allgosts.ru11. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ11.220. Ветеринария

ГОСТ 28424-90 Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия

Обозначение:
ГОСТ 28424-90
Наименование:
Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия
Статус:
Заменен
Дата введения:
01/01/1991
Дата отмены:
Заменен на:
Код ОКС:
11.220

Текст ГОСТ 28424-90 Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия



10 коп. БЗ 7—89/568

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО

СКОТА

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

ГОСТ 28424-90

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО УПРАВЛЕНИЮ КАЧЕСТВОМ ПРОДУКЦИИ И СТАНДАРТАМ

Москва

УДК 636.082.4:006.354    Группа Р38

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Технические условия    ГОСТ

Cattle embryos.

Specifications    28424—90

ОКП 98 8500

Срок действия с 01.01.91 до 01.01.96

Настоящий стандарт распространяется на эмбрионы крупного рогатого скота и устанавливает требования к свежеполученным и замороженным эмбрионам, предназначенным для пересадки животным-реципиентам.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Эмбрионы крупного рогатого скота должны соответствовать требованиям настоящего стандарта и быть получены в соответствии с правилами по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота и ветеринарно-санитарными требованиями к центрам и пунктам по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, утвержденным в установленном порядке.

1.2.    Эмбрионы для пересадки должны быть получены от клинически здоровых коров-доноров в возрасте от 3 лет и старше, осемененных спермой быков-улучшателей.

1.3.    Характеристики

1.3.1.    Эмбрионы, пригодные для пересадки, должны быть в возрасте 7—9 сут и находиться в стадии развития ранней морулы (Mol, черт. 1—4), поздней морулы (Мо2, черт. 5—8), ранней бластоцисты (Бл1, черт. 9—12) и поздней бластоцисты (Бл2, черт. 13—16).

1.3.2.    Эмбрионы в зависимости от морфологических показателей подразделяют на «отличные», «хорошие», «удовлетворительные», «условно пригодные» и «плохие» в соответствии с требованиями, указанными в таблице.

Издание официальное    Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов* 1990

2 Зак. 261

Черт. 3 — Морула ранняя, удовлет-    Черт. 4 — Морула ранняя, условно

верительная. Неравномерные шары    пригодная. Рыхлые бластомеры

дробления. Грануляция в бластомерах

Черт. 7 — Морула поздняя, удовлет-    Черт. 8 — Мсрула поздняя, условно

ворительная. Частичный зародыш.    пригодная. Грануляция значительной

Часть бластомеров выступает и раз-    части комплекса

рушена

Черт. 11 — Бластсциста ранняя, удовлетворительная. Сжатие комплекса, трещина зоны пеллюцида

Черт. 12 — Бластоциста ранняя, ус ловно пригодная, деформация, ежа тие клеток

Черт. 15 — Бластоциста поздняя, удовлетворительная Сжатие клеточного комплекса, незначительный скол зоны

Черт. 16 — Бластоциста поздняя, условно пригодная. Сжатие клеточного комплекса. Скол зоны пеллюцида

п

I

а

Стадия

развития

эмбриона

Морфологические показатели качества эмбрионов с оценкой

отличные

хорошие

удовлетворительные

условно пригодные

плохие

Морула ранняя

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

(Mol),

да округлой фор-

да округлой фор-

да округлой фор-

да округлой фор-

да округлой фор-

Морула позд-

мы, без трещин

мы, без трещин

мы или с неболь-

мы или деформи-

мы или деформи-

няя (Мо2)

и сколов, соеди-

и сколов, соеди-

шой деформаци-

рованная, имеет-

рованная, разрыв

йена с цитоплаз-

йена с цитоплаз’

ей; допускается

ся значительная

оболочки с час-

мой перивителли-

мой перивителли-

небольшая тре-

трещина или скол,

тичным выходом

нового простран-

нового простран-

щина или скол; в

частично наруше-

бластомеров кле-

ства; перивител-

ства; в перивител-

перивителлиновом

на связь с цито-

точного комплек-

линовое прост-

линовом прост-

пространстве гра-

плазмой периви-

са, нарушена

раиство без цито-

ранстве наличие

нулы, включения

теллинового про-

связь с цитоплаз-

плазматических

гранул и включе-

отдельных блас-

странства; в пе-

мой перивителли-

включений; блас-

ний, бластомеры

томеров; бласто-

ривителлиновом

нового простран-

томеры четкие,

расположены ас-

меры расположе-

пространстве зна-

ства; перивител-

прозрачные, оди-

симетрично, не-

ны ассиметрично,

чительное количе-

линовое простран-

наковой формы и

одинаковые по

немного сжаты и

ство бластомеров;

