ГОСТ Р 54055-2010 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Метод определения жирно-кислотного состава

ГОСТ Р 54055-2010

Группа Н09

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ЯИЦ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ

Метод определения жирно-кислотного состава

Food eggs and foodstuffs of processed poultry eggs. Method for determination of fatty acid composition

ОКС 67.120.20

Дата введения 2012-01-01

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 "Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 673-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые яйца и пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы (жидкие, концентрированные и сухие - яичная масса, яичный меланж, яичный желток) (далее - продукты) и устанавливает газохроматографический метод определения жирно-кислотного состава - массовой доли индивидуальных жирных кислот.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме

ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ Р 52943-2008 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы пищевые. Термины и определения

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53404-2009 Яйца пищевые (индюшиные, цесариные, перепелиные, страусиные). Технические условия

ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа

ГОСТ Р 53746-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы физико-химического анализа

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту. - .

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 5829-71 Реактивы. Ацетил хлористый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 11109-90 Марля бытовая хлопчатобумажная. Общие технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26703-93 Хроматографы аналитические газовые. Общие технические условия и методы испытаний

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52943.

4 Метрологические характеристики метода

4.1 Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот по отношению к сумме всех жирных кислот (метод внутренней нормализации)

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.

Таблица 1

4.2 Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот в липидах из экстрагированных продуктов (метод внутреннего стандарта)

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 2.

Таблица 2

5 Сущность метода

Сущность метода состоит в экстракции липидов из продуктов, получении метиловых эфиров жирных кислот переэтерификацией экстрагированных липидов с помощью кислотного катализатора (хлористый водород) в присутствии избытка метилового спирта, разделении смеси полученных метиловых эфиров методом капиллярной газовой хроматографии и измерении площадей хроматографических пиков.

Массовую долю индивидуальной жирной кислоты относительно суммы масс всех жирных кислот определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к сумме площадей идентифицированных хроматографических пиков всех метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации), массовую долю содержания индивидуальной жирной кислоты в липидах яичных продуктов определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к площади пика внутреннего стандарта (метод внутреннего стандарта).

6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором (ПИД), пределом детектирования не более 5·10 г/с по ГОСТ 26703, оснащенный инжектором для капиллярных колонок с делением потока и управляющим вычислительным комплексом с программным обеспечением, позволяющим проводить разметку и определение площадей хроматографических пиков.

Капиллярная хроматографическая колонка с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичная колонка, обеспечивающая разделение пиков и продолжительность хроматографирования в соответствии с рисунком 1. Условия хроматографирования - в соответствии с 7.4.

1 - бутилокситолуол; 2 - С14:0; 3 - С14:1n5; 4 - С16:0; 5 - С16:1n7; 6 - С17:0; 7 - С17:1; 8 - С18:0; 9 - С18:1n9; 10 - С18:1n7; 11 - С18:2n6; 12 - С18:3n3; 13 - С20:0; 14 - С20:1n9; 15 - С20:3n6; 16 - С20:4n6; 17 - С20:5n3; 18 - С23:0 (внутренний стандарт); 19 - С22:5n3; 20 - С22:6n3

Рисунок 1 - Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот липидов куриного яйца (колонка Omegawax 320 (Supelco))

Микрошприцы МШ-1 вместимостью 1 мм или аналогичные.

Ротационный испаритель типа ИР-2.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой погрешности взвешивания не более ±0,0002 г.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Баня водяная.

Термостат суховоздушный типа ТС-80М или жидкостный термостат, обеспечивающий поддержание заданной температуры при (60±1) °С.

Термометр ртутный с диапазоном измерения температуры 0 °С - 100 °С и ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Часы.

Сушильный шкаф.

Гомогенизатор или миксер.

Автоклав с фторопластовой реакционной камерой рабочим объемом 25-30 см (например, аналитический автоклав - модель Т11 НПО "Анкон-АТ") или стеклянная виала вместимостью 25-35 см с завинчивающейся крышкой и фторопластовой прокладкой.

Колбы конические Кн-1-150-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы грушевидные Гр-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-25-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.

Воронки В-36-50 ХС и В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

Воронки делительные ВД-1-250 ХС или ВД-3-250 ХС по ГОСТ 25336.

Пипетки 2-2-5, 2-2-25 или 2-2-20 по ГОСТ 29169.

Пипетки 1-1-1(2)-1 по ГОСТ 29227.

Пробирки П-2-5-14/23ХС, П-2-25-14/23 ХС по ГОСТ 1770 или П4-5-14/23, П4-25-14/23 по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1-50 ХС и В-1-100 ХС по ГОСТ 25336.

