База ГОСТовallgosts.ru » 67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ » 67.120. Мясо, мясные продукты и другие животные продукты

ГОСТ Р 57481-2017 Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа

Обозначение: ГОСТ Р 57481-2017
Наименование: Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа
Статус: Принят

Дата введения: 07/01/2018
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 67.120.20
Скачать PDF: ГОСТ Р 57481-2017 Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа.pdf
Скачать Word:ГОСТ Р 57481-2017 Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа.doc


Текст ГОСТ Р 57481-2017 Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТР

57481-

2017

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа

Издание официальное

Москва

Стандартииформ

2017

ГОСТ Р 57481—2017

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» Российской академии наук (ВНИИПП)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2017 г. Nc 468-ст

4    8ВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. No 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января пюкущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Сгандартинформ. 2017

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 57481—2017

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ. ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes)

методом молекулярного анализа

Poultry slaughtering products, poultry meat products and environmental production objects. Pathogen microorganisms identification (Salmonella spp., L. monocytogenes) by molecular analysts method

Дате введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется:

•    на продукты убоя птицы (тушки, части тушек, жир-сырец, кожу, субпродукты, мясо птицы мехами* ческой обвалки, кость птицы пищевую, сырье коллагенсодержащее), полуфабрикаты из мяса птицы, а г. ч. высокой степени готовности, и яичные продукты, предназначенные для пищевых целей (далее — продукт):

•    продукцию из мяса птицы и яиц сельскохозяйственной птицы, готовую к употреблению — кол* басные, кулинарные изделия, консервы и др. (далее — готовые продукты);

•    объекты окружающей производственной среды (технологическое оборудование, тара, иивен* тарь. стены и полы производственных цехов, воздух в производственных цехах, одежда и поверхность рук работников).

Настоящийстандартустанаеливает молекулярный метод качестаенногообнаружения патогенных бактерий родов Salmonella spp. и L.monocytogenes на основе технологии петлевой изотермической амплификации ДНК(Ь4МР) и биолюминесценткой детекции.-

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76*1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтома* тического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ 8756.0 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ ISO 16140 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Издание официальное

1

ГОСТ Р 57481—2017

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27987 Анализаторы жидкости потенииометрические ГСП. Общие технические условия

ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 31468 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл

ГОСТ 31659 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ 32031 Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes

ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 52313 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты пищевые. Термины и определения

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего попьэоаания — на официвпьном сайте Федврапьного агентства по техническом/ регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликовен по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных еденную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, не который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта а ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применятьбеэ учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. в котором двна ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52313, ГОСТ 7702.2.0. ГОСТ 31468, ГОСТ 32031,

4    Сущность метода

Технология петлевой изотермической амплификации ДНК [LAMP) использует несколько праймеров, которые распознают различные участки гена-мишени бактерий рода Salmonella spp. и L. monocytogenes. Целевая ДНК непрерывно амплифицируется, при этом процесс является высокоспецифичным и быстрым и приводит к появлению более 109 копий ДНК всего за 15 мин. Биолюминесценция применяется для отображения амплификации ДНК патогенных бактерий в режиме реального времени. Она включает всебя двухэталныйферментативный процесс, в котором молекулы пирофосфата, являющиеся побочным продуктом амплификации ДНК. используются для генерации света. Это свечение затем считывается прибором. Положительные результаты отображаются в режиме реального времени, тогда как отрицательные результаты отображаются по окончании анализа.

Этап предварительного обогащения анализируемых проб является обязательным этапом анализа, обеспечивающим биологическое накопление возбудителей.

5    Требования безопасности

5.1    Общие требования проведения микробиологических исследований — по ГОСТ ISO 7218, в том числе требования безопасности кработесмикроорганизмами III и IV групп патогенности — no[1j. (2).

5.2    При подготовке и проведении анализа необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.3    Помещение, в котором проводят анализ, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004. и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4    При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТР 12.1.019.

5.5    Требования к персоналу — по ГОСТ ISO 7218.

2

ГОСТ Р 57481—2017

6    Аппаратура, оборудование, материалы и реактивы

6.1    Аппаратура, оборудование и материалы — по ГОСТ 7702.2.0 со следующими долопнениями:

•    анализатор потенциометрический с погрешностью измерения pH ± 0,01 вд. pH по ГОСТ 27987;

•    компьютер, совместимый с программным обеспечением прибора для молекулярного анализа;-

•    система молекулярного анализа в комплекте:

1)    прибор для молекулярного анализа (амплификатор),

2)    программное обеспечение (ПО).

3)    нагревательный блок.

4)    охладительный блок.

5) инструмвнт для запечатывания и распечатывания лизис-пробирок.

6)    инструмент для запечатывания и распечатывания реагент-пробирок,

7)    штатив для лизис-пробирок.

8)    штатив для реагент-пробирок.

