allgosts.ru07. МАТЕМАТИКА. ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ07.100. Микробиология

ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

Обозначение:
ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008
Наименование:
Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
Статус:
Отменен
Дата введения:
01.01.2010
Дата отмены:
Заменен на:
-
Код ОКС:
07.100.30

Текст ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

>

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ


НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТ Р исо 11133-2— 2008


МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ для животных РУКОВОДЯЩИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ И ПРОИЗВОДСТВУ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ СРЕД

Часть 2

Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ISO 11133-2:2000

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media (IDT)

Издание официальное

cn


Москва Стандартинформ 2010


Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

  • 1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Российской академии медицинских наук на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4

  • 2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

  • 3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. № 474-ст

  • 4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 11133-2:2000 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред» (ISO 11133-2:2000 «Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media»)

  • 5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ,2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

  • 1 Область применения

  • 2 Нормативные ссылки

  • 3 Термины иопределения

  • 4 Критерии обычного контроля качества

  • 5 Методы использования эксплуатационных испытаний культуральных сред

  • 6 Документирование результатов испытаний

Приложение А (рекомендуемое) Пример таблицы регистрации результатов испытаний культуральных сред, приготовленных лабораторией пользователя

Приложение В (рекомендуемое) Рекомендуемые тест-микроорганизмы для широко используемых культуральных сред (приводится информация о культуральных средах, условиях содержания сред, тест-микроорганизмах, номере коллекции культур тест-микро-организмов и ожидаемых реакциях)................................11

Библиография........................................................27

Введение

Важно, чтобы для проведения микробиологического анализа пищевых продуктов с большой степенью надежности использовались культуральные среды проверенного качества. Для всех сред, описанных в стандартизованных методах, является важным установить минимальные критерии приемлемости, требуемые для обеспечения надежности сред. Рекомендуется, чтобы при определении эксплуатационных характеристик культуральной среды проводились испытания, которые соответствуют настоящим техническим условиям. Это применяется:

  • 1) к приготовленным на коммерческой основе обезвоженным средам, готовым к употреблению;

  • 2) культуральным средам, приготовленным из основных компонентов в лаборатории пользователя.

Установление широко принятых минимальных критериев эксплуатации для сред должно привести к более однородному качеству продукции на коммерческой основе и тем самым сократить спектр испытаний, которые необходимо проводить 8 лаборатории пользователя.

Кроме того, минимальные критерии приемлемости, измеряемые методами, установленными в настоящем стандарте, могут использоваться всеми микробиологическими лабораториями для оценки свойств производительности, селективности и/или избирательности культуральной среды.

В микробиологическом анализе пищевых продуктов и кормов для животных требования настоящего стандарта являются приоритетными при оценке качества сред.

ГОСТ Р ИС011133-2—2008

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ РУКОВОДЯЩИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ И ПРОИЗВОДСТВУ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ СРЕД

Часть 2

Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 2. Practical guidelines on performance testing of culture media

Дата введения — 2010—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает критерии и методы эксплуатационных испытаний культуральных сред. Настоящий стандарт применяется:

  • - к коммерческим структурам, производящим и/или распространяющим готовые к употреблению или полуфабрикатные, восстановленные или обезвоженные среды для микробиологических лабораторий;

  • - некоммерческим структурам, поставляющим среды третьей стороне;

  • - микробиологическим лабораториям, осуществляющим приготовление культуральных сред для собственного использования и оценивание эксплуатационных характеристик этих сред.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована ссылка на следующий стандарт:

ИС011133-1:2000 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины лоИСО 11133-1.

4 Критерии обычного контроля качества

  • 4.1 Общие критерии качества

    • 4.1.1 Качество культуральных сред

Качество культуральных сред зависит от качества основных компонентов, правильности состава, качества процедур приготовления, устранения загрязняющих микробных агентов и надлежащих условий упаковки и хранения (см. ИС011133-1).

Производитель или оператор 8 лаборатории должен действовать в соответствии с физико-химическими характеристиками культуральных сред, как это установлено в соответствующем стандарте. Кроме того, оценивание качества должно гарантировать, что культуральная среда соответствует установленным рекомендациям, включая следующие характеристики:

  • - нанесенное количество и/или толщину;

Издание официальное

  • - внешний вид, цвет и гомогенность;

  • - однородность геля;

  • - содержание воды;

  • - значение pH;

  • - буферную емкость;

  • - микробное загрязнение.

Индивидуальные компоненты и любые питательные или селективные добавки также должны проходить надлежащие процедуры оценки качества.

  • 4.1.2 Качество основных компонентов сред

Культуральные среды, которые описываются в международных стандартах, рассматриваются как удовлетворительные; вместе с тем, из-за непостоянства их качества для производителей сред может быть приемлемым изменение концентрации некоторых основных биологических компонентов, приведенных ниже:

  • - пептонов и мясных или дрожжевых экстрактов, питательные свойства которых непостоянны;

  • - агара, гелеобразующие свойства которого непостоянны;

  • - буферных веществ;

  • - желчных солей, желчного экстракта и дезоксихолата, антибактериальных красителей, в зависимости от их селективных свойств;

  • - антибиотиков, в зависимости от их активности.

  • 4.2 Микробиологические критерии качества

    • 4.2.1 Общие положения

Испытания микробиологических эксплуатационных характеристик следует проводить с использованием пробы, которая является представительной для партии конечного продукта.

  • 4.2.2 Микробное загрязнение

Надлежащее количество, в зависимости от размера партии культуральной среды, должно быть испытано на микробное загрязнение путем инкубации в соответствующих условиях. Намеченные пределы количества загрязненных чашек или емкостей жидкой среды следует установить для каждой среды, или они должны быть установлены производителем. Производители должны составить технические условия, основываясь на компонентах сред, технологических ограничениях и типе упаковки.

Примечания

  • 1 Пробы, которые подвергаются испытаниям, должны представлять собой по меньшей мере одну чашку или пробирку либо 1 % чашек или пробирок от начала и одну чашку или пробирку, либо 1 % чашек или пробирок от конца процесса разливки или распределения. Чашки или пробирки следует инкубировать по меньшей мере в течение 18ч при 37 ФС или в условиях инкубации, которые обычно применяются для данной среды в соответствии с конкретным стандартом.

  • 2 Для плана статистической выборки см. ИСО 2859-1.

  • 4.2.3 Рост

    • 4.2.3.1 Общие положения

Для оценивания каждой партии культуральной среды в целом, питательных компонентов или добавок необходимо надлежащим образом оценить рост:

  • 1) количественным или

  • 2) полуколичественным или

  • 3) качественным методом.

Количественное, попуколичественное или качественное определение проводят методами, опи-саннымив настоящим стандарте, или другими общепринятыми методами. Для интерпретации результатов испытаний необходимо проводить сравнение величины роста в испытуемой среде сэтой величиной для эталонной среды. Использование конкретной эталонной среды является обязательным для количественного метода (см. соответствующий стандарт или приложение В).

В случае полуколичественного или качественного метода использование конкретной эталонной среды (см. соответствующий стандарт или приложение В) или культуральной среды, дающей «положительную» реакцию, помогает интерпретировать результаты. Эталонная среда должна быть проверенного качества, отобранная из недавно вылущенных партий, или партии другого поставщика, или готовая к употреблению среда и т.п.

