

Альтернариола-метиловый эфир

1.0

2.0

10

20

100

200

Афлатоксин В,

0.1

0.2

1

2

10

20

Афлатоксин В2

0.1

0.2

1

2

10

20

Афлатоксин G,

0.1

0.2

1

2

10

20

Афлатоксин

0.1

0.2

1

2

10

20

Боверицин

5.0

10.0

50

100

500

1000

Вортмакнин

1.0

2.0

10

20

100

200

Глио токсин

1.0

2.0

10

20

100

200

Гриэеофугъвин

1.0

2.0

10

20

100

200

Деэоксиниваленол

5.0

10.0

50

100

500

1000

Двэоксиниваленол-З-глкжоэид

5.0

10.0

50

100

500

1000

Деэпоксн-деэоксиниааленол

1.0

2.0

10

20

100

200

Диацетоксисцирпвнол

1.0

2.0

10

20

100

200

Зеаралвнон

2

4.0

20

40

200

400

Койевая кислота

10.0

20.0

100

200

1000

2000

Мелеагрин

1.0

2.0

10

20

100

200

Микофеноловая кислота

1.0

2.0

10

20

100

200

Монилиформин

1.0

2.0

10

20

100

200

НТ-2 токсин

1.0

2.0

10

20

100

200

Неосолэниол

1.0

2.0

10

20

100

200

Ниааленол

5.0

10,0

50

100

500

1000

Охратоксин А

0.1

0.2

1

2

10

20

Охратоксин В

0.1

0.2

1

2

10

20

Паксиллин

0.1

0.2

1

2

10

20

Пагулин

1.0

2.0

10

20

100

200

Пенициллиновая кислота

1.0

2.0

10

20

100

200

Рокфортин С

1.0

2.0

10

20

100

200

Роридин А

1.0

2.0

10

20

100

200

Стахиботрилактам

1.0

2.0

10

20

100

200

Стеригматоцистин

1.0

2.0

10

20

100

200

8

ГОСТ 34140—2017

Окончание таблицы 3

Микотокскн

Массовая концентрация миютоксина. иг/см3

Gl

*3

б4

в*

<?в

Т-2 тетраол

1.0

2.0

10

20

100

200

Т-2 токсин

1.0

2.0

10

20

100

200

Т-2 триол

1.0

2.0

10

20

100

200

Тентоксин

1.0

2.0

10

20

100

200

Тенуазоновая кислота

1.0

2.0

10

20

100

200

Фузаренон X

5.0

10.0

50

100

500

1000

Фуэариееая кислота

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумэгиллин

1.0

2.0

10

20

100

200

Фумонизин В,

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумонизин В2

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумонизин Bj

10,0

20

100

200

1000

2000

Циклопиазоновая кислота

1.0

2.0

10

20

100

200

Цитреовиридин

1.0

2.0

10

20

100

200

Цитринин

5.0

10.0

50

100

500

1000

Эргокорнин

1.0

2.0

10

20

100

200

Пробирки встряхивают в вибрационном шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.

Срок хранения растворов G.,—6в при температуре от 2 *С до 8 *С — не более 72 ч.

7    Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб зерна и продуктов переработки зерна — по ГОСТ 13586.3.

7.1.2    Отбор проб круп — по ГОСТ 26312.1.

7.1.3    Отбор проб муки и отрубей — по ГОСТ 27668.

7.1.4    Отбор проб кормов — по ГОСТ ISO 6497.

7.1.5    Отбор проб жмыхов, шротов — по ГОСТ 13979.0.

7.1.6    Отбор проб комбикормов, комбикормового сырья — по ГОСТ 13496.0.

7.2 Подготовка проб

Из средней пробы зерна, продуктов его переработки, круп, кормов, комбикормов, жмыхов, шротов выделяют около 100 г продукта, измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с от* еерстиями диаметром 0.5 мм. перемешивают.

Из средней пробы муки, отрубей выделяют около 100 г продукта, тщательно перемешивают.

Взвешивают 5.00 г подготовленной пробы и помещают в виалу или полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3. Добавляют 25 см3 раствора для экстракции (см. 6.2.2). помещают на 30 с в вибрационный шейкер, затем — для перемешивания в течение 60 мин на качающийся шейкер. Центрифугируют при 3500 g в течение 20 мин.

