База ГОСТовallgosts.ru » 07. МАТЕМАТИКА. ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ » 07.100. Микробиология

ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Обозначение: ГОСТ ISO 11133-2016
Наименование: Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред
Статус: Действует

Дата введения: 07/01/2017
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 07.100.30
Скачать PDF: ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.pdf
Скачать Word:ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред.doc


Текст ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

ISO 11133— 2016

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ,

КОРМОВ для животных и воды

Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

(ISO 11133:2014, ЮТ)

Издание официальное

Москаа

Стандарт* иформ 2016

ГОСТ ISO 11133—2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «8НИИС») на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 5 стандарта, который выполнен ОАО «ВНИИС»

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 июня 2016 N9 49)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004—97

Кол страны по МК <HC0 3t66) 004-97

Скрашенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MO

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 7 ноября 2016 г. № 1605-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11133—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 11133:2014 «Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред» («Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media». IDT).

Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВЗАМЕН ГОСТ ISO/TS 11133-1—2014 и ГОСТ ISO 11133-2—2011

ГОСТ ISO 11133—2016

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информацион ном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячном ин формационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном ин формационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведом ленив и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на офи циальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ ISO 11133—2016

Содержание

1    Область применения..................................................................1

2    Нормативные ссылки................................................................1

3    Термины и определения.............................................................2

4    Обеспечение качества питательных сред.................................................7

5    Тест-микроорганизмы для эксплуатационных испытаний...................................12

6    Проведение эксплуатационных испытаний питательных сред...............................16

7    Методы эксплуатационных испытаний плотных питательных сред...........................19

8    Методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред............................22

9    Методы эксплуатационных испытаний разбавителей и транспортных сред....................24

10 Документирование результатов испытаний..............................................26

Приложение А (справочное) Обозначение ингредиентов питательных сред

в международных стандартах на микробиологический анализ пищевых продуктов.

кормов для животных и воды...............................................27

Приложение В (обязательное) Приготовление контрольных (эталонных) исходных культур

и рабочих культур........................................................28

Приложение С (обязательное) Блок-схемы методов эксплуатационных испытаний...............30

Приложение D (справочное) Пример карточки записи результатов испытаний питательных сред____34

Приложение Е (обязательное) Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии

для питательных сред, которые широко используют в пищевой микробиологии.....36

Приложение F (обязательное) Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии

для питательных сред, которые широко используют в микробиологии воды........59

Приложение G (обязательное) Использование контрольных графиков для мониторинга

количественных испытаний плотных питательных сред.........................72

Приложение Н (справочное) Обеспечение качества питательных сред —

выявление и устранение недостатков........................................78

Приложение I (справочное) Количественные испытания жидких сред..........................79

Приложение J (обязательное) Инструкции по установлению условий проведения микробиологических эксплуатационных испытаний

для стандартизованных питательных сред....................................82

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

межгосударственным стандартам..........................................85

Библиография........................................................................86

IV

ГОСТ ISO 11133—2016

Введение

В лабораториях, проводящих микробиологические исследования, основными целями являются поддержание жизнеспособности, восстановление жизнеспособности, выращивание и/или подсчет широкого спектра микроорганизмов. Во всех традиционных методах микробиологического культивирования. а также во многих альтернативных методах используют питательные среды. Многие составы питательных сред имеются в продаже, и гораздо большее количество сред, предназначенных для конкретных целей обеспечения роста, описано в литературе.

Многие испытания и методики зависят от способности питательных сред обеспечивать получение достоверных и воспроизводимых реэупьтатов. Требования к среде могут быть специфичными как к пробе, так и к выявляемым микроорганизмам. Таким образом, соответствие питательных сред установленным эксплуатационным критериям является предварительным условием надежности любой работы в области микробиологии. Необходимо проведение достаточного количества испытаний, чтобы установить:

a)    приемлемость каждой партии среды:

b)    пригодность данной среды для конкретной цели;

c)    способность среды обеспечивать получение достоверных результатов.

Эти три критерия являются важной частью процедур управления внутренним качеством и наряду с соответствующей документацией позволяют осуществлять эффективный мониторинг питательных сред, что способствует получению прецизионных и надежных данных. Для проведения надежного микробиологического анализа важно использовать питательные среды признанного качества. Для всех сред, описанных в стандартных методах, важно установить минимальные критерии приемлемости, требуемые для гарантирования надежности. Рекомендуется, чтобы при проведении определения эксплуатационных характеристик питательной среды проводились испытания в соответствии с настоящим стандартом.

Установление повсеместно принятых минимальных эксплуатационных критериев для питательных сред позволит получать продукцию с более стабильным качеством, что будет способствовать снижению количества испытаний, которые необходимо проводить в лаборатории пользователя.

Более того, критерии приемлемости, измеренные в рамках методов, установленных в настоящем стандарте, допускается использовать во всех микробиологических лабораториях для оценивания таких свойств питательных сред, как производительность, селективность и/или элективность.

При проведении микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов для животных и воды требования настоящего стандарта являются первоочередными при оценке качества питательных сред.

V

ГОСТ ISO 11133—2016

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, КОРМОВ

для животных и воды

Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Microbiology of food, animal feed and water.

