ГОСТ 23452-79
Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Методы определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
Milk and milk products. Methods for determination of the chloreorganike pesticides esidues
MКC 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 1980-01-01
ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 30 января 1974 года N 332
Проверен в 1991 году Постановлением Госстандарта от 29.12.91 N 2396 снято ограничение срока действия
ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в июне 1986 года (ИУС 9-86).
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты и устанавливает методы определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов (4,4'-ДДТ; 4,4'-ДДЭ; 4,4'-ДДД, и
-изомеры ГХЦГ и ГЕПТАХЛОР) методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии.
1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1.1. Метод отбора проб молока и молочных продуктов и подготовка их к испытаниям - по ГОСТ 3622-68, ГОСТ 26809-86 и ГОСТ 13928-84.
2. МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Сущность метода
Метод основан на выделении хлорорганических пестицидов из молока и молочных продуктов, очистке экстрактов и определении их на стеклянных пластинках, покрытых слоем адсорбента, разгонке хроматограммы в подвижном растворителе и проявлении хроматограммы азотнокислым серебром.
Минимальная концентрация остаточных количеств хлорорганических пестицидов, определяемая указанным методом, составляет 0,05 мг/кг (мг/дм) с абсолютной суммарной погрешностью 0,017 мг/кг (мг/дм
) при доверительной вероятности
=0,95.
2.2. Аппаратура и реактивы
Пластинки стеклянные для хроматографии размером 90х120, 130х180 мм или фотопластинки.
Пульверизаторы стеклянные.
Камера для хроматографирования - стеклянный сосуд с притертой крышкой.
Микропипетки по ГОСТ 29169-91.
Лампа ртутно-кварцевая ПРК.
Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру (45±2) °С.
Часы.
Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88*.
______________
* С 1 июля 2002 года введен в действие ГОСТ 24104-2001.
Сушильный шкаф с терморегулятором, позволяющий поддерживать температуру (130±5) °С, (160±5) °С.
Прибор для отгонки растворителей (ИР-1, ИР-10, УОР-М).
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336-82.
Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный) с пределом измерения от 0 до 100 °С с ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498-90.
Груша резиновая.
Колбы мерные исполнения 2, номинальной вместимостью 100 см, 2-го класса точности по ГОСТ 1770-74.
Стаканы типа В или Н исполнения 1 или 2, номинальной вместимостью 50 см по ГОСТ 25336-82.
Цилиндры мерные исполнения 1, номинальной вместимостью 50, 100, 250 и 1000 см.
Воронки типа ВД, исполнения 1 или 2, номинальной вместимостью 250 и 500 см по ГОСТ 25336-82.
Пробирки исполнения 2, номинальной вместимостью 5 и 10 см, с ценой деления 0,1 см
по ГОСТ 1770-74.
Колбы типа К исполнения 1 со взаимозаменяемыми конусами, номинальной вместимостью 250 и 500 см по ГОСТ 25336-82.
Колонки хроматографические размером 18х390 см.
Ступка по ГОСТ 9147-80.
Пипетки исполнения 6 или 7, 1-го класса точности, номинальной вместимостью 5 и 10 см по ГОСТ 29169-91.
-Гексан, ч.д.а. по нормативно-технической документации.
Хлороформ по ГОСТ 20015-88, х.ч.
Ацетон по ГОСТ 2603-79, х.ч.
Калий щавелевокислый по ГОСТ 5868-78, ч.д.а., раствор с массовой долей щавелевокислого калия 50 г/дм.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77, насыщенный водный раствор.
Насыщенный раствор безводного сульфата натрия в серной кислоте плотностью 1,84 г/см (100 г безводного сульфата натрия растворяют в 1 дм
серной кислоты).
Бензол по ГОСТ 5955-75, х.ч.
Силикагель АСК по ГОСТ 3956-76.
Силикагель КСК по ГОСТ 3956-76.
Эфир диэтиловый для наркоза по Госфармакопее, том IX.
Калий хромовокислый по ГОСТ 4459-75.
Окись алюминия для хроматографии по нормативно-технической документации.
и
-изомеры ГХЦГ.
4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДЭ, 4,4'-ДДД- и ГЕПТАХЛОР по нормативно-технической документации.
Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
Вода питьевая по ГОСТ 2874-82*.