8    микроцектрифужную пробирку вносят 500 мм3 подвижной фазы А и 500 мм3 верхнего слоя экстракта. Центрифугируют при 15 000 g при температуре 4 *С в течение 20 мин. Пипеточным дозатором отбирают 700 мм3 верхнего слоя экстракта и фильтруют через микрофильтр с нейлоновой мембраной в виалу для 8ЭЖХ-МС/МС анализа.

9

ГОСТ 34140—2017

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-слектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2    Например, для колонки диаметром 2.1 мм. длиной 150 мм. с обращенно-фазовым сорбентом С18. с размером частиц не более 5.0 мкм. соблюдают следующие условия хроматографирования:

-    температура колонки — 40 *С;

-    скорость потока подвижной фазы — 0.25 см3/мин;

-    температура в отсеке устройства ввода проб —10 *С.

-    объем вводимой пробы — 20 мм3.

Разделение проворят в режиме градиентного элюирования в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4 — Условия градиентного элюирования

Время, мин

Подвижная фаза А. %

Подвижная фам в. %

0.0

100

0

2.0

100

0

12.0

0

100

16.0

0

100

16.1

100

0

25.0

100

0

8.1.3 Параметры режима мониторинга множественных реакций (МРМ) при измерении микотоксинов приведены в таблицах 5 и 6.

Регистрацию положительных и отрицательных ионов проводят путем двух отдельных последовательных измерений.

Настройки масс-спектрометрического детектора (источника ионов, ионной оптики) устанавливают при внедрении метода на каждой единице оборудования путем прямого ввода анализируемых веществ в масс-спектрометр и установления оптимальных характеристик согласно рекомендациям производителя масс-спектрометра.

Таблица 5 — Параметры режима МРМ при регистрации положительных ионов

Михотохсии

Ион-предшественник. /п/г

Ион-продукт 1Г ион-продукт 2

15-Ацетил-дезоксинивапвнол

339

322/304

Агроклавин

239

183/208

Афлатоксин В,

313

128/241

Афлэтоксин В2

315

259/287

Афлатоксин G,

329

243/200

Афлатоксин

331

245/189

Боверицин

807

384/784

Воргманнин

429

355/295

10

ГОСТ 34140—2017

Окончание таблицы 5

Микотоксин

Иом-предшестоеикик. т/г

Иои-продукт 1/ион-продукт 2

Глиотоксин

327

263/245

Гризеофульвин

353

165/215

Диацетоксисцирленол

384

307/105

Койевая кислота

143

69/113

Мелвагрин

434

403/334

Микофенолоаая кислота

338

207/303

НТ-2 токсин

442

263/105

Неосоланиол

400

215/185

Охратоксин А

404

239/102

Охратоксин В

370

205/103

Паксиллин

436

182/167

Пенициллиновая кислота

171

125/97

Рокфортин С

300

193/322

Pop идинА

550

249/231

Стахиботрилактам

386

178/150

Ствригмагоцистин

325

310/281

Т-2 тетраол

316

215/281

Т-2 токсин

484

215/185

Т-2 триол

400

215/281

Фузариевая кислота

180

152/134

Фуыагиллин

459

177/131

Фумонизин В,

722

334/704

Фумонизин &2

706

336/688

Фумонизин В3

706

336/319

Цитреоаиридин

403

139/297

Цитринин

251

233/205

Эргокорнин

562

544/223

Таблица б — Параметры режима МРМ при регистрации отрицательных ионов

Микотоксни

Ион-предшественник, т/г

Ион-продукт Т/ион-продукт 2

З-Ацетил-дезоксиниааленол

397

59/337

Альтернариол

257

213/215

Апьтврнариопа-метиловый эфир

271

256/227

11

ГОСТ 34140—2017

Окончание таблицы 6

Михотоксяи

Ион-преяшестеенния. т/г

Ион-продукт 1/ион-проаукт 2

Деэоксинивалвнол

295

59/265

Деэоксинивалвноп-З-глюхоэид

517

427/59

Деэлоксн-деэоксиниваленол

339

59/249

Зеаралвнон

317

131/175

Монилиформин

97

41

Нивапенол

371

59/281

Патулин

153

109/135

Тенгоксин

413

141/271

Тенуаэоновая кислота

196

139/112

Фузареном X

413

59/353

Цикпопиазоновая кислота

335

140/195

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии измерений с по* мощью программного обеспечения хромато*масс*спектрометра.