•    микродозаторы (одноканальные или 8-канальные) лилеточные номинальной вместимостью 20. 50 мм3 с относительной погрешностью дозирования не более ± 1 % с соответствующим наконечником по ГОСТ 28311:

•    наконечники для микродозаторов с фильтрами 0.5—50 мм3;

•    пакеты для гомогенизации образцов с фильтром;

•    колбы по ГОСТ 25336;

•    термостаты электрические для выращивания микроорганизмов с автоматическим терморегулятором. обеспечивающим поддержание температуры от 20 *С до 55 °С по ГОСТ ISO 7218;-

•    весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности и пределами допускаемой абсолютной погрешности 10.001 г;

•    баня водяная, поддерживающая температуру до 100 °С по ГОСТ ISO 7218:

•    термостат твердотельный блочный с автоматическим терморегулятором и таймером, обеспечивающий поддержание температуры до (100 ± 1) °С;

•    тест-наборы для обнаружения патогенных бактерий родов Salmonella spp. и L.monocytogenes по документации изготовителя, содержащие:

1)    лизис-пробирки с 580 мм3 раствора для лизиса в каждой пробирке — 96 шт. (12 стрипов по 8 пробирок),

2)    реагент-пробирки с лиофилиэировакной смесью для амплификации — 96 шт. (12 стрипов по 8 пробирок).

3)    запасные колпачки для реагент-пробирок — 96 шт.;

4} пробирки для контроля реагентов с лиофилиэированой смесью для амплификации и контрольной ДНК— 16 шт.

6.2    Допускается применение других аппаратуры и оборудования с техническими характеристиками. а также материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

7    Подготовка к проведению анализа

7.1    Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 7702.2.0. ГОСТ 9792. ГОСТ 8756.0

Для отбора проб окружающей среды используют губку (спонж) или тампон с нейтрализующим раствором, не содержащие антимикробные вещества.

Размер участка пробы для проверки присутствия или отсутствия патогенов на поверхности составляет 100см2 (10x10 см). Забирая пробу с помощью губки, покрывают весь участок в двух направлениях (слева направо, затем сверху вниз).

7.2    Подготовка посуды — по ГОСТ 31468.

7.3    Подготовка комплектующих изделий системы молекулярного анализа

7.3.1    Подготовка охладительного блока

Перед применением охладительного блока необходимо убедиться в том. что он хранился при комнатной температуре от 15 вС до 25 *С.

7.3.2    Подготовка нагревательного блока

Нагревательный блок помещают в твердотельный блочный термостат и задают температуру (100 ± 1) *С. которая достигается в течение 30—50 мин.

3

ГОСТ Р 57481—2017

7.3.3 Подготовка прибора для молекулярного анализа

Запускают программное обеспечение для молекулярного анализа. Включают прибор для молекулярного анализа, вносят данные для каждой пробы (дату анализа, наименование и код образца).-

Прибор должен достичь температуры 60 вС и поддерживать ее. Нагревание прибора длится около 20 мин и фиксируется световым сигналом оранжевого цвета, при достижении температуры — зеленым. Затем в прибор загружают штатив с реагент-пробирками.

7.4 Питательные среды

Среды для предварительного обогащения:

-    Salmonella spp. — забуференная пептонная вода по ГОСТ 7702.2.0;

-    L.monocytogenes — бульон Фразера полуконцентрированный по ГОСТ 32031.

8 Проведение анализа

8.1 Предварительное обогащение пробы

Цель — увеличение количества клеток патогенных бактерий.

Среды для предварительногообогащения (забуференная пептонная вода и бульон Фразера полу-концентрированный) подогревают до температуры (37.0 ±1.0) вС или (41,5 ± 1.0) °С в зависимости от группы продуктов (готовые или сырые либо пробы, отобранные из окружающей производственной среды) согласно таблицам 1 и 2.

В асептических условиях в каждый пакет с фильтром или колбу помещают необходимое количество среды для предварительного обогащения и количество пробы продукции или пробы из окружающей среды согласно таблицам 1 и 2.

Затем тщательно перемешивают содержимое пакета или колбы в течение 2 мин.

Инкубируют в термостате при температуре (37.0 ± 1.0) вС или (41.5 ± 1,0) СС согласно таблицам 1 и 2.

Таблице 1 — Обогащение пробы для обнаружения бактерии Salmonella зрр

Наименование продукции, от которой отобрана проба

Количество пробы.г

Объем среды (эабуференной лептокпой воды), си»

Температуре

инкубирования.

•с

Время

инкубирования.

ч

Анализируемый объем навески.

мм3

Готовые продукты из мяса птицы

2S

225

(37.0 z 1.0)

18—24

20

Продукты из мясе птицы (сырые)

25

225

(41.5 z 1.0)

18—24

20

Объекты окружающей произвол-стаенной среды

1 губка (спонж)

100

(41.5 х 1.0)

24—30

20

1 тампон

10

(41.5 z 1.0)

24—30

20

Таблица 2 — Обогащение пробы для обнаружения бактерии L.monocytogenes

Наименование продукции, от которой отобрана проба

Количество пробы.г

Объем среды (бупъома Фразера), см»

Температура

инкубирования.

•с

время

инкубирования.

