allgosts.ru11. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ11.220. Ветеринария

ГОСТ 20909.4-75 Сперма быков неразбавленная. Методы биологических исследований

Обозначение:
ГОСТ 20909.4-75
Наименование:
Сперма быков неразбавленная. Методы биологических исследований
Статус:
Заменен
Дата введения:
06/30/1976
Дата отмены:
Заменен на:
Код ОКС:
11.220

Текст ГОСТ 20909.4-75 Сперма быков неразбавленная. Методы биологических исследований



УДК 619:611 -013.11:620.193.8(063.74)    Группа Р39

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

СПЕРМА БЫКОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ Методы биологических исследований

Non-diluted sperm of bulls Methods of biological tests

ГОСТ

20909.4-75

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 19 сентября 1975 г. № 2440 срок действия установлен

с 01.07.76 до 01.07.81

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на неразбавленную свежеполученную сперму быков и устанавливает методы испытаний биологических свойств спермы — подвижности спермиев, абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах, осмотической (физиологической) резистентности, активнэсти дегидрогеназ и резистентности спермиев к холодовому шоку.

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

1.1.    Отбор проб — по ГОСТ 20909.1—75.

1.2.    Для проведения испытаний используют сперму, хранившуюся при температуре 30—35°С не более 30 мин с момента ее получения.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ

Сущность метода заключается в определении количества спермиев с прямолинейным поступательным движением.

2.1.    Оборудование и реактивы

2.1.1.    Для проведения испытания применяют:

микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284—67;

термостат ТМ-1 или другой конструкции, снабженный стандартным контактным или нестандартным однотемпературным термометром;

Издание официальное    Перепечатка воспрещена

стекла покровные по ГОСТ 6572—59;

стекла предметные по ГОСТ 9284—59;

стекла предметные с углублением;

палочки стеклянные или пипетки пастеровские;

натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 5.1314—72, 3%-ный раствор;

натрий хлористый по ГОСТ4233—66, 1%-ный раствор.

2.2. Подготовка к испытанию

2.2.1.    Подготовка и стерилизация лабораторной посуды — по ГОСТ 20909.2—75.

2.2.2.    Термостат включают за 20—30 мин до начала работы. Температура в термостате должна быть 40—42°С.

2.2.3.    Предметные и покровные стекла, стеклянные палочки, пипетки и растворы подогревают до 35—40°С.

2.3.    Проведение испытания

2.3Л. Подвижность спермиев определяют в раздавленной капле спермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении 100—180х. Более точно количество живых и мертвых спермиев определяют в счетной камере по ГОСТ 20909.3—75.

2.3.2. При определении подвижности спермиев под микрсскопом наносят на предметное стекло теплой стерильной стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой небольшую каплю спермы, к которой добавляют двух-четырехкратное количество 3%-иого раствора лимоннокислого натрия. Сперму с раствором лимоннокислого натрия тщательно перемешивают и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом весь препарат. Подсчет спермиев пре изводят не менее чем в трех полях зрения микроскопа с наибольшей подвижностью спермиев. Подсчитывают количество спермиев с прямолинейным поступательным движением и отдельно — количество спермиев с неправильным движением — манежным (перемещение по кругу), колебательным (сперм и и не перемещаются, но производят движение головкой или хвостиком) и мертвых спермиев.

2.4.    Обработка результатов

2.4.1. Подвижность спермиев (Пс ) в баллах вычисляют по формуле

я rv_10_

С П 9

где п — общее число подсчитанных спермиев;

П\ —- число подсчитанных, спермиев с прямолинейным поступательным движением;

10 — по стоянный к о э ффи ди еит.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Минимальной подвижностью спермиев принято считать подвижность, равную 0,6 балла.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АБСОЛЮТНОЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ И ВРЕМЕНИ ВЫЖИВАЕМОСТИ СПЕРМИЕ8

Сущность метода заключается в установлении подвижности спермиев за каждый последовательный интервал времени в процессе хранения спермы после ее разбавления.

Выживаемость спермиев в часах определяют по количеству времени, прошедшего от начала хранения спермы до ее гибели.