__________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.
Аммиак водный по ГОСТ 3760-79.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*.
__________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
Кальций сернокислый 2-водный (CaSO·2Н
О) по НТД ч.д.а. (гипс).
Эфир петролейный с температурой кипения (50±10) °С по нормативно-технической документации.
Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166-76.
Кислота серная по ГОСТ 4204-77.
Кислота соляная по ГОСТ 3118-77.
Кислота азотная по Г
ОСТ 4461-77.
2.1; 2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2.3. Подготовка к анализу
2.3.1.Приготовление проявляющего реактива
В стакан вместимостью 150 см отвешивают 0,5 г азотнокислого серебра, растворяют в 5 см
дистиллированной воды, приливают 7 см
водного аммиака и доводят объем раствора ацетоном до 100 см
. Готовят проявляющий реактив в день употребления. На пластинку размером 90х120 мм расходуется 8-10 см
реактива, а на пластинку 130х180 мм - 12-15 см
реактива.
2.3.2. Подготовка стеклянных пластинок
Стеклянную пластинку тщательно промывают водой, хромовой смесью, дистиллированной водой, высушивают, протирают этиловым спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой.
2.3.3. Подготовка силикагеля
Силикагель заливают соляной кислотой, разведенной водой 1:1, и оставляют на 18-20 ч. Кислоту сливают, силикагель промывают водой и кипятят в течение 2-3 ч с разбавленной азотной кислотой (1:1). Обработанный силикагель промывают проточной водопроводной водой, а затем дистиллированной до нейтральной реакции промывных вод и сушат в сушильном шкафу при температуре (130±5) °С в течение 4-5 ч. Дробят и просеивают через сито 100 меш (1600 отверстий на 1 см). Подготовленный силикагель хранят в склянке с притертой пробкой.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2.3.4. Подготовка гипса
Гипс (CaSO·2Н
О) прокаливают в сушильном шкафу при температуре (160±5) °С в течение 6 ч. Растирают в фарфоровой ступке и просеивают через сито 100 меш.
2.3.5. Приготовление сорбционной массы на 10 пластинок размером 130х180 мм.
2.3.5.1. Силикагель с гипсом
40 г силикагеля и 2 г гипса растирают в фарфоровой ступке, прибавляют 90 см дистиллированной воды порциями по 8-10 см
и размешивают до образования однородной массы.
2.3.5.2. Окись алюминия с гипсом
50 г окиси алюминия, просеянной через сито 100 меш, 5 г кальция сернокислого (гипса) тщательно смешивают в фарфоровой ступке, переносят в колбу, прибавляют 75 см дистиллированной воды и встряхивают до образования однородной массы.
2.3.6. На подготовленную по п.2.3.2 стеклянную пластинку наносят 20 г сорбционной массы, приготовленной по п.2.3.5, и равномерно распределяют по поверхности. Сушат на ровном столе 10-12 ч и хранят в эксикаторе без доступа света.
2.3.7. Подготовка стандартных растворов пестицидов (4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ, и
-изомеры ГХЦГ и ГЕПТАХЛОРА).
Стандартный раствор пестицидов в гексане готовят следующей массовой концентрации: 0,2 мкг/см ГХЦГ, 0,5 мкг/см
гептахлора, 0,4 мкг/см
4,4'-ДДЭ, 0,5 мкг/см
4,4'-ДДД, и 0,5 мкг/см
4,4'-ДДТ. Растворы хранят в сосуде с притертой пробкой при температуре (10±3) °С, не более 1 мес со дня приготовления
.
2.3.6; 2.3.7. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2.3.8. Приготовление насыщенного раствора хлористого натрия
К 1 дм дистиллированной воды добавляют хлористый натрий до тех пор, пока кристаллы хлористого натрия при комнатной температуре не перестанут растворяться. Хранят насыщенный раствор в склянке с пробкой при комнатной температуре.
2.3.9. Приготовление раствора щавелево-кислого калия
50 г щавелевокислого калия растворяют в 950 см дистиллированной воды. Хранят в склянке с пробкой при комнатной температуре.
2.3.10. Экстракция хлорорганических пестицидов (4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ, и
-ГХЦГ и ГЕПТАХЛОР).
