allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.180. Сахар. Продукты из сахара. Крахмал

ГОСТ 34232-2017 Мед. Методы определения активности сахаразы, диастазного числа, нерастворимых веществ

Обозначение:
ГОСТ 34232-2017
Наименование:
Мед. Методы определения активности сахаразы, диастазного числа, нерастворимых веществ
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2019
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.180.10

Текст ГОСТ 34232-2017 Мед. Методы определения активности сахаразы, диастазного числа, нерастворимых веществ


ГОСТ 34232-2017

Группа С52



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД

Методы определения активности сахаразы, диастазного числа,нерастворимых веществ

Honey. Methods for determination of sucrose activity,diastase activity, insoluble matters



МКС 67.180.10

Датавведения 2019-01-01



Предисловие


Цели, основные принципы иосновной порядок проведения работ по межгосударственнойстандартизации установлены в ГОСТ1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основныеположения" и ГОСТ1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандартымежгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственнойстандартизации. Правила разработки, принятия, обновления иотмены"

Сведения остандарте

1ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью Центрисследований и сертификации "Федерал" (ООО Центр "Федерал")

2ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432"Пчеловодство"

3ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии исертификации (протокол от 14 июля 2017 г. N 101-П)

За принятиепроголосовали:

Краткоенаименование страны по МК (ИСО3166) 004-97

Код страныпо
МК (ИСО3166) 004-97

Сокращенноенаименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт РеспубликиБеларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4ПриказомФедерального агентства по техническому регулированию и метрологииот 9 ноября 2017 г. N 1716-ст межгосударственный стандарт ГОСТ34232-2017 введен в действие в качестве национального стандартаРоссийской Федерации с 1 января 2019 г.

5В настоящем стандарте учтены основные нормативные положенияследующих национальных немецких стандартов:

-DIN 10759-1:1998* "Исследование меда. Определение активностисахаразы. Часть 1. Метод Зигенталера" ("Analysis of honey -Determination of saccharose activity - Part 1: Siegenthalermethod", NEQ);
________________
*Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь идалее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт . - Примечаниеизготовителя базы данных.


-DIN 10750:2006 "Анализ меда. Определение активности диастазы"("Analysis of honey - Determination of diastase activity",NEQ).

Настоящий стандартподготовлен на основе применения ГОСТ Р54386-2011*
_______________
*ПриказомФедерального агентства по техническому регулированию и метрологииот 9 ноября 2017 г. N 1716-ст ГОСТ Р54386-2011 отменен с 1 января 2019 г.

6ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация обизменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодноминформационном указателе "Национальные стандарты", а текстизменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе"Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отменынастоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликованов ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты".Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются такжев информационной системе общего пользования - на официальном сайтеФедерального агентства по техническому регулированию и метрологии всети Интернет (www.gost.ru)

1Область применения

1 Область применения


Настоящий стандартраспространяется на мед и устанавливает:

-метод определения активности сахаразы в диапазоне измерений от 20,0до 200,0 ед./кг;

-метод определения диастазного числа в диапазоне измерений от 3,0 до40,0 ед. Готе;

-метод определения диастазного числа по Шаде в диапазоне измеренийот 0 до 40,0 ед. Шаде;

-метод определения диастазного числа по Фадебазу в диапазонеизмерений от 0 до 40,0 ед. Шаде;

-метод определения массовой доли нерастворимых веществ в диапазонеизмерений от 0% до 0,5%.

2Нормативные ссылки


Внастоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующиестандарты:

ГОСТ12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарнаябезопасность. Общие требования

ГОСТ12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредныевещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда.Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видовзащиты
_______________
*В Российской Федерации действует ГОСТ Р12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда.Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видовзащиты".


ГОСТ12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарнаятехника для защиты объектов. Основные виды. Размещение иобслуживание

ГОСТ12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системывентиляционные. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1-2011Государственная система обеспечения единства измерений. Весынеавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и техническиетребования. Испытания

ГОСТ61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Техническиеусловия

ГОСТ1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторнаястеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие техническиеусловия

ГОСТ3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ ИСО 3310-1-2002**Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Техническиеусловия
_______________
** В Российской Федерациидействует ГОСТ Р51568-99 (ИСО 3310-1-90) "Сита лабораторные из металлическойпроволочной сетки. Технические условия".