3.1.    Оборудование и реактивы

3.1.1.    Оборудование и реактивы — по п. 2.1;

глюк озо-питратно-желт очная среда — по ГОСТ 14746—69.

3.2.    Проведение испытания

3.2.1 .Отбирают из одного эякулята или серии спермы не менее двух проб для анализа, которые разбавляют глюкозо-цитратнэ-желточной средой, приготавливая одно из разведений от 1:8 до 1:32, и сохраняют при 2—5°С.

Подвижность спермиев определяют через каждые 24 ч (в начале хранения можно через 48 ч) по п. 2.3. Последним днем испытания считают день, когда наблюдается единичная подвижность спермиев и нельзя установить минимальную подвижность спермиев в баллах.

3.3.    Обработка результатов

3.3.1.    Абсолютную выживаемость спермиев (S) вычисляют по формуле

5 = 1lit| #2$2 “Г #3^3 * • • “Ь &п >

где а{, а а>г ... ап —подвижность спермиев за интервалы времени, баллы;

tu t2y h • • ■ tn — последовательные интервалы времени, в

течение которых подвижность спермиев соответственно равна аи а2, а$...ап , ч, вычисляемые поп. 3.3.2;

ci\tu a2t2i azU .. .antn—выживаемость спермиев за последовательные интервалы времени.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух или более параллельных определений. Допускаемые расхождения между двумя параллельными определениями не должны превышать ±10%. Если из трех или четырех определений одно имеет расхождение более чем на ±10%, то среднее арифметическое вычисляют соответственно по двум или трем определениям. Если из трех или четырех определений два имеют расхождение более чем на ±10%, то испытание повторяют.

При проведении пяти определений среднее арифметическое вычисляют по трем определениям, при шести или семи определениях — по четырем, при восьми и девяти определениях — по пяти определениям, имеющим расхождение не более ±10%.

3 3.2. Интервалы времени (tu t2, /3---) в часах вычис шюг по формуле

fixз =Тп'И~Гп-.1. ,

где Г — время, прошедшее от начала испытания до дня следующего испытания, ч;

и — порядковый номер дня испытания.

При определении выживаемости спермиев в день испытания, когда нельзя установить минимальную подвижность спермиев, интервал времени (/„) в часах вычисляют по формуле

Тис—Т

п—1

где 7НС — время выживаемо ста спермиев, ч, вычисляемое по п 3.3 3,

Тп~ 1 -— время, прошедшее от начала испытания до предпоследнего дня испытания, когда была установлена минимальная подвижность спермиев в баллах, ч.

3.3.3. Время выживаемости спермиев (7\с ) в часах вычисляют по формуле

rp _ Т П т п ( ^

7 нс~~    2,    "Г 7 гг—1*

где Т п — время, прошедшее от начала испытания до последнего дня испытания, ч.

Результаты испытаний по определению подвижности спермиев при вычислении абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах записывают в журнале испытаний. Форма журнала для записи результатов испытаний, а также примеры вычислений абсолютной выживаемости спермиев, интервала времени и выживаемости спермиев в часах приведены в приложениях 1 и 2.

4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ! (ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ) РЕЗИСТЕНТНОСТИ СПЕРМИЕВ

Сущность метода заключается в определении устойчивости спермиев к действию гипотонического раствора хлористого натрия. 4.1.Оборудование и реактивы

4.1.1. Для проведения испытания применяют: микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284—67;

термостат ТМ-1 для микроскопа; флаконы вместимостью 10—15 мл или пробирки; микропипетки стеклянные по ГОСТ 12487—67; колбы стеклянные вместимостью 100—500 мл по ГОСТ 12487—67;

стекла предметные по ГОСТ 9281—59; стекла покровные по ГОСТ 6572 — 59;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—66, 0,1—0,6%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

4.2. Подготовка к испытанию

4.2.1.    При определении осмотической резистентности неразбавленной спермы должны строго соблюдаться правила, предупреждающие холодовый шок спермиев. Растворы и лабораторная посуда, применяемые для проведения испытания, должны быть стерильными и подогретыми до температуры 30—35°С.

