База ГОСТовallgosts.ru » 65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО » 65.120. Корма для животных


ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Обозначение: ГОСТ Р 54950-2012
Наименование: Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус: Действует

Дата введения: 07/01/2013
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 65.120
Скачать PDF: ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.pdf
Скачать Word:ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.doc


Текст ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТР54950-

2012

(ИСО 14565:2000)

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

ISO 14565:2000

Animal feeding stuffs — Determination of vitamin A content — Method using high-performance liquid chromatography (MOD)

Издание официальное

Москва

Стакдартинформ

2013

ГОСТ Р 54950—2012

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП») на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 «Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН 8 ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 июля 2012 г. No 212-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 14565:2000 «Корма для животных. Определение содержания витамина А. Метод с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии» (ISO 14565:2000 «Animal feeding stuffs — Determination of vitamin A content — Method using high-performance liquid chromatography») путем изменения отдельных фраз. слов, наименований единиц измерения, ссылок, которые в тексте стандарта выделены курсивом. При этом потребности национальной экономики Российской Федерации и особенности Российской национальной стандартизации учтены в дополнительных подразделах 6.7—6.21, которые выделены путем заключения их в рамки из тонких линий, а информация с объяснением включения этих положений приведена в виде примечаний.

Структура национального стандарта соответствует структуре международного стандарта, за исключением подразделов 6.5 и 9.3. которые разбиты на пункты для использования ссылок на описание прибора и повторяющиеся этапы испытаний, раздел 2 дополнен ссылками на национальные и межгосударственные стандарты для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3). и сведениями о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном стандарте.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с правилами, установленными ГОСТ Р 1.5 (подраздел 3.5). ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного международного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0—2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок— в ежемесячном информационном указателе «Национальные стан-дарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gostnj)

© Стандартинформ. 2013

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 54950—2012

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки............................................1

3    Термины и определения..........................................2

4    Сущность метода.............................................2

5    Реактивы..................................................2

в Сродства измерений, оборудование и материалы...........................2

7    Отбор проб.................................................4

8    Подготовка проб для испытания.....................................4

9    Проведение испытания..........................................4

10    Обработка результатов..........................................7

11    Прецизионность..............................................7

12    Протокол испытания...........................................8

Приложение А (справочное) Результаты межпабораторных испытаний.................9

Приложение ДА (справочное) Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой

примененного международного стандарта......................10

11

Библиография

ГОСТ Р 54950—2012 (ИСО 14565:2000)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Animal feeding stuffs. Determination of vitamin A content by high-performance llqutd chromatography method

Дата введения — 2013—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма для животных и устанавливает метод определения содержания витамина А (ретинола) с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р 51419—99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорме, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб (ИСО 6498:1998. MOD)

ГОСТР 51568—99 (ИСО 3310-1—90) Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Технические условия

ГОСТ Р 51652—2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТР 53228—2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Обилие технические условия

ГОСТ4166—76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9293—74 (ИСО 2435— 73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0—80 Комбикорма, сырье. Методы отборе проб

ГОСТ 24363—80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ29227—91 (ИС0835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Обшив требования

ГОСТ29251—91 (ИСО 385-1—84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользований — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному уквзвтето «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего годе, и по выпус-

Издание официальное

1

ГОСТ Р 54950—2012

кем ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты* за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарте с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта а ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. а котором дана ссылка на него, рекомендуется применять а части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание витамина А: Содержание всех иэомврое ретинола, определенное в соответствии с настоящим стандартом и выраженное в международных единицах на килограмм (МЕ/кг).

Примечание — 1МЕ витамина А соответствует 0.300 мкг изомеров ретинола.

4    Сущность метода

Сущность метода заключается в омылении анализируемой пробы еодно-слиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витамина А петролейным эфиром, выпаривании петролейного эфира и растворении полученного остатка в 2-пропаноле. Содержание витамина А в 2-проланоловом экстракте определяют с помощью ВЭЖХобратными фазами, используя условия, в которых получается один пик для всех изомеров ретинола.