ство заполнено

размера, распо*

размеру, немно-

(или) смещены

бластомеры смеще-

как отдельными,

ложены симметрично

го сжаты

относительно центра, отдельные бластомеры темного цвета, грануляция отдельных бластомеров

ны относительно центра, связь между отдельными бластомерами отсутствует, пик-ноз большей части бластомеров, часть бластомеров темного цвета

Трофобласт тр1

так и разрушенными бластомерами

Бластоциста

В стадии ранг

тего бластоциста

Трофобласт вы-

/дно различим на

ранняя (Бл1)

(Бл I) наблюдается начало образования трофобласта и эмбриобласта, видна небольшая бластополость.

Трофобласг на фоне клеточного комплекса выявляется в виде более яркого просветления

является в виде яркого просветления, смещен относительно центра

фоне клеточного комплекса

06-frZPSZ 1DOJ

Продолжение

Морфологические показатели качества эмбрионов с оценкой

Стадия

развития

эмбриона

отличные

хорошие

удовлетворительные

условно пригодные

плохие

Бластоциста

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

Зона пеллюци-

поздняя (Бл. 2)

да округлой фор-

да округлой фор-

да округлой фор-

да округлой фор-

да деформирова-

мы, прозрачная

мы; без трещин и

мы, прозрачная,

мы или деформи-

на, имеется зна-

без трещин и ско-

сколов; периви-

допускается не-

рованная, имеется

чительная трещи-

лов; перивителли-

теллиновое про-

значительная тре-

значительная тре-

на или скол;

новое пространст-

странство отсут-

щина или скол;

щина или скол;

бластополость

во отсутствует;

ствует; бластопо-

перивителлиновое

перивителлиновое

большая, расши-

бластополость

лость большая,

пространство от-

пространство от-

ренная, затемне-

большая, расши-

расширенная,

сутствует, блас-

сутствует, бласто-

на или деформи-

ренная, прозрач-

прозрачная, клет-

тополость боль-

полость большая,

рованная с цито-

ная; клетки тро-

ки трофобласта

шая, расширен-

расширенная с

плазматическими

фобласта четко

четко выражены;

ная, прозрачная;

незначительными

включениями;

выражены, рас-

эмбриобласт ок-

клетки трофоблас-

цитоплазматиче-

клетки трофоблас-

положены в ви-

руглой формы с

та четко выраже-

скими включени-

та могут быть де-

де полусфериче-

одной или двумя

ны; эмбриополость

ями; клетки тро-

формированы,

ской цепочки по

выделенными

округлой формы,

фобласта четко

связь между от-

внутренней по-

клетками клеточ-

компактная с вы-

выражены, нару-

дельными клет-

верхности зоны

ного комплекса

деленными клет-

шена связь меж-

ками отсутствует;

пеллюцида; эм-

ками от клеточно-

ду отдельными

эмбриобласт де-

бриобласт округ-

го комплекса

клетками; эмбрио-

формирован, рых-

лой формы в ви-

бласт деформиро-

лый, часть клет-

де компактного

ван с выделенны-

ки разрушена,

скопления клеток

ми клетками кле-

отсутствует связь

точного комп-

у большинства

лекса

клеток

О

*

ч

06-IDOJ

1.3.3. Свежеполученные и подлежащие замораживанию эмбрионы не должны быть контаминированы патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами.

1.4.    Упаковка

1.4.1.    Каждую серию свежелолученных эмбрионов после морфологической оценки помещают в соломинки (пайеты) или полиэтиленовые пробирки, содержащие питательную среду, состоящую из фосфатно-буферной среды с 20 %-ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или сыворотки крови для биотехнологических работ, или 0,4 %-ного альбумина бычьей сыворотки крови и санирующего препарата ГАМП в дозе 1G0 мкг/см3, или спермо-сан-ППК в дозе 200 ЕД/см3 среды. Укупорку соломинок (пайет), пробирок проводят в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.