2.3.10.1. Молоко, кефир, кумыс, простокваша и другие кисломолочные напитки
Первый способ: 25 см продукта помещают в делительную воронку вместимостью 250 или 300 см
. Приливают 5 см
водного раствора щавелевокислого калия и 5 см
насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, приливают 100 см
ацетона и энергично встряхивают в течение 2 мин. Приливают 100 см
хлороформа и вновь встряхивают 2 мин, после чего воронку оставляют на 5 мин до полного разделения слоев. Нижнюю фазу выливают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 500 см
и испаряют на приборе для отгонки растворителей досуха, а верхнюю фазу отбрасывают. Экстракт смывают со стенок колбы 30 см
-гексана.
Второй способ: к 50 см продукта прибавляют концентрированную серную кислоту 30-40 см
до полного почернения пробы. Охлажденный до (13±2) °С раствор переносят в делительную воронку и экстрагируют
-гексаном два раза порциями по 25 см
. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 мин, затем оставляют ее на несколько минут до полного разделения слоев. Если образуется эмульсия, прибавляют 1-2 см
этилового спирта. К объединенным экстрактам в делительной воронке прибавляют 10 см
концентрированной серной кислоты, насыщенной сульфатом натрия, и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку повторяют до получения бесцветной кислоты.
(Измененная редакция, И
зм. N 1).
2.3.10.2. Сгущенное молоко, сливки 10-20%-ной жирности
10 г продукта перемешивают с 10 см насыщенного раствора хлористого натрия в химическом стакане вместимостью 50 см
и выливают в делительную воронку вместимостью 150 см
. К смеси приливают 40 см
ацетона и энергично встряхивают в течение 2 мин, затем приливают 50 см
хлороформа, встряхивают и оставляют до разделения слоев. Далее - по п.2.3.10.1.
2.3.10.3. Сливки 30-40%-ной жирности, сметана, сухое молоко
5 г продукта помещают в делительную воронку вместимостью 150 см, приливают 10 см
насыщенного раствора хлористого натрия, 40 см
ацетона и энергично встряхивают 2 мин. Добавляют 70 см
хлороформа, смесь встряхивают и оставляют до разделения слоев. Далее - по п.2.3.10.1.
2.3.10.4. Масло, молочный жир
Первый способ: 20 г продукта при определении методом тонкослойной хроматографии или 5 г - при определении методом газожидкостной хроматографии помещают в стакан вместимостью 50 см, подогревают до температуры (40±2) °С и растворяют в 30 см
-гексана.
Второй способ: навеску масла 20 г растапливают на водяной бане в круглодонной колбе, прибавляют 50 см ацетона, тщательно перемешивают до растворения жира, прибавляют 10 см
дистиллированной воды и охлаждают на льду до затвердения жира (примерно 30 мин), сливают ацетоновый экстракт и процедуру повторяют три раза. Из объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане. Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта
-гексаном тремя порциями по 10 см
в течение 5 мин. Объединенные экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым натрием. Очищенный экстракт сушат и упаривают досуха.
(Измененная редакция, Изм. N 1)
.
2.3.10.5. Творог, сыр
10 г творога или измельченного сыра растирают с 10 см насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку вместимостью 250 см
. Приливают 80 см
ацетона, встряхивают 2 мин, прибавляют 100 см
хлороформа и вновь встряхивают. После разделения слоев поступают согласно п.2.3.10.1.
2.3.11. Очистка экстрактов
2.3.11.1. Очистка на хроматографической колонке с силикагелем АСК
Для подготовки колонки в нижнюю часть бюретки помещают стекловату, насыпают 70 см силикагеля АСК, уплотняют его постукиванием и промывают 50 см
-гексана. На подготовленную колонку наносят 30 см
экстракта, полученного в соответствии с п.2.3.10. После того, как экстракт впитается в сорбент, пестициды вымывают 110 см
смеси бензол-
-гексан (в соотношении 3:8) порциями по 25-30 см
. Прошедший через колонку растворитель собирают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250-300 см
. После впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши.
Содержимое колбы упаривают досуха на приборе для отгонки растворителей (температура водяной бани 40-45 °С) и очищенный экстракт смывают со стенок колбы 5 см
-гекс
ана.
2.3.11.2. Очистка серной кислотой
Экстракт, полученный в соответствии с п.2.3.10, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см, приливают 20 см
серной кислоты, насыщенной безводным сернокислым натрием, и осторожно встряхивают. Отделяют нижний слой и повторяют обработку до тех пор, пока кислота не станет бесцветной.