ГОСТ4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный.Технические условия

ГОСТ4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ4919.2-2016 Реактивы и особо чистые вещества. Методыприготовления буферных растворов

ГОСТ ИСО 5725-1-2003*Точность (правильность и прецизионность) методов и результатовизмерений. Часть 1. Основные положения и определения
_______________
*В Российской Федерации действует ГОСТ РИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность)методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения иопределения".


ГОСТ ИСО 5725-6-2003**Точность (правильность и прецизионность) методов и результатовизмерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
_______________
** В Российской Федерациидействует ГОСТ РИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность)методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значенийточности на практике".


ГОСТ6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10163-75* Реактивы.Крахмал растворимый. Технические условия
________________
*Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ10163-76. - .


ГОСТ11773-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный.Технические условия

ГОСТ14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафыбытовые. Общие технические условия

ГОСТ19792-2017 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования иметоды испытаний

ГОСТ25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы,основные параметры и размеры

ГОСТ25629-2014 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие техническиетребования. Методы испытаний

ГОСТ29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипеткиградуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная.Бюретки. Часть 1. Общие требования

ГОСТ31774-2012 Мед. Рефрактометрический метод определения воды

Примечание - Припользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действиессылочных стандартов в информационной системе общего пользования -на официальном сайте Федерального агентства по техническомурегулированию и метрологии в сети Интернет или ежегодномуинформационному указателю "Национальные стандарты", которыйопубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускамежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" затекущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то припользовании настоящим стандартом следует руководствоватьсязаменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отмененбез замены, то положение, в котором дана ссылка на него,применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3Термины и определения


Внастоящем стандарте применены термины по ГОСТ25629, ГОСТ ИСО 5725-1.

4Требования безопасности проведения работ

4.1 При проведенииизмерений необходимо соблюдать требования пожарной безопасности поГОСТ12.1.004, требования электробезопасности при работе сэлектроустановками по ГОСТ12.1.019, требования безопасности при работе с химическимиреактивами по ГОСТ12.1.007, инструкцию по эксплуатации жидкостного хроматографа,иметь средства пожаротушения по ГОСТ12.4.009.

4.2 Помещение лабораториидолжно соответствовать санитарным правилам проектирования,оборудования, эксплуатации и содержания производственных илабораторных помещений, предназначенных для проведения работ свеществами 1-го и 2-го классов опасности, органическимирастворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащенавентиляционной системой согласно ГОСТ12.4.021.

5Условия проведения измерений


При выполнении измеренийследует соблюдать следующие условия:

-температура окружающей среды

от 15°С до25°С;

-относительная влажность воздуха при температуре 25°С

не более80%;

-атмосферное давление

от 97 до 101 кПа(730-760 мм рт.ст.).

6Метод определения активности сахаразы

6.1 Отбор и подготовкапробы

Пробу меда массой неменее 200 г отбирают по ГОСТ19792.

Закристаллизованный медразмягчают в термостате или на водяной бане при температуре не выше40°С. Пробу охлаждают до комнатной температуры.

Мед с примесямипроцеживают при комнатной температуре через сито.Закристаллизованный мед продавливают через сито шпателем. Крупныемеханические частицы удаляют вручную.

Сотовый мед (без перговыхячеек) отделяют от сот при помощи сита без нагревания.

Пробу интенсивно итщательно перемешивают не менее 3 мин. При этом следует обратитьвнимание на то, чтобы меньше воздуха попало в мед.

6.2 Сущностьметода

Метод основан нафотометрическом определении количества продукта расщеплениясубстрата в условиях проведения ферментативной реакции ипоследующем вычислении активности сахаразы (-глюкозидазы, инвертазы) меда и инвертазногочисла.

1мкмоль субстрата, расщепленного сахаразой за 1 мин при оптимальныхдля ферментативной реакции условиях (значение pH, температура),соответствует 1 ед. активности.

