allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.180. Сахар. Продукты из сахара. Крахмал

ГОСТ 32167-2013 Мед. Метод определения сахаров

Обозначение:
ГОСТ 32167-2013
Наименование:
Мед. Метод определения сахаров
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2014
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.180.10

Текст ГОСТ 32167-2013 Мед. Метод определения сахаров



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

32167-

2013

МЕД

Метод определения сахаров

(DIN 10758:1997, NEQ)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2013

ГОСТ 32167—2013

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения)» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью Центр исследований и сертификации «Федерал» (ООО Центр «Федерал»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 19 мая 2013 г. № 56-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны

по МК (ИСО 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа

по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

К2

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызствндарт

Молдова

MD

Молдовв-Ста нда рт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандврт

Узбекистан

UZ

Узсгандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 сентября 2013 г. № 1072-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32167—2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.

5    В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения национального немецкого стандарта DIN 10758:1997 Analysis of honey — Determination of the content of saccharides fructose, glucose, saccharose, turanose and maltose — HPLC method (Анализ меда. Определение содержания сахаридов фруктозы, глюкозы, сахарозы, туранозы и мальтозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)).

Степень соответствия — неэквивалентная (NEQ).

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53883—2010

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены наслюящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соотвепктвующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

€> Стандартинформ. 2013

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен е качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 32167—2013

Содержание

1 Область применения............................................1

2 Нормативные ссылки............................................1

3    Термины и определения...................................

4    Требования безопасности проведения работ........................

5    Условия измерений......................................

6    Метод определения массовой доли редуцирующих сахаров и массовой доли сахарозы

(в пересчете на безводное вещество)..................................3

7    Метод определения массовой доли фруктозы, глюкозы, сахарозы, тураноэы. мальтозы, трегалозы.

арабиноэы, раффинозы, мелецитозы. мелибиозы с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)..........................................7

Библиография................................................11

in

го го го

ГОСТ 32167—2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ стандарт

МЕД

Метод определения сахаров Honey. Method for determination of sugars

Дате введения — 2014—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мед и устанавливает методы определения сахаров:

1)    метод определения массовой доли редуцирующих сахаров и массовой доли сахарозы (в лере* счете на безводное вещество) с помощью колориметра в диапазонах измерений от 70,00 % до 96,00 % и от 1.00 % до 26.00 % соответственно;

2)    метод определения массовой доли сахаров с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в следующих диапазонах измерений:

- фруктозы от 30.00 % до 43.00 %;

•    глюкозы от 22,00 % до 40.00 %:

•    сахарозы от 0.10 % до 8.00 %;

•    туранозы от 0.50 % до 3.00 %;

•    мальтозы от 0.50 % до 5.00 %;

•    трегалоэы от 0.50 % до 2.50 %;

•    арабинозы от 0.50 % до 2,50 %;

•    раффинозы от 0,50 % до 2.50 %;

•    мелецитозы от 0.50 % до 40.00 %;

•    мелибиоэы от 0,50 % до 2,50 %.

Требования к контролируемому показателю установлены в ГОСТ 19792. ГОСТ 31766.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электро безопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021—75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ИСО 3310-1—2002 Сита контрольные. Часть 1. Сита контрольные из металлической проволочной ткани. Технические требования и испытания

ГОСТ 3118—77 (СТ СЭВ 4276—83) Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4206—75 Реактивы. Калий желеэосинеродистый. Технические условия

Издание официальное

1

ГОСТ 32167—2013

ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4919.1—77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТИСО 5725-1—2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-6—2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ 5833—75 Реактивы. Сахароза. Технические условия ГОСТ 6038—79 Реактивы. D-глюкоэа. Технические условия ГОСТ 6709—72 8ода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 14919—83 Электроплиты. Электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 19792—2001 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 24363—80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры

и размеры

ГОСТ 25629—83 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ 28498—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251—91 (ИСО 385-1—84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31766—2012 Моды монофлорные. Технические условия

ГОСТ 31774—2012 Мед. Рефрактометрический метод определения воды

ГОСТ 31895—2012 Сахар белый. Технические условия*

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей згу ссылку.

3 Термины и определения

8 настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 25629, ГОСТ ИСО 5725-1.

