allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.100. Молоко и молочные продукты

ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков

Обозначение:
ГОСТ 32219-2013
Наименование:
Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков
Статус:
Действует
Дата введения:
07/01/2015
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.100.10

Текст ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

32219—

2013

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Иммуноферментные методы определения наличия

антибиотиков

(ISO 18330:2003, NEQ)

Издание официальное

Москва

Стаидартинформ

2015

ГОСТ 32219—2013

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ ло межгосударственной стан* дартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные по* ложекия» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосудар* ственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук» (ГНУ 8НИМИ Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 14 ноября 2013 г. N9 44)

За принятие проголосовали:

Краткое маиыеноеание страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Кол страны по МК ГИСО 3106)004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандэрт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Уэствндарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноя* бря 2013 г. N9 1920-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32219—2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5    Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 18330:2003 «Молоко и молочные продукты. Руководящие указания ло стандартизованному описанию иммунологических или рецепторных анализов для определения антибактериальных остатков» («Milk and milk products — Guidelines for the standardized description of immunoassays or recep* tor assays for the detection of antimicrobial residues», NEO)

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и попраеок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сета Интернет

© Стандартинформ. 2015

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ 32219—2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Иммумоферментные методы определения наличия антибиотиков

Milk and milk products.

Immunoenzyme methods for determination of antibiotics

Дата введения — 2015—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее — молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

•    методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

•    методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетради-клиновой группы;

•    метод одновременного определения лееомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;

- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрацикли-новой группы, лееомицетина и стрептомицина.

2    Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты;

ГОСТ 3145—64 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317—67 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 28498—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы определений

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—61) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссыгкдоых стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «[Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °С до 66 *С с допустимой погрешностью ± 0.5 "С.

Издание официальное

1

ГОСТ 32219—2013

3.2 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 *С до 66 *С.

З.ЗХолодильникбытовой. позволяющий поддерживать температуру отО*С до 12вСпоГОСТ 16317.

3.4    Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 ± 2) *С.

3.5    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6    Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 вС до 100 *С ценой деле* ния шкалы 1*С по ГОСТ 28498.

3.7    Пипетки вместимостью 0.5 и 1.0 см3 * * * 7 по ГОСТ 29227.

3.8    Бода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.9    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.10    Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

*тест*на6ор Nv 11) для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий закрытые крышкой пробирки с 3,3’.5,5'*тетраметилбензидином и специфическими рецепторами: пипетки вместимостью 0.45 см3: индикаторное устройство с диметилсульфоксидом:

•    тест-набор N9 22> для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий флаконы с лиофилизатом, индикаторные полоски хроматографической бумаги, пипетки вместимостью 0.15 см3;

•    тест-набор № З3) для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетра-циклиновой группы, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги: пипетками вместимостью 0.2 см3 с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пекициллина-G 0.004 мкг/г и окситетрациклина 0.01 мкг/г. красителя («Positive Standard»); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»);

•    тест-набор № 4J) для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетра* циклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору № 1;

-тест-набор No 55> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и те-трациклиновой группы, включающий закрытые крышкой флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги: пипетку вместимостью 0.2 см3 с наконечниками:

-тест-набор N9 6е) для одновременного определения левомицетина и стрептомицина, включающий флаконы: индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетки вместимостью 0.2 см3;

-тест-набор N9 7?> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетра-циклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N9 3:

•    тест-набор N9 8в> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетра-циклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N9 6.

Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.

4 Отбор проб

Отбор проб молока — по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт. Пробы допускается хранить в холодильнике при температуре (4 ± 2) *С не более 24 ч.

^ Тест-набор «СНАП Бета-Пактам СТ».

Тест-набор «Detvotest BLF*.

3) Тест-набор «Twinsensor®3».

Тест-набор «СНАП Дуо Бета-Твтра СТ».

5) Тест-набор «Betastar Combo HS».

Тест-набор «Reveal for САР/STREP»

7) Тест-набор «4sensorBTCS».

Тест-набор «Betastar 40».