Preparation, production, storage and performance testing of culture media

Дата введения —2017—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает условия, касающиеся обеспечения качества питательных сред, а также устанавливает требования к приготовлению питательных сред, предназначенных для микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов для животных, проб окружающей среды из зоны производства пищевых продуктов и кормов для животных, а также всех видов воды, предназначенной для потребления или используемой при производстве пищевых продуктов.

Настоящие требования применимы ко всем видам питательных сред, которые приготовляют для использования в лабораториях, проводящих микробиологический анализ.

Настоящий стандарт также устанавливает критерии и описывает методы определения рабочих характеристик (эксплуатационных испытаний) питательных сред. Настоящий стандарт следует применять следующим поставщикам и изготовителям:

-    торговым организациям, которые выпускают и/или распространяют готовые к использованию или частично готовые восстановленные или обезвоженные среды:

-    некоммерческим организациям, которые поставляют среды третьей стороне:

-    микробиологическим лабораториям, которые готовят питательные среды для собственного применения.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте приведены нормативные ссылки на нижеприведенные стандарты, которые являются обязательными при применении настоящего стандарта. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все изменения).

ISO 6887-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб.

Издание официальное

1

ГОСТ ISO 11133—2016

исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)

(SO 6887*3. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)

ISO 6887-4. Microbiology of food and animal feed — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of miscellaneous products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний. исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления различных продуктов)

ISO 6887-5, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 5. Специальные правила подготовки молока и молочных продуктов)

ISO 6887-6. Microbiology of food and animal feed — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the primary production stage (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 6. Специальные правила приготовления проб, отобранных на начальной стадии производства)

ISO 7704. Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses (Качество воды. Оценка мембранных фильтров, используемых для микробиологических анализов)

ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

ISO 8199. Water quality — General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

Примечания

1    В данном разделе приведены основные определения, касающиеся обеспечения качества питательных сред, а также терминология, касающаяся определения рабочих характеристик (эксплуатационных испытаний), питательных сред и тест-микроорганизмов.

2    В таблицах Е2 и F.2 приведены пояснения к аббревиатурам наименований питательных сред.

3.1    Основные термины и определения

3.1.1    управление качеством (quality control): Область менеджмента качества, основным объектом которой является выполнение требований к качеству.

Примечание — См. ссылку [1].

3.1.2    партия питательной среды (batch of culture medium, lot of culture medium): Однородная и полностью прослеживаемая единица среды, связанная с определенным количеством бестарного продукта, полуфабриката или конечного продукта, которая соответствует одному типу и качеству, которая была произведена в течение определенного периода производства и которой был присвоен один и тот же номер партии.

3.1.3    хромогенный субстрат, флуорогеиный субстрат (chromogenic substrate, fluorogenic substrate): Субстрат, содержащий хромофорную/флуорофорную группу, усваиваемый бактериями или грибами.

Примечание — После расщепления хромогенного/флуорогенного субстрата выделяется хромофор/ флуорофор. и окрашенный/флуоресцирующий конечный продукт становится видимым либо может быть обнаружен при помощи ультрафиолетовой лампы.

2

ГОСТ ISO 11133—2016

3.2 Терминология, касающаяся определения рабочих характеристик

(эксплуатационных испытаний)

3.2.1    эффективность питательной среды (performance of culture media): Реакция питательной среды на введение в нее (посев) тест-микроорганизмов в определенных условиях.

3.2.2    целевой микроорганизм (target microorganism): Микроорганизм или группа микроорганизмов. выявление и подсчет которых проводят.

3.2.3    нецелевой микроорганизм (non-target microorganism): Микроорганизм, который подавлен средой и/или условиями инкубирования или который не демонстрирует признаков, характерных для целевого микроорганизма.

3.2.4    производительность питательной среды (productivity of culture medium): Стелень роста целевого микроорганизма на питательной среде при определенных условиях.

3.2.5    селективность питательной среды (selectivity of culture medium): Степень ингибирования нецелевого микроорганизма на или в селективной питательной среде при определенных условиях.

3.2.6    элективность (специфичность) питательной среды (eiectivity of culture medium, specificity of culture medium): Демонстрация при определенных условиях того, что нецелевые микроорганизмы не проявляют те же визуальные характеристики, что целевые микроорганизмы.

3.3 Терминология, касающаяся питательных сред

3.3.1    питательная среда (culture medium): Смесь веществ в жидком, полутвердом или твердом состоянии, в которую входят природные и/или синтетические ингредиенты, предназначенные для поддержания размножения (с ингибированием роста определенных микроорганизмов или без него), идентификации или сохранения жизнеспособности микроорганизмов.

Примечание — При использовании с дополнительными словами этот термин часто сокращают до слова «среда» (например, «обогатительная среда»).

3.3.2    Питательные среды, классификация по составу

3.3.2.1    питательная среда с химически определенным составом (chemically defined medium): Питательная среда, состоящая только из ингредиентов с четко определенным химическим составом с известной молекулярной структурой и степенью чистоты.

3.3.2.2    питательная среда с химически неопределенным составом или с химически частично неопределенным составом (chemically undefined or partially undefined medium): Питательная среда, состоящая полностью или частично из природных веществ, переработанных или нет. химический состав которых определен не полностью.

Примечание — Гармонизированные обозначения для различных ингредиентов с химически неопределенным составом, используемых в питательных средах, приведены в приложении А.