5    Реактивы

5.1    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.2    Калия гидроокись (КОН) по ГОСТ 24363, раствор с массовой долей 50 %

500 г гидроокиси калия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 (см. 6.17), растворяют в дистиллированной воде (см. 5.1) и доводят объем раствора водой до метки.

5.3    Спирт этиловый ректификованный (С2Н5ОН) по ГОСТ Р 51652 с объемной долей 95 % или эквивалентный технический метилированный спирт.

5.4    2-пропанол (С3НгОН).

5.5    Эфир летролейный. интервал температуры кипения от 40 ®С до 60 вС. Остаток после выпаривания должен быть не более 20 мг(дм3.

5.6    Стандартный образец витамина А (ретинил^ацетата)

5.6.1    Рвтинил-ацвтат. ацетат витамина А (С22Н3202) молярной массой 328.5 г/моль. чистота не менее 90 %.

5.6.2    Ретинол, витамин А спирт (С20НиО) молярной массой 286,5 г/моль. чистота не менее 90 %.

5.7    Спирт метиловый (СН3ОН) специальной марки для ВЭЖХ.

5.8    Подвижная фаза для жидкостной хроматографии

Смешивают метиловый спирт (см. 5.7) и дистиллированную воду (см. 5.1) в соотношении 770:30 по объему и при необходимости фильтруют через мембранный фильтр (см. 6.6).

5.9    Натрий сернокислый (Na2S04) по ГОСТ 4166. безводный.

5.10    Натрия аскорбат, раствор массовой концентрации с - 100 г(дм3.

5.11    Инертный газ. например, азот поГОСТ9293.

Примечание — все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.

6    Средства измерений, оборудование и материалы

Используют обычное лабораторное оборудование и. в частности, следующее:

6.1    высокоэффективный жидкостный хроматограф, состоящий из следующего оборудования.

6.1.1    Насос, установленный для подачи элюента с постоянной объемной скоростью 1 см-7мин.

6.1.2    Устройство для ввода ВЭЖХ.

2

ГОСТ Р 54950—2012

6.1.3    Колонка длиной 250 мм с внутренним диаметром 4.6 мм. набивная, неподвижная фаза со* стоит из октадециловых групп (Си), присоединенных к кремнезему.

Колонка считается удовлетворительной, если число теоретических тарелок не менее 4000, значение коэффициента емкости к ' равно 0.6 в отношении изомеров ретинола. Рекомендуемый размер частиц от 5 до Юмкм.

Допускается использовать другие системы при условии, что достигается удовлетворительное отделение витамина А от других экстрагируемых с ним веществ.

6.1.4    Детектор, позволяющий производить измерение ультрафиолетового (УФ) излучения при длине волны 325 нм и оснащенный интегратором (системой обработки данных).

6.2    Спектрометр в УФ области спектра (или в УФ-видимой области спектра), обеспечивающий измерение поглощения при длине волны, определенной в 9.6. оснащенный кварцевыми кюветами с длиной оптического пути 10 мм.

6.3    Баня с кипящей водой.

6.4    Испаритель роторный вакуумный с водяной баней при температуре 40 *С.

6.5    Аппарат для экстракции (см. рисунок 1), состоящий из следующего:

I — цилиндр со шпифои вместимостью 1000 см'; 2 — слой петролейиого эфира; 3 — водный спой с омыленной пробой корма; 4 — насадка, обеспечивающая притертое соединение с цилиндром.

5 — отводная трубка, 6 —■ трубка сифонная регулируемая

Рисунок 1 — Пример аппарате для экстракции

6.5.1    Цилиндр для экстракции вместимостью 1000 см3 со шлифом по ГОСТ 1770 и притертой пробкой.

6.5.2    Насадка, имеющая отводную трубку, обеспечивающая притертое соединение с цилиндром. оснащенная регулируемой сифонной трубкой (см. 6.5.3). проходящей по центру.