4.2.2.    Перед испытанием готовят пробирки с концентрацией раствора хлористого натрия от 0,6 до 0,1%. Для этого вначале готовят на дистиллированной воде 1%-ный раствор хлористого натрия, который разливают в девять пробирок в объеме от 0,5 до 3,0 мл в соответствии с таблицей и добавляют дистиллированную воду до объема 5 мл.

Номера

проби

рок

Количество 1%-но-го раствора хлористого натрия, мл

Количество дистиллированной воды, мл

Концентрация раствора хлористого натрия, %

Номера

пробирок

Количество 1%-ного раствора хлористого натрия, мл

Количество дистиллированной воды, мл

Концентрация раствора хлористого натрия, %

1

3,00

2,00

0,60

6

1,25

3,75

0,25

2

2,50

2,50

0,50

7

1,00

4,00

0,20

3

2,00

3,00

0,40

8

0,75

4,25

0,15

4

1,75

3,25

0,35

9

0,50

4,50

0,10

5

1,50

3,50

0,30

При исследовании большого количества проб спермы раствор хлористого натрия в концентрациях от 0 6 до 0,1% готовят в девяти колбах, затем из каждой колбы переносят мерной стеклянной пипеткой тю 5 мл раствора в заранее при готовленные флаконы или пробирки.

4.2.3.    Приготавливают по две пробирки с раствором хлористого натрия каждой из указанных в таблице концентраций. Пробирки закрывают резиновыми пробками, обернутыми пергаментной бумагой, и ставят в термостат при температуре 33—35аС на 10—15 мин.

4.3.    Проведение испытания

4.3.1.    В каждую пробирку с раствором хлористого натрия теплой микропипеткой вносят по 0,025 или 0,05 мл испытуемой спермы. Получают разбавление от 1:100 до 1:200,

Пробирки с разбавленной спермой выдерживают 3 чпри температуре 18—22Х.

Подвижность спермиев в раздавленной катле определяют по п. 2.3 без добавления раствора лимоннокислого натрия.

4.4.    Обработка результатов

4.4.1.    Осмотическую резистентность спермы (R0) выражают

значением концентрации раствора хлористого натрия, при которой подвижность сперм в ев < оставляет не менее 0,5 балла. Чем ниже концентрация раствора хлористого натрия, в котором спермин остаются живыми, тем выше осмотическая резистентность спермы.

Пример. В пробирке № 8 (0,15%-ный раствор хлористого натрия) определена единичная подвижность спермиев, а в пробирке № 7 (0,2%-ный раствор хлористого натрия) подвижность спермиев 0,5 балла. Следовательно, значение осмотической резистентнее™ спермы равно 0,2. Или, если в пробирке № 8 мертвые спермин, в пробирках № 7 и 6 единичная подвижность спермиев, а в пробирке № 5 (0,3%-ный раствор хлористого натрия) подвижность — 0,5 балла. Следовательно, ссмогическая резистентность спермы равна 0,3.

4.42. Коэффициент резистентности (RK) вычисляют по формуле

где 0,1 — постоянный коэффициент;

R о— осмотическая резистентнс сть (концентрация раствора хлористого натрия, %).

5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДЕГИДРОГЕН АЗ НОЙ АКТИВНОСТИ СПЕРМЫ

Сущность метода заключается в определении сксрссги обесцвечивания метиленовой сини, добавленной к сперме.

Скорость обесцвечивания метиленовой сини зависит от активности дегидрогеназ-ферментов дыхания опермиев.

Детидрогеназную активнсегь спермы определяют в капиллярах или в пробирках.

5.1.    Метод определения дегидрогеназной активности спермы в капиллярах

5.1.1.    Оборудование и реактивы

Для проведения испытания применяют: термостат ТМ-1 для микроскопа; термометр по ГОСТ 215—73;

термостат или ультратермостат, или баню водяную; секундомер по ГОСТ 5072—72; стекла предметные по ГОСТ 9284-—59; пипетки глазные и пастеровские;

трубочки стеклянные длиной 5—В см с внутренним диаметром 0,8—1,0 мм или катетеры от шприцов для искусственного осеменения короов;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—66; синь метиленовую 0,01%-ный раствор; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

5.1.2.    Подготовка к испытанию

5.1.2.1. Концентрацию спермиев в сперме определяют п< ГОСТ 20909.5—75.