Помимо этого, рост целевых штаммов должен быть типичным в плане внешнего вида, размера и морфологии колоний, и рост нецелевых штаммов должен быть частично или полностью ингибирован.

  • 4.2.3.2 Производительность

Твердые, полутвердые или жидкие культуральные среды должны быть инокулированы с использованием подходящего инокулята (см. 5.2.1.1) рабочей культуры каждого определенного тест-микроорга-низма при помощи надлежащего устройства.

Производительность должна достичь установленного минимального предела (см. соответствующий стандарт или приложение В).

Для количественного метода коэффициент производительности вычисляют по формуле

Pr = N$/Nq, (1)

гдеЛ/5 — общее количество колоний,полученных наданнойкультуральнойсреде при испытании (полученных на одной или более чашках);

No — общее количество колоний, полученных на определенной эталонной культуральной среде на одной или более чашках; оно должно быть £ 100 КОЕ (колониеобразующих единиц).

Примечание — Коэффициент производительности неселективной среды составляет по меньшей мере 0,7 для микроорганизмов, которые могут легко расти на этой среде. Pr целевых микроорганизмов на селективной среде должен быть не менее 0,1. Обычно достигаются эти значения, вместе с тем для определенных комбинаций сред и тест-микроорганизмов могут быть приняты менее жесткие критерии (см. соответствующий стандарт или приложение 8).

В случае лолукопичественных методов результаты подсчета в последовательных секторах чашки с инокуляцией экометрическим методом суммируются для получения показателя роста Gf, который варьируется в зависимости от культуральной среды. Таким образом, является существенным их сравнение с предыдущими показателями и/или с G, эталонной среды и обеспечение того, что имеющиеся вариации не превышают норму. Ожидаемый диапазон вариаций для каждой культуральной среды также может быть установлен, как только будет наработан достаточный опыт применения метода.

Качественные определения проводят визуально путем локализации баллов, характеризующих рост.

  • 4.2.3.3 Селективность

Для количественной оценки селективности селективные культуральные среды и эталонную среду инокулируют с использованием надлежащего инокулята (см .4.2.1.2) определенного тест-микроорганиз-ма при помощи надлежащего устройства. Селективность должна достичь определенных значений (см. соответствующий конкретный стандарт или приложение В).

Фактор селективности SF вычисляют по формуле

$F = &О~ &S’ (2)

где Оо — наибольшее разбавление, демонстрирующее рост по меньшей мере 10 колоний на эталонной среде;

Ds — наибольшее разбавление, демонстрирующее сопоставимый рост на испытуемой среде.

SF, Do и Ds выражены в единицах log 10.

Примечание — Sp нецелевых микроорганизмов на селективной среде должен быть не менее двух. Как правило, достигается это значение. Вместе с тем, для определенных комбинаций сред и тест-микроорганизмов могут быть приняты менее жесткие критерии (см. соответствующий стандарт или приложение 8).

Для полуколичественных и качественных методов рост неселективного штамма(ов) должен быть частично или полностью ингибирован.

  • 4.2.4 Биохимические и физиологические характеристики (селективность и специфичность)

Морфология колоний и диагностические особенности вместе со степенью селективности должны быть установлены с целью получения полной картины эксплуатационных характеристик среды.

Необходимо определить и достичь существенные характеристики специфичности. Для дифференциальных сред качество биохимических/физиологических характеристик целевого микроорганизма^) и степень ингибирования нецелевых микроорганизмов следует определить с использованием надлежащего набора испытательных штаммов.

  • 4.2.5 Характеристики антимикробных испытаний

Антимикробное действие антибиотиков зависит от характеристик их диффузии в агаре и любых антагонистических влияний присутствующих компонентов. Среды для испытаний присутствия или отсутствия антимикробных веществ в пробах пищевых продуктов должны подходить для эталонных методов.

  • 4.3 Оценивание эксплуатационных характеристик и интерпретация результатов

Партия культуральной среды демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики, если все используемые тест-микроорганизмы ведут себя в соответствии с приведенными в настоящем стандарте. Она должна быть принята в случае, если соблюдаются общие и микробиологические критерии качества.

5 Методы использования эксплуатационных испытаний культуральных сред

  • 5.1 Общие положения

Описаны примеры количественного, полуколичественного и качественного методов испытаний для твердых культуральных и жидких сред. В большинстве случаев полуколичественный и качественный методы, используемые в лаборатории пользователя, должны соответствовать требованиям к эксплуатационным испытаниям партии культуральной среды.

В особых случаях, например, при оценивании новой среды или нового производителя и т.п. количественные методы испытаний следует применять в лаборатории пользователя.

Предполагается, что общепринятые микробиологические методы известны и, следовательно, их полное изложение не приводится.

Релевантные тест-микроорганизмы приведены в приложении В (см. также ИС011133-1).

Примечание — В новые и пересматриваемые стандарты по определению или подсчету конкретных микроорганизмов или групп микроорганизмов следует включать описание релевантных тест-микроорганизмов. которые будут использоваться вместе с критериями приемлемости для каждой культуры в стандарте.

Для жидких сред взаимодействия, приводящие к успешному росту микроорганизмов, более сложные; таким образом, устанавливаемые методы эксплуатационных испытаний менее эффективны, чем для твердых сред.

Для успешной изоляции целевых микроорганизмов в многостадийном методе, например, определении Salmonella, на каждой стадии роста имеют место несколько сложных взаимодействий. В данном случае следует провести контрольное испытание с использованием надлежащих проб, культуры и эталонных веществ, чтобы продемонстрировать производительность или, соответственно, селективность всего метода. Кроме того, можно продемонстрировать, что каждый компонент среды соответствует целям.

  • 5.2 Тест-микроорганизмы

Релевантные эталонные штаммы целевых (продуктивность) и нецелевых (селективность) микроорганизмов для каждой культуральной среды приведены 8 приложении В. Тест-микроорганизмы должны соответствовать требованиям, изложенным в ИСО 11133-1 (пункт 5.2.2), например, речь идет о жизнестойких, медленно растущих, биохимически неактивных или поврежденных штаммах, когда это целесообразно.

Методические указания по консервированию и сохранению эталонных штаммов приводятся в приложении В ИСО 11133-2.

  • 5.2.1 Приготовление рабочей культуры

Рабочие культуры следует готовить как чистые культуры со стационарной фазой в неселективном бульоне из эталонных исходных культур.

Могут использоваться различные методы, но они должны гарантировать чистоту инокулята, а также его стандартизацию, которая позволит использовать его в последующей стадии.

Примечание — Замороженные инокуляты можно использовать, если будет показано, что данный микроорганизм способен выживать в течение выбранного периода.

  • 5.2.1.1 Рабочая культура для испытаний на производительность

Для количественных испытаний чашечной среды для требуемых микроорганизмов используется инокулят, содержащий приблизительно 102 КОЕ.

Для полуколичественных или качественных испытаний чашечной среды необходим инокулят, содержащий 103 — 104 КОЕ.

Для испытаний на производительность жидких сред используется инокулят, содержащий 10 — 100 КОЕ.

  • 5.2.1.2 Рабочая культура для испытаний на селективность

Для испытаний культуральных сред на селективность в чашку или в пробирку со средой инокулиру-ют суспензию нецелевых микроорганизмов, содержащую от 104 до 10б КОЕ.