4 Требования безопасности проведения работ

При проведении измерений необходимо соблюдать требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. требования элекгробеэоласности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. инструкцию по эксплуатации жидкостного хроматографа, иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5 Условия измерений

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования. эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1-го и 2-го классов опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021. При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

Температура окружающего воздуха от 15 *С до 25 *С. относительная влажность воздуха не более 80 % при температуре 25 вС. атмосферное давление 730—760 мм рт. ст.

’ На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р53396—2009 «Сахар белый. Технические условия».

2

ГОСТ 32167—2013

6 Метод определения массовой доли редуцирующих сахаров и массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество)

6.1    Отбор и подготовка пробы

Пробу меда массой не менее 200 г отбирают по ГОСТ 19792.

Закристаллизованный мед размягчают в термостате по 6.3.4 или на термостатируемой водяной баке по 6.3.5 при температуре не выше 40 *С. Пробу охлаждают до комнатной температуры.

Мед с примесями процеживают при комнатной температуре через сито по 6.3.7. Закристаллизован* ный мед продавливают через сито шпателем по 6.3.8. Крупные механические частицы удаляют вручную.

Сотовый мед (без перговых ячеек) отделяют от сот при помощи сита без нагревания.

Пробу интенсивно и тщательно перемешивают не менее 3 мин.

6.2    Сущность метода

Метод основан на определении оптической плотности раствора желеэосинеродистого калия после того, как он прореагирует с редуцирующими сахарами меда. Метод испытания включает определение сахаров меда до и после инверсии.

6.3    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

6.3.1    Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК или других аналогичных марок, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны (440110) нм.

6.3.2    Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

6.3.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104, предел допускаемой абсолютной погрешности однократною взвешивания не более ± 0.1 мг.

6.3.4    Термостат или другое устройство, позволяющее производить равномерный нагрев до температуры 40 "С.

6.3.5    Водяная баня, позволяющая производить равномерный нагрев до температуры 82 *С.

6.3.6    Секундомер механический СОСпр-26-2-О00.

6.3.7    Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ ИСО 3310-1.

6.3.8    Шпатель лабораторный ШЛ.

6.3.9    Электроплитка по ГОСТ 14919 или газовая горелка.

6.3.10    Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100 °С по ГОСТ 28498 с ценой деления шкалы 1 *С.

6.3.11    Колбы мерные 1(2)-100(200.1000)-2(ПМ) по ГОСТ 1770.

6.3.12    Колбы конические КН-1(2,3>-250-29/32(34) ТС по ГОСТ 25336.

6.3.13    Пипетки 1.2-1*5(10. 25) по ГОСТ 29227.

6.3.14    Цилиндры 3-100 по ГОСТ 1770.

6.3.15    Стаканы В-1-100 ТС по ГОСТ 25336.

6.3.16    Бюретка 1-1 (2)-2-25-0.1 по ГОСТ 29251.

6.3.17    Эксикатор по ГОСТ 25336.

6.3.18    Калий жепеэосикеродистый по ГОСТ 4206. ч. д. а., х. ч.

6.3.19    Натрия гидроокись по ГОСТ 4328 или калия гидроокись по ГОСТ 24363. ч. д. а., раствор молярной концентрацией 2.5 моль/дм3 и раствор массовой долей 25 %.

6.3.20    Сахароза по ГОСТ 5833, х. ч.. или кристаллический сахар, или сахарная пудра по ГОСТ 31361, категории экстра.

6.3.21    Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч., ч. д. а.

6.3.22    Метиловый оранжевый, ч. д. а., раствор массовой долей 0.1 %. готовят по ГОСТ 4919.1 (подраздел 3.1).

6.3.23    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается использование других средств измерений и вспомогательною оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже указанных.

6.4 Подготовка к испытаниям

6.4.1 Приготовление раствора железосинеродистого калия

Желеэосинеродистый калий по ГОСТ 4206 массой (10.00 ± 0.01) г растворяют в дистиллированной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

з

ГОСТ 32167—2013

6.4.2    Приготовление стандартного раствора инвертного сахара

В стакан вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают навеску высушенной в эксикаторе по ГОСТ 25336 в течение 3 сут сахарозы по ГОСТ 5833 (или кристаллического сахара, или сахарной пудры по ГОСТ 31895) массой (0.381 ± 0,001) г. К навеске приливают 20—30 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. тщательно перемешивают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 200 см3 по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два—три раза до полного растворения на* вески. Стакан обмывают небольшой порцией дистиллированной воды, сливают в ту же мерную колбу. Объем жидкости в мерной колбе не должен превышать 100 см3.