1.4.2.    Эмбрионы, предназначенные для замораживания, после четырехкратной проводки через фосфатно-буферную среду, содержащую наиболее высокую концентрацию криопротектора 1,5 г/моль диметилсульфоксида (ДМСО) или 1,4 г/моль глицерина, 20%-ную фетальную сыворотку крупного рогатого скота или 20 %-ную сыворотку крови для биотехнологических работ и санирующий препарат, помещают в пробирки или соломинки с указанной средой, закрывают пластиковыми пробками и замораживают в жидком азоте в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.

1.5.    Маркировка

1.5.1.    Каждую пробирку или соломинку (пайету) маркируют, нанося несмывающейся краской номер серии и дату получения эмбрионов.

1.5.2.    Пробирки, соломинки (пайеты) с замороженными эмбрионами помещают в специальные канистры, которые переносят в сосуд Дьюара по ГОСТ 9293, содержащий не менее одной трети объема азота.

2. приемка

2.1.    Свежеполученные и замороженные эмбрионы принимают сериями.

Под серией понимают любое количество эмбрионов, полученное от одной коровы-донора за один технологический цикл и оформленное одним документом о качестве (сертификат, см. приложение).

2.2.    Каждая серия свежеполученных и замороженных эмбрионов должна быть принята (проверена) на предприятии-изготови-теле специалистом этого предприятия.

2.3.    Каждая серия замороженных эмбрионов после оттаивания при подготовке к пересадке их реципиентам должна быть принята (проверена) специалистом по пересадке эмбрионов предприятия-потребителя или изготовителя.

2.4.    По требованию потребителя проверку санитарного состояния эмбрионов проводит отдел биологического контроля предприятия-изготовителя или ветлаборатория (районная, областная* краевая или республиканская).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1.    Определение качества эмбрионов по морфологическим показателям.

3.1.1.    Аппаратура, материалы и среды

Лупа бинокулярная марок МБС-9, МБС-10 или аналогичных марок.

Микроскоп марок МБИ-10, МБИ-13 или аналогичных марок.

Термостат с температурой нагрева 37—38 °С.

Сифон или шприц марки «Рекорд» с удлиненной иглой.

Чашки Петри или часовые стекла.

Цилиндры мерные вместимостью 500 см3 по ГОСТ 1770 или флаконы вместимостью 450—500 см3.

Пипетка Пастера.

Среда фосфатно-буферная с 20% -ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или 20%-ной сывороткой крови для биотехнологических работ.

Трипсин, раствор с массовой долей 0,25 %.

Санирующие препараты.

3.1.2.    Подготовка к испытанию

Растворы, полученные после вымывания эмбрионов из каждого рога матки коров-доноров, помещают с соблюдением правил ассеп-тики в отдельные стерильные эмбриоприемники вместимостью 450—500 см3 (цилиндры или флаконы), которые выдерживают в термостате при 37—38 °С или при комнатной температуре не ниже 18°С в течение 20 мин для осаждения эмбрионов. Верхнюю часть раствора удаляют с помощью стерильного сифона или шприца с удлиненной иглой, оставляя 60—100 см3 раствора. Отстой переносят в 2—3 стерильные чашки Петри диаметром 90 мм, дно которых с внешней стороны расчерчено на квадраты со стороной 1 см.

3.1.3.    Проведение испытания

Качество эмбрионов по морфологическим показателям определяют у всех свежеполученных эмбрионов и замороженных эмбрионов после их оттаивания.

Эмбрионы просматривают под бинокулярной лупой при увеличении 20—28*. Определяют по морфологическим показателям эмб-

рионы с оценкой «плохие» и их удаляют. Оставшиеся эмбрионы обрабатывают раствором трипсина с массовой долей 25 % при 37—38 °С в течение 3—5 мин, а затем промывают 2 см3 стерильной фосфатно-буферной средой, содержащей 20 % фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20 % сыворотки крови для биотехнологических работ и санирующий препарат. Промывку эмбрионов в стерильных средах проводят четыре раза. Для проводки эмбрионов через стерильные среды каждый раз используют новую чашку Петри и пипетку Пастера. После четвертой промывки эмбрионы просматривают под микроскопом марки МБИ-10 или МБИ-13 при увеличении 1X100х в том же составе среды.