  • 5.2.1.3 Условия инкубации

Инокулированные культуральные среды инкубируют с соблюдением условий, описанных в соответствующем стандарте и приведенных в соответствующих таблицах приложения В.

  • 5.3 Методы, применяемые в отношении твердых культуральных сред

    • 5.3.1 Метод количественного культивирования

      • 5.3.1.1 Общие положения

Это обычный метод, пригодный для большинства твердых культуральных сред. Он может быть непригодным для испытаний некоторых видов плесневых грибов.

  • 5.3.1.2 Процедура

Используют рабочие культуры в соответствии с 5.2.1.

Отбирают надлежащее число чашек, которые являются представительными для каждой партии, подлежащей испытаниям, иобеспечивают правильное высушивание поверхности каждойчашки. Чашки с эталонной средой готовят аналогичным образом.

По поверхности испытуемых и эталонных чашек распределяют инокулят разбавленной рабочей культуры с целью внесения количества, которое входит в рекомендуемые пределы, приведенные в 5.2.1.

Примечание — Может также использоваться чашечный метод для культуральных сред, обычно применяемых для подсчета таким образом.

Чашки инкубируют в соответствующих условиях, как это установлено в соответствующих стандартах.

Проводят подсчет колоний, присутствующих в каждой чашке или в каждой капле, по обстоятельствам. Оценивают размер и внешний вид колоний

  • 5.3.1.3 Расчеты

Исходя из объема, распределенного на чашках, и фактора разбавления, можно рассчитать среднее количество микроорганизмов в среде. В случае использования капельных методов необходимо принимать во внимание количество капель и их объем.

  • 5.3.1.4 Интерпретация результатов

Для интерпретации результатов следует рассчитать коэффициент производительности PR (см. 5.2.3.2) или фактор селективности SF (см. 5.2.3.3).

  • 5.3.2 Полуколичественный метод штриховой разводки, основанный на экометрии

    • 5.3.2.1 Общие положения

Метод штриховой разводки пригоден для эксплуатационных испытаний твердых и жидких культуральных сред, данный метод является только полуколичественным. Таким образом, показатели роста являются лишь ориентировочными, и он может рассматриваться только какдополнительное испытание твердых культуральных сред.

При использовании данного метода испытуемые культуральные среды необходимо высушить до одной и той же степени, и вся процедура должна быть стандартизирована, чтобы можно было сравнивать результаты, полученные для различных партий.

  • 5.3.2.2 Процедура

Чашки с агаром готовят обычным способом, используя около 15см3 агара. Среды,обычно используемые в чашечном методе, например агар с чашечным подсчетом, могут также подвергаться испытаниям поверхностным культивированием на затвердевших средах.

Используют рабочие культуры, как это описано в 5.2.1.

В чашки делают посев штрихом, как это показано на рисунке 1, используя петлю на 1 мкл. Проводят четыре параллельные линии петлей с интервалом приблизительно 0,5 см в секторе А. Штриховую разводку повторяют для секторов В и С и завершают в секторе D одной линией. Для помощи в выполнении точной штриховой разводки под чашкой можно использовать шаблон.

Соблюдают время и температуру инкубации, установленные в стандартных методах.

Примечание — В культуру необходимо погружать только петлю, но не проволоку. Петля должна быть полностью заполнена культурой. Избыточную жидкость удаляют трехкратным нажатием на расширенную часть петли, используя край емкости. При нанесении штриховой разводки угол между петлей и поверхностью агара должен быть от 20 * С до 30 °C. Давление петли на поверхность агара и скорость проведения штриховой разводки должны быть всегда соразмерны. Следует избегать погружения петли в культуру, если на поверхности бульона имеются пена и/или пузыри.

Обычно для штриховой разводки всех секторов от А до D используют одну и ту же петлю без обработки в пламени между операциями посева штрихом. В некоторых случаях, когда более низкий показатель роста Gf, как ожидается, должен продемонстрировать четко выраженные различия, могут быть уместными замена или стерилизация петли между операциями посева штрихом в секторах А и В.

Рисунок 1 — Образец проведения инокуляции при помощи модифицированного метода штриховой разводки и угол наклона петли

  • 5.3.2.3 Расчеты

После инкубации оценивают внешний вид, размер колоний и интенсивность роста и вычисляют показатель роста G,. Каждой линии посева, которая показывает рост, приписывают 1 балл. Максимальное количество баллов для чашки равно 16. Линии приписывают 0,5 баллов, если рост наблюдается только на половине ее длины. Линия, на которой роста нет или имеется ограниченный рост (менее половины длины), оценивается в 0 баллов. Баллы суммируют с целью получения Gt. Например, если рост наблюдается всекторах АиВ и в половине сектора С, G, будет равен 10.

  • 5.3.2.4 Интерпретация результатов

Показатель роста Gt, характеризующий целевой штамм, должен быть по меньшей мере равен 6, чтобы сделать выводы о приемлемости среды. В случае неселективных сред G, обычно выше.

Кроме того, рост целевого штамма должен быть типичным, а рост нецелевых штаммов должен быть частично или полностью ингибирован.

  • 5.3.3 Качественный метод штриховой разводки

    • 5.3.3.1 Общие положения

Данный метод пригоден для дополнительных эксплуатационных испытаний твердых культуральных сред.

Данный метод является только качественным, и, таким образом, оценка дается только приблизительная.

  • 5.3.3.2 Процедура

Чашкисагаром готовят обычным способом, используя около 15см3 агара. Среды,обычно используемые в чашечном методе, например агар с чашечным подсчетом, могут также подвергаться испытаниям поверхностным культивированием на затвердевших средах.

Используют рабочие культуры, как это описано в 5.2.1.

Тест-микроорганизмы наносят прямыми параллельными линиями, используя петлю на 1 мкл, на поверхность испытуемой среды. В одной и той же чашке можно осуществлять посев штрихом нескольких тест-микроорганизмов, не смешивая их.

Примечание — Возможно применение других стандартизированных методов штриховой разводки.

  • 5.3.3.3 Интерпретация результатов

Рост, наблюдаемый в чашках после инкубации, оценивается следующим образом:

  • - 0 соответствует нулевому росту,

-1 соответствует слабому росту и

  • - 2 соответствует значительному росту.

Целевые микроорганизмы должны оцениваться в 2 балла и иметь типичный внешний вид, размер и морфологию колоний. Рост нецелевых микроорганизмов должен быть частично или полностью ингибирован^ или 1).

  • 5.4 Методы, применяемые в отношении жидких культуральных сред

    • 5.4.1 Общие положения

Для определения производительности жидкой среды необходимо использовать подходящий инокулят. Количественный, лолуколичественный и качественный методы, описанные ниже, позволяют оценить производительность и селективность. Предлагаемые методы регистрируют степень роста после надлежащей инкубации путем культивирования или штрихового посева из жидких сред на агаровые среды и подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) или вычисления баллов для жидкой среды. В случае качественных методов для жидких сред характеристические реакции оценивают визуально.

  • 5.4.2 Количественный метод разбавления для целевых и нецелевых микроорганизмов Данный метод также пригоден для оценивания новых культуральных сред или разбавителей.