8 колбу вносят 5 см3 концентрированной соляной кислоты по ГОСТ 3118. помещают термометр по 6.3.10 и ставят колбу в нагретую до 80 *С—82 *С водяную баню по 6.3.5. Содержимое колбы нагревают до 67 *С—70 *С. выдерживают при этой температуре ровно 5 мин. охлаждают до 20 *С. Добавляют одну каплю раствора метилового оранжевого, приготовленного по 6.3.22. и нейтрапиэуют раствором гидро* окиси калия или натрия массовой долей 25 % по 6.3.19. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Полученный раствор содержит 2 мг сахара в 1 см3.

6.4.3    Колориметрирование стандартного раствора инвертного сахара и построение градуировочного графика

8 сухие конические колбы вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 отмеряют пипетками по ГОСТ 29227 по 20 см3 раствора желеэосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1, по 5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2.5 моль/дм3 по 6.3.19 и по 6.0; 6.5; 7,0; 7.5 и

8.0 см3 стандартного раствора инвертного сахара, приготовленного по 6.4.2 (что соответствует 12. 13. 14.15 и 16 мг инвертного сахара). 8 каждую колбу приливают из бюретки по ГОСТ 29251 соответственно 4.0; 3.5; 3.0; 2.5 и 2.0 см дистиллированной воды по ГОСТ 6709 (объем жидкости в каждой колбе должен быть 35 см3). Содержимое колб нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин. охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность растворов по отношению к дистиллированной воде на фотоколориметре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны >. = 440 нм. Оптическую плотность каждого раствора определяют не менее трех раз.

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности каждого раствора при уело* вии. если абсолютное расхождение (Ома,е - DUMM) результатов трех определений не превосходит эначе* ния критического диапазона CR^p). приведенного в таблице 1. При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

Тдблииз 1

Диапазон измерении оптической плотности О

Критичесжии диапазон при трех измерениях CRt и{3)

От 0.587 до 0.726 включ

0.02 0

Строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значение оптической плотности каждого раствора, а на оси абсцисс — соответствующую этому значению массу инвертного сахара в миллиграммах. Градуировочный график должен быть линейным в заданном диапазоне с коэффициентом корреляции 0.99. График используют для определения содержания редуцирующих сахаров и общею сахара после инверсии.

6.4.4    Приготовление раствора меда

Навеску меда, подготовленного по 6.1. массой (2.00 ± 0.01) г растворяют в дистиллированной воде по ГОСТ 6709 в мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.4.5    Определение массовой доли воды в меде

Определение массовой доли воды в меде, подготовленном по 6.1. проводят по ГОСТ 31774.

6.5    Проведение испытаний

6.5.1    Определение массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии

6.5.1.1    Раствор меда, приготовленный по 6.4.4, объемом 10 см3 вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.5.1.2    6 коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 вносят 20 см3 раствора железосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1.5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2.5 моль/дм3 по 4.4.18 и 10 см3 раствора меда, приготовленного по 6.5.1.1. Смесь нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин. быстро охлаждают до комнатной температуры и делают не ме

4

ГОСТ 32167—2013

нее трех измерений оптической плотности {О) по отношению к дистиллированной воде на фотоколоримегре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны X = 440 нм.

Т. к. градуировочный график строится в диапазоне значений оптической плотности от 0.587 до 0.728 (что соответствует массе инвертного сахара от 12 до 16 мг). то в случае получения значений оптической плотности, не попадающих в указанный интервал, определение повторяют, соответственно изменив объем раствора меда, приготовленного по 6.5.1.1. в реакции с раствором железосинеродистого калия.

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности раствора при условии, если абсолютное расхождение - 0И1Ш) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CR0 «(З), приведенного в таблице 1. При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

6.5.1.3    При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

6.5.1.4    Для каждой пробы по градуировочному графику находят массу редуцирующих сахаров до инверсии, соответствующую значению оптической плотности, определенному по 6.5.1.2.