8.2.1    Проводят однократные измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовлен* ных по в.3.5. в порядке возрастания концентраций микотоксинов в соответствии с таблицей 3.

8.2.2    Вычисление площади пика проводят для каждого иона-продукта анализируемых микотоксинов. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, иону* продукту.

8.2.3    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0.98.

8.2.4    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации микотоксинов в анализируемых пробах выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.2.5    Градуировочную характеристику строят заново при каждой серии измерений.

8.3 ВЭЖХ*МС/МС измерение

8.3.1    Для измерения содержания микотоксинов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ е соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2    Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

•    подвижная фаза А;

•    «чистая» проба;

•    градуировочные растворы (см. 6.3.5);

•    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3    В инжектор хроматографа вводят 20 мм3 пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. и проводят измерения в условиях, используемых при установлении градуировочной зависимости.

8.3.4    Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов*про* дуктое каждого микотоксина, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов.

9 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания микотоксинов с относительной расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к = 2 и доверительной вероятности Р - 0,95. указанной в таблице 7.

12

Таблица 7 — Показатели точности и прецизионности метода при измерении содержания микотоксинов

Микотохсин

Диапазон измерений содержания, мкглсг

Значение относительной расширенной неопределенности 1 У/. %, при коэффициенте охвата к • 2

Показатель повторяемости (относительное стандартное отклонение повторяемости) о,. %

Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимое и} 0*.%

Предел

повторяемости л Ik (При 0.95. к«2>

З-Ацвтил-деэоксиниваленол

От 100 до 2000 включ.

38

12

18

33

15-Ацетил-деэоксимивалшол

От 100 до ЮООвключ.

66

16

32

45

С в. 1000 до 2000 8ключ.

35

11

16

30

Агроклавин

От 10 до 200 вклкм.

51

18

24

50

Св. 200 до 1000 включ.

36

11

17

30

Альгер на риол

От 10 до 20 включ.

74

21

35

59

Св. 20 до 200 включ.

54

16

25

43

От 200 до 2000 включ.

33

10

16

28

Альтернариола-метиловьм эфир

От 20 до 200 включ.

74

23

35

63

Се. 200 до 1000 включ.

63

13

30

36

Св. 1000 до 2000 включ.

41

7

19

19

Афлэтоксин 6,

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Афлатоксин

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 вхлюч

31

10

14

28

Афлатоксин G,

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Се. 20 до 200 включ.

31

10

14

26

Афлатоксин Gg

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Боаерицин

От 50 до 1000 включ.

67

20

31

56

Се. 1000 до 10000 включ.

43

13

20

36

вортманнин

От 20 до 100 включ.

43

18

31

51

Св. 100 до 2000 включ.

19

12

16

34

ГОСТ 34140—2017

Продолжение таблицы 7

Микогоксин

Диапазон измерений содержания, миг Air

Значение отноо*гельи<й расширенной неогре-дележости t uf. %. при «оэффиииенте oiaara к ■ 2

показатель повторяемости {относительное стандартное отклонение повторяемости} ол %

Показател ь воспроизводимости {относительное стандартное отклонение воспроизводимости}

вд.%

предел

повторяемости г. % {лриР* 0.95, к к 2}

Глио токсин

От 100 до 2000 еклкм.

54

21

30

58

Гризеофульеин

От 20 до 2000 еклкм.

46

15

22

42

Деэоксиниеаленол

От 100 до 500 еклкм.

70

22

33

61

Се. 500 до 10000 еклкм.

58

20

27

55

Дезоксингееленол-З-глюкозид

От 100 до 200 еклкм.

72

17

34

48

Се. 200 до 2000 еклкм.

48

13

23

36

Деэпокси'деэоксинивалбнол

От 200 до 2000 еклкм.