3.1.4. Обработка результатов

Оценку качества эмбрионов по морфологическим показателям проводят в соответствии с требованиями, указанными в п. 1.3.2.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой «отличные» и «хорошие» подлежат замораживанию.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой «отличные», «хорошие» и «удовлетворительные» используют для пересадки животным-ре-ципиентам.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой «условно пригодные» и «плохие» выбраковывают.

Эмбрионы, замороженные с оценкой «отличные», «хорошие», «удовлетворительные» и «условно пригодные», пересаживаю! жи-вотным-реципиентам.

Замороженные эмбрионы с оценкой «плохие» выбраковывают.

3.2. Определение санитарного состояния эмбрионов

3.2.1.    Санитарное состояние определяют у свежеполученных эмбрионов и у эмбрионов, подлежащих замораживанию.

3.2.2.    Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов устанавливают на основании выборочного микробиологического исследования третьего промывного раствора среды по п. 3.1.3 не менее чем от 6 серий эмбрионов в квартал.

3.2.3.    Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов, подлежащих замораживанию, устанавливают на основании микробиологических исследований среды, использованной для подготовки эмбрионов к замораживанию после предпоследней промывки по п. 1.4.2.

3.2.4.    Отбор проб

Отбирают по 2 см3 соответствующей среды. 1 см3 среды используют для микробиологических исследований, а 1 см3 среды помещают в стеклянную ампулу или полиэтиленовую пробирку, которые запаивают или закрывают полиэтиленовыми крышками и хранят в замороженном виде в сосуде Дьюара в архиве центра или пункта по трансплантации эмбрионов до использования всех эмбрионов данной серии. На пробирке наносят несмываемой краской номер серии.

3.2.5.    Аппаратура, среда

Термостат с температурой нагрева 37—38 °С.

Термостат с температурой нагрева 20—22 °С.

Пипетки стеклянные градуированные вместимостью 1, 2 и 10 см3 по ГОСТ 20292.

Пробирки стеклянные вместимостью 20 см3 по ГОСТ 25336.

Среда тиогликолевая или МПБ, среда Тароцци и Сабуро.

3.2.6.    Проведение испытания

В две пробирки с тиогликолевой средой вносят по 0,5 см3 исследуемой среды и выдерживают 10—14 сут — одну пробирку в термостате при температуре 37—38 °С, а другую в термостате при температуре 20—22 °С. При отсутствии тиогликолевой среды проводят высевы — 0,5 см3 исследуемого материала на среду с МПБ и по 2—3 капли на среду Тароцци и Сабуро (по одной пробирке). Посевной материал со средой МПБ и Тароцци инкубируют при температуре 37—38 °С, а со средой Сабуро при температуре 20—22 °С. В качестве контроля при тех же условиях выдерживают по одной пробирке использованной среды без посевного материала.

3.2.7.    Обработка результатов

Через 10—14 сут ни в одной из пробирок с посевным материалом не должно быть роста микроорганизмов.

При выделении из посевного материала условно патогенной микрофлоры проводят тщательный контроль стерильности инструментов и сред, применяемых для вымывания, кратковременного хранения и замораживания эмбрионов, а также подготовки коров-доноров к извлечению эмбрионов.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1.    Свежеполученные эмбрионы транспортируют в эмбриомобилях при температуре 22—25°С в сопровождении специалиста по трансплантации эмбрионов.

Замороженные эмбрионы транспортируют в сосудах Дьюара с жидким азотом, с сопровождающим, всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозки багажа, действующими на данном виде транспорта.

К транспортируемым эмбрионам прилагается подлинник сертификата.

4.2.    Свежеполученные эмбрионы сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20 % фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20 % сыворотки крови для биотехнологических работ, 0,4 % альбумина бычьей сыворотки крови и санирующий препарат, при температуре 22—25°С в течение 5 ч.

4.3.    Замороженные эмбрионы сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20 % фетальной сыворотки крупного рогатого

скота или 20 % сыворотки крови для биотехнологических работ, криопротектор (ДМСО или глицерин) и санирующий препарат, в жидком азоте при минус 196 °С.

4.4. Эмбрионы, оттаянные после замораживания, сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20 % фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20 % сыворотки крови для биотехнологических работ и санирующий препарат, при температуре 22—25 °С не более 30 мин.