6.5.2 Определение массовой доли общего сахара после инверсии

6.5.2.1    В мерную колбу вместимостью 200 см3 вносят раствор меда, приготовленный по 6.4.4. объемом 20 см3, добавляют 80 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и 5 см3 концентрированной соляной кислоты по ГОСТ 3118. помещают термометр по 6.3.10 и ставят колбу в нагретую до 80 вС—82 *С водяную баню по 6.3.5. Содержимое колбы нагревают до 67 *С— 70 *С. выдерживают при этой температуре точно 5 мин. охлаждают до 20 *С. Добавляют одну каплю раствора метилового оранжевого, приготовленного по 6.3.22. и нейтрализуют раствором гидроокиси калия или натрия массовой долей 25 % по 6.3.19. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

6.5.2.2    В коническую колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 вносят 20 см3 раствора железосинеродистого калия, приготовленного по 6.4.1, 5 см3 раствора гидроокиси натрия или калия молярной концентрацией 2.5 моль/дмэ по 6.3.19 и 10 см3 раствора меда после инверсии, полученного по 6.5.2.1. Смесь нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин. быстро охлаждают до комнатной температуры и делают не менее трех измерений оптической плотности (О) по отношению к дистиллированной воде на фотоколориметре по 6.3.1 в кюветах по 6.3.2 при длине волны ). - 440 нм. Так как градуировочный график строится в диапазоне значений оптической плотности от 0.587 до 0,728 (что соответствует массе инвертного сахара от 12 до 16 мг), то в случае получения значений оптической плотности, не попадающих в указанный интервал, определение повторяют, соответственно изменив объем раствора меда, приготовленного по 6.5.2.1. в реакции с раствором железосинеродистого калия.

Вычисляют среднеарифметическое значение оптической плотности раствора при условии, если абсолютное расхождение (DMU. - Оиим) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CJ?0i95(3). приведенного в таблице 1. При невыполнении этого условия проводят повторные испытания. Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

6.5.2.3    При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

6.5.2.4    Для каждой пробы по градуировочному графику находят массовую долю общего сахара после инверсии, соответствующую значению оптической плотности, определенному по 6.5.2.2.

6.6 Обработка и представление результатов испытаний

6.6.1 Значение массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии (в пересчете на безводное вещество) X,. %. вычисляют по формуле

X, = 5а,-100(100-ИО'.    (1)

где 5 коэффициент пересчета миллиграммов в проценты, учитывающий объем и концентрацию испытуемого раствора меда:

а, — масса редуцирующих сахаров в соответствии с 6.5.1.4. мг;

W —* массовая доля воды в меде в соответствии с 6.4.5. %.

6.6.2 Значение массовой доли общих сахаров после инверсии (в пересчете на безводное вещество) Х2, %. вычисляют по формуле

Х2 - 5а2 -100 (100 - И/)'1.    (2)

где 5 — коэффициент пересчета миллиграммов в проценты, учитывающий объем и концентрацию испытуемого раствора меда:

5

ГОСТ 32167—2013

а2 — масса общих сахаров в соответствии с 6.S.2.4. мг;

W — массовая доля воды в меде в соответствии с 6.4.5, %.

6.6.3 Значение массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество) Ху %, вычисляют по формуле

ХЭ»(Х2-Х,).    (3)

6.6.4 За результаты испытаний принимают среднеарифметические значения двух параллельных определений каждого показателя, полученные в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между параллельными определениями не превышает пределов повторяемости г по ГОСТ ИСО 5725-6. Значения пределов повторяемости гприведены в таблице 2.

Таблица 2

Наименование

контролируемого

показателя

Диапазон

измерений

Предел

повторяемости при Р • 0,95 г. Ч

Критический диапазон при трех измерениях.

ся4„(3).%

Предел воспроизводимости при Р ■ 0.95 R.%

Границы абсолютной погрешности при Р > 0.95 IX %

Массовая доля редуцирующих сахвроа до инверсии {в пересчете на безводное вещество) Х,.Ч

От 70.00 до 96.00 включ.

0.05 X,

0.06 X,

0.10 X,

0.08 X,

Мвссоввя доля общих сахаров после инверсии (в пересчете не безводное вещество) X,. %

От 70.00 до 96.00 включ.

0.05 Х2

0.06 X,

0.10 X,

0.08 Хг

Мвссоввя доля сахарозы (в пересчете не безводное вещество) X,. %

От 1.00 до 26.00 включ.

