allgosts.ru11. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ11.220. Ветеринария

ГОСТ 27145-86 Антиген и антисыворотка для диагностики инфекционной анемии лошадей. Технические требования и методы испытаний

Обозначение:
ГОСТ 27145-86
Наименование:
Антиген и антисыворотка для диагностики инфекционной анемии лошадей. Технические требования и методы испытаний
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/1987
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
11.220

Текст ГОСТ 27145-86 Антиген и антисыворотка для диагностики инфекционной анемии лошадей. Технические требования и методы испытаний



ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОЮЗА ССР

АНТИГЕН И АНТИСЫВОРОТКА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ

АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ

ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

ГОСТ 27145-86 (СТ СЭВ 5156-85)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва

Группа Р31

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

АНТИГЕН И АНТИСЫВОРОТКА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ

Технические требования и методы испытаний

Antigen and antiserum for diagnosis of equine infectious anaemia. Technical requirements and

test methods

ГОСТ

27145-86

(СТ СЭВ 5156-85)

ОКСТУ 9382

Срок действия с 01.01.87 до 01.01,92

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на антиген и антисыворотку, предназначенные для диагностики инфекционной анемии лошадей (ИНАН) с помощью реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП).

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5156—85.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Антиген и антисыворотка по физико-химическим и биологическим свойствам должны соответствовать характеристикам и нормам, указанным в таблице.

Наименование показателя

Характеристика и норма

1.    Внешний вид

2.    Цвет антигена антисыворотки

3.    Наличие посторонней примеси, плесени, изменение консистенции, трещин ампул

4.    Наличие вакуума в ампулах

5 Растворимость

6. Массовая доля влаги, %

Сухая однородная пористая масса

От светло-желтого до темно-коричневого Светло-серая, иногда с розовым оттенком Не допускается

Наличие фиолетово-синего свечения, сопровождающегося характерным потрескиванием при испытании Содержимое ампул должно полностью раствориться в течение 2—3 мин в стерильной деионизированной воде

1—3

Издание официальное

Перепечатка воспрещена © Издательство стандартов, 1987

Наименование показателя

Продолжение

Характеристика и норма

7. Контаминация бактериальной и грибковой микрофлорой

8. Активность антигена в РДП

9. Активность антисыворотки в РДП

10.    Специфичность антигена в РДП

11.    Специфичность антисыворотки в РДП

12.    Чувствительность тест-системы антиген-антисыворотка в РДП

13.    Полнота инактивации антигена и антисыворотки

В посевах из диагностикумов на питательные среды не должно быть роста микрофлоры в течение 10 дней при температуре (37±0,5)°С и на агаре Сабуро при температуре (22±2)°С

Антиген должен давать четкие полосы преципитации с неразведенной и разведенной 1 : 2 положительной сывороткой через 24—48 ч после постановки реакции Антисыворотка в разведении 1 ; 2 должна давать четкие полосы преципитации с известным антигеном через 24—48 ч после постановки реакции

Антиген не должен давать полосы преципитации с отрицательными сыворотками Антисыворотка должна давать четкую реакцию со специфическим антигеном и не давать полосы преципитации с контрольным отрицательным антигеном Со стандартной слабоположительной сывороткой должна наблюдаться слабоположительная реакция

Не допускается наличие вирулентного вируса ИНАН

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1.    Отбор проб

2.1.1.    Для проведения испытания от каждой серии отбирают 26 ампул. Половину ампул используют для анализа, а половину хранят в архиве государственного контролера в течение 18 мес.

2.1.2.    Ампулы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием:

наименования препарата;

даты изготовления;

номера серии;

номера контроля;

даты отбора проб;

общего количества упаковочных единиц;

объема серии;

обозначения настоящего стандарта;

должности и подписи лица, отобравшего пробу.

2.2.    Определение внешнего вида, цвета и наличия посторонних примесей

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, изменения консистенции и трещин ампул, каждую ампулу просматривают при дневном свете.

