База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных


ГОСТ 32015-2012 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Обозначение: ГОСТ 32015-2012
Наименование: Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Статус: Действует

Дата введения: 07/01/2014
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120, 67.050
Скачать PDF: ГОСТ 32015-2012 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.pdf
Скачать Word:ГОСТ 32015-2012 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.doc


Текст ГОСТ 32015-2012 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

ГОСТ

32015—

2012


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим

детектором

Издание официальное

Москва

Стандартииформ

2014


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»), Федеральным государственным учреждением «Центральная научио-метсдичесхая ветеринарная лаборатория» (ФГУ «ЦНМВЛ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Госстандарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 3 декабря 2012 г. No 54-П)

За принятие проголосовали:

по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны

по МК (ИСО 31661004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандарт*>ации

Казахстан

К2

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

КО

Кыргызсгаидарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджиксгаидарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 июня 2013 г. No 240-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32015—2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.

5    Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 54035—2010

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». 8 случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

€> Стандартинформ. 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

и

Содержание

in

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания анаболических стероидов и производных стильбена с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Food products, feeds, food raw materials. Method of determination of anabolic steroids and stylben derivatives by gas chromatography using mass spectrometry

Дата введения — 2014—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты пищевые, корма, продовольственное сырье и устанавливает метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для идентификации и количественною определения анаболических стероидов и производных стильбена. Диапазон измерений от 0.1 до 100,0 мкг/кг

Метод может быть использован для идентификации и количественного определения анаболических стероидов и производных стильбена в физиологических жидкостях и органах животных.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085—2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ 61—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770—74 (ИС01042—83, ИС0 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 3118—77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4166—76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496.0—60 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13647—78 Реактивы. Пиридин. Технические условия ГОСТ 13867—68 Продукты химические. Обозначение чистоты ГОСТ 24104—2001 * Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 24363—80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25386—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р S3228—2008.

Издание официальное

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов а информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства ло техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или ло ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован ло состоянию на 1 января текущего года, и ло выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Идентификацию и количественное определение анаболических стероидов и производных стиль-бена проводят методом газовой хроматографии с масс-слектрометрическим детектором (ГХ-МС) с использованием аналитических стандартов анаболических веществ с учетом критериев идентификации.

Количественное определение анаболических стероидов и производных стильбена проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений относительно градуировочной зависимости, полученной при анализе градуировочных растворов в аналогичных условиях.

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

4.1 При определении содержания анаболических стероидов и производных стильбена применяют следующие средства измерений и вспомогательное оборудование:

-    х рома то-м асе-спектрометр, позволяющий проводить измерения в диапазоне масс от 45 до 650 атомных единиц массы (а. е. м ). с разрешением по шкале масс не более 1.0 а. е. м. и чувствительностью в режиме ионизации электронным ударом: при инжекции в колонку 2 лг гексахлорбензола (сканирование в диапазоне от 45 до 350 а. в. м. за 1 с) отношение сигнал/шум на молекулярном ионе с m/z 284 не менее 10/1:

•    колонку кварцевую капиллярную 30 м ж 0.25 мм х 0.25 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от пяти до 30:

•    компьютер с установленным программным обеспечением для управления хромато-масс-спектрометром и обработки результатов измерений:

-    автосамллер для газового хроматографа;

•    бинарный жидкостный хроматограф со спектрофогометричесхим детектором;

-    ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) колонка С18 250 мм х 4.6 мм х 5 мкм:

•    ВЭЖХ предколонка С18 10 мм 4.6 мм х 5 мкм;

-    пипетки одноканальные переменного объема 10—100 мм3.40—200 мм3.200—1000 мм3,1—5 смс допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу не более 2 % (Transferpetlor Brand. Германия);

•    весы класса точности I и класса точности II с дискретностью отсчета d = 0,01 мг. поверочным делением е = 100 d ло ГОСТ 24104;

-    модуль термостатирувмый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатироеания 250 С;

•    измельчитель-гомогенизатор лабораторный:

-    испаритель ротационный со скоростью вращения от 20 до 280 об/мин и температурным диапазоном нагревательной бани от 30 °С до 100 °С;

•    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 3500 об/с и диапазоном рабочих температур от минус 10 вС до 25 °С. с адаптерами для пробирок вместимостью 15. 50 см3 и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см3:

•    картриджи для твердофазной экстракции объемом не менее 12 см, заполненные обращен-но-фазным сорбентом С18 с диаметром частиц не более 50 мкм;

•    устройство вакуумное для твердофазной экстракции:

•    флаконы стеклянные вместимостью 4 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;

•    флаконы стеклянные вместимостью 40 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками:

-    флаконы стеклянные вместимостью 2 см3 с завинчивающимися тефлоновыми прокладками и вставками объемом 100 мм3:

•    колбы мерные стеклянные 2-10-2 по ГОСТ 1770:

-    колбы мерные стеклянные 2-100-2 по ГОСТ 1770:

•    колбы мерные стеклянные 2-1000-2 по ГОСТ 1770:

•    колбы круглодонные К-1-100-14У23 ТС по ГОСТ 25336:

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 дм3;

•    pH-метр с набором электродов, с пределами абсолютной погрешности измерений ±0.01 pH. Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с метрологическими и техническими характеристиками не ниже указанных.