ч

Анализируемый объем мееески. им5

Готовые продукты из мяса птицы

25

225

(37.0 z 1.0}

18—24

20

Продукты из мяса птицы (сырые)

25

225

(41.5 Z 1.0)

18—24

20

Объекты окружающей производ-стаенной среды

1 губка (спонж)

100

(41.5 Z 1.0)

24—30

20

1 тампон

10

(41.5 д 1.0}

24—30

20

8.2 Лизис

8.2.1 После инкубирования обогащенные пробы извлекают из термостата и осторожно перемешивают содержимое.

ГОСТ Р 57481—2017

8.2.2    Для каждой обогащенной пробы, а также пробы отрицательного контроля готовят ло одной лизис-пробирке и помещают в пустой штатив. Отрицательный контроль представляет собой стерильную среду обогащения (забуфервнную пептонкую воду или бульон Фразера лолуконцентрированный).

Во избежание вторичного загрязнения распечатывать лизис-пробирки на каждой пластинке следу* ет по очереди, а перед каждым этапом переноса проб необходимо менять наконечник для пипетки.

8.2.3    Переносят 20 мм3 обогащенной пробы в лизис-пробирку.

8.2.4    Проверяют, нагрелся ли нагревательный блок до температуры (100 ± 1) ®С. Помещают штатив с лизис-пробирками в нагревательный блок и оставляют нагреваться в течение (15 ± 1) мин.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Пробы, не прошедшие должную температурную обработку во время этапа лизиса, могут представлять биологическую опасность, поэтому не допускается вставлять их в прибор для молекулярного анализа.

Во время тепловой обработки цвет раствора в лизис-пробирках изменится с розового (холодный) на желтый (горячий).

8.2.5    В качестве альтернативы сухому нагреванию на этапе лизиса можно прибегнуть к нагреванию на водяной бане при (100 ± 1) СС. Необходимо, чтобы уровень воды в бане был выше уровня жидкости в лизис-пробирках. Погружают штатив с лизис-пробирками в водяную баню, нагретую до (10011) 4С, на(15±1)мим.

8.2.6    Извлекают штатив с лизис-пробирками из нагревательного блока и помещают его на охлаждение в охладительный блок (вставной) на (ЮН) мин. Во время охлаждения цвет раствора лизис-про-бирок снова станет розовым.

8.3    Амплификация

После этапа охлаждения лизис-пробирок из верхней части жидкости в пробирке переносят с помощью микропипетки 20 мм3 содержимого в реагент-пробирки. Переносить лизат в пробирку следует под определенным углом, чтобы не потревожить осадок. Перемешивают лизат в пробирке с помощью пипетки (набирают и выпускают жидкость из пипетки пять раз).

Реагент-пробирки помещают в прибор для молекулярного анализа. Для размещения реагент-пробирок в приборе используют лоток быстрой загрузки. Лоток входит в комплектацию прибора. Запускают программу. Результаты появятся в течение 75 мин. Положительные результаты могут появиться раньше.

Цепьэтала: амплификация ДНК искомой бактериальной клетки и быстрое накопление ДНК. Побочный продукт амплификации — пирофосфат — вступает в реакцию с термостабильной люциферазой (входит в комплект реагент-пробирки). Специфическое свечение в результате данной реакции фиксируется прибором, и результат предоставляется в относительных световых единицах (ОСЕ). Показатель ОСЕ с определенным порогом чувствительности указывает на наличие/отсугствие патогенных микроорганизмов.

8.4    Результаты анализа-

Специальный алгоритм анализирует кривую светоотдачи, выводимую в результате обнаружения амплификации нуклеотидных последовательностей. Программное обеспечение автоматически анализирует полученные данные и снабжает их цветовыми кодами. Анализ параметров кривой позволяет получить положительные или отрицательные результаты. Положительные результаты отображаются в реальном времени, а отрицательные — ло окончании анализа.

Положительные результаты следует подтверждать серологическими и биохимическими методами в соответствии с ГОСТ 31659. ГОСТ 31468. ГОСТ 32031.

9 Валидация метода

Валидация метода проведена с помощью межлабораторных испытаний по ГОСТ IS016140.

S

ГОСТ Р 57481—2017

Библиография

|11 СП 1.3.2322—08 Санитарно-эп/дем.*олог.;чес*не правиле «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 28 января 2008 г.

(2) МУ 1.3.2569—09    Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых

кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I—IV групп патогенности

УДК637.54:579.67:006.35    ОКС67.120.20

Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, бактерии рода Salmonella spp., L.monocytogenes, питательные среды, отбор проб, метод молекулярного анализа, система молекулярного анализа, результаты анализа и их интерпретация

63 7—2017/94

Редактор В.Н. Шмельков Технический редактор В. Н. Прусакова Корректор И.А. Королева Компьютерная верстка И.А. Налей киной

Сдано а набор 14.06.2017. Подписано а печать 16.06.2017. Формат 60 > 64^. Гарнитура Ариел. Уел. печ. л. 0.93. Уч.-иэд л. 0.74. Тираж 32 мз. Зак. 976.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано ео ФГУП «СТАНДАР ТИМ ФОРМ». 123995 Москва, Гранатный пор.. 4.