75

14

35

40

Диацегоксисцирпенол

От 10 до 200 ек*оч.

50

14

23

36

Се. 200 до 2000 еклкм.

34

11

16

30

Зеараленон

От 20 до 40 еклкм.

65

18

31

51

Се. 40 до 400 аключ.

39

12

18

32

Се. 400 до 4000 вслкм.

31

7

14

20

Койееая кислота

От 10 000 до 20 000 еклкм.

65

21

30

59

Мелеагрин

От 20 до 200 еклоч.

46

16

22

45

Се. 200 до 2000 еклкм.

28

в

13

21

Микофеноловая кислота

От20до100еключ.

43

12

20

33

Се. 100 до 2000 еклкм.

31

12

16

33

Монилиформин

От 20 до 200 «лоч.

62

23

29

65

Се. 200 до 2000 еклкм.

48

11

23

30

НТ-2 токсин

От 10 до 20 еклкм.

61

17

25

47

Се. 20 до 1000 еклкм.

54

17

25

47

Се. 1000 до 2000 еклкм.

35

9

17

24

ГОСТ 34140—2017

Продолжение таблицы ?

МИКОТОЯШН

Диапазон измерений содержания. мкгЛсг

Значение относительной расширенной иеолре-депо>мосги * U/, %. при коэффициенте охвата к = 2

Показатель повторяв, мости (относительное стандартное отклонение повторяемое ти) %

Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение пс производимое™}

Ор.%

Предел

повторяемости г. % (приР* 055. К*2)

Неосоланнол

От 10 до 20 в ключ.

56

15

23

41

Са. 20 до 2000 еключ.

36

12

17

32

Ниваленол

От 100 до 500 еключ.

54

21

26

56

Се. 500 до 5000 еключ.

54

12

25

33

Се. 5000 до 10 000 вкпоч.

39

13

16

36

Охратоксин А

От 1 до 10 еключ.

72

16

34

43

Са. 10 до 20 еключ.

47

12

22

33

Се. 20 до 200 вкпоч.

32

10

15

29

Охра токсин В

От 1 др 20 вкпоч.

62

20

29

56

Са. 20 до 200 вкпоч.

34

6

16

23

Паксиллин

От 20 до 200 вкпоч.

43

13

20

35

Па тулин

От 1000 до 2000 еключ.

73

23

34

65

Пенициллиновая кислота

От 20 до 1000 в ключ.

65

23

31

65

Се. 1000 до 2000 еключ.

46

17

23

47

РокфортинС

От 10 до 100 вкпоч.

66

19

32

S3

Се. 100 до 2000 еключ.

36

13

18

35

Роридин А

От 20 до 100 аспоч.

65

16

31

51

Се. 100 до 2000 еключ.

56

14

22

39

Стахиботрилактаи

От 10 до 20 еключ.

69

25

32

70

Се. 20 до 200 вкпоч.

44

10

21

27

Са. 200 до 2000 аключ.

33

10

16

28

ГОСТ 34140—2017

Продолжение таблицы 7

е>

Микотоксин

диапазон измерений содержания. ммЫг

Значение относительной расширенной неопределенности s Jr %. при коэффициенте окаата к«2

покеэатель повторяемости {относительное стандартное отклонение повторяемости) ог %

Показатель воспроизводимости {относительное стандартное отклонение воспроизводимости)

в*%

предел

повторяемости г.% {при Р ■ 0.95. K-2)

Стеригоато цистин

От 10 до 100 еключ.

53

21

25

57

Се. 100 до 1000 включ.

36

11

18

31

Се. 1000 до 2000 включ.

24

9

14

25

Т-2 твтраол

От 100 до 200 включ.

54

24

29

67

Се. 200 до 2000 включ.

52

15

25

42

Т-2 токсин

От Ю до ЮОеключ.

46

13

22

37

Се. 100 до 2000 включ.

36

11

16

30

Т-2 триол

От 20 до 100 включ.

54

15

26

41

Се. 100 до 2000 еключ.

43

10

20

27

Твнтокснн

От 20 до 1000 еключ.

53

11

25

30

Се. 1000 до 2000 включ.

25

6

12

22

Твнуаэоноеая кислота

От 20 до 1000 еключ.