4.2    При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы:

-    гелий газообразный марки а60»:

•    фермент протеолитический Subtilisine A (Sigma. Германия. № Р-5380);

•    уксусную кислоту по ГОСТ 61. х. ч.:

-    соляную кислоту по ГОСТ 3118, х. ч.;

•    натрий уксуснокислый, х. ч.;

-    эфир метил-трет-бутиловый для хроматографии:

-    воду деионизованную:

-    А/-метил-А/-триметилсилил-трифторацетамид (МСТФА) (Sigma. Германия. No М-7891);

-    триметилйсдсилан (ТМИС) (Aldrich. Германия. No 19.552-9);

•    дитиоэритритол (ДТЭ). х. ч.:

-    пиридин по ГОСТ 13647;

•    А/.А/-бис-триметилсилилтрифторацетамид (БСТФА) (Sigma. Германия. Nc Т-5634);

•    триметилхлорсилан (ТМХС) (Sigma. Германия No Т-4252);

-    леитафторпропионоеый ангидрид, х. ч.:

-    метоксиламин гидрохлорид ангидрид (Aldrich. Германия. No 22.690-4):

-    н-Гексан. х. ч.:

-    калия гидроокись по ГОСТ 24363. х. ч.;

-    метанол-яд по ГОСТ 6995:

-    этанол абсолютный, х. ч.;

-    изооктан, х. ч.:

-    кальций хлористый дэухвсдный. х. ч.:

-    ацетон по ГОСТ 2603, х. ч.;

-    сорбент С18 40 мкм (Vanan. США . No 12213012):

•    сок пищеварительный Hetix pomatia (Merck. Германия. No 1.04114);

-    натрий сернокислый по ГОСТ 4166. х. ч.;

•    ацетонитрил, ч. д. а:

•    трис(гидроксиметил)-аминометан, х. ч.

Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 х. ч. или 3 ч. д. а. по ГОСТ 13867.

4.3    Для определения содержания анаболических стероидов и производных стильбе и а применяют следующие стандартные образцы:

-    диэтилстильбэстрол-06 с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT. BRS 01 );

•    диенестрол-02 с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT. BRS 02);

-    гвксестрол-04 с содержанием основного вещества не менее 98,0 % (RIKILT BRS 03):

-    HopTecTocrepOH-d3 с содержанием основного вещества не менее 98.0 % (RIKILT. BRS 04);

-    метилтестостерон-03 с содержанием основного вещества не менее 98.0 % О (RIKILT. BRS 05):

-17р-Эстрадиол-03 с содержанием основного вещества не менее 98.0 % (RIKILT. BRS 54);

•    17р-Тестостерон-02 с содержанием основного вещества не менее 98,0 % (RIKILT, BRS 55);

-    17а- Нортестостерон с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT. BRS 56);

-    17а-Тренболон с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT BRS 57);

-    17р-Тренболон с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT. BRS 58);

-    17[-Трвнболон-<12 с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (RIKILT. BRS 59):

•    17р-Трвнболон<13 с содержанием основного вещества не монее 99.0 % (RIKILT. BRS 72);

-17-Метилтестостврон с содержанием основного вещества не менее 98.0 % (Acros. 225730050)

-17а-Этинилэстрадиол с содержанием основного вещества не менее 98.0 % (Sigma. Е-4876)

•    (^Эстрадиол с содержанием основного вещества не менее 98,0 % (Sigma. Е-8875):

•    17(1-Тестоствром с содержанием основного вещества не менее 99,0 % (Acros. 164410050):

•    прогестерон с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (Sigma. Р-0130);

-    19-Нортестостерон с содержанием основного вещества не менее 99,0 % (Пика. 74640);

•диенэстрол с содержанием основного вещества не менее 98.0 % (Sigma. D-3253):

•    гексестрол с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (Sigma. Н-7753):

•    диэтилстильбэстрол с содержанием основного вещества не менее 99.0 % (Sigma, D-4628);

•    стандартные образцы с аттестованным содержанием анаболических веществ:

1)    лиофилиэованная моча с аттестованным содержанием диэтилстильбэстрола (IRMM. BCR-411);

2)    лиофилиэованное мясо с аттестованным содержанием диэтилстильбэстрола (IRMM, BCR-411);

3)    лиофилиэованная печень с аттестованным содержанием 17а-Тренболона (IRMM. ВС R-474/475).

5 Условия выполнения измерений и требования безопасности

5.1    Используемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007. при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

5.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

5.3    Операции по приготовлению и дозированию градуировочных растворов в процессе подготовки проб следует проводить лсд тягой в вытяжном шкафу.

5.4    При проведении испытаний следует соблюдать ГОСТ 12.2.085 и правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением, действующие на территории государства, принявшего стандарт.

5.5    При выполнении измерений на хромато-масс-спектрометре следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.6    К выполнению измерений методом газовой хроматографии допускаются лица, владеющие техникой ГХ-МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

5.7    При определении анаболических стероидов и производных стильбеиа в лаборатории должны

быть соблюдены следующие условия:

-    температура окружающего воздуха..........от    20    °С    до 25 °С;

-    атмосферное давление.................от    84    до    106 кПа:

• напряжение в электросети...............(220 ± 20) В.