3.3.2.3    хромогенная питательная среда, флуорогенкая питательная среда (chromogenic culture medium, fluorogenic culture medium): Питательная среда, которая содержит один и несколько хромогенных/флуорогенных субстратов.

Примечание — Хромогенные питательные среды облегчают идентификацию бактерий или грибов посредством образования определенной окраски и определенных морфологических характеристик (типичный рост на питательной среде). Флуорогенкая среда может быть визуализирована при помощи ультрафиолетовой лампы. Продукты биохимических реакций, которые необходимы для эффективности хромогенных/флуорогенных питательных сред, как правило, являются результатом ферментативной активности определенных микроорганизмов, которая в большой степени зависит от точного поддержания специальных условий (например, температуры, значения pH. концентрации субстрата).

3.3.3    Классификация питательных сред в соответствии с их физической консистенцией

3.3.3.1    жидкая питательная среда (liquid medium): Питательная среда, состоящая из водного раствора одного или нескольких компонентов (например, легтгонная вода, питательный бульон).

Примечания

1    В некоторых случаях а жидкую питательную среду добавляют твердые частицы (например, среда с переработанным мясом).

2    Жидкие среды в пробирках, колбах или флаконах обычно называют термином «бульон».

3.3.3.2    плотная питательная среда, полужидкая питательная среда (solid medium, semi-solid medium): Жидкая питательная среда, содержащая затвердевающие материалы (например, агар-агар, желатин и т. д.) е различных концентрациях.

3

ГОСТ ISO 11133—2016

Примечания

1    Благодаря широкому использованию по всему миру питательных сред, затвердевающих с помощью агар-агара. в качестве синонима плотной питательной среды часто используют сокращенный термин «агар» и также в сочетании с существительными: например, «агар для подсчета микроорганизмов в чашках Петри».

2    Плотную питательную среду, разлитую по чашкам Петри, обычно называют plate {«чашка Петри»). Плотную питательную среду, разлитую по пробиркам или небольшим флаконам, которые держат в наклонном положении при застывании среды, часто называют slant или slope (скошенная плотная питательная среда, косой агар). Если среда заполняет дно емкости, образующийся слой называют столбиком.

3.3.4 Классификация питательных сред в соответствии со способом их применения

3.3.4.1    транспортная (питательная) среда (transport medium): Питательная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов без возможности существенного размножения в течение времени с момента отбора проб до момента обработки пробы в лаборатории.

Пример — Транспортная среда Стюарта или Эми (Stuart, Amies).

3.3.4.2    (питательная) среда для сохранения (preservation medium): Питательная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение более продолжительного периода времени, чтобы защитить их от неблагоприятных воздействий, которые могут возникнуть при длительном хранении и способствовать восстановлению после этого периода.

Пример — Яичная питательная среда Дорсета (Dorset), сношенный питательный агар.

3.3.4.3    питательная среда суспензирования (diluent medium, suspension medium): Питательная среда, предназначенная для отделения микроорганизмов от плотного испытуемого продукта в жидкую фазу и/или для снижения их концентрации путем разбавления без размножения или ингибирования в течение времени контактирования.

Пример —Пептонный солевой раствор.

3.3.4.4    оживляющая (питательная) среда (resuscitation medium): Питательная среда, предназначенная для активации подверженных стрессу или поврежденных микроорганизмов и восстановления их способности к нормальному росту, но не обязательно способствующая их размножению.

Пример — Буфернаяпептонная вода.

Примечание —Данную среду можно также использовать как обогатительную среду (например, буферную лагпонную воду).

3.3.4.5    обогатительная (питательная) среда (pre-enrichment medium, enrichment medium): Преимущественно жидкая питательная среда, которая благодаря составу обеспечивает особенно благоприятные условия для размножения микроорганизмов.

Пример —Триптон-соевый бульон.

3.3.4.5.1    селективная обогатительная (питательная) среда (selective enrichment medium): Обогатительная среда, которая поддерживает размножение конкретных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов.

Пример — Соевая пеппюиная среда Раппапорта — Bacunuaduca (Rappaport — Vasiliadis).

3.3.4.5.2    неселективная обогатительная (питательная) среда (non-setective enrichment medium): Обогатительная среда, которая поддерживает рост большинства микроорганизмов.

Пример — Питательный бульон из сердечно-мозговой настойки.

3.3.4.6    (питательная) среда для выделения (isolation medium): Плотная или полужидкая питательная среда, которая поддерживает рост микроорганизмов.

3.3.4.6.1 селективная (питательная) среда для выделения (selective isolation medium): Питательная среда для выделения, которая поддерживает рост конкретных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов.

Пример — Модифицированный агар с активированным углем, цефоперазоном и дезоксихолэ-том (агар mCCD).

4

ГОСТ ISO 11133—2016

3.3.4.6.2    неселективная (питательная) среда для выделения (non-selective isolation medium): Питательная среда для выделения, которая не приспособлена к избирательному подавлению роста микроорганизмов.

Пример —Питательный агар.

3.3.4.6.3    хромогенная селективная питательная среда, флуорогенная селективная лита* тельная среда (chromogenic selective culture medium, fluorogenic selective culture medium): Хромогенная/ флуорогенная питательная среда, которая также содержит селективные компоненты, которые частично или полностью ингибируют сопутствующую микрофлору, содержащуюся в испытуемом материале, тем самым способствуя точному выявлению целевых микроорганизмов.

