ГОСТ 16445-2012
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Технические условия
Serum haemolitic for the complement fixation test. Specification
МКС 11.220
Дата введения 2014-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 54-П от 3 декабря 2012 г. N 54-П*)
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - .
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4 ВЗАМЕН ГОСТ 16445-78
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 316-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 года
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная на официальном сайте Росстандарта России rst.gov.ru по состоянию на 11.11.2024
Поправка внесена изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на гемолитическую сыворотку для реакции связывания комплемента (далее - сыворотка), представляющую собой консервированную глицерином сыворотку крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана.
Сыворотка предназначена для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (далее - РСК) в ветеринарии.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9142-90 Ящики из гофрированного картона. Общие технические условия
ГОСТ 12301-2006 Коробки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 12303-80 Пачки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 14192-90* Маркировка грузов
________________
* Действует ГОСТ 14192-96, здесь и далее по тексту. - .
ГОСТ 16446-2012 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия
ГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные. Технические условия.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования и методы испытаний.
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части не затрагивающей эту ссылку.
3 Технические требования
3.1 Сыворотка должна соответствовать требованиям настоящего стандарта и производиться по технологическому регламенту.
3.2 По физико-химическим и биологическим свойствам сыворотка должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.
Таблица 1
Наименование показателя | Характеристика и норма |
Внешний вид | Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость желтого цвета с розовым оттенком без хлопьев, осадка и посторонней примеси |
Массовая доля глицерина, % | 50±5 |
Стерильность | Посевы на питательные среды не должны давать роста бактериальной микрофлоры в течение 10 сут при выдерживании в термостате при температуре (37,5±0,5)°С и грибов при температуре (21±1)°С |
Гемолитические свойства | Не должна вызывать гемолиза эритроцитов барана |
Активность, титр, не менее | 1:1000 |
3.3 Упаковывание, маркирование
3.3.1 Сыворотку расфасовывают по 1 см в стерильные ампулы из нейтрального стекла и запаивают.
На ампулы наносят маркировку с указанием:
- наименования организации-производителя;
- наименования сыворотки;
- номера серии;
- даты выпуска;
- количества сыворотки в ампуле, см;
- срока годности;
- надписи: "Для ветеринарного применения".
3.3.2 Ампулы с сывороткой упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 12301 или пачки по ГОСТ 12303 с разделительными перегородками (прокладками), обеспечивающими их сохранность при транспортировании и хранении.
3.3.3 На каждую коробку наклеивают этикетку, на которой указывают:
- наименование организации-производителя и ее товарный знак;
- наименование сыворотки;
- количество ампул в коробке;
- количество сыворотки в ампуле, см;
- количество доз в ампуле;
- номер серии;
- дату выпуска;
- срок годности;
- титр;
- условия хранения;
- надпись: "Для ветеринарного применения";
- обозначение настоящего стандарта;
- штриховой код;
- информацию о подтверждении соответствия;
- предупредительную надпись: "Разводить без учета содержания глицерина!".
3.3.4 Коробки с сывороткой упаковывают в картонные ящики по ГОСТ 9142 или аналогичные массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:
- наименования сыворотки,
- номера серии,
- даты упаковки,
- фамилии или номера упаковщика.
3.3.5 Каждый ящик (транспортная тара) маркируют по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: "Хрупкое. Осторожно", "Ограничение температуры".
3.3.6 Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующую информацию:
- наименование организации-производителя и ее адрес (в том числе страну);
- наименование сыворотки;
- число коробок в ящике;
- номер серии;
- дату выпуска;
- условия хранения и перевозки;
- массу брутто;
- надпись: "Для ветеринарного применения".
4 Правила приемки
4.1 Каждая серия сыворотки должна быть принята (проверена) отделом, отвечающим за контроль качества готовой продукции организации-производителя в соответствии с нормативными документами государства, принявшего стандарт.
4.2 Серией сыворотки считают определенное количество сыворотки, полученное за один технологический цикл, одновременно представленное на контроль и оформленное одним документом о качестве.
4.3 В документе о качестве указывают:
- наименование организации-производителя;
- наименование сыворотки;
- номер серии;
- дату изготовления (месяц и год);
- объем серии;
- результаты испытания по показателям качества;
- срок годности (месяц и год);
- условия хранения;
- обозначение стандарта;
- номер и дату выдачи документа о качестве;
- заключение и подпись лица, выдавшего документ о качестве.