6.5.3    Трубка сифонная регулируемая с нижним концом U-обраэной формы для переноса верхнего слоя жидкости из цилиндра в делительную воронку вместимостью 1000 см3.

Допускается использовать другое оборудование для экстракции, такое как конические колбы и делительные воронки вместо аппарата, показанного на рисунке 1. при условии, что достигается удовлетворительный выход витамина А.

э

ГОСТ Р 54950—2012

6.6    Мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы (см. 5.6} и растворов проб для испытания.

6.7    Мельница лабораторная электрическая, обеспечивающая измельчение пробы до прохода через сито с размером отверстии 1.0 мм.

6.8    Сито с размером стороны квадратных ячеек 1,0 мм по ГОСТ Р 51568.

6.9    Мясорубка с размером отверстий в пластинке 4.0 мм.

6.10    Весы лабораторные по ГОСТР 53228 с наибольшим пределом взвешивания 500 г и допускаемой погрешностью однократного взвешивания 1 0.001г.

6.11    Колбы конические Кн-2-1000-42 ТХС поГОСТ25336.

6.12    Холодильники стеклянные лабораторные обратимые по ГОСТ 25336.

6.13    Воронки делительные ВД -1(2)-1000 ХС по ГОСТ 25336.

6.14    Воронки фильтрующие ВФ-1(3)-100 ХС по ГОСТ 25336.

6.15    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры.

6.16    Колбы круглодонные К-2-250-34 ТХС по ГОСТ 25336.

6.17    Колбымерные 1(2)-50(250. 1000)-2 по ГОСТ 1770.

6.18    Пипетки градуированные 1(2. 3. 5)-1(1а. 2. 2а)-1-1(2. 5) по ГОСТ 29227.

6.19    Бюретки вместимостью 5 см3 по ГОСТ 29251.

6.20    Цилиндры мерные 1(2)-50(100. 250,1000) по ГОСТ 1770.

6.21    Колбы мерные вместимостью 20 см3.

Примечание — Подразделы 6.7—6.21 введены дополнительно с учетом требований к перечню оборудования. необходимого для проведения испытания и применяемого в Российской Федерации

7    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ 13496.0.

Поступающая в лаборалюрию проба должна быть представительной, не поврежденной и не претерпевшей изменений во время транспортирования и хранения.

Пробу должны хранить в условиях, предотвращающих ее порчу или изменение состава.

8    Подготовка проб для испытания

Пробу для испытания готовят в соответствии с ГОСТ Р 51419.

Непосредственно перед началом испытаний лабораторную пробу тщательно перемешивают и измельчают на лабораторной мельнице (см. 6.7) до прохода через сито с отверстиями 1.0 мм (см. 6.8). Снова тщательно перемешивают.

Консервированные и влажные корма гомогенизируют, для чего лабораторную пробу пропускают через мясорубку с диаметром отверстий в пластинке 4.0 мм (см. 6.9) и тщательно перемешивают.

9    Проведение испытания

9.1    Общие положения

Ввиду чувствительности витамина А к УФ-излучению и воздуху все операции выполняют в местах, защищенных от сильного естественного и люминесцентного освещения, и по возможности быстро и аккуратно. Рекомендуется использовать янтарное стекло.

Каждое испытание должно проводиться в течение одного рабочего дня.

Омыление и экстракцию стандартного образца ретинил-aqemama и анализируемых проб выполняют одновременно.

9.2    Омыление

На лабораторных весах (см. 6.10) взвешивают (50 ±0.1) г пробы, подготовленной по 8. и помещают в коническую колбу вместимостью 1000 см3 (см. 6.11).

К анализируемой пробе добавляют при помощи цилиндра (см. 6.20) 200 см7 этилового спирта (см. 5.3) и помешивают колбу круговыми движениями, чтобы проба диспергировала.