Гексановый экстракт промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, а затем сушат безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняют до объема 0,1-0,2 см.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2.4. Проведение анализа
2.4.1. 5 см очищенного экстракта, полученного по п.2.3.11, из колбы переносят в градуированную пробирку и выпаривают на водяной бане при температуре (50±2) °С до объема 0,2 см
. Этот объем при помощи микропипетки наносят на стеклянную пластинку со слоем сорбента, подготовленную по п.2.3.6, на расстоянии 15 мм от края в одну точку так, чтобы диаметр пятна (след от нанесения раствора) не превышал 10 мм. Колбу ополаскивают 5 см
диэтилового эфира, который переносят в ту же градуированную пробирку, упаривают до объема 0,2 см
на водяной бане при температуре 35-40 °С и наносят его в центр первого пятна. Справа и слева от места нанесения пробы на расстоянии 20 мм наносят стандартные растворы смеси пестицидов, приготовленные по п.2.3.7, содержащие 1,0 или 10,0 мкг препарата. Для этого стандартный раствор разбавляют в 10-100 раз.
2.4.2. Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 мин до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель--гексан. Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 5 мм. После того, как фронт растворителя поднимается на 100 мм, пластинку вынимают из камеры и оставляют на 2-3 мин для испарения растворителя. Пластинку опрыскивают из пульверизатора проявляющим реактивом, приготовленным по п.2.3.1, и облучают 10-15 мин ультрафиолетовым светом, держа пластинки на расстоянии 200 мм от ртутно-кварцевой лампы ПРК-4. При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета.
2.5. Обработка результатов
Количественное определение пестицидов производят сравнением размера пятна пробы с размером пятна стандартного раствора. Сравнение размеров пятен производят визуально или измерением их площадей. При расчете содержания пестицида в пробе предполагают, что между количеством препарата в пробе и площадью его пятна на пластинках существует прямая зависимость. Эта зависимость соблюдается лишь при содержании пестицидов до 10 мкг в пробе.
Массовую долю () в мг/кг или массовую концентрацию (
) в мг/дм
пестицидов в пробе вычисляют по формулам:
или 
;
или 
;
где - масса пестицидов, определенная визуальным сравнением со стандартным раствором, мкг;
- масса пестицидов в стандартном растворе, мг;
- площадь пятна исследуемой пробы, мм
;
- масса исследуемой пробы, г;
- объем исследуемой пробы, дм
;
- площадь пятна стандартного раствора, мм
.
Вычисление производят до третьего десятичного знака.
За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми по абсолютной величине не должны превышать 20% по отношению к среднеарифметическому. Окончательный результат округляют до второго десятичного знака.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3. МЕТОД ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
3.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выделении хлорорганических пестицидов, очистке их и определении на газожидкостном хроматографе, снабженном детектором по захвату электронов, с использованием неполярной силиконовой фазы и газа-носителя - азота, аргона.
Метод предназначен для количественного определения хлорорганических пестицидов и применяется при разногласиях в оценке качества молока и молочных продуктов.
Минимальная концентрация остаточных количеств хлорорганических пестицидов, определяемая указанным методом, для 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ составляет 0,005 мг/кг (мг/дм) с абсолютной суммарной погрешностью 0,0025 мг/кг (мг/дм
) при доверительной вероятности
=0,95, для
и
-изомеров ГХЦГ - 0,008 мг/кг (мг/дм
) с абсолютной суммарной погрешностью 0,004 мг/кг (мг/дм
), для ГЕПТАХЛОРА - 0,005 мг/кг (мг/дм
) с абсолютной суммарной погрешностью 0,0025 мг/кг (мг/дм
).
3.2. Аппаратура и реактивы
Хроматограф газожидкостный, оборудованный детектором по захвату электронов.
Колонки газохроматографические по НТД, длиной 1800 мм, внутренним диаметром 3 мм.
Микрошприц на 10 мм марки МШ-1 или другой модификации.
Баня водяная с термообогревом, обеспечивающая нагрев до температуры 45 °С.