4.4 Для контроля качества сыворотки от каждой серии отбирают выборку. Из выборки выделяют среднюю пробу в количестве 40 ампул. 20 ампул с сывороткой используют для проведения испытания по показателям качества, указанным в таблице 1, а 20 ампул направляют в архив организации-производителя. Пробы в архиве хранят в течение срока годности.
4.5 Архивные образцы маркируют надписью "Архив", опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:
- наименования сыворотки;
- номера серии;
- даты выпуска (месяц и год);
- даты отбора проб;
- объема серии;
- числа отобранных образцов;
- должности и подписи лица отобравшего пробы;
- срока годности (месяц и год);
- обозначения настоящего стандарта;
- срока хранения проб в архиве.
4.6 При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве проб сыворотки, взятой от той же серии и на удвоенном количестве материалов. Результаты повторных испытаний считают окончательными и распространяют на всю серию.
В случае неудовлетворительных результатов повторной проверки серию сыворотки считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта, ее бракуют и уничтожают путем раздавливания ампул с последующим разведением содержимого ампул водой в соотношении 1:100 и сливом образующегося раствора в промышленную канализацию, о чем составляют соответствующий акт.
4.7 Контроль качества сыворотки, поступающей по рекламации, проводит организация-производитель, а при разногласиях в оценке качества между производителем и потребителем контроль проводит организация, уполномоченная в порядке, действующем на территории государства, принявшего стандарт.
5 Методы испытаний
5.1 Для определения внешнего вида, наличия посторонней примеси, хлопьев и осадка ампулы с сывороткой встряхивают и просматривают в проходящем свете.
Содержимое ампул должно представлять собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтого цвета с розовым оттенком без хлопьев, осадка и посторонней примеси.
5.2 Определение массовой доли глицерина
5.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- пикнометр вместимостью 1-2 см по ГОСТ 22524;
- баню водяную или термостат;
- термометр технический стеклянный ртутный со шкалой от 0°С до 100°С и ценой деления 1°С по ГОСТ 28498;
- весы лабораторные аналитические;
- эксикатор по ГОСТ 25336;
- пипетки градуированные для отбора жидкости по ГОСТ 29227;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709, кипяченую или бидистиллированную.
5.2.2 Подготовка к испытанию
Пикнометр тщательно очищают хромовой смесью, промывают водой, ополаскивают спиртом, затем эфиром, высушивают продуванием воздуха или в сушильном шкафу и охлаждают в эксикаторе.
5.2.3 Проведение испытания
Пикнометр взвешивают на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Наполняют его дистиллированной водой до метки, выдерживают на водяной бане или в термостате при температуре 20 °С в течение 20-30 мин и вновь корректируют заполнение водой до метки. Затем пикнометр обтирают и взвешивают на аналитических весах. Освобождают пикнометр от воды, сушат, как указано выше, и заполняют испытуемой гемолитической сывороткой. Дальнейшие процедуры проводят так же, как при определении массы воды.
5.2.4 Обработка результатов
Плотность гемолитической сыворотки , содержащей глицерин, г/см, вычисляют по формуле
, (1)
где - масса пробы сыворотки в объеме пикнометра, г;
- масса пробы воды в объеме пикнометра, г.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов трех параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,0008 г/см.
Плотность гемолитической сыворотки должна составлять 1,115-1,145 г/см, что соответствует 45%-55% массовой доли глицерина в сыворотке.
5.3 Определение стерильности
Стерильность сыворотки определяют по ГОСТ 28085.
Сыворотка должна быть стерильной.
5.4 Определение активности (титра) и гемолитических свойств
Активность гемолитической сыворотки определяют по показателю 100%-ного гемолиза эритроцитов барана в гемолитической системе. Титрование гемолитической сыворотки производится комплементом для реакции связывания комплемента ГОСТ 16446 с титром 0,08-0,14 в гемолитической системе.
Титром гемолитической сыворотки следует считать наибольшее ее разведение (наименьшее количество), при котором в течение 10 мин при температуре 37°С-38°С наступает полный (100%-ный) гемолиз 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,2 см комплемента в разведении 1:20 в общем объеме жидкости 1,0 см.
Сыворотка должна характеризоваться полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без комплемента.
5.4.1 Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- штативы;
- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
- стаканы лабораторные, колбы по ГОСТ 25336;
- колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см по ГОСТ 1770;
- пипетки вместимостью до 10 см с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 29227;
- пипетки вместимостью 1 см с ценой деления 0,01 см по ГОСТ 29227 или дозаторы пипеточные;
- баню водяную;
- маркеры по стеклу;
- физиологический раствор рН 6,8-7,2.