В коническую колбу с анализируемой пробой добавляют 2 см3 раствора аскорбата натрия (см. 5.10), 50 см3 раствора гидроокиси калия (см. 5.2) и снова помешивают колбу круговыми движения-

ГОСТ Р 54950—2012

ми. Подсоединяют к колбе обратимый холодильник (см. 6.12) и погружают колбу а кипящую водяную баню (см. 6.3).

Колбу с содержимым и обратимым холодильником выдерживают на кипящей бане в течение 60 мин. время от времени помешивая круговыми движениями.

Колбу извлекают из бани и охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды как можно быстрее.

9.3 Экстракция витамина А (ретинола)

9.3.1    Содержимое колбы перекосят в цилиндр для экстракции (см. 6.5.1). ополаскивают колбу для омыления двумя порциями по 25 см3 этилового спирта или технического метилированного спирта [см. 5.3} и переносят их в цилиндр.

Повторяют ополаскивание колбы двумя порциями по 125 см3 петролейного эфира (см. 5.5) и одной порцией 250 см3 дистиллированной воды (см. 5.1). каждый раз перенося ополаскивающие порции в цилиндр. Закрывают цилиндр пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. время от времени сбрасывая давление.

Охлаждают цилиндр под струей холодной воды.

После разделения двух жидких фаз пробку вынимают, смывают боковые стороны пробки неволь* шим количеством петролейного эфира и вставляют е цилиндр насадку (см. 6.5.2) с регулируемой си* фонной трубкой (см. 6.5.3). располагая нижний открытый конец трубки таким образом, чтобы он располагался прямо над уровнем границы разделения двух фаз.

Путем приложения через отводную трубку небольшого давления с помощью инертного газа (см. 5.11) переносят верхний слой петролейного эфира в делительную воронку вместимостью 1000 см(см. 6.13).

9.3.2    В цилиндр для экстракции добавляют 125 см3 петролейного эфира, закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям разделиться и переносят верхний слой в ту же делительную воронку с помощью регулируемой трубки как описано в 9.3.1.

9.3.3    Повторяют этап экстракции витамина А по 9.3.2.

9.3.4    Объединенные экстракты петролейного эфира промывают четырьмя порциями по 100 смдистиллированной воды, сначала немного наклоняя делительную воронку из стороны в сторону, потом слезка встряхивая, чтобы свести к минимуму образование эмульсии.

9.3.5    Промытый экстракт через воронку для фильтрования (см. 6.14). заправленную фильтровальной бумагой средней или быстрой фильтрации (см. 6.15) со слоем 60 г безводного сернокислого натрия (см. 5.9), переносят в круглодонную колбу (см. 6.16). подходящую для вакуумного выпаривания.

Делительную воронку споласкивают двумя порциями по 20 см3 петролейного эфира и добавляют их через фильтр в колбу для выпаривания.

Промывают фильтр еще двумя порциями по 25 см3 петролейного эфира и добавляют их в колбу для выпаривания.

9.3.6    Петролейный эфир выпаривают из экстракта досуха на роторном испарителе (см. 6.4) под вакуумом при температуре не выше 40 *С. Атмосферное давление восстанавливают с помощью инертного газа (см. 5.11).

Примечание - Нумерация пунктов введена с целью использования ссылок на повторяющиеся зтапы испытаний.

9.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография

9.4.1    Остаток (см. 9.3.6) растворяют в минимальном объеме 2-пропанола (см. 5.4) и переносят количественно в мерную колбу вместимостью 20 см3 (см. 6.21).

Колбу для выпаривания ополаскивают тремя небольшими порциями 2-пропанола, перенося смывы в ту же мерную колбу. Доводят объем содержимого колбы до метки 2-пропанолом и перемешивают.

Для кормов, содержащих витамина А более 100000 МЕУкг, рекомендуется дальнейшее разведение.

При необходимости экстракт пробы фильтруют через мембранный фильтр (см. 6.6).

9.4.2    При невозможности проведения испытания в течение одного дня экстракт хранят в атмосфере инертного газа (см. 5.11) в холодильнике при температуре 4 *С. а затем выдерживают в темном месте до достижения комнатной температуры.