Холодильник XIII-1-300-29/32 по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные 1-10-2, 1-50-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.

Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.

Палочка стеклянная.

Стекловата.

Марля по ГОСТ 11109.

Воздух класса "0" по ГОСТ 17433. Допускается использовать компрессоры, обеспечивающие необходимые давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.

Азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч.

Водород технический марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода.

Гексан для хроматографии.

Ацетил хлористый (ацетилхлорид) по ГОСТ 5829, ч.д.а.

Метанол по ГОСТ 6995, х.ч.

Бутилокситолуол (2,6-ди-трет-бутил-4-метоксифенол), массовая доля основного вещества не менее 95%.

Метиловый эфир трикозановой кислоты С23:0, массовая доля основного вещества не менее 99,0%.

Раствор в гексане смеси метиловых эфиров жирных кислот (от С10 до С24) для идентификации хроматографических пиков [1], [2].

Толуол, ос.ч.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч., водный раствор массовой долей 10%.

Силикагель марки АСКГ по ГОСТ 3956.

Кислота соляная массовой долей не менее 35% по ГОСТ 3118, ос.ч.

Эфир диэтиловый (эфир этиловый), ос.ч., безводный, содержащий менее 0,05% этилового спирта.

Эфир петролейный перегнанный с температурой кипения не более 60 °С .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.

7 Подготовка к проведению испытаний

7.1 Приготовление смеси для получения метиловых эфиров [раствор хлористого водорода (HCI) в метаноле массовой долей 5,6%]

В высокую пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см вносят с помощью пипетки 5 см метанола. Осторожно по каплям добавляют с помощью пипетки 0,5 см ацетилхлорида с соблюдением мер предосторожности по 13.3 (при добавлении ацетилхлорида происходит бурная реакция с образованием брызг, поэтому необходимо использовать высокую пробирку). Перемешивают, закрывают пробкой и выдерживают перед использованием в течение 10 мин.

Смесь готовят непосредственно перед каждым испытанием.

7.2 Приготовление стандартного раствора метилового эфира трикозановой кислоты С23:0 массовой концентрацией 5 мг/см (метод внутреннего стандарта)

В стакане вместимостью 50 см взвешивают 250 мг метилового эфира трикозановой кислоты с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, добавляют 25-30 мг бутилокситолуола (антиокислитель) и растворяют метиловый эфир трикозановой кислоты и бутилокситолуол в 30 см толуола (кристаллы метилового эфира трикозановой кислоты должны полностью раствориться, при необходимости стаканчик с содержимым можно подогреть до температуры 30 °С - 40 °С). Содержимое стакана количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см. Стакан три раза ополаскивают толуолом порциями по 3 см, которые добавляют в мерную колбу. Колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С, доводят объем толуолом до метки, закрывают пробкой и перемешивают.

Срок хранения стандартного раствора - 1 мес в холодильнике при температуре (6±2) °С.

Перед использованием колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С.

7.3 Приготовление раствора бутилокситолуола в толуоле (метод внутренней нормализации)

В стакан вместимостью 100 см помещают 25-35 мг бутилокситолуола, добавляют с помощью мерного цилиндра 50 см толуола и перемешивают до полного растворения бутилокситолуола. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытой стеклянной емкости не более 5 мес.

7.4 Приготовление воронки для фильтрования раствора метиловых эфиров жирных кислот

В нижнюю часть носика воронки диаметром 36 мм и высотой 50 мм по ГОСТ Р 25336* вставляют тампон из кусочка обезжиренной стекловаты, насыпают силикагель АСКГ до образования слоя высотой примерно 15-20 мм, сверху насыпают слой безводного сернокислого натрия так, чтобы он полностью заполнил носик воронки и нижнюю часть сужения воронки слоем высотой примерно 5 мм.

______________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 25336. - .

7.5 Подготовка газового хроматографа и капиллярной колонки

Подготовку хроматографа и капиллярной колонки (кондиционирование колонки) проводят в соответствии с инструкциями по эксплуатации. При работе с капиллярной колонкой Omegawax 320 устанавливают следующий режим работы хроматографа:

- температура детектора 260 °С;

- температура инжектора 250 °С;

- температура термостата колонки 200 °С;

- давление газа-носителя (азота) в испарителе 85 кПа;

- деление потока газа-носителя в испарителе 1:30;

- расходы водорода, воздуха и азота (поддув в детектор) устанавливают в соответствии с инструкцией к эксплуатации хроматографа или подбирают путем хроматографирования тестовых смесей метиловых эфиров для обеспечения максимальной чувствительности пламенно-ионизационного детектора.