Фаза неподвижная - жидкость кремнийорганическая ПФМС-4 по ГОСТ 15866-70 SE-30, SE-301, ДС-550, СКТФТ-50, ОУ-17, СЕ-ХЕ-60 или другие аналогичные фазы.
Твердый носитель - хроматон NaW. Целит-545, хромосорб W.
Прибор для отгонки растворителей (ИР-1, ИР-10, УОР-М и т.п.).
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336-82.
Термометр технический стеклянный с пределом измерения 0-150 °С по ТУ 3-3.2123-88.
Груша резиновая.
Колбы мерные исполнения 2, номинальной вместимостью 100 см, 2-го класса точности по ГОСТ 1770-74.
Стаканы стеклянные лабораторные типа В или Н, исполнения 1 или 2, номинальной вместимостью 50 см по ГОСТ 25336-82.
Цилиндры мерные исполнения 1, номинальной вместимостью 50, 100 и 250 см по ГОСТ 1770-74.
Воронки делительные по ГОСТ 1770-74 номинальной вместимостью 150, 200 и 500 см.
Колбы типа К, исполнения 1, со взаимозаменяемыми конусами, номинальной вместимостью 250 или 500 см по ГОСТ 25336-82.
Пипетки исполнения 2, 1-го класса точности, номинальной вместимостью 5 и 10 см по ГОСТ 29169-91.
Колонки хроматографические размером 18х390 мм.
Стекловата.
Реактивы - по п.2.
2.
3.1, 3.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.3. Подготовка к анализу
3.3.1. Подготовка стандартных растворов пестицидов (4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДЭ, 4,4'-ДДД, и
-ГХЦГ и ГЕПТАХЛОР) - по п.2.3.7.
3.3.2. Приготовление насыщенного раствора хлористого натрия - по п.2.3.8.
3.3.3. Приготовление раствора щавелевокислого калия - по п.2.3.9.
3.3.4. Подготовка газохроматографической колонки.
Газохроматографическую колонку заполняют сорбентом и присоединяют к прибору, не присоединяя к детектору. Кондиционирование колонки проводят в течение четырех дней, постепенно (в течение 6 ч) повышая температуру от 50 до 220 °С (5% ПФМС-4, нанесенного на хроматон NAW) и присоединяют к прибору.
3.3.5. Температурные режимы хроматографа
Температура испарителя (220±10) °С, колонок - (190±5) °С, детектора - (210±20) °С.
3.3.6. Скорость подачи газа-носителя - (60-75) мм/мин.
3.3.4-3.3.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.3.7. Рабочая шкала электрометра 1.10 а/шкалу.
3.4. Экстракция пестицидов - по п.2.3.10.
3.5. Очистка экстрактов - по п.2.3.11.
3.6. Проведение анализа
После подготовки хроматографа к работе - по пп.3.3.4-3.3.7 в испаритель вводят микрошприцем 2-5 мм стандартного раствора пестицидов, приготовленного по п.2.3.7 или очищенного экстракта, приготовленного по п.2.3.11 в зависимости от концентрации пестицидов в исследуемой пробе. Высота пиков в пробе должна быть в пределах высоты пиков пестицидов, содержащихся в 2 и 5 мм стандартных растворов.
3.7. Обработка результатов
Наличие пестицидов регистрируется самописцем прибора в виде ряда пиков с различным временем удерживания. Идентификацию пиков, полученных из очищенных экстрактов, проводят сравнением времен их удерживания с временами удерживания пиков, полученных из стандартного раствора пестицидов.
Массовую долю мг/кг или массовую концентрацию
мг/дм
, пестицидов в пробе вычисляют по формулам:
или 
;
или 
;
где - масса пестицидов в стандартном растворе, введенном в хроматограф;
или
- площадь или высота пика в исследуемой пробе, мм
или мм;
- общий объем экстракта после упаривания, см
;
или
- площадь или высота пика стандартного раствора пестицидов, введенных в хроматограф, мм
или мм;
- объем пробы, введенной в хроматограф, см
;
- масса исследуемой пробы, г;
- объем исследуемой пробы, дм
.
Вычисление производят до четвертого десятичного знака.
За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми по абсолютной величине не должны превышать 10% по отношению к среднеарифметическому. Окончательный результат округляют до третьего десятичного знака.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
Текст документа сверен по:
Молоко и молочные продукты.
Общие методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.:ИПК Издательство стандартов, 2004