2.3.    Определение вакуума

Наличие вакуума в ампулах определяют аппаратом Д’Арсон-валь или другим аппаратом.

2.4.    Определение растворимости

Сущность метода заключается в определении времени, достаточного для полного растворения сухого диагностикума в растворителе.

2.4.1.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют: пипетки мерные по ГОСТ 20292—74; воду деионизированную.

2.4.2.    Проведение испытания

Для проведения испытания в три ампулы с препаратом добавляют деионизированную воду в объеме, равном объему препарата до сушки.

2.4.3.    Обработка результатов

Содержимое ампулы должно полностью раствориться в течение 2—3 мин без образования хлопьев и осадка.

2.5.    Определение массовой доли влаги — по ГОСТ 24061—80.

2.6.    Определение контаминации бактериальной и грибковой микрофлорой

Сущность метода заключается в определении роста бактериальной и грибковой флоры в посевах из проб диагностикумов на питательных средах.

2.6.1.    Аппаратура и материалы

Для проведения испытаний применяют:

термостаты с температурой нагрева (22±2)°С и (37±0,5)°С; пипетки мерные вместимостью 1,2 и 5 см3 ГОСТ 20292—74; флаконы стеклянные вместимостью 100 см3; бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730—75; агар мясо-пептонный (МПА);

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805—76; агар микробиологический по ГОСТ 17206—84; масло вазелиновое по ГОСТ 3164—78; раствор физиологический;

бульон мясо-пептонный печеночный (МППБ) под вазелиновым маслом;

агар Сабуро.

2.6.2.    Проведение испытания

Для проведения испытания используют по три ампулы каждого диагностикума. Содержимое каждой ампулы растворяют в 4 см3 стерильного физиологического раствора.

Испытание проводят путем посева из каждой ампулы по 0,2 см3 диагностикума в две пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро и по 0,5—1 см3 в два флакона с МПБ и МППБ под вазелиновым маслом. Питательные ореды

с посевами выдерживают в течение 10 дней при температуре (37± 0,5) °С, для агара Сабуро — ( 22±2) °С.

2.7, Определение активности

Сущность метода заключается в выявлении с помощью реакции диффузионной преципитации в агаровом геле вирусспецифи-ческих антител в сыворотке с положительным антигеном.

2.7.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: установку вакуумную;

источник света точечного или щелевого потока светового луча;

пробойник металлический диаметром 7 мм;

иглы;

пинцеты;

канюля;

чашки Петри диаметром 9—10 см; пипетки пастеровские;

пипетки градуированные вместимостью 5—10 см3 по ГОСТ 20292—74;

микропипетки;

фильтры бумажные;

антиген преципитирующий;

антиген отрицательный контрольный;

сыворотку положительную преципитирующую;

сыворотку слабоположительную преципитирующую;

сыворотки испытуемые;

10 заведомо отрицательных сывороток лошадей;

10 заведомо положительных сывороток лошадей; агар очищенный;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77; кислоту борную по ГОСТ 9656—75; воду деионизированную; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

2.7.2.    Подготовка к испытанию

2.7.2.1.    Приготовление боратного буфера pH 8,6 смешивают 2 г гидроокиси натрия и 9—11 г борной кислоты,

доводят объем дистиллированной водой до 1000 см3 и фильтруют через бумажный фильтр.

2.7.2.2.    Сухие пробы испытуемых антисывороток и антигена растворяют дистиллированной водой в объеме, равном объему диагностикумов до сушки. Готовят разведение сывороток на бо-ратном буфере 1 :2.

Сыворотки испытывают неразведенными и в разведении 1 : 2, а антиген испытывают в цельном виде.

2.7.2.3.    Приготовление агарового геля

1%-ный и 2%-ный агар готовят на боратном буфере путем кипячения или автоклавирования (без давления) до полного расплавления агара.