Режимы хроматографа при работе с другими типами капиллярных колонок подбирают так, чтобы качество разделения и время регистрации хроматограмм было не хуже показанной на рисунке 1 хроматограммы.

Не реже одного раза в месяц, а также при замене реактивов проводят хроматографирование холостой пробы, приготовленной по 7.6, но без добавления липидов. На хроматограмме холостой пробы не должно быть посторонних пиков, кроме пиков бутилокситолуола и метилового эфира трикозановой кислоты (допускаются посторонние пики непосредственно рядом с пиком растворителя).

7.6 Отбор и подготовка проб

7.6.1 Отбор проб куриных яиц - по ГОСТ Р 52121, индюшиных, цесариных, перепелиных и страусиных - по ГОСТ Р 53404, яичных продуктов - по ГОСТ Р 53669.

7.6.2 Подготовка проб к испытанию

7.6.2.1 Яйца

В стакан вместимостью 500 смосторожно разбивают пять-семь куриных или индюшиных яиц или 10-12 перепелиных или цесариных яиц, или два-три страусиных яйца, не допуская попадания в стакан частиц скорлупы. Стеклянной палочкой смешивают желтки с белками и полученную массу гомогенизируют с помощью гомогенизатора или миксера при средней скорости, не допуская вспенивания. Для удаления пленок и мембран гомогенат фильтруют через два слоя марли.

7.6.2.2 Яичные продукты

Подготовку лабораторных проб яичных продуктов проводят по ГОСТ Р 53669.

Подготовленные пробы хранят до окончания испытания в плотно закрытой стеклянной емкости в холодильнике при температуре от 4 °С до 8 °С.

7.6.3 Кислотный гидролиз пробы

Навеску подготовленной по 7.6.2 пробы массой:

- 5 г жидкого меланжа или перемешанного яйца (яичной массы);

- 3 г жидкого желтка;

- 2 г яичного сухого меланжа или сухого желтка взвешивают в конической колбе вместимостью 100 см с записью результата взвешивания в граммах до третьего десятичного знака и медленно добавляют с постоянным энергичным встряхиванием колбы 10 см неразбавленной (жидкие яичные продукты) или разбавленной (сухие яичные продукты) соляной кислоты (смешивают по объему четыре части концентрированной соляной кислоты и одну часть дистиллированной воды), смывая все частицы яичного продукта, приставшие к стенкам колбы, подсоединяют холодильник и помещают в водяную баню, нагретую до температуры (70±2) °С, доводят до кипения и продолжают кипятить 20 мин, встряхивая колбу через каждые 5 мин. В процессе гидролиза через верхнее отверстие холодильника подают внутрь колбы небольшой поток азота. После окончания гидролиза колбу снимают с водяной бани, добавляют 10 см дистиллированной воды и охлаждают до комнатной температуры.

Параллельно из подготовленной по 7.6.2 пробы отбирают навески для определения массовой доли жира по ГОСТ Р 53746.

7.6.4 Экстракция липидов

Содержимое колбы переносят в цилиндр вместимостью 100 см, смывая остатки пробы с колбы в цилиндр с помощью 10 см дистиллированной воды. В колбу добавляют 25 см диэтилового эфира, встряхивают, промывая стенки колбы, и добавляют в цилиндр. Цилиндр с гидролизованной пробой закрывают стеклянной пробкой и энергично встряхивают с переворачиванием цилиндра в течение примерно 1 мин, периодически открывая пробку для сброса давления. Затем осторожно вынимают пробку и добавляют в цилиндр 25 см петролейного эфира, ополаскивая эфиром пробку и внутреннюю поверхность шлифа. Цилиндр закрывают пробкой и встряхивают с переворачиванием в течение примерно 30 с. Цилиндр оставляют в покое до полного разделения на водную и прозрачную эфирную фазы с четкой границей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность шлифа с помощью примерно 5 см петролейного эфира так, чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как можно больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см и переносят через воронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см, в которую предварительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронку диаметром 56 мм и длиной 80 мм, в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной стекловаты и насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).

Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед сбросом давления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до полного исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в холодильнике при температуре (6±2) °С не более 24 ч. При необходимости более длительного хранения колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °С (срок хранения - не более одной недели).

На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.