-    частота тока в электросети...............от    49    до    51 Гц;

-    относительная влажность воздуха..........от    40    %    до 80 %.


5.8 Хроматографические измерения проводят в условиях, указанных в инструкции по эксплуатации соответствующего прибора.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Отбор проб

6.1.1    Отбор проб мяса и мясных продуктов, включая мясо и продукты из мяса птицы, проводят в соответствии с [1].

6.1.2    Объем отбираемых образцов мочи должен быть не менее 40 см3.

Объем отбираемых образцов желчи должен быть не менее 30 см3.

Отобранные образцы мочи и желчи при отсутствии возможности исследования в день отбора замораживают при температуре минус 20 °С до проведения исследования.

6.1.3    Отбор проб кормов — по ГОСТ 13496.0.

6.2    Подготовка хромато-масс-спектрометра к выполнению измерений

Подготовку хромато-масс-спектрометра к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора.

6.3    Приготовление растворов

6.3.1    Приготовление трис-буфера молярной концентрации 0,1 моль/дм3 и pH 9,5

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 12,1 г трис(гцдроксиметил)-амино-метаиа и 7.3 г кальция хлористою двухводного, растворяют в 800 см3 деионизованной воды, измеряют pH. доводят значение pH до (9.5 ± 0,1) соляной кислотой молярной концентрации 1 моль/дм3 (6.3.7) и доводят объем до метки деионизованной водой.

Срок хранения при температуре от 2 *С до 4 °С — не более 1 мес.

6.3.2    Приготовление щелочного раствора для гидролиза

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 5.6 г гидроокиси калия, растворяют в 80 см3 метанола и доводят объем до метки метанолом.

Срок хранения при температуре от 2 *С до 4 *С — не более 1 нед.

6.3.3    Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0,2 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 16.4 г натрия уксуснокислою, растворяют в 900 см3

деионизованной воды, измеряют pH, доводят значение pH до (5.2 ±0.1) концентрированной уксусной кислотой и доводят объем до метки деионизованной водой.

Срок хранения при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1 мес.

6.3.4    Приготовление «кислого» буферного раствора

Для приготовления «кислого» буферного раствора смешивают 1.7 см3 соляной кислоты с 98.3 см3 ацетатною буферною раствора (6.3.3) в мерной колбе вместимостью 100 см3.

Срок хранения при температуре от 2 4С до 4 °С — не более 1 нед.

6.3.5    Приготовление раствора для дериватизации

Для приготовления раствора МСТФА/ТМИС/ДТЭ смешивают 1000 мм3 МСТФА и 5 мм3 ТМИС во флаконе вместимостью 2 см3, добавляют к полученному раствору 2 мг ДТЭ.

Срок хранения при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 1 нед.

6.3.6    Приготовление 2 %-ного раствора метоксиламин гидрохлорида в сухом пиридине

Для приготовления раствора 0.04 г метоксиламин гидрохлорида вносят во флакон вместимостью

4 см3 и приливают 2 см3 пиридина.

Срок хранения при комнатной температуре в вытяжном шкафу — не более 1 нед.

6.3.7    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 500 см3 деионизованной воды, вносят 81 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем до метки деионизованной водой.

Срок хранения при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.3.8    Приготовление растворов внутреннего стандарта

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 мг стандартною образца дейтрироваииых производных. приливают 80 см3 этанола, перемешивают и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню, затем доводят объем до метки этанолом. В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 0.1 см3 приготовленною раствора и доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация раствора внутреннею стандарта составляет 0.1 мкг/см3.

6.3.9    Приготовление стандартного раствора С0 анаболических стероидов и производных стильбе на

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 мг стандартною образца, приливают 80 см3 этанола. перемешивают и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню, затем доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация каждою соединения в растворе С0 составляет 0.1 мг/см3.

Срок хранения при температуре не выше минус 18 °С — не более 12 мес.

6.3.10    Приготовление стандартного раствора Ct анаболических стероидов и производных стильбе на

В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 0.1 см3 стандартною раствора С0 (6.3.9) и доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация каждою соединения в растворе С, составляет 1000 мг/см3.

Срок хранения при температуре от 2 °С до 4 °С — не более 4 мес.

6.3.11    Приготовление стандартного раствора С2 анаболических стероидов и производных стильбена

В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 1 см3 стандартного раствора С, (6.3.10) и доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация каждого соединения в растворе С2 составляет 100 нг/см3.

Срок хранения при температуре от 2 вС до 4 вС — не более 4 мес.

6.3.12    Приготовление стандартного раствора С3 анаболических стероидов и производных стильбена

В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 1 см3 стандартного раствора С2 (6.3.11) и доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация каждого соединения в растворе Су составляет 10 нг/см3.

Срок хранения при температуре от 2 вС до 4 вС — не более 4 мес.

6.3.13    Приготовление стандартного раствора С4 анаболических стероидов и производных стильбена

В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 5 см3 стандартного раствора С3 (6.3.12) и доводят объем до метки этанолом.