0.08 Ха

0.10 X,

0.16 X,

0.11 xs

При превышении пределов повторяемости г целесообразно провести дополнительное определение значений массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии, массовой доли общих сахаров после инверсии, массовой доли сахарозы и получить еще по одному результату. Если при этом абсолютные расхождения (X, М[е - X, мии), (X, ма>;е - Хг „J, (Х3 иакс - Х3 ыии) результатов трех определений не превосходят значений критических диапазонов CRf, 95(3). то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений для каждого показателя. Значения критических диапазонов CR0 9J(3) приведены в таблице 2.

6.6.5 Результаты испытаний, округленные до второго десятичного знака, в документах, предусматривающих их использование, представляют в виде:

(X, ± Д) % при Р = 0.95,

где X, — среднеарифметическое значение результатов определений массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии (в пересчете на безводное вещество) по 6.6.4. %; х л — границы абсолютной погрешности результатов определений по 6.7.1, %;

(JT, ± д) % при Р * 0,95.

где Х3 — среднеарифметическое значение результатов определений массовой доли сахарозы (в пересчете на безводное вещество) по 6.6.4. %;

± А — границы абсолютной погрешности результатов определений по 6.7.1, %.

6.7 Характеристика погрешности испытаний

6.7.1    Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу. ± д при доверительной вероятности Р - 0.95 приведены в таблице 2.

6.7.2    Результаты испытаний оформляют протоколом испытаний.

6

ГОСТ 32167—2013

7 Метод определения массовой доли фруктозы, глюкозы, сахарозы, туранозы, мальтозы, трегалозы, арабинозы, раффинозы, мелецитозы, мелибиозы с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

7.1    Отбор и подготовка пробы — по 6.1

7.2    Сущность метода

Метод основан на растворении испытуемой пробы в воде, хроматографическом (ВЭЖХ) разделе* нии сахаров меда, их регистрации с помощью рефрактометрического детектора и количественном определении по методу внешних стандартов.

7.3    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

7.3.1    Хроматограф жидкостный с пределом допускаемого значения относительного среднеквадратического отклонения выходного сигнала по площади или высоте пика не более 2 % и пределом обнаружения по антрацену (соотношение си гнал/шум равно 10) не более 0,01 мкг/см3. состоящий из:

•    насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа. диапазоном регулирования псдачи растворителя не менее (0,1—5.0) смэ/мин;

•    термостата колонок, поддерживающего температуру колонки (30,010.1) ®С;

•    инжектора или петлевого устройства ввода пробы рабочим объемом петли 0.020 см3:

•    рефрактометрического детектора;

•    системы для сбора и обработки данных;

•    колонки хроматографической длиной 250 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. заполненной амин-модифицированным диоксидом кремния (например. Edipse XDB-C18. 5 мкм. 250 х 4.6 мм).

7.3.2    Предколонка с картриджем Phenomenex C1B(ODS) размером 4x3 мм.

7.3.3    Микрошприцы вместимостью от 0.010 до 0.050 см3 для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

7.3.4    Весы по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0,02 мг.

7.3.5    Система получения воды квалификации «для ВЭЖХ» Millipore Simplicity или аналогичная.

7.3.6    Устройство для фильтрации и дегазации.

7.3.7    Колбы мерные 1(2)-100-2(ПМ) по ГОСТ 1770.

7.3.8    Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29227.

7.3.9    Цилиндры 3-50(100}-1 поГОСТ 1770.

7.3.10    Стаканы В-1-100 ТС по ГОСТ 25336.

7.3.11    Колбы конические КН-1 (2.3>-250-29/32(34) ТС по ГОСТ 25336.

7.3.12    Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор 0,45 мкм.

7.3.13    Термостат или другое устройство, позволяющее проводить равномерный нагрев до температуры 40 *С.

7.3.14    Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм по ГОСТ ИСО 3310-1.

7.3.15    Палочки стеклянные лабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.

7.3.16    Шпатель лабораторный ШЛ.

7.3.17    Ацетонитрил для хроматографии, х. ч.

7.3.18    Метанол — яд для хроматографии или по ГОСТ 6995. х. ч.

7.3.19    Фруктоза с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.

7.3.20    Глюкоза по ГОСТ 6038.

7.3.21    Сахароза по ГОСТ 5833.