    • 5.4.2.1 Процедура

Отбирают нужное число пробирок или порций по 10 см3 каждой партии испытуемой жидкой среды. Инокуляция целевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон, используя каждый тест-микроорганизм с малым содержанием (например, от 10до 100 КОЕ в каждой пробирке; о приготовлении инокулята см. 5.2.1), и перемешивают.

Инокуляция нецелевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон, используя каждый тест-микроорганизм с более высоким содержанием (> 1000 КОЕ в каждой пробирке; о приготовлении инокулята см. 5.2.1), и перемешивают.

Инокуляция целевых и нецелевых микроорганизмов как смешанной культуры: для испытаний смешанных культур в селективных средах инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон малым количеством целевых микроорганизмов (например, от 10 до 100 КОЕ на каждую пробирку; о приготовлении инокулята см. 5.2.1) и в ту же пробирку вносят значительное количество нецелевых микроорганизмов (> 1000 КОЕ 8 каждую пробирку; о приготовлении инокулята см. 5.2.1), и перемешивают.

Инокуляция целевых и нецелевых микроорганизмов в разбавителях и транспортных средах: инокулируют разбавители тест-микроорганизмами (например, от 100до 1000 КОЕ в каждую пробирку; о приготовлении инокулята см. 5.2.1) и перемешивают.

Соблюдают время и температуру инкубации, установленные в стандартных методах.

Разбавители должны инкубироваться в течение 45 мин при комнатной температуре и затем быть разлиты по чашкам. Транспортные среды должны инкубироваться при соответствующей температуре и нужное время в соответствии с обычным использованием и затем быть разлиты по чашкам.

Берут аликвотный объем или, при необходимости, разбавление каждого бульона после инкубации и распределяют в чашке с неингибирующим агаром, как это описано в 5.3.1.

Примечание — Для испытаний смешанных культур необходимо проводить распределение, когда это возможно, на чашках с неселективным агаром, которое позволяет достичь дифференциации микроорганизмов в смешанной культуре (например, для подсчета видов Escherichia coli и Salmonella используется агар с чашечным подсчетом с MUG). В случае, когда невозможно различить смешанные культуры на неселективном агаре, следует использовать среды с селективным агаром при условии, что были предварительно испытаны их эксплуатационные характеристики.

  • 5.4.2.2 Снятие результатов, расчеты и интерпретация

После инкубации проводят подсчет колоний целевых и нецелевых микроорганизмов, в случае, если в смешанных культурах можно различить разные типы. Расчеты и интерпретацию следует проводить с учетом цели исследования:

  • 1) сравнительная интерпретация между эталонным и испытуемым бульонами, используя значения PR и Sp, как это описано в 4.2.3.2 и 4.2.3.3:

-для целевых микроорганизмов PR не должен быть < 0,1 (разница в росте не превышает одного порядка величины);

  • - для нецелевых микроорганизмов Зрдолжен достигать по меньшей мере 2;

  • - в смешанных культурах рост целевых микроорганизмов не должен ингибироваться нецелевыми микроорганизмами, т.е. целевые микроорганизмы должны всегда быть доминирующей популяцией;

  • 2) в других случаях, когда достигается фиксированное минимальное количество целевых микроорганизмов и максимальное количество нецелевых микроорганизмов, более уместно, что:

  • - содержание целевых микроорганизмов должно достигать от 106 КОЕ/см3 до 10® КОЕ/см3;

-содержание нецелевых микроорганизмов не должно превышать 104 КОЕ/см3 в селективном бульоне;

  • 3) в случае разбавителей и транспортных сред не требуется ни пониженное, ни повышенное количество целевых и/или нецелевых микроорганизмов. Число микроорганизмов после инкубации в данных средах должно быть в пределах ± 50 % от исходного количества.

Примечание — Качество жидкой среды в плане свойств оптимального роста проявляется наиболее обстоятельно на ранней стадии роста. Анализ продолжительности лог-фазы и роста в начале лог-фазы дает наиболее точную информацию относительно производительности и селективности целевых и нецелевых микроорганизмов соответственно в испытуемом и эталонном бульонах. Таким образом, если пытаются обнаружить только минимальные различия в качестве сред, следует провести штриховой посев из жидких сред в чашках после сокращенного периода инкубации продолжительностью, например 6 или 12 ч.

  • 5.4.3 Полуколичественный метод с одной пробиркой для целевых, нецелевых и смешанных микроорганизмов

    • 5.4.3.1 Процедура

Отбирают нужное количество пробирок или порций по 10 мл каждой испытуемой партии.

Инокуляция целевых и нецелевых микроорганизмов как смешанной культуры: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона примерно от 10 до 100 КОЕ целевых микроорганизмов и в ту же пробирку инокулируют повышенное число нецелевых микроорганизмов (> 1000 КОЕ на каждую пробирку) и перемешивают.

Инокуляция нецелевых микроорганизмов: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона микроорганизмами с повышенным содержанием (> 1000 КОЕ) и перемешивают.

Соблюдают время и температуру инкубации, установленные в стандартных методах.

Отбирают 10 мкл смешанной культуры и проводят штриховой посев в чашке с конкретной селективной средой для целевых микроорганизмов.

Отбирают одну петлю (10 мкл) культуры нецелевых микроорганизмов и проводят штриховой посев в чашке с неселективной средой (например с триптиказо-соевым агаром).

Инкубируют обе чашки в надлежащих условиях необходимое время, какэто установлено в соответствующих стандартах.

  • 5.4.3.2 Расчеты и интерпретация результатов

Производительность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если по меньшей мере 10 колоний целевых микроорганизмов выросли в чашке с селективным агаром.

Селективность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если не наблюдалось никакого роста (или менее 10 КОЕ) нецелевых микроорганизмов в чашке с неселективным агаром.

  • 5.4.4 Качественный метод с одной пробиркой

    • 5.4.4.1 Общие положения

Данный метод пригоден для эксплуатационных испытаний жидких культуральных сред. Метод является только качественным, и оценки, таким образом, приблизительные. Для испытания мутных сред, например тетратионатный бульон, этот метод не применим.

  • 5.4.4.2 Процедура

Для эксплуатационных испытаний жидких культуральных сред рабочие культуры непосредственно инокулируют в испытуемую среду, используя петлю на 1 мкл.

Соблюдают время и температуру инкубации, установленные в стандартных методах.

  • 5.4.4.3 Интерпретация результатов

Качественное определение следует проводить визуально путем определения баллов роста, например, от Одо 2.

Для пробирок и бутылок

  • - 0 соответствует нулевой мутности;

-1 соответствует очень слабой мутности;

  • - 2 соответствует удовлетворительной мутности.

Число баллов для целевых микроорганизмов должно быть равно 2.

Примечания

  • 1 Иногда рост микроорганизмов можно наблюдать только как агрегацию, осаждение клеток на дне пробирки или бутылки. В этом случае оценивание и интерпретацию может улучшить тщательное встряхивание.

  • 2 Данный метод позволяет также оценить другие характеристики, такие как образование газа, изменение цвета и т.п.

6 Документирование результатов испытаний

  • 6.1 Информация, предоставляемая производителем

Производитель или поставщик культуральных сред должен по запросу предоставлять сведения о характеристиках конкретного микробиологического роста и общую информацию, касающуюся конкретной партии культуральной среды.