5Л.2.2. Подвижность спермиев определяют по п. 2.3.

Раствор метиленовой сини тотсвят, растворяя 0,01 г метиленовой сини и 0,9 г хлористсго натрия в 190 мл дистиллированной воды.

5Л.З. Проведение испытания

На чистое предметное стекло, подогретое до 30—37°С, наносят 0,05 мл (каплю) спермы и добавляют теплой пипеткой такое же количество (каплю) 0,01%-ного раствора метиленовой сини, подогретой до 30°С. Смесь спермы с краской тщательно смешивают и набирают ее в теплую (30—37°С) стеклянную трубку, рассчитывая, чтобы высота столбика смеси составляла 2—3 см. Столбик смеси, не содержащий пузырьков воздуха, располагают в центре трубки.

Трубочку, заполненную смесью опер мы с метиленовой синью* помещают в термостат при температуре 37±0,5°С на лист белой бумаги в горизонтальном положении. Записывают время начала испытания и окончания обесцвечивания метиленовой сини. При этом учитывают, что концы столбика (1—2 мм) обычно не обесцвечиваются.

5.1.4. Обработка результатов

5.1.4.1.    Дегидрсгеназную активность спермы выражают в условных единицах.

За единицу активности принимают такую активность, когда 1 млрд, спермиев обесцвечивает за 1 мин 0,05 мл 0,01%-ного раствора метиленовой сини (0,000005 г порошка метиленовой сини).

5.1.4.2.    Дегидр о геназную активность спермы (Да) в условных, единицах вычисляют по формуле

лг _. Пс */• С

Ма— 10    >

где Пс — подвижность спермиев, баллы;

t —- время обесцвечивания метиленовой сини в опыте,мин;

С — концентрация спермы, млрд/мл;

10 — постоянный кээффициент.

За окончательный результат иопытания пр инимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±10%.

5.2.    Метод определения д ег и д р о г е н а з н ой активности спермы в пробирках

5.2.1. Оборудование и реактивы

Для проведения испытания применяют;

термостат ТМ-1 для микроскопа;

термометр по ГОСТ 215—73;

термостат или ультратермостат, или баню водяную;

секундомер по ГОСТ 5072—72; стекла предметные п> ГОСТ 9284—59;

пипетки стеклянные вместимостью 1 мл по ГОСТ 12487—67; колбы стеклянные по ГОСТ 12487—67;

пробирки стеклянные вместимостью 5 мл и диаметрам 1 см;

синь метиленовую, 0,05%-ный раствор;

натрий лимоннокислый по ГОСТ 5.1314—72;

масло вазелиновое по ГОСТ 3164—52, х.ч.;

глюкозу по ГОСТ 4233—66;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

5.2.2. Подготовка к испытанию

5.2.2.1.    Приготовляют глюкозо-цитратный раствор на прокипяченной дистиллированной воде, для чего растворяют в колбе вместимостью 1ОЮ мл 3 г глюкозы и 1,4 г лимоннокислого натрия.

Раствор доводят до метки водой.

5.2.2.2.    Раствор метиленовой сини готовят на прокипяченной дистиллированной воде, растворяя в мерной кол 5 г вместимостью 100 мл 3 г глюкозы, 1,4 г цитрата натрия и 0,05 г метиленовой сини. Объем раствора доводят до метки.

5.2.2.3.    Концентрацию спермиев определяют по ГОСТ 20909.5—75.

5.2.3.    Проведение испытания

В чистую, подогретую до 30—37еС стеклянную пробирку вносят 0,8 мл теплого (37—45°С) глюкозо-цитратного раствора, добавляют 0,1 мл 0,05%-ного раствора метиленовой сини и 0,2 мл спермы. Содержимое тщательно перемешивают и наслаивают очищенное вазелиновое масло в таком количестве, чтобы получился столбик масла высотой 0,5—1,0 см.

Пробирки со смесью ставят в термостат или в водяную баню при температуре 45°С и учитывают время обесцвечивания метиленовой сини.

Допускается одновременно определять показатель выживаемости спермиев при температуре 45*С. Для этого через каждые 10— 15 мин из пробирок берут пробу стеклянной палочкой и оценивают подвижность спермиев по п. 2.3.