Массовая концентрация каждого соединения в растворе С, составляет 5 нг/см3.

Срок хранения при температуре от 2 вС до 4 вС — не более 4 мес.

6.3.14    Приготовление градуировочных растворов анаболических стероидов и производных стильбена

Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрации 0.1 нг/см3 к сухому остатку после упаривания чистой пробы исследуемого типа матриц вносят 0.02 см3 стандартного раствора С4 (6.3.13), припивают 0.1 см3 раствора каждою внутреннего стандарта (6.3.6). Затем пипеточным дозатором вносят 0.88 см3 этанола, переносят на шейкер и гомогенизируют. Затем помещают на центрифугу и центрифугируют при 1S000 об/мин в течение 10 мин при температуре 10 °С.

Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрации 0.5 нг/см3 используют стандартный раствор С4 (6.3.13).

Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрации 1 нг/см3 используют стандартный раствор С3 (6.3.12).

Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрации 10 нг/см3 используют стандартный раствор С2 (6.3.11).

Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрации 100 нг/см3 используют стандартный раствор С, (6.3.10).

К сухому остатку после упаривания чистой пробы исследуемого типа матриц вносят 0.1 см3 соответствующего стандартного раствора, приливают 0.1 см3 раствора внутреннего стандарта (6.3.8). Затем пипеточным дозатором вносят 0.8 см3 этанола, переносят на шейкер и гомогенизируют. Затем помещают на центрифугу и центрифугируют при 15000 об/мин в течение 10 мин при температуре 10 °С.

Приготовленные градуировочные растворы и растворы внутренних стандартов хранят в морозильнике при температуре не выше минус 20 вС. Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.4 Подготовка газового хроматографа к выполнению измерений

6.4.1    Подготовку газового хроматографа к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора. Для получения градуировочных характеристик устанавливают параметры газового хроматографа в соответствии с 6.5.1.

6.4.2    Для получения градуировочных данных используют градуировочные растворы анаболических стероидов и производных стильбена и растворы их дейтерированных производных в соответствии с таблицей 1. внесенные в заведомо чистые образцы исследуемого типа матриц (градуировочные растворы анаболических стероидов, производных стильбена и их дейтерированные производные вносят в матрицу перед этапом дериеатиэации). В качестве внутреннего стандарта используют дейгерирован-ные производные определяемых соединений. Для каждого анаболического стероида и производного стильбена используют соответствующее дейтерированное производное.

Таблица 1 — Массовая концентрация анаболических стероидов и производных стильбеиа в градуировочных растворах

Наименование

Градуировочный уровень

анаболического стероида и производного стильбеиа

Г* 1

Nt 2

№ 3

N3 4

N4 S

Массовая конце и г райи я. иг/см*

Нативные анаболические стероиды и производные стильбеиа

17и-Нортестостером

0.1

0.5

1

10

100

17|(-Нортестостерои

0.1

0.5

1

10

100

17а-Треиболои

0.1

0.5

1

10

100

17|1-Треиболои

0.1

0.5

1

10

100

и-Эстрад иол

0.1

0.5

1

10

100

р-Эст радиол

0.1

0.5

1

10

100

17а-Этим илэстрад иол

0.1

0.5

1

10

100

17-Метил тестостерон

0.1

0.5

1

10

100

17а-Тестостерон

0.1

0.5

1

10

100

17р-Тестостерои

0.1

0.5

1

10

100

Диенэстрол

0.1

0.5

1

10

100

Гексестрол

0.1

0.5

1

10

100

Диэтилстильбэстрол

0.1

0.5

1

10

100

Прогестерон

0.1

0.5

1

10

100

Изотопно-меченые анаболические стероиды и производные стильбеиа/еиутреииий стандарт

Нортестостерои-бЗ

10

10

10

10

10

17р-Треиболои-бЗ

10

10

10

10

10

17|1-Эстрадиол-<)3

10

10

10

10

10

17р-Тестостером-б2

10

10

10

10

10

Метилтестостерои-бЗ

10

10

10

10

10

Диеиэстрол-62

10

10

10

10

10

Гексестрол-44

10

10

10

10

10

Дизтилстильбэстрол-бб

10

10

10

10

10


6.4.3 При установлении градуировочной характеристики следует использовать не менее трех уровней массовых концентраций градуировочных растворов в диапазоне массы определяемого анали-та от 1 до 100 нг. В инжектор хроматографа вводят не менее двух раз каждый градуировочный раствор.

С помощью компьютерной системы обработки данных устанавливают градуировочную эависи-мость для площади пика методом внутреннего стандарта для каждого аналита по формуле

(1)


SuMt

где к, — коэффициент отклика для /«по аналита;

S, — площадь пика ко аналита в градуировочном растворе;

Su — площадь пика внутреннего стандарта в градуировочном растворе:

MJ — массовая концентрация /-го аналита в градуировочном растворе, и г/см5;

Mlf — массовая концентрация внутреннего стандарта в градуировочном растворе, нг/см3.

Проверяют приемлемость полученных значений коэффициента отклика к, для каждого амалита анализируемых градуировочных уровней, используя неравенство

(2)


100*4.