  • 6.2 Прослеживаемость

Все данные обычных эксплуатационных испытаний должны быть задокументированы надлежащим образом и храниться в течение достаточного периода времени в соответствии с действующей системой качества. Рекомендуется использование контрольных листов для документирования и оценивания результатов испытаний (см. приложение А).

Приложение А (рекомендуемое)

Пример таблицы регистрации результатов испытаний культуральных сред, приготовленных лабораторией пользователя

Таблица А.1 — Пример таблицы

Контрольная таблица для внутренних испытаний на качество культуральных сред

Культуральная среда:

Приготовленный объем:

Дата добавления:

Внутренний номер партии:

Обезвоженная среда (и код):

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Добавка:

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Подробности процесса

Физический контроль качества

Ожидаемое значение pH:

Измеренный pH:

Качество подтверждено: да □ . нет □

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемое заполняющее количество и/или толщина слоя:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да □ , нет □

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемый цвет:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да □ , нет □

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемая прозрачность/ присутствие оптических ар* тефактов:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да □, нет □

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемые стабильность/ постоянство/влажность геля:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да □ ,нет □

Дефекты:

Дата/подпись:

Микробное загрязнение

Номера испытуемых чашек или пробирок: Инкубация:

Результат:

Качество подтверждено: да □ , нет □

Номера загрязненных чашек или пробирок

Дата/подпись:

Микробиологический рост — Производительность

Метод контроля: Количественный □ Качественный □

Штаммы: Инкубация: Эталонная среда:

Критерии:

Результат:

Качество под

тверждено: да □ . нет □

Дата/подпись:

Микробиологический рост — Селективность

Метод контроля: Количественный □ Качественный □

Штаммы: Инкубация: Эталонная среда:

Критерии:

Результат:

Качество под

тверждено: да □. нет □

Дата/подпись:

Микробиологический рост — Специфичность

Метод контроля: Количественный □ Качественный □

Штаммы: Инкубация: Эталонная среда:

Критерии:

Результат:

Качество под

тверждено: да □ , нет □

Дата/подпись:

Выпуск партии

Подробности хранения

Выпуск партии да □ , нет □

Дата/подпись:

Приложение В (рекомендуемое)

Рекомендуемые тест-микроорганизмы для широко используемых культуральных сред (приводится информация о культуральных средах, условиях содержания сред, тест-микроорганизмах, номере коллекции культур тест-микроорганизмов и ожидаемых реакциях)

Таблицы В.1 — 8.6 составлены, принимая во внимание контрольные штаммы, используемые в Европейской фармакопее, и рекомендации фармакопеи, касающиеся микробиологии пищевых продуктов в отношении культуральных сред (Рабочая группа Международного комитета по микробиологии пищевых продуктов и гигиене). Данные критерии предстоит включить в соответствующие стандарты при их подготовке или пересмотре в будущем (новый стандарт или пересмотр). Утвержденная партия среды — это партия среды, которая показала удовлетворительные эксплуатационные характеристики. Допускается использование тех же штаммов из других эталонных коллекций (например. NCTC, CIP и др.). Все приводимые среды описаны в стандартах ЕН и ИСО.

Й Таблица 8.1 — Селективные среды для подсчета микроорганизмов

Среда

Тил

MmpOOpr Вниз ыы

Обоыачение стандарта

ФуМбЦИЯ

Инкубации

Конгротмыо штаммы

Эталонные среды

Метод «РНТрОЛЙ

критерии

Характерная реакция

Бэрда-Паркера

S*

Коагуляэоло-ложи тельные стафилококки

ЕН ИСО 6888-1

Производительность

24—48 чО7 X

S. aureus АТСС 6538 S aureus АТСС 25923’

Триптика-эосоееый агар (TSA)

Колимеет-

PR г 0.5

Черные^ерые колонии с чет->им ореолом (реакция гфо-сеетления яичного жалпи)

Селективность

48ч/37Х

Е. СОЙ

АТСС 25922 или 8739-

Качественный

Полное интиби-poeai«e

Специфичность

24—48 чЯ7 X

S. epidermtts АТСС 12228*

—• Качествен

ный

Черные^ерые колонии без реакции просвет, летыя яи**юю желтка

RPFA

S

Коагуляэопо-ложи тельные стафилококки

ЕН ИСО 6888-2

Производительность

24—48 4137 -С

S. aureus АТСС 6538 или 6538 Р

S. aureus АТСС 25923*

TSA

Кол имеет-

PR г 0.5

черные^серые полонии с тем-wm ореолом

Селективность

48W37X

Е. сой

АТСС 25922 или 8739-

Качественный

Полное ингибирование

Специфичность

24—48 чЯ7 X

S. ерйЬлпк&к

АТСС 12228*

Качественный

Черные^серые колонии без тэьыого оиеола

Хлор-амфеникол или OGA (OGY)

S

Дро жж ^плесневые грибы

ИСО 7954

Производительность

3—5дней/25‘С

С. albicans АТСС 10231 A. niper АТСС 16404* Р. cydopium АТСС 16025 S. cecevislee АТСС 8763*

SOA. ОСА илы хлорамфеникол агар

Кол имеет-

PR г 0.5

Характерные колонии в соответствии с каждым видом

Селектив

ность

3—бдней/25-C

Есой

АТСС 25922 или 8739-

в. Subt*S

АТСС 6633

Качественный

Полное ингибирование

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Продолжение таблицы вл

Среда

Тип

1А*«роорганиэиы

Обозначение ст«йрта

Функции

Ижубаиия

Контрольные штаммы

Эталонные среды

Метод контрола

Критерии

Характерная реакций

MRS

S

Молочнокислые бактерии

ИС015214

Производительность

72W30*C

L sake АТСС 15521* Ped. damnoeus АТСС 29358

Lc. laclis АТСС19435*

Партия среды MRS. ужо утверх-де»*ая

Количественный

PR20.5

Характерные колонии а соответствии с каждым видом

Сепеггив-

кость

72W30X

E.coi

АТСС 25922 «*8739»

Качает-ве»*ый

Полное ингибирование

В. cereus АТСС 11778

МУР

S

ВасВив сегеиз

ЕЫИСО

7932

Производительность

24-U8 чООХ

В. oereus АТС С 11778*

TSA

Количесь Вв**ЫЙ

PR г 0,7

Розовые колонии с ореолом осадка

Селективность

48W37X

Е. со<

АТСС 25922 нгы8739*

Качестве»* ый

Полное имиби* роеание

Специфичность

4BW37X

В. Subdks АТСС 6633*

Желтые колонии без ореола осадка

Oxford

S

Listeria mono* cytogenes

EN ИСО 11290

производительность

4BW37X

L mono 1/2а

АТСС 19111

TSA

Количестве»* ьй

PR г0.5

Черно-серые колонии с черным ореолом

L mono 4Ъ АТСС 13932*

Селективность

48W37 *С

E.COI АТСС 25922

Качестве** ый

Полное ингибирование

Е. toecafe АТСС 29212 или 19433

С. аЬсале АТСС 10231

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Продолжение таблицы В 1

Среда

Tki

№ф0дрГ>1КЭМЫ

Обомчение стандарта

Фуиаддий

Инкубация

Контрольные штампы

Эт злотые среды

1

Метод контроля

Критерии

Х&ремерная реакит

PAL САМ

S

Listeria monocytogenes

EN0CO

11290

Производительность

48*374С

L mono 1/2а

АТСС 19111

TSA

Количественный

PR г 0.5

Серо-зеленые и черные кол> нии с черным ореолом

Lmono4b АТСС 13932*

Селективность

72 *30*С

Е.ооб

АТСС 25922 ИЖ В739”

Качественней

Полное икмбн-рование

Е. Uecefcs АТСС 29212 мт 19433

TS(C)

S

Ckrs indium perfnngens

EH ИСО 783?