5.2.4.    Обработка результатов

Депидрогеназную активность спермы и коэффициент дегидро-геназяой активности вычисляют по пп. 5.1.4 и 5.1.5.

6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗИСТЕНТНОСТИ СПЕРМИЕВ К ХОЛОДОВОМУ ШОКУ

Сущность метода заключается в определении выживаемости спермиев после быстрого их охлаждения до температуры 1—3°С. 6.1.Оборудование и реактивы

6.1.1. Для проведения испытания применяют: микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284—67;

термостат ТМ-1 для микроскопа;

стекла предметные по ГОСТ 9284—59;

стекла покровные размером 18x18 или 24X24 мм по ГОСТ 6672—59;

палочки стеклянные или пипетки пастеровские;

флаконы вместимостью 2 мл;

глюкозу по ГОСТ 6038—74, 6%-ный раствор.

6.2.    Подготовка к испытанию

6.2.1.    Перед началом работы готовят на прокипяченной дистиллированной воде 6%-ный раствор глюкозы, растворяя 6 г глюкозы в мерной колбе вместимостью Ю0 мл. Объем раствора доводят водой до метки. Приготовленный раствор разливают по 1—2 мл в пробирки или флаконы из расчета на каждую пробу спермы не менее трех пробирок.

Готовят ванну со льдом с температурой 2±ГС, в которую не менее чем за 5 мин до начала исследования ставят для охлаждения по две из трех пробирок. Третью пробу с 6%-ным раствором глюкозы ставят в термостат прй температуре 37—40°С.

Подвижность слермиев определяют по п. 2.3.

6.3.    Проведение испытания

6.3.1.    Одну-две капли неразбавленной спермы, выдержанной при комнатной температуре не менее 10 и не более 30 мин, вносят стеклянной пипеткой в пробирки иля флаконы с 6%-ным раствором глюкозы, охлажденной до 2±ГС, и в пробирку с раствором, подогретым до 37—40°С. Выдерживают 5 мин. Подвижность спермиев определяют под микроскопом по п. 2.3.

6.4.    Обработка результатов

6.4.1.    Резистентность спермиев к холодовому шоку (Rx ) вычисляют по формуле

п __ а\

где а\ — подвижность спермиев через 5 мин после внесения спермы в 6%-ный раствор глюкозы при температуре 2±1°С, баллы;

а2 — подвижность спермиев через 5 мин после внесения спермы в 6%-ный раствор глюкозы при температуре 37—* 40аС, баллы.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных •определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±10%,

Пример. Подвижность спермиев в 6%-ном растворе глюкозы при температуре 37—40°С — 8,0 баллов, а в растворе с температурой 2±1°С — 1,5 балла.

Следовательно, резистентность к холодовому шоку

**=НОГ=018-

ПРИЛОЖЕНИЕ 1 к ГОСТ 20909 4-75 Рекомендуемое

Форма журнала для записи результатов испытаний

Дни проведения испытаний

И

S

2

3

4

1

5

6

1

7

1

8

1

9

10

11

1

12

1

8

£

£

а.

£

Время, прошедшее от

начала испытания до дня ■

оледующего испытания, Т, ч

я

".