9.4.3    Вводят 10 мм3 экстракта пробы в колонку жидкостного хроматографа (см. 6.1) и измеряют площадь пика ретинола.

5

ГОСТ Р 54950—2012

9.4.4 Рассчитывают среднюю площадь пика по повторным вводам экстракта пробы и определяют концентрацию ретинола в экстракте со ссылкой на среднюю площадь пика, полученного при повторных вводах стандартного раствора ретинола аналогичной концентрации. Время удерживания ретинола составляет около 5 мин. Выполняют ввод порций экстракта пробы и стандартного раствора по очереди.

9.5    Гидролиз ретинил-ацетата для градуировки

Готовят раствор ретинил-ацетата {см. 5.6) в этиловом спирте (см. 5.3) так. чтобы 1 см3 раствора содержал приблизительно 15000 ME витамина А.

Примечание — 1МЕ витамина А равноценна 0.344 мкг ретинип-вцетатв.

Используя бюретку на 5 см3 с ценой деления 0.02 см3 (см. 6.19), переносят (2.5 ± 0.02) см3 этого раствора в колбу вместимостью 250 см3. Добавляют 20 см3 этилового спирта. 1 см3 раствора гидроокиси калия (см. 5.2) и 5 см3 раствора аскорбата натрия (см. 5.10).

К колбе присоединяют обратимый холодильник, погружают ее в кипящую водяную баню и выдерживают в течение 60 мин. Охлаждают колбу до комнатной температуры под струей холодной воды и переносят содержимое в делительную воронку (см. 6.13).

Ополаскивают колбу порцией 50 см3 дистиллированной воды, затем порцией 25 см3 этилового спирта и добавляют смывы в делительную воронку. Экстрагируют витамин А из водно-слиртовой фазы одной порцией 80 см3 петролейного эфира, затем еще двумя порциями петролейного эфира по 50 см3.

Объединяют экстракты петролейного эфира, затем смывают двумя порциями дистиллированной воды по 50 см3. Добавляют (2 ± 0.1) г безводного сернокислого натрия (см. 5.9).

Количественно переносят экстракт петролейного эфира е мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем петролейным эфиром до метки.

Концентрация ретинола в этом растворе (раствор 1) равна 150 МЕ/см3.

9.6    Стандартизация раствора ретинола для градуировки

Пипеткой (см. 6.18) переносят (5 ± 0,03) см3 раствора 1 (см. 9.5) в мерную колбу вместимостью 50 см3 и удаляют растворитель при температуре окружающей среды струей инертного газа (см. 5.11).

Растворяют остаток в 2-пропаноле и доводят объем 2-пропанолом до метки.

Измеряют поглощение (А) раствора, используя 2-пропанол в качестве контроля, при длине волны 310,325 и 334 нм. Значения поглощения будут приблизительно 0.7—0.8. При необходимости допускается использовать промежуточное разведение.

Скорректированное поглощение при длине волны 325 нм. (A32S мрег), вычисляют по формуле

^.^ = 6.815-4^-2.555 А3,0-4.26 Азм.    (1)

если

„ л Q7    (2)

А

*ы>е

то для стандартизации используют значение 4325 хода; в противном случае используют А}25. Концентрацию ретинола в растворе 1, с. МВсм3, вычисляют по формуле

c-A32i • 183 МЕ/см3    (3)

или

с = ^325, *орр' 183 МЕ/см3.    (4)

9.7 Приготовление стандартного образца ретинола для хроматографии Готовят раствор ретинола в 2-проланоле (см. 5.4) приблизительно такой же концентрации, как ожидается в экстракте (см. 9.4.1). На каждые 1000 ME витамина А на килограмм пробы в экстракте ожидается концентрация ретинола 2.5 МЕ/см3.

Выпаривают аликвотный объем раствора 1 (см. 9.5) досуха при окружающей температуре в потоке инертного газа (см. 5.11). Растворяют остаток в подходящем объеме 2-пропанола, чтобы обеспечить требуемую концентрацию ретинола, и перемешивают. При необходимости фильтруют стандартный раствор через мембранный фильтр (см. 6.6).

