allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.100. Молоко и молочные продукты

ГОСТ 34472-2018 Молоко сырое. Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Обозначение:
ГОСТ 34472-2018
Наименование:
Молоко сырое. Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности
Статус:
Принят
Дата введения:
01/01/2020
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.100.10

Текст ГОСТ 34472-2018 Молоко сырое. Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC,

ГОСТ

34472—

2018


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МОЛОКО СЫРОЕ

Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Издание официальное

*ж_.—- ..

ммжжя

СтМ1ЛфТМ1фП[М

ГОСТ 34472—2018

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН всероссийским научно-исследовательским институтом маслоделия и сыроделия — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН (ВНИИМС — филиал ФГБНУ «ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 сентября 2018 г. N9112-П)

За принятие проголосовали:

Кратко* наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по

МК (ИСО 31вв> 004-97

Сокращен нов наименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргыэстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарг

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 октября 2018 г. № 745-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34472—2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2020 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соотеетстеующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. оформление. 2018


В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

1 Область применения .................................................................1

2 Нормативные ссылки .................................................................1

3 Термины и определения...............................................................2

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы....................2

5 Отбор проб .........................................................................3

6 Условия проведения измерений ........................................................3

7 Определение бактериальной обсемененности сырого молока ...............................3

8 Обработка результатов................................................................4

9 Требования безопасности .............................................................5

Приложение А (справочное) Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование

и материалы ............................................................6

Приложение Б (справочное) валидация турбидофлуориметрического приборного экспресс-метода

определения бактериальной обсемененности сырого молока с арбитражным методом определения КМАФАнМ по ГОСТ 32901 ..............................7

Библиография.........................................................................8

\AV



ГОСТ 34472—2018

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО СЫРОЕ

Турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности

Mik. Turbidofluorimetric rapid method for estimating total bacterial load

Дата введения — 2020—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на приборный турбидофлуориметрический экспресс-метод определения бактериальной обсемененности сырого молока по интенсивности флуоресценции веществ. образующихся из флуорогенного субстрата, в процессе жизнедеятельности микроорганизмов.

Диапазон измерения бактериальной обсемененности сырого молока — от 2 • 104 до 5 • 10е КОЕ/см3.

2 Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте применены нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004—2015 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда, вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79* Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 26809.1—2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752—88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32901—2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа

ГОСТ ИСО 5725-6—2002** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность {правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть в. Использование значений точности на практике».

Издание официальное

по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины е соответствии с [1]. а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактериальная обсемененность: Количество аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов, способных проявлять свою жизнедеятельность в сыром молоке при температуре 30 °C.

Примечание — Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) — это количество микроорганизмов, вырастающих и образующих видимые колонии на твердом питательном агаре при температуре (30 ± 1)®С.

В сыром молоке подавляющее количество микрофлоры представлено меэофильными аэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами. При посева сырого молока на определение КМАФАнМ не учитываются анаэробные бактерии, количество которых ничтожно по сравнению с общим количеством выявляемых микроорганизмов. Поэтому разницей между показателями бактериальной обсемененности и КМАФАнМ в сыром молоке следует пренебречь.

3.2 турбидофлуориметрия: Оптическая технология, используемая для измерения низких значений флуоресценции в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

Примечание — Математическая и статистическая обработка динамических значений концентрации флуоресцентного продукта на основе кинетики и стехиометрии микробного роста позволяют точно рассчитать биомассу микроорганизмов.

3.3 турбидофлуориметр: Оптический сенсор, предназначенный для фиксации динамических измерений интенсивности светорассеяния и флуоресценции при заданной температуре в мутных растворах биологических жидкостей, в том числе молоке.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы

Турбидофлуориметр1 с диапазоном рабочих длин волн от 400 до 650 нм. диапазоном измерений формазиновой суспензии от 100 до 1000 ЕМФ. рабочим диапазоном температуры режима термостати-рования от 30 °C до 43 °C и соответствующим программным обеспечением1.

Тест-наборьГ для определения бактериальной обсемененности в сыром молоке диапазоном измерения от 2 104 до 5 ■ 10е КОЕ/см3.

Дозаторы липеточные одноканальные переменного объема от 0.02 до 2 см3.

Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный) по ГОСТ 28498 диапазоном измерения от О °C до 100 °C и ценой деления шкалы 1 °C.

Подогреватель оптический облучающий, обеспечивающий поддержание температурного режима в диапазоне от 25 1С до 40 1С.

Часы по ГОСТ 27752. секундомер или таймер.

Встряхиеатель вибрационного типа со скоростью вращения до 3000 об/мин.

Контрольный образец для контроля тест-наборов1.

Пробирки пластиковые среднестенные с плоской крышкой стерильные (типа Элпендорф) вместимостью 1,5 см3.

Пипетки градуированные 1(2)—1{2>—1—2 по ГОСТ 29227.

Допускается применение другого оборудования, не уступающего вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающего необходимую точность измерения, а также материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб

5.1 Основные понятия и общие правила отбора проб — по ГОСТ 26809.1.