Пример — Агар ТВХ. среда MUG/EC.

3.3.4.7    дифференциальная (питательная) среда (differential medium, characterization medium): Питательная среда, которая позволяет анализировать одну или несколько фиэиологических/биохими-ческих характеристик микроорганизмов для их идентификации.

Пример — Агар ТВХ. лактозный агар с тераитолом 7, ТТС.

Примечание — Дифференциальные среды, которые можно использовать 8 качестве сред для выделе-ния. называют средами для выделения/днфференциагъными средами [например, агар на основе деэоксихопаг-лизин-ксилозы (XLD). агар лактозный ТТС].

3.3.4.8    идентификационная (питательная) среда (identification medium): Питательная среда, предназначенная для получения специфической опознавательной реакции, которая обычно не требует последующего подтверждения.

Пример — агар с желчью, эскулином и азидом.

3.3.4.9    среда для подсчета (enumeration medium): Селективная или неселективная питательная среда, которая позволяет производить подсчет микроорганизмов.

Пример — Агар Baird-Parker, агар с дрожжевым экстрактом.

Примечание — Среда для подсчета может обладать свойствами оживляющей и/или обогатительной среды.

3.3.4.10    подтверждающая среда (confirmation medium): Питательная среда, которая способствует идентификации или определению характеристик микроорганизмов, которые проводят после предварительных стадий оживления, выделения и/или обогащения.

Пример —Агар Kligler с железом.

3.3.4.11    среда, содержащая нейтрализующие вещества (Medium containing neutralizers): Транспортная среда, среда для суспензирования или питательная среда, которая содержит нейтрализующие ингредиенты, предназначенные для дезактивации моющих или дезинфицирующих средств, а также иных средств, вызывающих гибель микроорганизмов.

3.3.4.12    многоцелевая среда (medium having multiple uses): Питательная среда, относящаяся к нескольким категориям.

Пример — Кровяной агар является оживляющей средой согласно 3.3.4.4, средой для выделения согласно 3.4.4.6 и дифференциальной средой согласно 3.3.4.7, используемой для обнаружения гемолиза. Буферная пептонная вода является разбавителем согласно 3.3.4.3 и обогатительной средой согласно 3.3.4.5.

3.3.4.13    контрольная (зталонная) среда (reference medium): Питательная среда, как правило неселективная. используемая для сравнительной оценки эксплуатационных характеристик, применяемая независимо от испытуемой среды и пригодная для использования в качестве контрольной (эталлон-ной).

Пример — Триптоновый соевый агар (TSA).

3.3.5 Классификация питательных сред в соответствии с методом их приготовления

3.3.5.1 среда, готовая к использованию (ready-to-use medium): Жидкая, плотная или полужидкая среда, которая поставляется в чашках Петри, бутылках, пробирках и прочих контейнерах в форме.

5

ГОСТ ISO 11133—2016

готовой к использованию, готовой к использованию после переплавки или готовой к использованию после переплавки и внесения добавок.

3.3.5.1.1    готовая питательная среда (finished culture medium): Среда, готовая к инокуляции.

3.3.5.1.2    среда, готовая к использованию после переплавки (ready-to-use medium after remelting): Среда, которую необходимо переплавить, например, для использования при глубинном посеве в чашках Петри или для разлива в чашках Петри.

3.3.5.1.3    среда, готовая к использованию после переплавки и внесения добавок (ready-to-use medium after remelting and supplementing): Среда, которую необходимо переплавить, в которую необходимо внести добавки и которую следует распределить по емкостям перед использованием (неполная среда, готовая к использованию).

Пример — Агар триптозный с сульфитом и циклосеримом (TSC), агар Baird-Parker, агар с фибриногеном плазмы кролика (RPF).

3.3.5.2    питательная среда, приготовленная из имеющейся в продаже дегидратированной формы (medium prepared from commercially dehydrated formulations): Питательная среда в сухой форме. которая требует добавления воды и обработки перед использованием, в результате чего образуется один из двух видов среды:

-    среда, полностью готовая к использованию:

-    неполная среда, к которой необходимо добавить ингредиенты перед применением.

Пример — Порошки, компактные гранулы, лиофилизироеанные продукты.

3.3.5.3    питательная среда, приготовленная из отдельных ингредиентов (medium prepared from individual components): Питательная среда, приготовленная в микробиологической лаборатории полностью из конкретных ингредиентов.

3.4 Термины, касающиеся тест-микроорганизмов

3.4.1    тест-микроорганизмы (test organisms): Микроорганизмы, обычно используемые для эксплуатационных испытаний питательных сред.

Примечание — Тесг-микроорганизмы далее определены в соответствии с их источником (см. 3.4.2—3.4.7).

3.4.2    контрольный (эталонный) штамм (reference strain): Микроорганизм, полученный непосредственно из официальной коллекции культур, являющейся членом всемирной федерации коллекций культур (WFCC) или Европейской организации коллекций культур (ЕССО). для которого определены как минимум род и вид. который внесен в каталог и описан в соответствии с его характеристиками и предпочтительно при необходимости установлено его происхождение в плане пищевых продуктов, кормов для животных или окружающей среды зоны производства пищевых продуктов и кормов для животных или воды.