Инвертазное числохарактеризует активность сахаразы меда.

Инвертазное числопоказывает массу сахаразы (в граммах), расщепленную содержащимися в100 г меда ферментами за 1 ч при условиях испытания.

6.3 Средстваизмерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

6.3.1 Спектрофотометр,снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны400 нм и кюветами с четырьмя прозрачными стенками и длинойоптического пути 10 мм.

6.3.2 Весынеавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 высокого классаточности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более±0,1 мг.

6.3.3 Термометр ртутныйстеклянный лабораторный с диапазоном значений от 0°С до 100°С иценой деления шкалы 1°С по ГОСТ28498.

6.3.4 Термостат, водянаябаня или другое устройство, позволяющее проводить равномерныйнагрев до температуры 60°С.

6.3.5 pH-метр/иономер спределами допускаемой основной абсолютной погрешности прибора припреобразовании измеренного значения ЭДС в pX (pH) ±0,02 ед. pX(pH).

6.3.6 Сито из нержавеющейстали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ ИСО 3310-1.

6.3.7 Секундомермеханический с диапазоном измерений (0-60) с, (0-60) мин.

6.3.8 Шпательлабораторный.

6.3.9 Палочки стеклянныелабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.

6.3.10 Стаканы В-1-50 ТСпо ГОСТ25336.

6.3.11 Цилиндры мерные1-500-2 по ГОСТ1770.

6.3.12 Колбы мерные1(2)-25(100, 500, 1000)-2(ПМ) по ГОСТ1770.

6.3.13 Пипетки 1-2-1-1(5)по ГОСТ29227.

6.3.14 Калийфосфорнокислый однозамещенный () по ГОСТ4198, х.ч.

6.3.15 Натрийфосфорнокислый двузамещенный () по ГОСТ11773, х.ч.

6.3.16п-Нитрофенил---глюкопиранозид (4-Nitrophenyl --glucopyranoside) с содержанием основноговещества не менее 98,0%.

6.3.17Трис-(гидроксиметил)аминометан с содержанием основноговещества не менее 99,9%.

6.3.18 Кислота соляная поГОСТ3118, х.ч.

6.3.19 Водадистиллированная по ГОСТ6709.

Допускается использованиедругих средств измерений, вспомогательного оборудования пометрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных внастоящем стандарте.

Допускается использованиедругих реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

6.4 Подготовка киспытаниям

6.4.1 Приготовлениебуферного раствора (pH=6,0)

Калий фосфорнокислыйоднозамещенный () по 6.3.14 массой (11,66±0,01) г и натрийфосфорнокислый двузамещенный () по 6.3.15 массой (2,04±0,01) г растворяютв дистиллированной воде по 6.3.19 в мерной колбе по 6.3.12вместимостью 1000 см. Объем раствора в колбе доводят до меткидистиллированной водой, перемешивают. Измеряют и устанавливают pH,в случае его отклонения.

6.4.2 Приготовлениераствора субстрата

п-Нитрофенил---глюкопиранозид по 6.3.16 массой(3,0126±0,0001) г растворяют в буферном растворе, приготовленном по6.4.1, нагревая до температуры не выше (60±1)°С, в мерной колбе по6.3.12 вместимостью 500 см. Раствор быстро охлаждают до комнатнойтемпературы и доводят до метки буферным раствором,перемешивают.

Раствор хранят в склянкеиз темного стекла при температуре 4°С в течение 30 сут.

6.4.3 Приготовлениераствора соляной кислоты концентрацией 3 моль/дм

Соляную кислоту по 6.3.18объемом 270 см осторожно приливают к 300 см дистиллированной воды по 6.3.19 в мернуюколбу по 6.3.12 вместимостью 1000 см, перемешивают. Объем раствора в колбедоводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.4.4 Приготовлениефиксирующего раствора (pH=9,5)

Трис-(гидроксиметил)аминометанпо 6.3.17 массой (36,34±0,01) г растворяют в дистиллированной водев мерной колбе вместимостью 100 см. Добавляют раствор соляной кислотыконцентрацией 3 моль/дм, приготовленный по 6.4.3, в объеме,достаточном для установления значения pH раствора (9,5±0,1) ед. pH.Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой,перемешивают.