где К,тлм — максимальное значение а-го коэффициента отклика;

КГ* — минимальное значение ьго коэффициента отклика:

К, — среднее значение г-го коэффициента отклика:

4 — относительная раэность коэффициентов отклика.

Значения 4 (при Р - 0.95) не должны превышать: 5 % (п = 3) или 4 % (п = 2); п — число параллель* ных определений ьго коэффициента отклика для каждого градуировочного уровня.

6.4.4    При отсутствии дейтерированных производных анаболических стероидов и производных стипьбена используют метод абсолютной градуировки. Образцы для градуировки готовят по 6.4.2. за исключением введения раствора дейтерированных производных.

6.4.5    Расчеты коэффициента отклика и площади пика выполняют с помощью системы обработки данных в автоматическом режиме.

6.4.6    Градуировочную характеристику считают приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение квадрата коэффициента корреляции для каждого аналита 2 0.98. а значение «Accuracy» для каждой точки градуировочной кривой находится в диапазоне 80 %—120 %.

6.4.7    Построение новой градуировочной кривой проводят после каждого включения газового хроматографа (остановка работы для сервисного обслуживания или текущей профилактики).

6.5 Условия хроматографических измерений

6.5.1    Газовый хроматограф с масс-спектрометрическим детектором включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем капиллярных колонок. Например, для кварцевой капиллярной колонки 30 мх0.25 мм х 0.25 мкм применяют следующие хроматографические условия:

-    газ-носитель — гелий;

-    скорость потока газа носителя 1 см3/мин;

•    температура инжектора 280 °С;

•    инжектор в режиме без деления потока;

-    температурная программа колонки:

-    начальная температура 100 вС в течение 0.5 мин;

•    программируемый нагрев от 100 °С до 290 °С со скоростью 8.0 °С/мин;

•    изотерма при 290°С до 40 мин;

•    время анализа 40 мин:

•    объем пробы от 1 до 5 мм3.

Допускается использование других хроматографических условий, обеспечивающих разделение компонентов пробы.

6.5.2    Градуировку и настройку масс-спектрометрического детектора в режиме электронной ионизации и тандемной масс-слектрометрии проводят согласно инструкции по эксплуатации прибора.

7 Порядок выполнения измерений

7.1    Обработка проб органов, тканей, мочи, желчи животных и кормов

7.1.1    100 г мышечной ткани, предварительно очищенной от грубой соединительной ткани, измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на лабораторных весах по 5.0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют 15 см3 трис-буфера (6.3.1). 5 мг протеолитического фермента и пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 раствора дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3.

Флаконы закрывают крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой при температуре 55 °С на 3 ч. Затем флаконы с образцами охлаждают до комнатной температуры и приливают 2 см3 соляной кислоты. Гидролизат экстрагируют два раза по 15 см3 метил-трет-бутиловым эфиром, собирая эфирные фракции в отдельный флакон. При неполном отделении метил-трет-бутилового эфира флаконы с образцами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Объединенные эфирные экстракты упаривают на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 4 см3 метанола, затем приливают 1 см3 деионизованной воды и обезжиривают два раза по 3 см1 и-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом твердофазной экстракции (ТФЭ). а затем методом ВЭЖХ.

Если интересующие компоненты представлены в виде эфиров (например, гестагены или ацетат тренболона). дополнительно проводят их щелочной гидролиз. Для этого сухой остаток растворяют в 0.2 см3 щелочного раствора для гидролиза (6.3.2) и помещают на нагревательный модуль при температуре 37 вС на 30 мин. Гидролиз останавливают добавлением 1 см3 «кислого» буферного раствора (6.3.4) и обезжиривают два раза по 3 см3 н-Гвксаном.

7.1.2    Пробу печени или почек измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на лабораторных весах по 5.0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют по 15 см3 ацетатного буферного раствора (6.3.3) и 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia. Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 раствора дейтерироваиных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль при температуре 37 *С на 15 ч для ферментативного гидролиза коньюгатов стероидов. После гидролиза флаконы с образцами охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см3 соляной кислоты и экстрагируют два раза по 15 см3 ме* тил-трет-бутиловым эфиром. При неполном отделении метил-трет-бутилового эфира флаконы с образцами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Объединенные эфирные экстракты переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 4 см3 метанола, затем приливают 1 см3 деионизованной веды и обезжиривают два раза по 3 см3 н-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом ТФЭ (7.2). а затем методом ВЭЖХ (7.3).

7.1.3    Во флакон вносят 10 см3 мочи. 10 см3 ацетатного буферного раствора (6.3.3) и 100 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia. Пипеточным дозатором вносят 50 мм3 раствора дейтерироваиных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль при температуре 52 *С на 15 ч для ферментативногогидролиза коньюгатов стероидов. Энзиматический гидролизат охлаждают до комнатной температуры и очищают методом ТФЭ (7.2). а затем методом ВЭЖХ (7.3).

7.1.4    Во флакон вносят 5 см3 желчи. 15 см3 ацетатного буферного раствора (6.3.3) и 100 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia. Далее проводят обработку пробы в соответствии с 7.1.3.