6

ГОСТ Р 54950—2012

Допускается для градуировки использовать стандартный раствор витамина А (ретинола) е 2-про-паноле. приготовленный путем разбавления исходного стандартного раствора ретинола, полученного при растворении соответствующего количества стандартного образца ретинола (см. 5.6.2) непосредственно в 2-пропаноле.

8 этом случае проверяют стандартный раствор витамина А путем измерения его поглощения в кварцевых кюветах (см. 6.2) при длине волны 300, 325, 350 и 370 нм, используя 2-пропанол в качестве контроля. Определяют отношение А/А325 при каждой длине волны для ретинола, если полученное отношение не превышает 0.602:0,432 и 0,093 при 300.350 и 370 нм соответственно, стандартный образец подходит для применения {1}. (2).

Примечание — Использование многоточечной градуировки рекомендуется в тех случаях, когда ожидаемая концентрация витамина А в экстракте пробы неизвестна.

10 Обработка результатов

Содержание витамина А в анализируемой пробе. 1УА. МЕ/кг. вычисляют по формуле

W =20000-1,    (5)

А    т

где 20000 — коэффициент пересчета,

с — концентрация ретинола в экстракте. МЕ/см3: т — масса анализируемой пробы по 9.2, г.

11 Прецизионность

11.1    Межлабораторные испытания

Результаты межлабораторных испытаний в отношении прецизионности метода определения содержания витамина А в кормах приведены в приложении А. Значения, полученные в этих испытаниях, не могут быть применимы к диапазонам концентраций и образцам, отличающимся от описанных в данном стандарте.

11.2    Повторяемость (сходимость)

Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных независимых испытаний, полученными одним и тем же методом, на одной испытуемой пробе, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, на одном и том же оборудовании, в течение короткого промежутка времени, не должно превышать предел повторяемости, г, приведенный в таблице 1. более чем в 5 % случаев.

11.3    Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных испытаний, полученными одним и тем же методом, на одной испытуемой пробе, е разных лабораториях, разными операторами, на различном оборудовании, не должно превышать предел воспроизводимости R. приведенный в таблице 1. более чем в 5 % случаев.

Таблица 1 — Пределы повторяемости (г) и воспроизводимости (R)

Наименование анализируемой пробы

Содержание витамина А. МЕ/кг

Предел

повторяемости г. МЕ/кг

Предел воспроизводимости Я. ME la

Гранулированный корм для птицы

9886

860

2068

Кори для крупного рогатого скота

10812

2099

3549

Корм для рыбок

15879

2800

4672

Влажный корм для домашних животных

Э3250

1536

2446

Комбихорм-концентрат для свиней

40661

4049

7941

7

ГОСТ Р 54950—2012

12 Протокол испытания

Протокол испытания должен включать в себя следующее:

•    всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы:

-    используемый метод отбора проб, если известен;

♦    используемый метод определения со ссылкой на настоящий стандарт;

-    все детали испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные. которые могли повлиять на результаты) испытания;

-    полученный результат испытания, или среднеарифметическое значение результатов двух испытаний. если проверена повторяемость.

8

ГОСТ Р 54950—2012

Приложение А (справочное)

Результаты межлабораторных испытаний

Прецизионность методе была установлена е ходе межлабораторных испытаний, выполненных а соответствии с {3), (4). Результаты этих испытаний опубликованы в/5| В испытаниях приняло участие 12—14 лабораторий. Были исследованы следующие пробы: влажный кори для домашних животных — 1. гранулированный корм для птицы — 2. корм для крупного рогатого скота — 3. хомбикорм-концентрат для свиней — 4. корм для рыбок — S. Статистические результаты межлвбораторных испытаний приведены в таблице А.1.