6.4.5 Приготовлениераствора меда

Встакан по 6.3.10 вместимостью 50 см взвешивают навеску меда, подготовленного по6.1, массой (4,00±0,01) г. К навеске приливают 5 см буферного раствора, приготовленного по6.4.1, мед тщательно растирают стеклянной палочкой по 6.3.9 ипереносят жидкость в мерную колбу по 6.3.12 вместимостью 25см. Обработку пробы повторяют два-три раза дополного растворения меда, затем стакан несколько раз обмываютнебольшими порциями буферного раствора по 6.4.1, которые такжесливают в мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят до меткибуферным раствором, перемешивают.

Раствор хранят притемпературе 4°С в течение 24 ч.

6.5 Проведениеиспытаний

6.5.1 В две мерные колбыпо 6.3.12 вместимостью 25 см вносят по 5 см раствора субстрата, приготовленного по6.4.2. Колбы помещают в термостат или на водяную баню, срегулятором температуры, установленным на температуру (40,0±1,0)°С.Через 5 мин выдерживания при температуре (40,0±1,0)°С в первуюколбу добавляют 0,5 см раствора меда, приготовленного по 6.4.5, иначинают отсчет времени по секундомеру по 6.3.7. Перемешиваютсодержимое колбы (рабочий раствор) в течение 10 с, вновь помещаютколбу в термостат или на водяную баню температурой (40,0±1,0)°С.Через 20 мин в обе колбы добавляют по 0,5 см фиксирующего раствора, приготовленного по6.4.4, смеси в колбах перемешивают в течение 10 с. Во вторую колбудобавляют 0,5 см раствора меда, приготовленного по 6.4.5,смесь (контрольный раствор) вновь перемешивают. Контрольный растворготовят для каждого образца меда.

6.5.2 После охлаждениярастворов до комнатной температуры измеряют оптическую плотность() рабочего раствора по отношению кконтрольному раствору на спектрофотометре при длине волны 400 нм в течение 60 мин. Оптическуюплотность раствора определяют не менее трех раз.

Вычисляютсреднеарифметическое значение оптической плотности рабочегораствора при условии, если абсолютное расхождение () результатов трех определений непревосходит значения 0,02. При невыполнении этого условия проводятповторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичногознака.

6.5.3 При анализе каждойпробы выполняют два параллельных определения.

6.6 Обработка ипредставление результатов испытаний

6.6.1 Значение активностисахаразы , ед./кг меда, вычисляют по формуле

, (1)


где 794,7 - коэффициент, учитывающий разбавление (в пересчете на 1кг меда), объем рабочего раствора, пересчет времени реакции на 1мин, молярную концентрацию продукта разложения субстрата;

- оптическая плотность рабочего раствора по6.5.2;

- масса навески меда, г.

6.6.2 Значениеинвертазного числа вычисляют по формуле

, (2)


где 21,64 - коэффициент линейной зависимости инвертазного числа отоптической плотности;

- оптическая плотность рабочего раствора,найденная по 6.5.2.

6.6.3 За результатыиспытаний принимают среднеарифметические значения двух параллельныхопределений активности сахаразы и инвертазного числа, полученных вусловиях повторяемости, если абсолютные расхождения междупараллельными определениями не превышают пределов повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-6. Значения пределовповторяемости приведены в таблицах 1, 2.


Таблица 1

Диапазонизмерений активности сахаразы , ед./кг

Пределповторяемости , при 0,95, ед./кг

Критическийдиапазон при трех измерениях (3), ед./кг

Пределвоспроизводимости , при 0,95, ед./кг

Границыабсолютной погрешности , при 0,95, ед./кг

От 20,0 до 200,0включ.

0,07

0,10

0,13

0,12



Таблица 2

Диапазонизмерений инвертазного числа

Пределповторяемости , при 0,95

Критическийдиапазон при трех измерениях (3)

Пределвоспроизводимости, при 0,95

Границыабсолютной погрешности , при 0,95

От 2,2 до 21,8 включ.

0,07

0,10

0,13

0,12