Производи* гельносш

20*37*0 (анаэробная атм.)

Cl. periringens

АТСС 13124

Партия среды TS(CX уже утвержденная

Количест-ООннье!

PRaO.7

Черные коло-нт

Cl. pertringens

АТСС 12916

Селесгиэ-ноет» TSC

20 *37*0 (анаэробная атм.)

Е. сой

АТСС 25922

мт 8739

Количественный

Полное ингибирование

Слецифич-ноет» TS

Количественный

Белые коло-ним

VR8G

S

Enterobecte-riaoeae

ИСО 7402.

ИСО 8523

Производительность

24*37 *С

Е. сой

АТСС 25922 илмВТЗГ

TSA

Количественный

PR а 0.5

Розово-красные КОЛОНИИ с ореолом или баз ореола осадка

S. typftmurium АТСС 14028

Селективность

24*37*0

Е. taecafcs АТСС 29212 и» 19433”

Качественный

Полное икмби-рованне

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Продолжение таблицы в. f

Сред»

Тип

(Анрооранкэмы

Обомчение стаадерта

Функция

Имс^ация

Контрольные штаммы

Эталонные среды

Метод контроля

Критерии

Харомеркш* реэдде

VR8L

S

Cotiforms

ИСО 4332

Производи* гельнос1ь

24W30*C

Е оой

АТСС 25922 ил* 8739*

TSA

Ко пи чес т-

веннъы

PR 20.5

Пурпурные ко-1 юты с ореолом или без ореола осадка

Селективность

24 ч*30 *С

E.teecafes АТСС 20212 ил> 19433*

Качест-

001 и ival

Полное икмбн-рованне

Специфичность

24ч*30*С

Ps. aeruginosa АТСС 27853

Качест-

Бесцветные или бежевые колонии

CT-SMAC

S

Escherichia СОк 0157

ИС016654

Производи* гельносгь

24 ч/37 *С

Е.«1О157:Н7

АТСС 43894 или 43895* (не юксикстен-НМ)

TSA

Количественном

г

PR 2 0.5

Прозрачные КОЛОНИИ с бледной жел-зоеато-корич* туевой окраской и диаметром около

1 ММ

Селекти* ностъ

24ч/37*С

S. aureus АТС 6538 иж 25923*

*

Качест-

— ■.

Г

Полное икнби-ровапне

Слецифич-ностъ

24 4F37X

Е. оой

АТСС 11775 ил* 25922*

*

Качественный г

Розовые колонии

8GBLB

1/

Cotforms

ИСО 4831

Производи* тельное г ь

24—48ч*30 *С

Е. сой

АТСС 25922 нл*В739*

С. freurti

АТСС 43864

*

Полуио-личест-венньй

4

Мутность 2 * газ в 1/3 про-бирси Дирхама

Образование газа и мутность

Селективность

24—48 ч/ЗО *С

Б. taecafes АТСС 29212 ww 19433*

•л------------

Качестве** ьй

Отсутствие роста

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

® Окол/чание таблицы Я1

Среда

Тип

Мкфооргамммь*

Обсдмамемие стандарта

Фумаитя

Имсубатыя

Контрольные штаммы

Этапооыые среды

Метод контроля

Критерии

Характедоя реакция

LST

L

Coltfoona

ИСО 4831

Производительность

24—48 ч/ЗО -С

6. сов АТСС 25922 или 8739* С. treirtti АТСС 43864

Полуед-лимест-аенный

Мутность

2 «где в 1/3 пробирки Дорхэ-ыа

Образование газа и мутность

Селективность

Е. Гаесайз АТСС 29212 или 19433*

Качественный

Отсутствие роста

ЕС

L

Estfiertdiia cdi

ИСО 7251

Производительность

24—48 м/44 *С

Е. col

АТСС 25922 или 67396

Полуед* личест-венный

Мутность

2 «где в 1/3 пробирки Дархема

Образование газа и мутность

Селегтив-иость

24—48 ч?44 *С

Ре. aeruginosa АТСС 27853*

Качественный

Отсутствие роста

*$s тведоя среда.

9 Штаммы. предназначенные для использования о лаборатории пользователя (минимум). с L • жидкая среда.


ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008


П р им & ч а и и е - Для твещьх куяьтуралшыхсред возможно также использование полукалиместаанпого метода кугштиведоааны

Таблица В 2 — Населектмоные среды для подсчета миедооргамиэмоо

Среды

Тип

Микроорганизмы

Стандарт

Функция Инкубататя

Контрольное штаммы

Эталон цие среды

Метод контроля

Критерии

Харх терис-тмчеосие рдешии

РСА

S*

Общая флора

ИСО 4833

Производи- 72 ч/30 вС тельность

Е. coi АТСС 25922 или 8739*

TSA

Количест-ьежьы

PR г 0.7

S. aureus АТСС 6538 или 6538 Р

8. SubUlis АТСС 6633”

' S = твердая среда

* Штаммы. лредкаэ<аче»ыые для использования о лаборатории пользователя (минимум).

Таблица в.Э — Обогэгительные селективные среды

Среда

Тит

№*рооргхиэмы

Обохеченяе стандарта

Функций

Инкубаций

Контроль****

штаммы

Эгало»«ые среды

Метод штропе

Критерии

Характерней реакция целевых мифоорг а-мцмое

ЕЕ

L

Enterobacteria

свае

ИСО 7402

ИСО 5523

Производительность

24м/37*С

Е. coli

АТСС 25922 или 8739° или $. typhimurium

АТСС 14028

Полуко-лич ест-венный

Более Ю колоний на VRG8

Рсооео-крас-ныв КОЛОНИИ сили без ореола осадка

Селесгие-ноет*

24чЯ7*С

♦ Е. taecsfcs АТСС 29212 или 19433е

Полуко-/ычест-венный

Полное ингибирование

H^-Fraser

L

Ltsleria mono* cytogenes

EN0CO

11290 1

Производительность

24 ч*30 *С

L mono 1/21

АТСС 19111

Полуко-личест-еенный

> Ю КОЛОНИЙ на

Oxlord ИЛИ PALCAM

Серо-черные колонии с черным ореолом

или L гтюпо4Ь АТСС 13932й

+ Е.сой АТСС 25922 или 8739*

* Е faecate

АТСС 29212 или 19433й

Селективность

24чОО*С

Е. coli

АТСС 25922 или 8739*

Полуко-личесг-еенный

Полное ингибирование на Т$А

Е. teecalis

АТСС 29212 или 19433е

< 100 колоний на TSA

Fraser

L

Listeria monocytogenes

ЕН ИСО 11290*1

Производи-гельность

48ч/37*С

L. mono 1/2а

АТСС 19111

Полуко-личес-твенный

> 10 колоний на

Oxford или PALCAM

Серо-черные колонии с черным ореолом

или L. mono 4 b АТСС 13932й

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

00 Продолжение таблицы Q3

Среде

Тк1

М«Ф00рг^иЭыы

Обомчсмие стандарта

Функций

Инкубация

Контрольные

Ц}Т£И**1

Эталонные среды

Метод контроля

Критерии

Характерная ряямщя целевых имфоорга-комов

+ Е.«* АТСС 25922 им 8739’