2.7.2.4. В чашку Петри сначала вносят 5 см3 горячего 2%-ного агара и дают ему застыть. Затем, не сдвигая чашек с места, во избежание неравномерного распределения агара, вносят 15 смохлажденного до 60°С 1%-ного агара. При использовании пластмассовых чашек Петри применяют 0,7%-ный агар в одном слое. После застывания среды приступают к вырезанию лунок. Лунки вырезают только в слое 1%-ного (верхний слой) агара металлическим пробойником.

2.7.3. Проведение испытания

Испытание проводят по одной из двух схем постановки реакции

Первая схема

Диаметр лунок    — 7 мм

Расстояние от центральной

—    3 мм

—    1 лунка в центре, другие 6 лунок — по окружности

—    центральная лунка — антиген; 3 периферические через одну — антисыворотки;

3 свободных — испытуемые сыворотки

Объем компонентов реакции — 0,05—0,06 см3

Время реакции во влажной

камере при (18—25)°С    —48 ч

В одной чашке Петри испытывают 12 проб сыворотки.

Вторая схема

Диаметр лунок    — 7 мм

Расстояние от центральной

—    3 мм

—    1 лунка в центре, другие 6 лунок — по окружности

—    центральная лунка — антиген; две периферические, диаметрально расположенные лунки — контрольная положительная сыворотка; оставшиеся четыре — испытуемые сыворотки

Объем компонентов реакции —0,05—0,06 см3 Время реакции во влажной камере при 18—25°С    —48 ч

В одной чашке Петри испытывают 16 проб сыворотки. Результаты испытания учитывают через 24 и 48 ч.

лунки

Расположение лунок Компоненты реакции

лунки

Расположение лунок Компоненты реакции

Оценку реакции в чашках Петри проводят в проходящем пучке света на темном фоне.

Реакцию учитывают по контрольной линии преципитации, но если она отсутствует или слабо выражена, испытание повторяют.

Контрольные линии преципитации должны быть четкими, расположенными посередине между лунками с антигеном и положительной сывороткой.

При образовании интенсивного ореола вокруг лунок, затрудняющего учет реакции, пробы сыворотки исследуют повторно, добавив к агару 5% хлористого натрия (к 100 см3 буфера добавляют 5 г химически чистого хлористого натрия).

2.7.4. Обработка результатов

Реакция отрицательная—контрольные линии продолжаются в сторону лунки с испытуемой сывороткой без изгибов или с небольшим изгибом. Полоса преципитации с испытуемой сывороткой не образуется.

Реакция положительная:

а)    между лункой с испытуемой сывороткой и антигеном образуется полоса преципитации, которая соединяется с контрольной линией;

б)    линия преципитации отсутствует, но контрольные линии образуют вблизи с испытуемой сывороткой изгиб, направленный в сторону антигена — слабоположительная сыворотка;

в)    контрольные линии укорачиваются со стороны лунки с испытуемой сывороткой, в отдельных случаях контрольные линии полностью растворяются, что свидетельствует о высоком титре антигена.

Более четкие линии преципитации будут образовываться, если эти пробы развести 1 : 4 или 1 : 8 и повторить реакцию.

Реакция сомнительная — слабый изгиб контрольной линии плохо просматривается; образуются интенсивные неспецифические линии или ореол вокруг лунки, что затрудняет учет реакции.

Реакция н^специфическая образуется с некоторыми пробами сывороток, особенно полученных от старых лошадей. Признаками неспецифической роакпии является перекрещивание линий преципитации, в той же пробе сыворотки могут быть специфические и неспецифические антитела.

2.8. Определение специфичности

Сущность метода заключается в определении взаимодействия антигена и антисыворотки каждой тест-системы с десятью заведомо отрицательными сыворотками и контрольного антигена с антисыворотками в РДП.

2.8.1.    Аппаратура, материалы и реактивы — по п. 2.7.1.

2.8.2.    Подготовка и проведение испытания — по пп. 2.7.2 и

2.7.3.