7.3.22    Тураноза с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

7.3.23    Мальтоза с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

7.3.24    Трегалоза с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.

7.3.25    Арабиноэа с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

7.3.26    Раффиноза с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

7.3.27    Мелецитоза с содержанием основного вещества не менее 99.0 %.

7.3.28    Мелебиоза с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.

7.3.29    Вода для лабораторного анализа по {1). категории 1.

7.3.30    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

7

ГОСТ 32167—2013

Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по мет* рологическим. техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

7.4    Подготовка к испытаниям

7.4.1    Приготовление элюента для ВЭЖХ

8 конической колбе на 250 см3 по ГОСТ 25336 смешивают 60 см3 ацетонитрила по 7.3.17 и 20 см3 воды для лабораторного анализа по (1). Раствор элюента пропускают через устройство для фильтрации и дегазации по 7.3.6.

Раствор при необходимости хранят при температуре 4 *С в течение 30 сут.

7.4.2    Приготовление стандартного раствора

Фруктозу по 7.3.19 массой {2,0000 ± 0,0001) г, глюкозу по ГОСТ 6038 массой (1,5000 ± 0,0001) г, сахарозу по ГОСТ 5633 массой (0.2500 ± 0,0001) г. туранозу по 7.3.22 массой (0,1500 ±0,0001) г, мальтозу по 7.3.23 массой (0,1500 ± 0.0001) г, трегалозу по 7.3.24 массой (0.1500 ± 0.0001) г, арабинозу по 7.3.25 массой (0.1500 ± 0.0001) г, раффинозу по 7.3.26 массой (0.1500 ± 0.0001) г. мелецитозу по 7.3.27 массой (0,1500 ± 0.0001) г. мелебиозу по 7.3.28 массой (0.1500 ± 0.0001) г растворяют в воде для лабораторного анализа в одной мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Добавляют 25 см3 метанола по 7.3.18. Объем раствора в колбе доводят до метки водой для лабораторного анализа, перемешивают. По* лученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр по 7.3.12.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 ®С в течение 30 сут или при температуре минус 18 *С в течение 180 сут.

7.4.3    Приготовление раствора меда

В стакан вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают навеску меда массой (5.0000 ± 0.0001) г. подготовленного по 6.1. К навеске приливают 10—20 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. мед тщательно растирают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Обработку пробы повторяют два—три раза до полного растворения меда, затем стакан несколько раз обмывают небольшими порциями дистиллированной воды, которые также слива* ют в мерную колбу, при этом объем жидкости не должен превышать 2/3 объема колбы. Добавляют 25 смметанола. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр по 7.3.12.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 *С в течение 30 сут или при температуре минус 18 *С в течение 180 сут.

7.5    Проведение испытаний

Стандартный раствор (см. 7.4.2) и раствор меда (см. 7.4.3) последовательно хроматографируют в следующих условиях хроматографического анализа:

•    температура колонки (30.0 ± 0,1) *С;

•    скорость потока 1.3 см3/мин;

•    подвижная фаза — элюент (см. 7.4.1);

•    объем вводимого раствора 0,020 см3:

•    рефрактометрический детектор.

Значения времен удерживания сахаров в 8ЭЖХ*слектрах приведены в таблице 3.

Примечание — Объемы инжекции раствора меда и стандартного раствора должны быть одинаковыми.

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

Таблица 3

Наименование

Врана удерживания

Наименование

Время удерживания

сахара

сахара, мин

сахара

сахара, мин

Фруктоза

S.2 ±0.3

Трегалоза

12.2 ±0.3

Глюкоза

6.0 ±0.3

Арабинозв

14.010.3

Сахароза

8.5 ±0.3

Раффиноза

15.5x0.3

Тураноза

9.5 ±0.3

Мелецитоэв

18.0x0.3

Мальтоза

11.0 ± 0.3

Мелебиоза

21.010.3

8

ГОСТ 32167—2013

7.6 Обработка и представление результатов испытаний

7.6.1    Качественная оценка

Путем сравнения значений времен удерживания в ВЭЖХ*слектрах стандартного раствора и рас* твора меда проводят идентификацию определяемых сахаров.

7.6.2    Количественное определение

Количественное определение осуществляют методом внешних стандартов по площадям или вы-сотам пиков определяемых сахаров в ВЭЖХ-спектре раствора меда по отношению к таковым стандарт тного раствора.