5.4.2 Подготовка к испытанию
5.4.2.1 Подготовка разведений гемолитической сыворотки
Готовят исходное разведение гемолитической сыворотки 1:100 (0,1 см гемолитической сыворотки и 9,9 см физиологического раствора), из которого готовят разведения от 1:500 до 1:2000 (см. таблицу 2).
Таблица 2
Объем исходного разведения, см | Объем физиологического раствора, см | Общий объем, см | Получаемое разведение |
0,2 | 0,8 | 1,0 | 1:500 |
0,2 | 1,3 | 1,5 | 1:750 |
0,2 | 1,8 | 2,0 | 1:1000 |
0,2 | 2,3 | 2,5 | 1:1250 |
0,2 | 2,8 | 3,0 | 1:1500 |
0,2 | 3,3 | 3,5 | 1:1750 |
0,2 | 3,8 | 4,0 | 1:2000 |
Разведения сыворотки приготовлены с учетом массовой доли в ней глицерина (50%), поэтому при расчете количества сыворотки для постановки РСК следует исходить из ее титра, не учитывая содержание глицерина, то есть при титре сыворотки 1:1000 ее удвоенный титр будет 1:500, для приготовления которого следует взять 0,1 см сыворотки и 49,9 см физиологического раствора; при титре 1:1500 удвоенный титр 1:750 (0,1 см сыворотки и 74,9 см физиологического раствора) и т.д.
5.4.2.2 Подготовка 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана
Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными (керамическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе взятия и в течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю и отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об/мин по 15-10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную взвесь на физиологическом растворе.
5.5 Проведение испытания
5.5.1 По 0,2 см каждого разведения сыворотки переносят в серологические пробирки с указанием разведений, начиная с наибольшего разведения (1:2000). Во все пробирки вносят по 0,2 см комплемента в разведении 1:20, по 0,4 см физиологического раствора и по 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана.
Одновременно в этот же штатив ставят три пробирки для контроля.
В пробирки вносят:
в первую:
- 0,2 см гемолитической сыворотки в разведении 1:100;
- 0,6 см физиологического раствора;
- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;
во вторую:
- 0,2 см комплемента в разведении 1:20;
- 0,6 см физиологического раствора;
- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;
в третью:
- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;
- 0,8 см физиологического раствора.
В первой контрольной пробирке определяют гемолитические свойства сыворотки, во второй - гемолитические свойства комплемента, в третьей - резистентность эритроцитов барана (таблица 3).
Таблица 3
Компоненты | Дозы компонентов при разведении гемолитической сыворотки, см | Номера контрольных пробирок | |||||||||
1:100 | 1:500 | 1:750 | 1:1000 | 1:1250 | 1:1500 | 1:1750 | 1:2000 | 1 | 2 | 3 | |
Гемолизин | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - | - |
Комплемент 1:20 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - | 0,2 | - |
Физиологический раствор | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,6 | 0,6 | 0,8 |
Эритроциты барана (2,5%-ная взвесь) | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
Водяная баня 37°С-38°С - 10 мин | |||||||||||
Примерный результат | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ЧГ | ЧГ | ОГ | ОГ | ОГ |
Примечание - ПГ - полный гемолиз; ЧГ - частичный гемолиз; ОГ - отсутствие гемолиза. |
Штатив встряхивают и переносят в водяную баню на 10 мин при температуре 37°С-38°С. Штатив с пробирками извлекают из бани и немедленно проводят учет результатов реакций в проходящем свете.
5.5.2 Учет результатов
Сыворотку считают активной при титре не менее 1:1000 и при отсутствии гемолиза эритроцитов в контрольных пробирках.
6 Транспортирование и хранение
6.1 Гемолитическую сыворотку транспортируют всеми видами крытого транспорта.
Допускается транспортирование гемолитической сыворотки при температуре не выше 20°С, при этом срок транспортирования не должен превышать более 5 сут.
6.2 Гемолитическую сыворотку хранят в чистом, темном помещении при температуре от 2°С до 8°С.
(Поправка).
6.3 Срок годности гемолитической сыворотки - три года с даты изготовления. Датой изготовления считают дату расфасовки. Датой выпуска гемолитической сыворотки считают дату подписания документа о качестве.
УДК 612.398.12: 619. 006.354 | МКС 11.220 |
Ключевые слова: сыворотка гемолитическая для реакции связывания комплемента, технические требования, правила приемки, методы испытаний, транспортирование и хранение |
Редакция документа с учетом
изменений и дополнений подготовлена