♦ Е. faecafa

АТСС 29212 или 19433d

Селе* г ио* ностъ

24—48 ч/37 *С

Е. coli

АТСС 25922 или 3739*

Полуко-лмчес-твенный

Псиеюе ин* ш бирс ванне на TSA

6. faecalis АТСС 29212 или 19433d

< 100 колоний на TSA

ггс

L

Yersinia ente-rocoWca

ИС010273

Производительность

48чЯ5*С

Y. enterocolifca

АТСС 23715 или 96101

Полуко-личест-венный

< 10 колонии на CIN илиббОС

Характерные колонии согласно каждой среде (см. стан

дарт)

+ Е«*

АТСС 25922 или 8739*

4 Ps. aeruginosa АТСС 2785^

Селективность

48ч25*С

Ра. aeruginosa АТСС2785У

Полуко* личест-венный

Полное ин* гн би ре ванне на TSA

Р.

АТСС 29906

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Продолжение таблицы ВЗ

Среда

Тил

МифОРрг^яаиы

Обозначение стандарта

Фумщия

Иикувец-Я Кснфол^ые

Л WT3WM

Эталонные среды

Метод пом тропя

Критерии

Характерная решил целевых ыикроорга-номое

Park & San ders

L

Campyfobacter

ИС010272

Производите^ ность

См. стандарт С. оой

АТОС 4347В*

или С. jejuni АТСС 33291 или 29428*

+ Е.со* АТСС 25922 или 8739*

* Р. mkabdis АТСС 29906°

Полуко-личвст-еенный

< 10 колонии на среде Karmaii или любой другой среде по выбору

Характерные колонии согласно каждой среде (см. стан

дарт)

Селективность

См. стандарт ♦ Е. сс* АТСС 25922 или 8739*

Р. mirat*s АТСС 2990В

Пол ухо* тычест-венный

Погвюе ингибирование наTSA

Preston

L

Campyfctecter

ИС010272

Пронзео-дитшж-мосте

18ч*42*С С.О04

АТСС 43478°

>

или С. jejuni АТСС Э3291 или 2942В9

* Е.сой АТСС 25922 или 8739*

Полуко-личест-венный

<10 КОЛОНИИ на среде Karmali или любой другой среде по выбору

Характерные колонии согласно каждой среде (см. стан

дарт)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

К)

° Продолжено таблицы В 3

Среда

Тип

Микроорганизмы

Обозначение стандарта

ФОНАЦИЯ

И^ция котрот-ьв

7 штаммы

Эт&псммые среды

Метод контроля

Критерии

Харам вр»1М peemiMM ueлевых микроорганизмов

* Р. nwabiiis АТСС 29906"

Селектме-кость

18ч42‘С Е. COh

АТСС 25922 или 8739*

Р. miratdrs

АТСС 29906

Пол уко-личест-венный

Потное ин-гнбнро&а-мне на TSA

PS0

L

Yersinia ente-rocolifca

ИСО 10273

Производи гель-нос ть

3—6 »«e»V25 'С Y. enierocolibca АТСС 23715 или 96101

  • ♦ Е. cot АТСС 25922 илы 6739"

  • * Рв. аегидйюва АТСС 27853"

Полуко-личест-венный

> 10 колоний на CIN или SSOC

Характерные колонии согласно каж-дой среде (см. стан

дарт)

Селективность

3—5днеА25'С Ps. aervgrwea АТСС 27853°

Р. гнгэЬйэ

. АТСС 29906

Пол ухо-личест-венный

Полное им-сибырова-HHenaTSA

МКТТп

L

Saknonefe

ИСО 6579

Пронаео-дмтв1ш-НОСТЬ

24 ч»37 ’С S. typtwnunum

АТСС 14028°

1

млмв. ertoritide . АТСС 1307^

♦ E.cot

АТСС 25922 или 8739*

Полуко-лимест-венный

> Ю колоний на XLD или другой среде по выбору

Характерные колонии согласно каждой среде (см. стан

дарт)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Продолжение таблицы ВЗ

Среда

Тип

.. Обозначение

FAiipo органоны

стандарта

Фрмция

Инкубация

Контрогмые

штаммы

Эталонные

среды

Метод контроля

Критерии

Характерная реешия целевых мицхюрго мамэе

* Ps. aeiuginosa АТСС 27853°

СелеКТИВ-НОСТЬ

24 W37 *С

Е. сой АТСС 25922 или 8739*

Е. faecalis АТСС 29212 или 19433

Полуко-личест-венный

Потхое ин-гмбироде-ниенаТ$А

< 10 коло нийкаТЭА

Rappoport VassAadis

L

Saknoneaa EH 12824

Производитель-ность

24м/41.5 *С

S. typftmurium АТСС 14028?

Полу количественный

«10 КОЛО ний на

8GA или другой среда по вы-бору

Характерные КОЛОНИИ со гласно каждой среде (см. стан-Дврт)

илив. eneritfcfo АТСС 13076“

♦ E.coi АТСС 25922 или 8739*

4 Р$. aeruginosa АТСС 27853?

Селективность

24чМ1.5*С

Е. сой

АТСС 25922 или 8739*

Полуко-iHHiecT-венный

Потное ин-гмбнроде* нивка TSA

Е. feecalis

АТСС 29212 или 19433

«10 коло мий на TSA

RVS

L

Salmoneta ИСО 6579

Производительность

24чМ1.5Х

S. typftmurium

АТСС 14028

Полуко-iHHiecT-венный

> 10 коло иий на XLD или Другой среде по выбору

Характерные колонии со гласно каждой среде (см. стан

дарт)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

м OoMMawe таблицы ВЗ

Среда

Тил

МифООрГ «№ЮЫЫ

Обозначение стандарта

ФуММ|ИЙ

Имсувацкя

Ксмгропьные

штанга

Эталонные среди

Метод юн троля

Характер» шй рее шин Критерии ((елевых

МИфООрО мимов

или S. ententidis АТСС 13078J___

* Е.соВ АТСС 25922 или 8739*

* Ps мгадйюм АТСС 27853*

1

Сел ек тианос гъ

24 W41.S X

Е. coll

АТСС 25922 или 8739*

Полуко-личест-венный

Полное ин- —

гмбирова-ниемаТЭД

Е. foecalis АТСС 29212 или 19433

< 10 коло- —

шйнбТвА

Selenite-cystine

L

Salmonella

ЕН 12804

Производительность

24ч*7Х

S. typlwnurium АТСС t4028*

Подуло-личест-венный

1

<10 коло- Характерные »ый на коло»*м со-

BGA или гласно каж-другой ере- дой среде де по вы- (см стан-

бору дарт)

или S. enteritidis АТСС 13078*

♦ E-COli АТСС 25922 или 8739*

* Ре. аелфпоеа АТСС 27853*

Селективность

24 4*37 *С

Е. coll

АТСС 25922 или 8739*

Пол ухо-личест-венный

<100 коло- —

1ый на TSA

Е. (аесайе АТСС 29212 или 19433

  • • L • жидкая среда.