Примечание — Чтобы учесть изменения во временах удерживания и значениях пиков сахаров, через каждые четыре анализа испытуемых растворов вводят стандартный раствор. Времена удерживания сахаров могут меняться при переходе от одной колонки к другой. После выхода последнего сахара (мелебиозы) необходимо произвести промывку хроматографической колонки дистиллированной водой для удаления прочно удерживаемых соединений.

7.6.3    Массовую долю сахара X. %. рассчитывают по формуле

Х= 100Л,V, iryV V,1 т;\    (4)

где А, — площадь или высота пика соответствующего сахара в растворе меда, в м2 или м;

V, — общий объем раствора меда, см3:

гл3 — масса сахара, содержащаяся в общем объеме стандартного раствора V2, г;

Аг — площадь или высота пика соответствующего сахара в стандартном растворе, в м2 или м;

V2 — общий объем стандартного раствора, см3;

/л, — проба меда, г.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.

7.6.4    За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, полученных е условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между параллельными определениями не превышает предела повторяемости г по ГОСТ ИСО 5725-6. Значение предела повторяемости г приведено в таблице 4.

Табпица 4

Наименование

сахара

Диапазон измерений массовой доли сахара X. %

Предел

повторяемости при Р « 0.95 г, %

Критический диапазон при трах измерениях

ся0*(3). *

Предел

воспроизводимости при Р - 0.95 R, %

Границы абсолютной погрешности при Р - 0.95 1Х%

Фруктоза

От 30.00 ДО 43.00 включ.

0.03 X

0.04 X

0.06 X

0.04 X

Глюкоза

От 22.00 до 40.00 включ.

0.04 X

0.06 X

0.10Х

0.07 X

Сахароза

От 0.10 до 8.00 включ.

0.15 X

0.20 X

0.30 X

0.20 X

Тураноэв

От 0.50 до 3.00 включ.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Мальтоза

От 0.50 до S.OO вкпюч.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Трегвлозв

От 0.50 до 2.50 включ.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Арвбиноза

От 0.50 до 2.50 вкпюч.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Раффинозе

От 0.50 до 2,50 включ.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Мвпецитоза

От 0.50 до 40.00 включ.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

Мвпебиоза

От 0.50 до 2.50 включ.

0.20 X

0.30 X

0.40 X

0.30 X

9

ГОСТ 32167—2013

При превышении предела повторяемости г целесообразно произвести дополнительное определение значения массовой доли сахара и получить еще один результат. Если при этом абсолютное расхождение (Хыаи. >ХИМН) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CRq де(3). то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона CR095<3) приведено в таблице 4.

При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.

7.6.5    Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях. не должно превышать предела воспроизводимости R по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этою условия приемлемы оба результата испытания и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 4.

7.6.6    Результат испытаний, округленный до второго десятичного знака, в документах, предусматривающих ею использование, представляют в виде:

(X ± Д) % при Р - 0,95.

где X — среднеарифметическое значение результатов определений по 7.6.4. %;

± д — границы абсолютной погрешности результатов определений по 7.7.1. %.

7.7 Характеристика погрешности испытаний

7.7.1    Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу. 1 д при доверительной вероятности Р - 0.95 приведены в таблице 4.

7.7.2    Результаты испытаний оформляют протоколом испытаний.

Ю

ГОСТ 32167—2013

Библиография

(1] ИСО 3696:1987 Воде для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

11

ГОСТ 32167—2013

УДК 638.16:006.354    МКС 67.180.10    С52

Ключевые слова: мед. редуцирующие сахара, сахароза, колориметр, сахара, высокоэффективная жидкостная хроматография, метрологические характеристики

Редактор Ы.И. Максимова Технический редактор в.И. Прусакова Корректор Ю.М. Прокофьева Компьютерная верстка В.И. Грищенко

Сдано е набор 00.11.2013 Подписано а печать 20.11.2013.    Формат 60-84Vt.    Гарнитура Ариал Усп. печ. л. 1,66.

Уч.-иад л. 1.20. Тираж 110 экз. Эак.1363

ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. wwtv.gostinfo.ru info£gostinfo.iu Набрано во ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ

Отпечатано е фипкапе ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ» — тип. кМоскоаский печатник». 105002 Москва. Лялин пер., в.