5.2 Отбор проб сырого молока при проведении микробиологических анализов проводят перед от* бором проб для физико-химических и органолептических анализов в соответствии с ГОСТ 32901.

При контроле бактериальной обсемененности турбидофлуориметрическим методом из объединенной пробы сырого молока, предназначенной для проведения микробиологических анализов объ* емом не менее 500 см3, отбирают пробу для анализа объемом от 50 до 100 см3 в соответствии с ГОСТ 32901 (раздел 5).

Перед отбором проб сырое молоко должно быть тщательно перемешано.

5.3 Пробы сырого молока не подлежат консервированию и хранению. Их анализируют непосредственно после отбора для получения более объективных результатов измерений.

6 Условия проведения измерений

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

- температура окружающего воздуха.........................от 15 ’С до 28 *С;

- относительная влажность воздуха..........................от 20 % до 80 %;

• атмосферное давление...................................от 84 до 106 кПа.


7 Определение бактериальной обсемененности сырого молока

7.1 Сущность метода

Метод основан на измерении скорости образования флуоресцентных веществ из флуороген-ных субстратов в результате жизнедеятельности микроорганизмов. Скорость изменения флуоресценции прямо пропорциональна биомассе жизнеспособных микроорганизмов в сыром молоке. Исходя из средней массы бактериальной клетки, равной 1 пг. программное обеспечение прибора трансформирует значение биомассы в наиболее вероятное число клеток микроорганизмов (НВЧ/см3): биомасса (пг) <=> НВЧ/см3 <=> КОЕ/см3.

7.2 Подготовка к проведению измерений

7.2.1 Подготовка к работе турбидофлуориметра

Турбидофлуориметр располагают вдали от источников тепла и сильного электромагнитного излучения. избегая попадания на него прямых солнечных лучей.

Подготовку турбидофлуориметра и его эксплуатацию следует проводить в соответствии с рекомендациями инструкции или паспорта на прибор.

Перед выполнением измерений проводят холостую пробу для регистрации фоновых значений в соответствии с инструкцией к прибору.

7.2.2 Подготовка тест-наборов

7.2.2.1 При хранении тест-наборов при температуре от 4 *С до 10 °C до начала выполнения измерений тест-набор с пробирками необходимо выдержать в помещении при комнатной температуре для их отепления.

Перед выполнением измерений реагенты в тест-пробирке активируют путем встряхивания.

7.2.2.2 Проверку тест-набора следует проводить ежемесячно, либо при появлении сомнительных результатов.

Контроль качества тест-пробирок, входящих в тест-набор, и правильности выполнения процедуры измерения осуществляют согласно инструкции по эксплуатации, используя контрольный образец сухих реагентов, поставляемых вместе с прибором.

7.3 Проведение измерений

7.3.1 Перед началом измерения пробу для анализа исследуемого сырого молока, предварительно нагретого до комнатной температуры, тщательно перемешивают до получения максимально однородного распределения клеток микроорганизмов в объеме пробы. Точность дальнейшего измерения во многом определяется однородностью распределения клеток микроорганизмов в пробе молока.

7.3.2 С помощью дозатора или стерильной мерной пипеткой отбирают 1.3 см3 сырого молока, которое помещают е микропробирку и перемешивают на естряхивателе вибрационного типа в течение 15 с.

Подогрев сырого молока в микропробирке до температуры (30 ± 2) °C (или температуры, указанной в документах изготовителя тест-наборов ло определению общего количества микроорганизмов) проводят в течение 10 мин в оптическом облучающем подогревателе.

7.3.3 Подогретую пробу сырого молока из микропробирки переливают в предварительно активированную тест-пробирку и плотно закрывают крышкой. Объем сырого молока в активированной тест-пробирке должен быть не менее 1,2 см3.

7.3.4 Перед началом измерения визуально оценивают цвет сырого молока в тест-пробирке. Появление розовой окраски различной интенсивности свидетельствует о высокой бактериальной обсемененности, превышающей диапазон измерения. Такое сырое молоко не подлежит дальнейшему контролю.

7.3.5 Содержимое тест-пробирки с пробой сырого молока перед началом измерений перемешивают на естряхивателе вибрационного типа в течение 10—15 с. Тест-пробирку с перемешанной пробой сырого молока помещают в турбидофлуориметр и плотно закрывают крышку прибора.

В зависимости от степени обсемененности молока время измерения составляет от 8 до 20 мин. После завершения измерения результат появится на мониторе в протоколе испытаний.

7.3.6 Проводят два параллельных измерения.

При этом важно соблюдать последовательность выполнения измерений согласно 7.3.1—7.3.5.

8 Обработка результатов

8.1 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости (1).

В случае если бактериальная обсемененность составляет менее 2 104 КОЕ/см3 (т. е. результат находится за пределами нижней границы диапазона измерений), то результат записывают «менее 2 • 10* КОЕ/см3».

В случае если бактериальная обсемененность молока превышает верхнюю границу диапазона измерений, то результат записывают «более 5 10б КОЕ/см3».