7.7 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутреннего стандарта)

7.7.1 С помощью стеклянной палочки отбирают из колбы экстрагированные липиды (7.6.4), помещают их в предварительно взвешенную фторопластовую реакционную камеру автоклава или стеклянную виалу и взвешивают с записью результата взвешивания в миллиграммах до первого десятичного знака (масса жира должна быть в пределах 40-50 мг). В реакционную камеру автоклава или виалу с навеской липидов вносят 1 см раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле (см. 7.2). Перемешивают для растворения липидов и добавляют смесь, приготовленную по 7.1. Реакционную камеру помещают в автоклав и закрывают крышкой (виалу плотно закрывают завинчивающейся крышкой с фторопластовой прокладкой). Перед закрыванием емкостей их внутренний объем продувают азотом. Автоклав (виалу) с пробой и смесью по 7.1 помещают в предварительно нагретый до (60±1) °С суховоздушный или жидкостной термостат и выдерживают при этой температуре в течение (80±2) мин, периодически перемешивая содержимое с интервалом примерно 15 мин.

7.7.2 После окончания термостатирования содержимое реакционной камеры или виалы переносят в пробирку вместимостью 25 см [можно использовать пробирку, в которой готовилась реакционная смесь (см. 7.1)]. В реакционную камеру или виалу вносят 3 см гексана, закрывают крышкой, энергично встряхивают и смыв добавляют в пробирку. В пробирку добавляют 7 см водного раствора хлорида натрия массовой долей 10%, закрывают пробкой, энергично встряхивают с переворачиванием в течение 10 с и оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю органическую фазу осторожно отбирают с помощью пипетки вместимостью 5 см и пропускают через воронку с силикагелем и сернокислым натрием (см. 7.3), предварительно промытой 3-4 см гексана (слой силикагеля в воронке должен все время быть смоченным растворителем), собирая фильтрат в пробирку вместимостью 5 см. После стекания раствора метиловых эфиров из воронки в нее добавляют 2 см гексана и фильтрат собирают в эту же пробирку. Окончательный объем раствора метиловых эфиров жирных кислот должен быть примерно 5-6 см.

Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот - 48 ч в холодильнике при температуре (6±2) °С.

7.8 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации)

Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реакционную камеру или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1 см раствора бутилокситолуола в толуоле, приготовленного по 7.3.

8 Проведение измерений

8.1 В испаритель хроматографа вводят 1 мм раствора метиловых эфиров жирных кислот, приготовленных по 7.7 (метод внутреннего стандарта) или по 7.8 (метод внутренней нормализации). Хроматографирование проводят дважды. На полученной хроматограмме размечают все пики (кроме пика бутилокситолуола) и с помощью программного обеспечения определяют значения площадей пиков.

9 Обработка результатов

9.1 Идентификация хроматографических пиков

Идентификацию пиков проводят по времени удерживания хроматографических пиков по ГОСТ Р 51483 или путем сравнения хроматограммы пробы с хроматограммой тестовой смеси метиловых эфиров жирных кислот. На рисунке 1 показана хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот, типичная для липидов куриных яиц.

Для интерпретации пиков можно воспользоваться приложением Б, в котором приведен характерный для куриных яиц перечень жирных кислот, порядок их выхода на хроматограмме (колонка Omegawax 320) и диапазон значений площадей пиков в процентах по отношению к сумме площадей всех пиков метиловых эфиров жирных кислот.

Сумма относительных площадей не идентифицированных пиков не должна превышать 0,5%. Соответствующее значение должно быть указано в протоколе испытаний.

9.2 При определении жирно-кислотного состава методом внутренней нормализации массовую долю индивидуальной жирной кислоты , %, по отношению к сумме масс всех жирных кислот вычисляют по формуле

, (1)

где - площадь хроматографического пика метилового эфира определяемой жирной кислоты;

- сумма площадей всех идентифицированных хроматографических пиков метиловых эфиров жирных кислот с учетом соответствующих поправочных коэффициентов (см. приложение А);

- поправочные коэффициенты, учитывающие различия в чувствительности детектора ПИД к метиловым эфирам разных жирных кислот и отличия молекулярных масс жирных кислот и их метиловых эфиров (коэффициенты приведены в приложении А);

- общее количество определяемых жирных кислот.

В качестве результата единичного измерения принимают среднеарифметические значения , полученные для двух хроматографирований одной и той же смеси метиловых эфиров жирных кислот.

9.3 Массовую долю жирных кислот , %, в экстрагированных из продуктов липидах вычисляют по методу внутреннего стандарта по формуле

, (2)

где и - соответственно абсолютные значения площадей пиков и поправочных коэффициентов для определяемых жирных кислот;

и - соответственно абсолютные значения площадей пиков и поправочных коэффициентов для внутреннего стандарта (метиловый эфир трикозановой кислоты С23:0);

- массовая концентрация метилового эфира трикозановой кислоты в стандартном растворе в толуоле, мг/см;

- объем стандартного раствора метилового эфира трикозановой кислоты, вносимого в реакционную камеру автоклава или виалу, см;

0,962 - отношение молекулярных масс трикозановой кислоты и ее метилового эфира;

- масса навески экстрагированных липидов, использованной для получения метиловых эфиров жирных кислот, мг.