3.4.3    контрольные (эталонные) исходные культуры (reference stock): Набор отдельных идентичных культур, полученных в результате одного пересева контрольного штамма, либо имеющегося в лаборатории, либо полученного от поставщика.

3.4.4    исходная культура (stock culture): Первый пересев контрольной (эталонной) исходной культуры.

3.4.5    рабочая культура (working culture): Пересев контрольной исходной культуры, исходной культуры или стандартного образца, сертифицированного или нет.

3.4.6    стандартный образец (reference material. RM): Материал, содержащий определенное количество жизнеспособных микроорганизмов, достаточно однородный и стабильный в плане данных микроорганизмов, который пригоден для применения в процессах измерения.

Примечание — См. [3].

3.4.7    сертифицированный стандартный образец (certified reference material. CRM): Стандартный образец, прошедший метрологическую процедуру определения количества жизнеспособных микроорганизмов. сопровождаемый сертификатом, в котором указаны установленное значение количества жизнеспособных микроорганизмов, значение соответствующей неопределенности и приведены данные о метрологической прослеживаемости.

Примечание — См.[3].

6

ГОСТ ISO 11133—2016

4 Обеспечение качества питательных сред

4.1    Документация

4.1.1    Документация, требуемая от изготовителя

От изготовителя (коммерческих или некоммерческих организаций, поставляющих среды третьей стороне) требуется предоставление следующей информации о средах:

•    наименование среды, отдельных ингредиентов, всех добавок и по возможности товарные коды среды;

•    технические данные, например, состав, цель применения, количество (при необходимости), ссылки:

. сведения, касающиеся безопасности и/или рисков (при необходимости):

•    ксщ партии;

-    значение pH готовой среды;

-    информация о хранении и дата истечения срока годности;

•    предписанный срок хранения;

-    свидетельство о контроле качества с указанием используемого тест-микроорганизма и результатов эксплуатационных испытаний с критериями приемлемости.

4.1.2    Сдача-приемка продукции

Для каждой партии продукции (ингредиента или питательной среды) проводят проверку следующих показателей:

•    идентификации продукции;

•    целостности упаковки:

•    даты истечения срока годности продукции;

•    сопроводительной документации;

•    количества полученных единиц продукции.

Регистрируют дату получения.

4.2    Хранение

4.2.1    Общие положения

Во всех случаях необходимо следовать инструкциям изготовителя.

4.2.2    Контроль качества и управление качеством обезвоженных (сухих) питательных сред и добавок

Питательные среды поставляют в форме обезвоженных порошков или гранул в герметично закрытых контейнерах, а добавки различных селективных или диагностических веществ поставляют либо в лиофилизированном, либо в жидком состоянии. Однако приобретение необходимо планировать заранее. чтобы обеспечить регулярный поток (т. е. «первым получен — первым использован»).

При вскрытии нового контейнера осуществляют:

•    проверку герметичности;

•    запись даты первого вскрытия;

•    визуальную оценку содержимого вскрытых контейнеров.

Качество среды будет зависеть от условий хранения после того, как вскроют новый контейнер. Потеря качества обезвоженных сред проявляется в изменении текучести (сыпучести) порошка, изменении гомогенности, комковании, изменениях цвета и т. д. Любую обезвоженную среду, которая абсорбировала влагу или демонстрирует очевидные изменения физического внешнего вида, не следует использовать.

При вскрытии бутылки с обезвоженной средой на бутылке ставят соответствующую дату и указывают максимальное время хранения.

4.3 Приготовление сред в лаборатории

4.3.1 Общие положения

Правильное приготовление питательных сред является одним из основных этапов для обеспечения достоверности микробиологического исследования, и ему необходимо уделить особое внимание.

Следуют нормам надлежащей лабораторной практики и инструкциям изготовителя в том. что касается операций с обезвоженными средами и другими ингредиентами, в частности с теми, которые содержат опасные вещества, такие как желчные соли, азид натрия, антибиотики и прочие селективные агенты.

7

ГОСТ ISO 11133—2016

При приготовлении сред из обезвоженных коммерчески доступных рецептур строго следуют инструкциям изготовителя. Документируют все сопутствующие данные, такие как код. номер партии, мае-са/объем. pH. дата приготовления, условия стерилизации, сведения об изготовителе.

При приготовлении сред из отдельных ингредиентов строго следуют рецептуре. Записывают все подробности (как и ранее), а также полную идентификацию всех используемых ингредиентов (код, номер партии и дату истечения срока годности при наличии таковых).

В приложении D приведен пример учетной карточки с данной информацией.

4.3.2    Качество основных ингредиентов питательных сред

Рецептуры основных ингредиентов питательных сред приведены в конкретных стандартах (см. библиографию). В рецептуре дополнительно могут быть указаны молекулярная масса и номер CAS1> химического вещества.

Иногда определенные ингредиенты (например, приведенные ниже), входящие в рецептуру, могут быть модифицированы для того, чтобы эксплуатационные характеристики среды были неизменными и стабильными.

Данные ингредиенты включают:

•    пептоны, мясные и дрожжевые экстракты, питательные свойства которых подвержены изменениям;

-    агар, желирующие свойства которого подвержены изменениям:

-    буферные вещества;

-    желчные соли, желчный экстракт, деэоксихолат. антибактериальные красители в зависимости от их селективных свойств;

•    красители-индикаторы;

•    антибиотики в зависимости от их активности и взаимодействия с другими ингредиентами.