5. ГАРАНТИИ ПОСТАВЩИКА

5.1. Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие качества эмбрионов требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения, установленных стандартом, в пределах срока годности.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Обязательное

СЕРТИФ ИКАТ

на эмбрионы крупного рогатого скота №

Наименование центра (пункта) заготовки (трансплантации) эмбрионов и место его нахождения _

Номер серии___„_

Форма упаковки эмбрионов (пробирка, ампула, соломинка)_____

Количество эмбрионов в упаковке___^

Дата получения эмбрионов и день полового цикла коровы-донора ____

Возраст и стадия развития эмбрионов и морфологическая оценка__

Для замороженных эмбрионов

Состав среды для замораживания, санирующие препараты и их доза _

Время с момента получения до их замораживания, ч __

Температура, при которой отправлены эмбрионы, °С __

Режим оттаивания эмбрионов___„

Номер и тип сосуда Дьюара и номер канистры _.

Порода коровы-донора, кличка, номер и дата начала использования донора для получения эмбрионов________

Порода быка-производителя, кличка, номер _

Продуктивность коровы-донора_____

Продуктивные качества быка-производителя (выписано из племенного свидетельства) _______

Группа крови коровы-донора и быка-производителя _

Сведения о состояния здоровья животных и ветеринарно-санитарном состоянии ферм______

У производителя и коровы-донора, их родителей и потомства нет генетически обусловленных болезней _____

Племенные животные, от которых получены эмбрионы, здоровы и происходят из ферм, свободных в течение последних 12 мес от инфекционных болезней крупного рогатого скота — туберкулеза (tuberculosis), паратурбекулеза (paratu-berculosis), бруцеллеза (brucelosis), лейкоза (leicosis), инфекционного ринотра-хеита (infectious bovin rtinotracheitis), вирусной диареи (virus diarrhea bovina)^ трихомоноза (trichomonosis), кампилобактериоза (campylobacteriosis), вибриоза (vibriosis), блутанга (bluetongue), эпизоотического аборта (epizootical abortus),

лептоспироза (leptospirosis), хламидиоза (chlamydiosis), микоплазмоза (mycoplasmosis), чумы (pestis bovum), инфекционной плевропневмонии крупного рогатого скота (Pleuropneumonis infectiosa bovum), ящура обычных и экзотических типов (Aphtae epizootical).

Поголовье животных центра заготовки, где получены эмбрионы, находится под постоянным ветеринарным наблюдением, периодически подвергается через каждые б или 12 мес диагностическим исследованиям, а содержание животных и взятие от них эмбрионов проводят с соблюдением санитарных требований.

Производитель_донор__

кличка, номер    кличка, номер

исследовались на следующие заболевания с отрицательными результатами:

1.    Туберкулез________

дата, метод и результаты исследования

2.    Паратуберкулез__

3.    Бруцеллез _

4.    Лейкоз__„__

5.    Инфекционный ринотрахеит _

6.    Вирусная диарея ____

7.    Трихомоноз _

8.    Кампилобактериоз _

9.    Вибриоз ___

10.    Лептоспироз__

11.    Хламидиоз ____

12.    Микоплазмоз _

13.    Другие болезни____

Сертификат выдан _

число, месяц, год

Г осударственный

ветеринарный врач ____

фамилия, инициалы, подпись

Главный технолог

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР РАЗРАБОТЧИКИ

Н. И. Сергеев, д-р биол. наук (руководитель темы); С. В. Со-веткин, канд. биол. наук; Ю. В. Фомин, д-р вет. наук; М. Н. Ефремова; Е. В. Пронина, канд. хим. наук; Е. А. Назаров, вет. врач; А. Н. Мелентьев, канд. с.-х. наук

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 05.01.90 № 10

3.    Срок первой проверки — Ш кв. 1994 г., периодичность проверки — 5 лет

4.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕН

ТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта

ГОСТ 1770-74 ГОСТ 9293-74 ГОСТ 20292—74 ГОСТ 25336-82

3.1 1 1 44 325 325

Редактор Т. И. Василенко Технический редактор М. И. Максимова Корректор О. Я. Чернецова

Сдано в наб. 31,01.90 Подп. в печ. 13.04,99 1,25 уел. п. л. 1,25 уел. кр.-отт. 0,97 уч.-изд. л.

Тираж 3000 Цена 10 к.

Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123557, Москва, ГСП,

Новопресненскнй пер., 3.

Калужская типография стандартов, ул. Московская, 256. Зак. 261