4>

£

С*

С

и

к

0 1

| 24

1

1

48

1

1

1

96

1

120

1

1

168

1

192

216

1

240

1

264

№ 3

a

н

и

А

£

я

I-1

и

о

ЕС

Последовательные интервалы времени, t,

ч

« ex £ <u

я 5

8 h

О

£

V

«

£

ех

о

н

§•

£

12

24

26

1

-

1

36

1

36

36

1

24

24

1

18

1

a

£

*

я

£

О

С

Л

Л*

а

at

а

at

а

at

а

at

а

at

а

at

а

at

а

' at

а

at

а

at

а

at

о g

Я

Ю 5*

СО

1

9,0

108

9,0

216

8,0

288

7,0

252

6,0

216

_

■1-

5,0

180

3,0

72

2,0

48

1,0

18

1398

252

<у ж

2

9,0

108

9,0

216

7,0

252

6,0

216

6,0

216

6,0

216

5,0

216

2,0

48

1,0

18

1410

252

с 3 Ою

3

9,0

108

9,0

216

8,0

288

8,0

288

6,0

216

5,0

180

4,0

96

2,0

48

1,0

18

1458

252

Среднее

1422

252

ю

Стр. 10

ПРИЛОЖЕНИЕ 2 к ГОСТ 20909.4—75 Справочное

ПРИМЕР ВЫЧИСЛЕНИЙ ИНТЕРВАЛА ВРЕМЕНИ, ВЫЖИВАЕМОСТИ СПЕРМИЕВ В ЧАСАХ И АБСОЛЮТНОЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ

СПЕРМИЕВ

(данные для расчетов взяты из журнала для записи результатов испытаний, приведенном в приложении 1)

1.    Интервал времени на четвертый день испытания

.    Т--Т3    _ 120-48

tA—    2    2    —36 ч,

выживаемость спермиев за этот интервал времени

1—7*36=252.

2.    Выживаемость спермиев в часах

^ _Тп-Тп_г    264—240

- ' 1 /г-1”

нс

2

2

240-252 ч.

3. Интервал времени на девятый день испытания, когда установлена минимальная подвижность спермиев в баллах

Тпс-Тп^ 252—216

.=18 ч.

2 2

4. Абсолютная выживаемость спермиев в трех повторностях составляет S1==2e*=108+216+288+252+216 + 180+72+48+I8=1398;

St=2at=l 08+216+216+216+216+120 +48+18=1410; ^з=2л/=Ю8+216+288+*288+288+216+180+56 ^48+18=1458.

Расхождение между минимальным (1398) и максимальным (1458) показателями абсолютной вживаемости спермиев составляет 60 или 4,3%. Следовательно, абсолютная выживаемость спермиев

Scp

Si+Sa+Ss 1398+1410+1458

3

3

— 1422.

Изменение № 1 ГОСТ 20909.4—75 Сперма быков неразбавленная. Методы биологических исследований

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 08.06.81 № 2857 срок введения установлен

с 01.07.81

Пункты 2.1.1, 4.1.1. Заменить ссылки: ГОСТ 8284—67 на ГОСТ 8284—78, ГОСТ 6672-59 на ГОСТ 6672-75, ГОСТ 9284-59 на ГОСТ 9284-75, ГОСТ 4233-66 на ГОСТ 4233-77.

Пункты 2.1.1, 5*.2.1. Заменить ссылку: ГОСТ 5.1314—72 на ГОСТ 22280— 76.

Пункт 4.1,1. Заменить слова: «микропипетки стеклянные по ГОСТ 12487—67» на «микропипетки стеклянные».

Пункты 5.1.1, 5.2.1. Заменить ссылки: ГОСТ 5072—72 на ГОСТ 5072—79, ГОСТ'9284-50 на ГОСТ 9284-75, ГОСТ 4233-66 на ГОСТ 4233-77.

Раздел 5 дополнить новым пунктом — 5.1.4.3:

«5.1.4.3. Коэффициент дегидрогеназной активности (/(Да) вычисляют по формуле

(Продолжение см. стр. 236)

КДаа

где Да — дегидрогеназная активность».

Пункт 5.2.1. Заменить слова и ссылки: «пипетки стеклянные вместимостью 1 мл по ГОСТ 12487—67» на «пипетки стеклянные вместимостью 1 мл по ГОСТ 20292-74», ГОСТ 12487-67 на ГОСТ 1770-74, ГОСТ 3164-52 на ГОСТ 3164-78.

Пункт 5.2.4. Исключить слова: «и 5.1.5».

Пункт 6.1.1. Заменить ссылки: ГОСТ 8284—67 на ГОСТ 8284—78, ГОСТ 9284-59 на ГОСТ 9284-75, ГОСТ 6672-59 на ГОСТ 6672-75, ГОСТ 6038--74 на ГОСТ 6038-79.

Приложение 1. Графа «Последовательные интервалы времени, t, н». Заменить значение: 26 на 36;

графа а. Для 12-го дня проведения испытаний заменить знак:—на ЕП (3 раза).

(ИУС № 8 1981 г.)