Сноски 1)—8) с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает их обязательное применение. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, обеспечивающие требования настоящего стандарта. В этом случае следует руководствоваться инструкциями, прилагаемыми к данным тест-наборам.

2

ГОСТ 32219—2013

5 Методы определения наличия антибиотиков

5.1    Методы определения наличия антибиотиков бота-лактамкого типа

5.1.1    Метод с использованием тест-набора Ns 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1    Подготовка к определению

Тест-набор No 1 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 Хдо 8 X. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 X до 30 X в течение 5 мин.

Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре от О X до 10 X.

Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

5.1.1.2    Проведение определения

Снимают крышку с пробирки. Пипетку вместимостью 0.45 см3 наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают крышкой и перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так. чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

8 момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течение 30 мин.

5.1.1.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.1 (приложение А).

Если после проведения определения по 5.1.1.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора Ns 2

Метод основан на реакции комплексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилиэате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги. содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1    Подготовка копределению

Тест-набор No 2 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (612) X не более 9 мес. Перед началом работы необходимое количество флаконов извлекают из тест-набора, выдерживают при температуре от 15 X до 30 X. после чего открывают, удаляя фольгу.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (64 ± 2) вС.

5.1.2.2    Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,15 см3 наполняют анализируемым молоком, выливают во флакон и перемешивают круговыми движениями.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (64 ± 2) X в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата (водяной бани), перемешивают круговыми движениями до растворения реактива и помещают обратно.

3

ГОСТ 32219—2013

Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают в течение 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.1.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.2 (приложение А).

Зона в верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.1.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и

тетрациклиновой группы

5.2.1    Метод с использованием тест-набора № 3

Метод основан на реакции комплексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.2.1.1    Подготовка к определению

Тест-набор № 3 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2®С до 8 *С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество пеналов из тест-набора выдерживают при температуре от 15 *С до 30 *С.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40 ± 3) *С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard»

В стеклянные пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 см3 дистиллированной воды (0.4 см3 для контрольных растворов в пластиковых флаконах) и перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 *С — не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.2.1.2    Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 ± 3) ®С. 8 каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см3 анализируемого молока, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 3 мин.

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 ± 3) *С в течение 3 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см3 раствора «Positive Standard», в другую — 0.2 см3 раствора «Negative Standard».

5.2.1.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной

полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.З (приложение А).

4

ГОСТ 32219—2013

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контроль* ной. Если после проведения определения по 5.2.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест*набором.

Зона определения антибиотиков тетрацикпиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактам-кого типа — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят, как указано выше.

5.2.2 Метод с использованием тест-набора Ns 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета*лактамного типа и тетрацикпиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зон определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.2.2.1    Подготовка копределению в соответствии с 5.1.1.1 для тест-набора № 4 по 3.10.

5.2.2.2    Проведение определения в соответствии с 5.1.1.2.

5.2.2.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.4 (приложение А).

Если после проведения определения no S.2.2.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2.3    Метод с использованием тест-набора Ns 5

Метод основан на реакции комллексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа и тетра-циклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.3.1    Подготовка копределению

Тест-набор No 5 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 *С до 8 ®С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 *С до 30 *С в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (37,5 ± 1,0) ‘С.

Флаконы с реагентом встряхивают для осаждения содержимого на дне.

5.2.3.2    Проведение определения

Снимают крышку с флакона. Пипеткой с наконечником вносят 0,2 смэ анализируемого молока во флакон, закрывают его крышкой, встряхивают до растворения реактива и снимают крышку.

Для каждого флакона используют новый наконечник на пипетку.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (37.5 ± 1) *С в течение 5 мин. Затем ео флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.2.3.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.5 (приложение А).

5

ГОСТ 32219—2013

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контроль-ной. Если после проведения определения по 5.2.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиноеой группы — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.3 Метод одновременного определения наличия левомицетина и стрептомицина с

использованием тест-набора № 6

Метод основан на реакции комплексообраэования левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1    Подготовка к определению

Тест-набор Ne 6 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2®С до 8 *С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 ®С до 30 *С в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры <47,5 ± 1,0) °С.