2.8.3.    Обработка результатов

Каждая тест-система антиген-антисыворотка должна давать специфическую реакцию с 10 заведомо положительными сыворотками и не давать реакции с 10 заведомо отрицательными сыворотками. Антисыворотки не должны давать специфическую реакцию С контрольным отрицательным антигеном.

2.9.    Определение чувствительности тест-систе-мы антиге н-а нтисыворотка

Сущность метода заключается в определении чувствительности составляемой тест-системы антиген-антисыворотка в РДП со стандартной слабоположительной сывороткой и положительной пре-ципитирующей сывороткой.

2.9.1.    Проведение испытания

Постановка реакции диффузионной преципитации — по п. 2.7.3.

2.9.2.    Обработка результатов

Должна наблюдаться слабоположительная реакция с отклонением контрольной линии преципитации у лунки со слабоположительной сывороткой в ее сторону.

2.10.    Определение полноты инактивации

Сущность метода заключается в постановке биопробы, после

которой у животных не должны проявляться признаки, указывающие на наличие вирулентного вируса: клинические, гематологические, серологические, характерные для инфекционной анемии. Проверяют каждую серию антигена и антисыворотки.

2.10.1.    Материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

шприцы с иглами;

антиген и антисыворотки;

физиологический раствор.

2.10.2.    Подготовка к испытанию

Отбирают клинически здоровых жеребят в возрасте 8—10 мес, проверенных на отсутствие инфекционных, кровепаразитарных и инвазионных болезней, согласно действующим инструкциям. Во время отбора животных проводят клинико-гематологические и серологические обследования с целью исключения инфекционной анемии.

Отобранных животных выдерживают в карантине в течение 30 дней и сыворотки их крови повторно исследуют на инфекционную анемию.

2.10.3.    Проведение испытания

Двум здоровым жеребятам с соблюдением правил асептики вводят подкожно в нижнюю треть шеи по 1—3 см3 антигена (одной серии) и антисыворотки (одной или нескольких серий). За животными ведут наблюдение в течение 2 мес. В течение этого срока еженедельно проводят клинические и гематологические ис-

следования. По окончании срока наблюдения проводят паталого-анатомические и серологические исследования.

2.10.4. Обработка результатов

Заключение о положительных или отрицательных результатах биопробы делают по данным анализов.

3. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ

Для каждой проверенной серии препарата составляют протокол испытания, который должен содержать следующие данные: наименование штамма ИНАН; использованный метод;

результат испытания показателей качества; дату изготовления;

подпись лица, проводившего испытание; обозначение настоящего стандарта.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Г. ф. Коромыслов, д-р биол. наук; Ю. А. Малахов, д-р вет. наук; К. П. Юров, д-р вет. наук; Б. И. Токарик, канд. вет. наук; В. В. Гуненков,

д-р биол. наук; О. И. Шарабрин, канд. биол. наук

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 декабря 1986 г. № 3760

3.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта, подпункта, перечисления, приложения

ГОСТ 3164—78

2.6.1.

ГОСТ 4328—78

2.7.1

ГОСТ 6709—72

2.7.1

ГОСТ 9656—75

2.7.1

ГОСТ 13805—76

2.6.1

ГОСТ 17206—84

2.6.1

ГОСТ 20730—75

2.6.1

ГОСТ 20292—74

2.4.1; 2.6.1; 2.7.1

ГОСТ 24061—80

2.5

Редактор 7. П. Шашина Технический редактор М. И. Максимова Корректор И. Л. Асауленко

Сдано в наб. 30.12.86 Подп. в печ. 24.02.87 0,75 уел. п. л. 0,75 уел. Тир. 8000

Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123840, Москва, ГСП, Тип. «Московский печатник». Москва, Лялин пер., 6.

кр.-отт. 0,57 уч.-изд. л.

Цена 3 коп.

Новопресненский пер., 3 Зак. 6