7.1.5    5 г жира взвешивают на лабораторных весах в стеклянном флаконе вместимостью 40 см3. Во флакон добавляют 20 см3 н-Гексана и 10 см3 ацетонитрила. Пипеточным дозатором вносят 50 ммраствора дейтерироваиных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Помещают флакон на ультразвуковую баню на 15 мин. до полного растворения жира. Затем интенсивно перемешивают, флакон с образцом помещают на центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Ацетонитрильную фракцию отбирают и повторяют жидкостно-жидкостную экстракцию 10 см3 ацетонитрила. Объединенные ацетонитрильные фракции упаривают досуха на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 см3 метанола, а затем приливают 1 см3 деионизованной воды и обезжиривают два раза по 3 см3 н-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом ТФЭ (7.2), а затем методом ВЭЖХ (7.3).

7.1.6    100 г кормов измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на лабораторных весах по 5.0 г го-могенизированнои пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют 20 см3 раствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 80 : 20. и пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 раствора дейтерироваиных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Помещают флаконы на ультразвуковую баню на 20 мин. Затем интенсивно перемешивают, флаконы с образцами помещают на центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочный слой обезжиривают два раза по 5 см3 н-Гексана и упаривают на ротационном испарителе при температуре 40 °С до окончания упаривания метанола. Водный остаток очищают методом ТФЭ (7.2). а затем методом ВЭЖХ (7.3).

7.2 Очистка методом твердофазной экстракции

Картриджи для ТФЭ объемом 12 см3 с 1 г сорбента С18 40 мкм кондиционируют на вакуумном устройстве для ТФЭ. пропуская последовательно 10 см3 метанола и 4 см3 деионизованной воды. К вод* но-метанольному экстракту, полученному после стадий экстракции в соответствии с 7.1.1—7.1.6. приливают 15 см3 деионизованной воды и пропускают через кондиционированный картридж оо скоростью

элюирования не более двух капель в секунду. Промывают картридж последовательно 2 см3 деионизованной воды. 10 см3 раствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 20 : 80. 5 см3 раствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 40 :60. Элюируют аналиты 10 смраствора метанола и деионизованной воды, взятых в соотношении 80 : 20. Упаривают элюат на ротационном испарителе лри температуре от 45 *С до 48 °С до 1 или 1.5 см3, водный остаток очищают методом ВЭЖХ.

7.3 Очистка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

7.3.1    Систему ВЭЖХ с бинарным градиентом и спектрофогометричесхим детектором подготавливают в соответствии с руководством по эксплуатации прибора. Вместо петли инжектора устанавливают предколонку С18. Разделение анаболических стероидов и производных стильбена проводят на аналитической колонке С18 (250 мм к 4,6 мм х 5 мкм). При этом соблюдают следующие хроматографические условия:

•    подвижная фаза: А — метанол 30 %. Б — вода 70 %;

- градиент до 100 % подвижной фазы А к 10 мин. с 10 до 15 мин — 100 % А, с 15 до 23 мин соотношение А/Б — 30/70:

•    скорость потока подвижной фазы — 1 см3/мин.

7.3.2    Порядок элюирования анаболических стероидов и производных стильбена: гренболон (7,0 мин), нортестостерон, транс-диэтилстильбэстрол. эти и ил эстрад иол. гексестрол. диенэстрол. эстрадиол, тестостерон, метилтестостерон. цис-диэтилстильбэстроп. прогестерон (11.5 мин). Времена удерживания уточняют после предварительного анализа стандартного раствора концентрации 1 мкг/см3 для каждого аналита при спектрофотометрическом детектировании 254 нм. Время отбора интересующей фракции должно быть больше на 1 мин времени удерживания последнего аналита.

7.3.3    В положении Load инжектора пропускают через предколонку 0.5 см3 деионизованной воды, а затем водный остаток пробы после ТФЭ очистки. Переводят инжектор в положение Inject и собирают фракцию, соответствующую временам удерживания анаболических стероидов и производных стильбена. Полученную фракцию анаболических стероидов и производных стильбена после ВЭЖХ упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 45 °С. Сухой остаток растворяют в 1 смабсолютного этанола и переносят во флакон вместимостью 4 см3. Упаривают этанол досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 *С.

7.4    Дериватизация анаболических стероидов и производных стильбена

7.4.1    Для получения триметилсилилоаых производных анаболических стероидов и производных стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 50 мм3 раствора МСТФАДМИС/ДТЭ (6.3.5). Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 еС. Реакционную смесь переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа.

7.4.2    Для получения пентафторпропионовых производных анаболических стероидов и производных стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 200 мм3 ацетона и 50 мм3 пентафторпропионового ангидрида. Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 °С. Реакционную смесь упаривают досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3 изооктана, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для анализа.

7.4.3    Данный метод дериватизации используют для получения метилоксим/триметипсилиловых (МО/ТМС) производных тренболона и других кетостероидов. При этом к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 100 мм3 2 %-ного раствора метоксиламин гидрохлорида в сухом пиридине (6.3.6). Полученную реакционную смесь помешают на нагревательный модуль при температуре 60 °С на 30 мин. По истечении указанного времени реакционную смесь упаривают досуха в токе азота. К сухому остатку добавляют 100 мм3 БСТФА с 1 мм3 ТМХС и помещают в нагревательный модуль при температуре 60 °С на 60 мин. Реакционную смесь упаривают досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3 изооктана с 5 % реакционной смеси БСТФА/ТМХС. переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа.