Таблица А.1 — Статистические результаты межлабораторных испытаний

Наименование показателя

Значение показателя для проб:

1

2

3

4

5

Число лабораторий

14

12

13

12

13

Число отдельных результатов

56

24

26

24

26

Число принятых результатов

56

24

26

24

26

Среднее значение содержания витамина А. МЕ/кг

33250

9888

10812

40661

15879

Стандартное отклонение повторяемости а,. МЕ/кг

666

304

742

1431

989

Коэффициент вариации повторяемости. %

2.0

3.1

6.9

3.5

6.2

Предел повторяемости г {г» 2.6 $J. МЕ/кг

1536

660

2099

4049

2800

Стандартное отклонение воспроизводимости SH. МЕ/кг

664

731

1254

2806

1651

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

2.6

7.4

11.6

6.9

10.4

Предел воспроизводимости. R (Я » 2.6 - S*), МЕ/кг

2446

2068

3549

7941

4672

9

ГОСТ Р 54950—2012

Приложение ДА (справочное)

сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного международного стандарта

Таблица ДА. 1

Структура настоящего стандарта

Структуре международного стандарта

Подраздел

Пункт

Подпункт

Подраздел

Пункт

Подпункт

Раздал 6

Раздел 6

6.1

6.1.1

6.1

6.1.1

6.1.2

6.1.2

6.1.3

6.1.3

6.1.4

6.1.4

6.2

6.2

6.3

6.5

6.4

6.4

6.5

6.5.1

6.5

6.5.2

6.5.5

6.6

6.6

Раздал 9

Раздел 9

9.1

9.1

9.2

9.2

9.3

9.3.1

9.5

9.3.2

9.3.3

9.3.4

9.3.5

9.3.6

Приложение ДА Сопоставление структуры настоящего стандарте со структурой примененного международного стандарта

Примечания

1    Сопоставление структуры стандартов приведено, начиная с раздела 6. так как предыдущие разделы стандартов и их иные структурные элементы (за исключением предисловия) идентичны.

2    В разделе 6 подразделе 6.5 настоящего стандарта введена нумерация пунктов 6.5.1—6.5.3 для использования ссылок на них по тексту.

3    8 разделе 9 подразделе 9.3 настоящего стандарта введена нумерация пунктов 9.3.1—9.3.6 с целью использования ссылок на повторяющиеся зталы испытаний.

4    8 соответствии с ГОСТ 1.7—2008 в настоящий стандарт включено дополнительное приложение ДА *Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного международного стандарта*>.

10

ГОСТ Р 54950—2012

Библиография

(1)    Takashima. Y. el al. Stability of retinol analogs. Cftem. Pharm. Bull.. 27. 1979, pp. 1553

(2)    Bolllger. M R et al. The monograph of vitamin A in the European Pharmacopoeia. Pharm. Ada. Halv.. 52 (8). 1977. pp. 161 — 174

13) ИСО 5725*1:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения Часть 1. Общие принципы и определения

(4) ИСО 5725*2:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения Часть 2.

Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения IS) Analytical Methods Committee. Analyst. 110, 1985. pp. 1019—1026

11

ГОСТ Р 54950—2012

УДК 636.065.3:006.364    ОКС 65.120    С19    ОКСТУ 9209

Ключевые слова: норма для животных, витамин А. ретинол, ретинил-ацетат. сущность метода, высокоэффективная жидкостная хроматография, омыление, экстракция, петролейный эфир, об♦ ратная фаза, проведение испытаний, обработка результатов, прецизионность, протокол испытания

Редактор M.E. Накупано Технический редактор в.Н. Прусакова Корректор М.М. Малахова Компьютерная верстка В.Н. Грищенко

Сдано а набор 02.10.2013.    Подписано в печать 15.10.2013.    Формат 60x847t.    Гарнитура Ариал. Уел. печ.л. 1.80.

Уч им. л. 1.25. Тираж 153 »о. Эак. 1152.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123095 Москва. Гранатный лер.. 4 «vww.gostrifo.ru info£gostinfo.iu Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105052 Москва. Лялин пер.. 5.