Примечание — При выпуске сред в промышленном масштабе производители, как правило, дают указания. что рецептура среды может быть оптимизирована с тем. чтобы добиться соответствия требуемым эксплуатационным критериям. Распространенной является практика, когда вначале выбирают ингредиент и затем регулируют концентрацию от партии к партии с целью достижения одинаковых эксплуатационных характеристик и минимизации колебаний от партии к партии.

4.3.3    Вода

При приготовлении питательных сред используют только воду, которая подвергалась предварительной очистке — дистиллированную, деминерализованную, деионизированную, обработанную путем обратного осмоса либо эквивалентного качества, не содержащую веществ, которые могут ингибировать или иным способом повлиять на рост микроорганизмов в условиях испытания (например, следы хлора, аммиака или ионов металлов).

Очищенную воду хранят в герметично упакованных емкостях из инертного материала (нейтральное стекло, полиэтилен и т. п.), который не содержит ингибирующих веществ. Воду очищают перед использованием при приготовлении питательных сред.

Микробное загрязнение не должно превышать 103 колонивобразующих единиц (КОЕ) на кубический сантиметр, и оно должно быть предпочтительно менее 102 КОЕ/см3. Микробное загрязнение следует регулярно контролировать е соответствии с [4]. проводя инкубирование при температуре (22 ± 1) *С в течение (68 ± 4) ч или используя аналогичный метод.

Примечание — Вода, которая была пропущена через ионообменник (деминерализованная), может содержать весьма значительное количество микроорганизмов. Таким образом, не рекомендуется использовать данный процесс без проверки воды на микробное загрязнение. Для поиска наилучшего способа минимизации микробного загрязнения следует проконсультироваться с производителем. Деминерализованная вода с высоким уровнем загрязнения, даже стерилизованная путем фильтрации, все еще может содержать вещества, подавляющие рост определенных микроорганизмов.

Электропроводность воды, используемой в лаборатории, должна быть не более 25 мкС/см (что эквивалентно сопротивлению z 0.4 МОм см) и предпочтительно ниже 5 мкС/см (степень чистоты 3 по (5)) при температуре 25 *С. если не требуется иное. Электропроводность воды следует проверять перед использованием.

Номер CAS (регистрационный номер CAS) — эго однозначный цифровой едентифюотор Chemical Abstracts Service (CAS), присваиваемый химическим элементам, соединениям, полимерам, биологическим последовательностям. смесям и сплавам.

8

ГОСТ ISO 11133—2016

4.3.4    Взвешивание и растворение

Соблюдая необходимые меры предосторожности, аккуратно взвешивают требуемое количество обезвоженной среды или отдельных ингредиентов и постепенно смешивают с необходимым количеством воды, избегая образования комков. Соблюдают требуемый баланс: максимально допустимая ошибка составляет 1 % или менее, как это установлено в ISO 7218 и ISO 8199. Если не указано иное, ингредиенты добавляют к требуемому объему воды, а не доводят объем водой до нужного уровня.

4.3.5    Растворение и диспергирование

Если необходимо, для растворения обезвоженные среды требуется быстро диспергировать путем периодического или постоянного перемешивания с последующим нагреванием. Средам, содержащим агар, перед нагреванием с перемешиванием для растворения необходимо дать несколько минут на пропитывание, и затем их разливают перед автоклавированием, если это необходимо. Следует избегать перегрева.

4.3.6    Измерение и регулирование pH

pH измеряют с помощью pH-метра и регулируют перед стерилизацией, если необходимо, так. чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 "С среда имела требуемое значение pH 1 0,2 ед. pH. если нет иных указаний. Регулировку pH обычно осуществляют с помощью раствора гидроксида натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/дм3 (примерно 1 моль/дм3) или разбавленной соляной кислоты (HCI) концентрацией приблизительно 36,5 г/дм3 (примерно 1 моль/дм3). При регулировании pH среды после стерилизации используют стерильные растворы. Дополнительная информация, касающаяся измерения pH. приведена в ISO 7218 и ISO 8199.

Примечание — Имеющиеся в продаже среды могут демонстрировать значительные изменения pH до и после обработки 8 автоклаве. Однако при условии использования дистиллированной или деионизованной воды надлежащего качества регулирование pH перед обработкой в автоклаве, как правило, не потребуется.

4.3.7    Разливка

Среду разливают по соответствующим емкостям, при этом оставляют достаточное свободное пространство над средой во избежание выкипания среды в процессе охлаждения после тепловой обработки при автоклавировании или переплавке либо перелива среды после внесения добавок.

Примечание — Данное свободное пространство может не потребоваться, если в процессе охлаждения в автоклаве поддерживается надлежащее давление.

4.3.8    Стерилизация

4.3.8.1    Общие положения

Готовые питательные среды стерилизуют в день приготовления.

Стерилизацию питательных сред и реактивов, как правило, проводят при помощи влажного пара (см. 4.3.8.2) или фильтрации (см. 4.3.8.3).

Определенным средам для стерилизации не требуется обработка в автоклаве, их можно использовать после кипячения. Например, среды для выращивания Enterobacteriaceae. содержащие бриллиантовый зеленый, особенно чувствительны к нагреванию и действию света, и после кипения их необходимо быстро охладить и защищать от интенсивного света. Некоторые реактивы также могут использоваться без стерилизации. В любом случае необходимо ссылаться на соответствующий стандарт или инструкции изготовителя.