Данные валидации турбедофлуориметрического приборного экспресс-метода определения бактериальной обсемененности сырого молока с арбитражным методом определения КМАФАнМ ло ГОСТ 32901 приведены в приложении Б.

8.2 Контроль точности измерений

Характеристики погрешности и прецизионности при доверительной вероятности Р - 0,95 приведены в таблице 1.

Таблица 1

Наименование показателя

Количество клеток, КОЕ/см3

Предел повторяемости г. КО£/смэ

Предел воспроизводимости Я. КОЕ/см3

2 - 104

5.0 • 103

1.4-10*

Бактериальная обсемененность

1 • 105

2.5 • 104

7.0 • 10*

сырого молока

5-10®

1.0-10®

2.8 • 10®

5-10®

1,0-10®

2.8-10®

8.3 Проверка приемлемости результатов измерений

8.3.1 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости

Проверку приемлемости результатов измерений бактериальной обсемененности. полученных в условиях повторяемости (л = 2). проводят е соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

Результаты измерений считаются приемлемыми при условии

|£О, -60г|£ г, (1)

где 50, и 5О2 — значения двух параллельных измерений, полученные в условиях повторяемости. КОЕ/см3;

г — предел повторяемости, значение которого приведено в таблице 1, КОЕ/см3.

Если условие (1) не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости результатов измерений в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

При повторном превышении указанного значения выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам анализа.

8.3.2 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений бактериальной обсемененности. полученные в условиях воспроизводимости (т - 2), проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.3).

Результаты измерений, выполненные в условиях воспроизводимости, считаются приемлемыми, если выполняется условие

|50э - 5О4| £ R. (2)

где БО3 и БОЛ — значения двух параллельных определений бактериальной обсемененности. полученные в условиях воспроизводимости. КОЕ/см3;

R — предел воспроизводимости, значение которого приведено в таблице 1, КОЕ/см3.

9 Требования безопасности

9.1 При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования;

- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;

«требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Организация обучения работающих безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

9.2 Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица с образованием не ниже среднего, имеющие опыт работы в химической или микробиологической лаборатории, освоившие методику выполнения измерений и изучившие инструкцию по эксплуатации турбидофлуориметра.

Приложение А (справочное)

Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы

А.1 Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы для воспроизводства методики измерений Турбедофлуориметр БиоТФ.

Тест-набор «СТАРТ» для определения общего количества микроорганизмов в сыром молоке диапазоном измерения от 2 • 104 до 5 • 10® КОЕ/см3.

Программное обеспечение БиоТФ с приложением «СТАРТ».

Контрольный образец для проверки тест-набора «СТАРТ».

Приложение Б (справочное)

Валидация турбидофлуориметрического приборного экспресс-метода определения бактериальной обсемененности сырого молока с арбитражным методом определения КМАФАнМ по ГОСТ 32901

Графическая зависимость для общего массива данных, полученных при определении бактериальной обсе-мененности молока арбитражным методом на среде КМАФАнМ и с использованием турбидофлуориметра. представлена на рисунке Б.1.

КМАФАнМ. Ig КОЕйм’

Рисунок Б.1 — Зависимость между результатами содержания КМАФАнМ и результатами, полученными с использованием турбидофлуориметра БиоТФ (л = 137)

Представленные на рисунке Б.1 данные свидетельствуют о линейной зависимости между показателями бактериальной обсемененности. полученными турбидофлуориметрическим экспресс-методом, и результатами определения КМАФАнМ. полученными арбитражным методом по ГОСТ 32901. в диапазоне or 104 до 107 КОЕ/см3.

Уравнение линейной зависимости

у- 1.025Х-0.0281. (Б.1).

Коэффициент линейного уравнения (основной критерий сходимости методов) равен 1,025. Свободный член линейного уравнения (0.0281) несет информацию о сдвиге методов.

Так как коэффициент линейного уравнения близок к единице, а свободный член — к нулю, можно говорить о высокой сходимости методов определения бактериальной обсемененности приборным экспресс-методом с использованием турбидофлуориметра и показателя КМАФАнМ. определяемого арбитражным чашечным методом в соответствии с ГОСТ 32901.

Библиография

[1] Технический регламент Таможенного союза ТР ТС 033/2013


О безопасности молока и молочной продукции

УДК 637.127:006.354 МКС 67.100.10

Ключевые слова: сырое молоко, методы анализа, бактериальная обсемененность, турбидофлуори-метр, тест-набор, контрольный образец, измерения

БЗ 10—2018/43

Редактор В.Н. Шмельков Технический редактор И.Е. Черепкова Корректор И.А. Королева Компьютерная верстка Л.А. Круговой

Сдано а набор 12.10.2014. Подписано в печать 23.10.2018. Формат в0«в4’/в. Гарнитура Ариап. Уел. печ. п. 1,40 Уч.-изд. п. 1.26.

Подготовлено на основе эпектронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Создано в единичном исполнении дпв комплектования Федеральною информационного фонда стандартов. <17416 Москва, Нахимовский лр-т. д. 31, к. 2. www.gostinlo.ru

1

Рекомендуемые средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы приведены е приложении А.