67

21

31

56

Се. 1000 до 2000 еключ.

41

13

19

35

Фузаренон X

От 500 до 10000 включ.

50

12

23

33

Фуэариевая кислота

От 100 до 1000 еключ.

75

16

35

44

Се. 1000 до 2000 еключ.

44

16

21

44

Се. 2000 до 20 000 включ.

33

12

16

34

Фумагиллин

От 100 до 200 еключ.

56

12

26

33

Се. 200 до 2000 еключ.

29

10

14

29

Фумониэин В,

От 100 до 1000 еключ.

71

12

33

32

Се. 1000 до 20 000 еключ.

44

12

21

32

ГОСТ 34140—2017

Оончание таблицы 7

Микотоксин

Диапазон измерений «держания, мкг/кг

Значение относительной расширенной неопределенности * Ц/. %, при коэффициенте охвата 4 = 2

Показатель повторяемости (относительное стандартное от*1оие*ме повторяемости) «у %

Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) оя.%

Предел

повторяемости г.% (при Р * 0.95. *=2)

Фумониэин By

От 100 до 10 000 включ.

67

22

31

60

Се. 10 000 до 20 000 ехлюч.

30

9

14

26

ФуМОНИЭИН Вз

От 100 до 2000 включ.

62

18

29

50

Се. 2000 до 10 000 включ.

46

11

23

31

Се. 10 000 до 20 000 включ.

37

9

17

26

Ц «к лопиа зоновая кислота

От 20 до 100 аключ.

74

29

35

81

Се. 100 до 200 еключ.

65

13

30

35

Се. 200 до 2000 еклкм.

49

9

23

25

Цигреовиридин

От 100 до 1000 еключ.

49

14

23

40

Се. 1000 до 2000 еключ.

27

10

13

29

Цотринин

От 50 до 100 включ.

66

19

32

53

Св. 100 до 1000 вклкм.

44

14

20

39

Се. 1000 до 2000 еключ.

27

10

13

29

ЭргокорНИН

От 20 до 200 еключ.

49

14

23

40

Се. 200 до 2000 еклкм.

28

10

13

29

ГОСТ 34140—2017

10 Обработка результатов измерений

10.1    В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения массовой концентрации микотоксинов в анализируемой пробе.

10.2    Содержание микотоксина в пробе X. мкг/кг. вычисляют по формуле

У V

(2)

т

где 2 — фактор разведения экстракта;

Х( — массовая концентрация микотоксина в анализируемой пробе, определенная по градуировочному графику. нг/смэ:

V — объем раствора для экстракции, см3; m — масса навески, г.

10.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений пробы, если выполнено условие приемлемости по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).

11    Оформление результатов измерений

Содержание /-го микотоксина, мкг/кг. представляют в виде

X, ±0.01 U, X, при Р * 0.95.    (3)

где X, — среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания /-го микотоксина в анализируемой пробе, мкг/кг;

Ц — значение относительной расширенной неопределенности содержания /-го микотоксина для соответствующего диапазона измерений. % (е соответствии с таблицей 7);

0.01 ' U, ■ X, — значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, мкг/кг.

Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности, содержащее не более двух значащих цифр и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

12    Контроль правильности и прецизионности результатов измерений

Контроль правильности и прецизионности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3} с использованием контрольных карт Шухарта.

16

ГОСТ 34140—2017

УДК 633.1:636.086.1:636.087.26:006.354    МКС 65.120

67.050

67.060

Ключевые слова: пищевые продукты, продовольственное и кормовое сырье, комбикорма, корма, мико* токсины, метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-слектрометрическим детектированием

19

БЗ 8—2017/243

Редактор Л.С. Зиыилова Технический редактор И.Е. Черепкова Корректор Л.С. Лысенко Компьютерная верстка Л.А. Круговой

Сдано в набор 20.07.2017. Подписано а печать 27.07.2017.    Формат 60*84 Vg.    Гарнитура Ариап.

Уел. печ. л. 2.79. Уч.-иад. л. 2.51 Тираж 20 эм. Эак. 1226.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИКФОРМ». 123001 Москва. Гранатный пер.. 4