  • * Штаммы, предназначенные для ислольэоеания е лаборетооии пользователя (мимшумЬ

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Таблица 8.4— Обогатительные неселестменые среды

Среда

Тил

Ми фв организмы

Обозначение стандарта

Фумныя

ЬЬиуСмцня

Кснтрогъмые

штаммы

Эталон! мо среды

метод контроля

крн.орин хар^кая

роащия

BHI

L"

Staphylococcus

исовввз

Производительность

24 ч/37 *С

S. aureus АТСС 25923*

Качественный

Мутюсть —

1—2

Brucella

L

Campylobacter

ИС010272

Производительность

2—5 дней<25 'С

С. cob АТСС 43478

С. jejuni АТСС 33291 или 29428*

Качественный

Мутность —

1—2

Peptone-мН (петь токовая соль)

L

Mutton liqiate (разбавите/*)

ИСО6787

Растворитель

45 ыин<20 'С—25 *С

Е. сой

АТСС 25922 или 8739*

TSA

Количественный

♦/—50 % иол. —

к (♦/-60 % изначального подсчета)

S. aureus АТСС 25923

Thioglycol-late

L

doe iridium perfringm

ИСО3937

Производительность

24мГ37 *С

О. perfrfngens АТСС 13124*

Качественный

Мутность —

1—2

TSYEB

L

Listeria mono-cytogenes

ИС011290

Производительность

24 м/26 *С

L mono 1Л2а

АТСС 18111

Качественный

Муттюсть —

1—2

L mono 4Ь АТСС 13832 •

  • • L • жидкая среда.

  • * Штаммы, предназначенные для использования в лаборатории пользователя (минимум).

*■ Таблица В 5 — Селективные разделительные среды

Среде

Тиа

Ми*рооргемизмы

OOowoimo стандарта

Фумоцмя

Инсубвшы

Контрольные

штаммы

Эталонные среды

Метод мэм троля

критерии

Хере мерные peauiMH

Модифи-цирован-мая среда BuUlor

S’

Carnpyfcbacier

ИСО 10272

Производительность

24—72 ч/ 42 X

С. coli

АТСС 43478

Качественный

Хороший рост (2)

Характерные колонии согласно каждой среде (см. стандарт)

ССОД

Karmeli

С. jejuni

АТСС 33291 или 29428*

Pre won

Skwrow

Селективность

24—72чМ2 X

Е.сок

АТСС 25022 или 8739“

Качественный

Погме или частичное ингибирование (Q—1)

не обнаруживается никаких характерных колоний

S. aureus АТСС 25923

Полное ингибирование (0)

CIN

s

Yersinia entero-cottica

ИСО 10273

производительность

24 чГЗО X

У. enierocolittca

АТСС 23715 или 9610°

Качественный

Хороший рост (2)

Характерные КОЛОНИИ согласно каждой среде (см. стандарт)

SSDC

СеЛеК-

ТИвНОСТЬ

24 ч<30 *С

EcoS

АТСС 25922 или 8739*

Качественный

Псиьюе или чэсти*юе ингибирование <0—1)

Не обнаруживается никаких характерных колоний

S. aureus АТСС 25923

Полное ингибирование (0)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Охойчан^е таблицы В9

Среде

Тил

Ммрооргемизмы

Обозначен стандарта

Функция

IWyteUMA

ксмтрогьмые штаммы

Эталоны1 срелы

метод мои троля

критерии

Характерные роашии

Агар с бриллиантовым зеленым (SGA)

S

Salmonela

ЕН 12824/ ИСО8579

Производительность

24—18ч/37 1С

S. typtiantfium АТСС 140281

Качественный

Хороший рост(2)

Характерные КОЛОНИИ согласно каждой среде (см. стандарт)

S. awnids АТСС 1Э076

XLD

Селективность

24—48 м/37 ФС

Е. сон АТСС 25922 или 8739е

Качественный

Полное ингибирование или медлен-юй рост {0-1)

Не сбнару» миеается никаких ха-ракюрных колоний

Е. faecalis АТСС 29212 или 19433

Полное ингибирование (0)

Среде

Тил

МжрООДОммЗиы

Оботмачеми стандарта

Фумкцмя

№куОеция

ксытрогьмые штаммы

Этап оные среды

метод контроля

критерии

хервстермая рсашия

Питательный агар

S2

Enterobacteria-свае

ИСО 7402. ИСО 8523

Производительность

24 ч/37 ‘С

Е. сом АТСС 25922 или 8739°

Качественный

Хороший рост(2)

Salmonella

ЕН 12824. ИСО 8579

24 ч/Э7 X

S. typhrnuriurn АТСС 14028е

Yersinia entero-eoitica

ИС010273

24 ч/ЗО ’С

Y. enterocolitica АТСС 23715 или 9610е

Агар TSYEA

S

Listeria mono» cytogenes

ЕН ИСО

11290

Производительность

24 4WC

1. mono 1/2а АТСС 19111 или L mono 4Ъ АТСС 13932 2

Качественный

Хороший рост (2)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

Библиография

[1] EH ИСО 6887-1

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление испытательных образцов, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 1. Общие правила для подготовки исходных суспензий и десятичных разведений (ИСО 6887-1:1999)

[2] EH ИСО 8261

Молоко и молочные продукты. Общие руководящие указания по приготовлению проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований (ИСО 8261:2001)

[3] EH ИСО 6887-2

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для приготовления мяса и мясных продуктов (ИСО/FDIS 6887-2:2003}

[4] пр. EH ИСО 6887-3

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов (ИСО/FDIS 6887-3:2003)

[5] пр. EH ИСО 6887-4

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов (ИСО/FDIS 6887-4:2003)

[6] ИСО 7218:1996

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований

[7] ИСО 2859-1:1999

Процедуры выборочного контроля по альтернативному признаку. Часть 1. Планы выборочного контроля с указанием приемлемого уровня качества (AQL) для последовательного контроля партий

  • (8] Corry JEL, Curtis GDW, Baird RM, 1995, Культуральные среды для микробиологии пищевых продуктов. Лондон: Elsevier Science, Том 34

  • [9] Anon. 1998., Int. J. Food Microbiol. 45. 65

    [10] ИСО 11133-1:2000

    Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории (ИСО/ТО 11133-1:2000)

ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008

УДК 576.8:006.354 ОКС 07.100.30 Н09 ОКСТУ 9209.

9210

Ключевые слова: пищевые продукты, корма, обеспечение качества, питательная среда, культуральная среда, штамм

Редактор Л.В. Коретникоеа Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.С. Кабашова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 15.12.2009. Подписано в печать 21.01.2010. Формат 60 х 84^ Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Усл. печ.л. 3,72. Уч.-изд. л. 2.90. Тираж 293 экз. Зак. 32.

, 123995 Москва, Гранатный пер., 4.

www.gostinfo.HJ

Набрано во на ПЭВМ Отпечатано 8 филиале — тип. «Московский печатник», 105062 Москва. Лялин пер., 6.

1

S 1 твердая среда.

  • * Штаммы, предназначенные дня использоватя в лаборатории пользователя (митыыум).

2

S — твердая среде.

  • * Штаммы, предназначенные для использования в лаборатории пользователя (минимум). ( Произвольные штаммы е зависимости от используемого методе.