4.3.8.2    Стерилизация влажным паром

Стерилизацию влажным паром выполняют в автоклаве или специальном аппарате для приготовления питательных сред.

Для объемов свыше 1000 см3 режим стерилизации в автоклаве адаптируют соответствующим образом, чтобы обеспечить надлежащую тепловую обработку. В любом случае необходимо следовать положениям соответствующего стандарта или инструкциям изготовителя.

Примечание — Если в автоклаве обрабатывают большие объемы сред (> 1000см3). может произойти перегрев.

После нагревания необходимо дать средам остыть таким образом, чтобы предотвратить выкипание. Это особенно важно для сред в большом объеме и для сред, содержащих чувствительные к воздействию тепла ингредиенты, например, сред с бриллиантовым зеленым.

Дополнительная информация по стерилизации влажным паром приведена в ISO 7218 и в [11].

Стерилизацию паром оценивают при помощи значений F0, принимая во внимание обработку паром в процессе нагрева и охлаждения. Параметры тепловой обработки необходимо определить для

9

ГОСТ ISO 11133—2016

конфеткой загрузки с тем. чтобы добиться надлежащей обработки емкостей независимо от местоположения е автоклаве.

4.3.8.3 Стерилизация фильтрацией

Стерилизацию фильтрацией можно выполнить под вакуумом или под давлением. Используют стерильное оборудование и мембраны с диаметром пор 0,2 мкм. Стерилизуют различные части фильтровального оборудования в соответствии с ISO 7218 или ISO 8199 либо используют заранее стерилизованное оборудование.

На некоторых фильтровальных мембранах могут задержаться протеины или другие вещества (такие как антибиотики). Для получения требуемой концентрации пользователь должен выбрать подходящий тип мембраны, например мембрану с малой способностью связывать белки, и использовать предварительно смоченный фильтр.

4.3.9 Подготовка добавок

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ — С готовыми добавками, содержащими токсичные вещества, особенно антибиотики, необходимо обращаться с осторожностью, избегая рассеивания порошка, что может вызвать аллергические или другие реакции у лабораторного персонала. Необходимо соблюдать технику безопасности и следовать инструкциям изготовителя при приготовлении растворов.

Нельзя использовать просроченные добавки, поскольку, например, для рабочих растворов антибиотиков срок годности истекает обычно в тот же самый день. При определенных обстоятельствах растворы антибиотиков можно хранить в замороженном состоянии подходящими объемами (аликвотами), но не допускается вторичное замораживание после размораживания. Пользователю рекомендуется обсудить с изготовителем потенциальную потерю активности в результате замораживания или определить ее самостоятельно.

4.4 Хранение и срок годности приготовленных сред

4.4.1    Среды, поставляемые из коммерческих источников

Следуют инструкциям изготовителя в том, что касается условий хранения, даты истечения срока годности и использования сред.

4.4.2    Среды, приготовленные в лаборатории

4.4.2.1    Общие положения

Все среды идентифицируют для обеспечения их прослеживаемости.

Срок годности сред может быть разным. Конкретные стандарты могут устанавливать определенные условия и сроки хранения, однако они должны быть проверены в лаборатории. Частоту процедур проверки устанавливают в лаборатории.

Среды хранят в условиях, в которых не происходит никаких изменений их состава, в частности в условиях защиты от света и высыхания. Если их не используют незамедлительно или их используют иным образом в соответствии с конкретным стандартом, среды хранят в холодильнике при температуре (513) °С.

Срок хранения сред в чашках Петри в холодильнике не должен превышать 2—4 недели, а бутылок и пробирок 3—6 месяцев, если в конкретных стандартах не указано иное или результаты проверки срока годности при хранении в лаборатории подтверждают возможность обеспечения более длительного периода сохранности. Дополнительная информация о максимальном сроке хранения для приготовленных сред приведена в ISO 8199, [17] и [21].

Рекомендуется среды, к которым добавлены лабильные добавки, использовать в день приготовления. если в конкретных стандартах не указано иное или результаты проверки срока годности в лаборатории не показывают более длительную сохранность (см. 4.4.2.2). Плотные среды, содержащие химически активные и/или лабильные вещества, следует хранить в таре, в которой осуществляют их плавление.

Перед применением или перед нагреванием питательные среды рекомендуется выдерживать до установления равновесия с окружающей температурой.

4.4.2.2    Оценка срока годности среды

Дату истечения срока годности для хранимых сред устанавливают путем проверки состояния среды после определенного периода времени хранения на основании ее физических, химических и микробиологических характеристик, как это установлено в настоящем стандарте. Частоту процедур проверки устанавливают в лаборатории.

Наблюдают любые изменения цвета среды, признаки испарения/обезеоживания, изменения величины pH или неудовлетворительной производительности, селективности или специфичности

10

ГОСТ ISO 11133—2016

(при необходимости). Дату истечения срока годности устанавливают на основании периода хранения. по прошествии которого все вышеуказанные эксплуатационные характеристики остаются приемлемыми.

Примечание — Данная проверка также пригодна для сред, поставляемых из коммерческих источников.