7.5    ГХ-МС анализ

7.5.1 В инжектор хроматографа вводят от 1 до 5 мм3 пробы и проводят анализ в условиях, указанных в 6.5. При этом для каждого образца проводят не менее двух определений.

ю

7.5.2    времена удерживания анаболических стероидов и производных стильбена определяют при анализе градуировочных растворов, времена удерживания идентифицированных анаболических стероидов и производных стильбена в анализируемой пробе не должны отличаться от времен удерживания анаболических стероидов и производных стильбена в градуировочном растворе более чем на 2.5 %.

7.5.3    Данные о диагностических ионах дериватов анаболических стероидов и производных стильбена указаны в таблице 2.

Таблица 2 — Диагностические ионы дериватов анаболических стероидов и производных стильбена

Наименование анаболического стероида и производною стильбена

Тримо т илс и липовое производное

Мо тилосим/тримо ТИЛ-сипилооое производное

Поитафторлропионоаоо

производное

Тестостерон

417/432

268/358/374/389

401/417/565/560

Тестостерон d2

419/434

270/360/376/391

403/419/567/562

Нортестостерон

418

254/285/344/375

256/402/566

Нортестостером 03

421

257/288/347/376

256/403/569

Метилтестостерои

301/341/356/446

305/319/415/430

Метилтестостерои d3

301/344/359/449

Прогестерон

458

273/286/341/372

375/427/445/460

Диэтилстильбэстрол

217/383/397/412

217/383/397/412

291/397/531/S60

Диэтилстильбэстрол Об

220/386/400/418

220/386/400/416

294/403/534/566

Диенэстрол

381/395/410

381/395/410

395/530/543/558

Диеиэсгрол 02

382/397/412

382/397/412

397/530/545/560

Эстрадиол

285/326/416

285/326/416

237/359/401/S64

Этиикл эстрадиол

285/425/440

285/425/440

381/396/409/424

Трвиболои

240/266/340/371

8 Обработка результатов ГХ-МС анализа

8.1 в соответствии сданными, полученными при анализе градуировочных растворов, оформляют таблицу пиков с использованием программного обеспечения хромато-масс-спектрометра. Аналиты е пробе идентифицируются по временам удерживания аналитов, определенным при анализе градуировочных растворов. Метод обработки хроматограммы — внутренний стандарт. При этом используют следующую формулу:

*.=


s,MH


(3)


где X, — содержание ьго аналита в анализируемой пробе, мкг/кг.

S — площадь пика /-го аналита в аналиэруемой пробе:

S* — площадь пика внутреннего стандарта в аналиэруемой пробе;

— содержание внутреннего стандарта в анализируемой пробе, мкг/кг, kt — коэффициент отклика для /-го аналита.

8.1.1    Расчеты количества анаболического стероида и производного стильбена и площади пика выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.1.2    Результаты измерений округляют до второго десятичного знака и выражают в мкг/кг.

За окончательный результат измерений содержания ьго аналита принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

Х'г1100£ г.    (4)

где X,, и Xq — результаты параллельных определений содержания /-по аналита. мкг/кг; X, — среднеарифметическое Хи и Хс, мкг/кг: г — предел повторяемости при Р = 0.95: значение приведено в таблице 6, %.

и

8.1.3 Для целей количественною и подтверждающего анализа допускается проведение измерений в различных режимах тандемной масс-сяектрометрии. позволяющих получить требуемое количество подтверждающих критериев. При количественном анализе допускается проведение измерения по одному наиболее интенсивному иону в соответствии с требованиями, установленными в 8.2. Подтверждающий анализ проводят при наличии не менее четырех диагностических критериев в соответствии с требованиями, установленными в 8.2.

8.2 Идентификацию анаболических стероидов и производных стильбом а и их количественное определение проводят с соблюдением следующих условий для масс-спектрометрическою детектирования:

•    молекулярный ион используют для идентификации, если присутствует в масс-спектре с относительной интенсивностью не менее 10 %;

•    относительная ионная интенсивность каждою из диагностических ионов должна быть не менее 10%:

•    соотношение сигнал/шум для каждого диагностическою иона должно быть не менее 3/1.

Относительные интенсивности детектированных ионов, выраженные как процент от интенсивности самого интенсивною иона, должны соответствовать таковым из калибровочною раствора, в сопоставимых концентрациях, измеренные при тех же самых условиях, в пределах допустимых отклонений, указанных в таблице 3.

Таблица 3 — Максимально допустимые отклонения для относительных ионных интенсивностей

Относительная интенсивность <% от основного пика)

ГХ-МС'. {относительная), %

Св.50%

НО

=20

» 20 % до 50 % включ.

115

=25

От 10 4 и 20% »

120

=30

Менее 10 %

150

=50

При проведении подтверждающею анализа число диагностических ионов для каждою из масс-спектрометрических методов определяют с учетом идентифицирующих критериев.