5.3.2    Проведение определения

Пипеткой вносят 0.2 см3 анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 ± 1) 'С е течение 5 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.3.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.6 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения левомицетина на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной второй.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.4 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа,

тетрациклиноеой группы, левомицетина и стрептомицина

5.4.1    Метод с использованием тест-набора № 7

Метод основан на реакции комллексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетраци-клиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.4.1.1    Подготовка к определению е соответствии с 5.2.1.1 для тест-набора № 7 по 3.10.

5.4.1.2    Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 1 3) *С. 8 каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см3 анализируемого б

ГОСТ 32219—2013

молока, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 5 мин.

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 ± 3) *С в течение 5 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см3 раствора «Positive Standard», в другую — 0.2 см3 раствора «Negative Standard».

5.4.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.7 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят как указано выше.

5.4.2 Метод с использованием тест-набора Ns 8

Метод основан на реакции комплексообраэоеания антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина оо специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.2.1    Подготовка к определению в соответствии с 5.3.1 для тест-набора Ne 8 по 3.10.

5.4.2.2    Проведение определения в соответствии с 5.3.2.

5.4.2.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения no S.4.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

6 Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах представлены

в таблице 1.

7

ГОСТ 32219—2013

Таблица 1

Наименование

антибиотика

Наименьший предел определения антибиотиков с ислольювамием тест-иаборов. мг/хг

m 1

N1 2

N1 Э

N1 4

1* 5

№ б

№ 7

№ 8

Амоксициллин

0.0035

0.004

0.003

0.003

0.002

0.002

0.002

Ампициллин

0.0035

0.004

0.003

0.003

0.002

0.003

0.003

Бензициллин

0.003

0.003

0.003

Гетациллин

0.01

0.005

0.005

Дигид рострелтомицин

0.05

Диклоксациллин

0,02

0.03

0.006

0.011

0.002

0.006

0.003

Доксициклин

0.0025

0.002

0.002

0.002

Клоксэцилпин

0.022

0.03

0.006

0.018

0.002

0.006

0.003

Лееомицвтин (хлорамфвникол)

0.0003

0.0003

0.0003

Нафциллин

0.052

0.03

0.046

0.0075

0.03

0.01

Оксациллин

0.024

0.03

0.012

0.032

0.003

0.012

0.003

Окситетрациклин

0.0075

0.01

0.01

0.007

0.01

Пенициллин G

0.002

0.004

0.003

0.001

0.002

0.003

0.003

Пенициллин V

0.003

0.003

0.003

Пилврациллин

0.006

0.005

0.005

Прокаин-пенициллин

0.002

0.003

0.003

Стрептомицин

0.2

0.15

0.2

Тетрацикшн

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01

Тикарциллин

0.04

Хлортетра циклим

0.006

0.026

0.006

0.005

0.006

Цефадроксил

0.03

0.005

0.005

Цефаэолин

0.013

0.05

0.018

0.015

0.018

0.02

Цефалексин

0.025

0.1

0.75

0.01

0.4

1.0

Цефалоний

0.04

0.003

0.003

Цефалониум

0.04

0.02

0.003

0.04

0.003

0.003

0.003

Цефапирин

0.011

0.006

0.008

0.004

0.006

0.004

Цефацетрил

0.05

0.03

0.009

0.03

Цефкином

0.02

0.02

0.02

0.01

0.006

0.03

0.006

Цефоксаэол

0.05

Цефопераэон

0.01

0.05

0.003

0.004

0.003

0.003

0.004

Цефотаксим

0.01

Цефрадин

0.03

Цефтиофур

0.011

0.1

0.01

0.002

0.05

0.01

0.015

Цефуроксим

0.01

8

ГОСТ 32219—2013

Приложение А (справочное)

Примеры возможных результатов определения наличия антибиотиков в молоке

А.1 Примеры реэугътатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N9 1 приведены на рисунке А.1.

Контрольная зона

Зона определения антибиотиков

1,2 — антибиотики отсутствуют: 3 — антибиотики присутствуют Рисунок А.1

А.2 Примеры реэугътатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N9 2 приведены на рисунке А.2.