В качестве результата единичного измерения принимают среднеарифметические значения , полученные для двуххроматографирований одной и той же смеси метиловых эфиров жирных кислот.

9.4 За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение (метод внутренней нормализации) или (метод внутреннего стандарта) результатов двух определений, выполненных в условиях повторяемости по ГОСТ Р ИСО 5725-1 для двух идентичных проб яиц или яичных продуктов, если выполняется условие приемлемости

, (3)

где , - результаты единичных определений для двух идентичных проб массовых долей индивидуальных жирных кислот (см. 9.2) или (см. 9.3), %;

- предел повторяемости при 0,95, % (таблицы 1 и 2).

9.5 Расхождение между результатами двух независимых определений, полученных при использовании одного и того же метода, на одной и той же пробе, в разных лабораториях, разными операторами, с использованием различного оборудования, должно удовлетворять следующему условию приемлемости:

, (4)

где , - среднеарифметические значения результатов определения массовых долей индивидуальных жирных кислот (метод внутренней нормализации) или (метод внутреннего стандарта), полученных в двух разных лабораториях, %;

- значение критической разности при 0,95 и двух параллельных определений в каждой лаборатории, % (таблицы 1 и 2).

10 Оформление результатов

10.1 Результат измерений представляют в виде

, (5)

где - среднеарифметические значения результатов определения массовых долей индивидуальных жирных кислот или , %, признанных приемлемыми по 9.4;

- границы абсолютной погрешности, %, при 0,95 (таблицы 1 и 2).

Результат измерения округляют до первого десятичного знака.

10.2 Массовую долю индивидуальных жирных кислот в пересчете на исходный продукт, мг/100 г продукта, вычисляют по формуле

, (6)

где - среднеарифметические значения результатов определений по методу внутреннего стандарта массовых долей индивидуальных жирных кислот в экстрагированных липидах (см. 9.3), %;

- массовая доля жира в подготовленной лабораторной пробе продукта (см. 7.6.2), измеренная по ГОСТ Р 53746, %.

Результат вычислений округляют до целого числа.

11 Требования к условиям измерений

При выполнении измерений температура и относительная влажность в лабораторном помещении, напряжение и частота переменного тока питающей электросети не должны выходить за предельные значения, приведенные в технических инструкциях на средства измерений и оборудование, указанные в разделе 6.

12 Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или среднее специальное образование и опыт работы в химической лаборатории, изучившие инструкцию по эксплуатации газового хроматографа и прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие газохроматографический метод определения жирно-кислотного состава в процессе обучения и получившие удовлетворительные результаты при оперативном контроле процедуры измерения.

13 Требования безопасности

13.1 При подготовке и проведении испытаний необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами и горючими газами по ГОСТ 12.1.007, правила пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и правила взрывобезопасности по ГОСТ 12.1.010. При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

13.2 При работе со сжатыми газами следует соблюдать правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением [3]. Запрещается работать с негерметичными газовыми линиями хроматографа.

13.3 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с концентрированной соляной кислотой, метанолом, диэтиловым и петролейным эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу.

Ацетилхлорид вызывает раздражение кожи и слизистых оболочек, поражает дыхательные пути, поэтому работу с ацетилхлоридом следует проводить только в вытяжном шкафу с применением индивидуальных средств защиты.

Приложение А
(обязательное)

Значения поправочных коэффициентов для вычисления массовых долей жирных кислот

А.1 Значения поправочных коэффициентов для вычисления массовых долей жирных кислот приведены в таблице А.1.

Таблица А.1

Приложение Б
(справочное)

Наименования и диапазон значений относительных площадей хроматографических пиков жирных кислот

Б.1 Названия и обозначения жирных кислот, а также диапазон значений относительных площадей хроматографических пиков к сумме площадей всех пиков, характерных для липидов куриных яиц (жирные кислоты перечисляются в порядке выхода соответствующих хроматографических пиков при использовании капиллярной колонки Omegawax 320), приведены в таблице Б.1.

Таблица Б.1

Библиография

[1] Omegawax Column Test Mix. Фирма Supeico, США, кат. N 48476

[2] PUFA-2, Animal Source. Фирма Supeico, США, кат. N. 47015-U

[3] ПБ 10-115-96* Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением. Утверждены Постановлением Гостехнадзора России от 18 апреля 1995 г. N 20

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ПБ 03-576-03. - .

Электронный текст документа

и сверен по:

, 2012