Для подтверждения каждою из анаболических стероидов и производных стильбе на необходимы минимум четыре идентифицирующих критерия. В таблице 4 установлено число идентифицирующих критериев в зависимости от используемых масс-спектрометрических методов.

Таблица 4 — Отношение межлу масс-спектрометрическими методами и количеством полученных идентифицирующих критериев

Масс-слектрометрические методы

Количество идентифицирующих хритериее. полученных не диагностический ион

Месс-слектрометрия низкого разрешения (ИР)

1.0

НР-МС” ион предшественник

1.0

HP-MC* дочерние ионы

1.5

Масс-спектрометрия высокого разрешения (ВР)

2.0

ВР-МС" ион предшественник

2.0

ВР-МС" дочерние ионы

2.5

8 таблице 5 показаны примеры числа идентифицирующих критериев (п — целое число), полученных для различных масс-спектрометрических методов.

Таблица 5 — Примеры расчета идентифицирующих критериев

Методы ГХ-МС аналим

Число диагностических ионов

идентифицирующих

ГХ-МС |ЭИ или химическая ионизация (ХИ)|

N

п

ГХ-МС (ЭИ или ХИ) 2 производных

2 (Производное А) ♦ 2 (Производное Б)

4

ГХ-МС-МС

1 предшественник и 2 дочерних

4

ГХ-МС-МС

2 предшественника, каждый с 1 дочерним

5

9 Метрологические характеристики

Значения допускаемой относительной расширенной неопределенности Un(s % (при коэффициенте охвата к = 2) измерений содержания индивидуальных анаболических стероидов и производных стиль-бена по установленному в настоящем стандарте методу приведены в таблице 6.

Фактические значения расширенной неопределенности Ue, мкг/кг (при коэффициенте охвата к - 2) результатов, полученных при определении содержания индивидуальных бета-адреностимуляторое и признанных приемлемыми (8.1.2), рассчитывают по формуле (7).

Таблица б — Метрологические характеристики метода

Диапазон измерений содержаний анаболических

Относи тельиав расширенна и

Предеп повторяемости

стероидов и производных стильбена. мдг/кг

при Р » 0.95. п » 2 rem, %

От 0.10 до 1.00включ.

2S

20

Св. 1.00 и 10.00 а

15

10

и 10.00

10

5

10 Оформление результатов измерений

Результат анализа Мс в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

Ч = Х(>С ± Uc%    (5)

где Мс — окончательный результат определения анаболического стероида и производного стильбена мкг/кг:

X, е — среднеарифметическое двух параллельных измерений содержания /-го а нал и та в анализируемой пробе, выполненных в условиях повторяемости, мкг/кг:

Uc — расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата к-2) определения содержания ьго а налита, определяемая по формуле (7). мкг/кг.

11 Контроль точности измерений

11.1    Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже одного раза в пять дней. Заново анализируют образцы для градуировки хроматографа по 6.4 и определяют коэффициенты отклика для каждого анаболического стероида и производного стильбена (два параллельных определения) в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика. Градуировочную характеристику признают стабильной, если коэффициент отклика для каждого из двух параллельных определений отличается от значения, установленного при градуировке, не более чем на 10 %. Если градуировочная характеристика нестабильна, градуировку хроматографа проводят заново.

11.2    Контроль смещения результатов измерений с помощью стандартных образцов проводят не реже одного раза в месяц. С использованием стандартной процедуры подготовки проб проводят анализ стандартных образцов в соответствии с разделом 7 и получают результат измерений содержания f-го ана-лита (Х. мкг/кг). Результаты измерений признают удовлетворительными при выполнении неравенства

(б)


IX... - XJ £ pi, + и}..

где Хле

и, с


содержание /-го а налита в анализируемом стандартном образце, мкг/кг:

аттестованное значение содержания /-го аналита в стандартном образце, мкг/кг:

расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата к-2) результата измерений содержания ьго аналита. полученного при соблюдении требований настоящего стандарта, мкг/кг. рассчитывают по формуле

Ч е = 0,15 Х^


76 с •


(7)


где Ц j — расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата к-2) аттестованного содержания /-го аналита в аттестованном стандартном образце в соответствии с паспортом (сертификатом) на конкретный стандартный образец, мкг/кг.

Библиография

(1] ISO 17604:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Carcass sampling for microbiological analysis (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор проб с туши дпя микробиологического анализа)

УДК 664.002.3.001.4:006.034    МКС 65.120

67.050

Ключевые слова: пищевые продукты, продовольственное сырье, анаболические стероиды и производные стильбена. газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектором

Редактор М.И. Максимова Технический редактор 6 Н Прусакова Корректор М.И. Першина Ком пью терна к верстка 8М. Грищенко

Сдано в набор 06.1120*3


Подписано а почать 20.01 2014.    Формат 60*84 Va.    Гарнитура Ариал.    Усп. печ. л. 2.32.

Уч.«изд. п. 1.56. Тирам 71 ао. Зак. 34.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДЛРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. info4ggoslinfo.ru

Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Указанные реактивы и стандартные образцы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

*' Институт пищевой безопасности, расположенный в Нидерландах.

Указанные стандартные образцы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Институт референтных материалов и измерений, расположенный в Бельгии.