1    2    3    4    5

Контрольная зона

Зона определения антибиотиков

1 — антибиотики отсутствуют-, 2. 3. 4 — антибиотики присутствуют. 5 — недействительный результат

Рисунок А.2

А.З Примеры реэугътатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N9 3 приведены на рисунке А.З.

1    2    3    4    5

Зона определения антибиотиков тетркрклиноеой группы

Контрогъная зона

Зона определения антибиотиков бета-лэктэмного типа

1 — антибиотики отсутствуют. 2 — присутствуют антибиотики бета-лактамното типа:

3 — присутствуют антибиотики тетрацнклииовой группы:

4 — присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрацнклиновой группы: 5 — недействительный результат

Рисунок А.З

9

ГОСТ 32219—2013

А.4 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № 4 приведены на рисунке А.4.

Контрольная зона

Зона определения антибиотиков т етра цикл имоаой группы

Зона определения антибиотиков бета-лактаиного типа

Т — антибиотики отсутствуют: 2 — присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой труппы:

3 — присутствуют антибиотики бета-лактамиою типа. 4 — присутствуют антибиотики тетрацикл и новой группы

Рисунок А.4

А.5 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № 5 приведены на рисунке А.5.

1    2    3    4    5

Зона определения антибиотиков бетз-лактамного типа

Контрольная зона

Зона определения антибиотиков тетрациклиновойгруппы

1 — антибиотики отсутствуют; 2 «— присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы: 3 — присутствуют внтибиотики бета-лак-тайною типа. 4 — присутствуют антибиотики бета-лактамиого типа и тетрациклиновой группы: 5 — недействительный результат

Рисунок А.5

А.6 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N9 6 приведены на рисунке А.6.

Контрольная зона

Зона определения левомицетина

Зона определения стрептомицина

1    2    3    4    5

1 — антибиотики отсутствуют; 2 — присутствует стрептоыиции; 3 — присутствует левомицетин. 4 — присутствуют левомицетин и стрептомицин; S — недействительный результат

10

Рисунок Аб

ГОСТ 32219—2013

А.7 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-наборов № 7 приведены на рисунке А.7.

12    3    4    5    6

Контрольная зона

Зоны определения: антибиотиков тетрацихлиноеой группы

лееомицетина

стрептомицина

антибиотиков бета-ла намного типа

Т — антибиотики отсутствуют: 2 — присутствуют антибиотики тетрациклиноеой группы: 2 — присутствует левомицетии: 4 — присутствует стрептомицин, б — присутствуют антибиотики бета-лактаыиого типа: в — недействительный результат

Рисунок А.7

А.в Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № в приведены на рисунке А.8.

1    2    3    4    5    6

Контрольная зона

Зоны определения антибиотиков тетрациклиноеой группы

левомицетинэ

стрептомицина

антибиотиков бета-пактамното типа

1 — антибиотики отсутствуют: 2 — присутствуют антибиотики тетрациклиноеой грумы: 3 — присутствует левомицетии: 4 — присутствует стрептомицин; S — присутствуют антибиотики бета-л актами ого типа: б — недействительный результат

Рисунок А.8

11

ГОСТ 32219—2013

УДК 637.12.04/.07:006.354    МКС 67.100.10    NEQ

Ключевые слова: молоко и молочные продукты, иммуноферментные методы, методы определения антибиотиков бета-лактамного типа. методы одновременного определения антибиотиков бета-лактам-ною типа и тетрациклиновой группы, метод одновременного определения левомицетина (хлорамфе-никола) и стрептомицина, методы одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина

12

Редактор Л.В. Коретникоеа Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.М. Малахова Компьютерная верстка Е.О. Асташина

Слано а набор 23.П.2016.    Подписано а печать 04.12.201S. Формат 60«84,/д.

Ven.ne4.n t.se Уч-иад. п 1.30 Тираж 76 эм. Эак. 3950

Гарнитура Ариел.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТЛНДАРТИМФОРМ». Т2Э995 Москва. Гранатный пер.. 4.

wwwgoslmfo.ru