4.4.2.3 Хранение сред в чашках Петри

Затвердевшие среды используют незамедлительно или хранят в перевернутом виде в условиях защиты снижения качества и обезвоживания, т. е. в темноте и/или в холодильнике при температуре (5 ± 3) °С. На нижнюю часть или боковую поверхность чашки наносят дату приготовления среды и/или дату истечения срока годности, а также идентификационные данные. Допускается использовать альтернативную систему кодирования, соответствующую конкретным требованиям.

Срок годности среды в чашках Петри может быть увеличен при хранении в запечатанных пластиковых или целлофановых мешках. С целью минимизации конденсации влаги перед помещением е мешки чашки Петри охлаждают. Перед помещением чашек в холодильник поверхность агара не следует высушивать.

4.5 Подготовка к применению

4.5.1    Плавление агаризованных питательных сред

Расплавляют питательную среду, поместив ее на кипящую водяную баню или с помощью любого другого процесса, который дает аналогичные результаты (например, в автоклаве текучим паром, как это установлено в ISO 7218 и ISO 8199). Среды, которые ранее прошли обработку в автоклаве, рекомендуется снова нагревать в течение минимального времени, чтобы поддержать качество среды. Необходимо избегать перегрева и прекратить нагревание, если среда уже расплавилась, выдерживают на теплоустойчивой поверхности при комнатной температуре в течение короткого периода времени, например. 2 мин., перед помещением в водяную баню для охлаждения во избежание растрескивания стекла.

Охлаждают расплавленную среду до температуры от 47 до 50 ®С на водяной бане с контролем температуры, время, необходимое для достижения температуры от 47 до 50 *С. зависит от типа среды. объема и количества сосудов в водяной бане. Расплавленную среду рекомендуется использовать по возможности сразу, оставляя в таком состоянии не более чем на 4 ч. При работе с особо чувствительными средами время выдержки расплавленной среды следует сократить, и это должно быть установлено в соответствующем стандарте. Неиспользованную среду не следует подвергать вторичному затвердеванию для последующего использования.

Устанавливают и документируют режим нагрева агара путем установки термометра в авизованную среду в отдельном контейнере, аналогичном тому, который используется для испытуемой среды. Это зависит от количества и размеров контейнеров, помещенных в водяную баню.

Примечание — Среды, используемые е чашках Петри, следует нагреть до температуры от 44 до 47 *С или как это установлено в соответствующем стандарте. Используют водяную баню, установленную на температуру от 44 до 47 *С. Дополнительная информация, касающаяся использования и проверки водяных бань, приведена в ISO 7218.

4.5.2    Деаэрация питательных сред

Если необходимо обеспечить требуемое содержание воздуха (или кислорода), непосредственно перед применением нагревают питательную среду на кипящей водяной бане или текучим паром в течение 15 мин., приоткрыв крышку или колпачок; после нагревания плотно закрывают крышки и быстро охлаждают до необходимой температуры.

4.5.3    Введение дополнительных ингредиентов

Не устойчивые к нагреванию ингредиенты рекомендуется добавлять в среду после ее охлаждения до температуры ниже 50 *С. Если среда содержит агар, стерильному ингредиенту дают достичь ло меньшей мере комнатной температуры перед добавлением его в плотную среду. Холодные жидкости могут вызвать желатиниэацию агара или образование прозрачных хлопьев, при этом требуемое диспергирование не достигается. Следуют инструкциям изготовителя. Все добавленные в среду ингредиенты осторожно и тщательно перемешивают, а затем распределяют по конечным контейнерам ло возможности максимально быстро.

4.5.4    Приготовление плотных сред в чашках Петри

Разливают расплавленную агаровую питательную среду по чашкам Петри так. чтобы получить слой толщиной не менее 3 мм (например, для чашек диаметром 90 мм обычно требуется от 18 до 20 см3

11

ГОСТ ISO 11133—2016

агара), или как это установлено в соответствующем стандарте. При хранении чашек, или когда инкубирование длится более 72 ч. или когда температура инкубирования выше 40 *С, может потребоваться больший объем питательной среды. Дают агару охладиться и застыть, разместив чашки Петри с закрытыми крышками на холодной горизонтальной поверхности.

Готовые чашки с агаром следует хранить и использовать в соответствии с инструкциями изготовителя.

4.5.5 Приготовление среды для инокуляции

Для поверхностной инокуляции плотной питательной среды высушивают среду непосредственно перед использованием до тех пор. пока с поверхности среды не исчезнут капли. Слой среды не следует подвергать чрезмерному высушиванию.

При высушивании слоев среды важными являются следующие аспекты:

•    степень влажности питательной среды является принципиальной, поскольку оптимальный рост бактерий зависит от количества влаги внутри или на среде. Значительная потеря влаги может привести. например, к увеличению концентрации ингибирующих веществ в селективной питательной среде и снижению активности воды на поверхности среды;

•    при выращивании бактерий, которые не демонстрируют быстрый рост, и слои среды выглядят сухими после кондиционирования, ситуация такова, что высушивание не всегда является необходимым. В этом случае высушивание можно не проводить, поскольку это может только повысить вероятность загрязнения и приводит к ненужной потере влаги:

- температуру и время высушивания подбирают такими, чтобы вероятность загрязнения была минимальной и нагревание не повлияло бы негативно на качество питательной среды. Время высушивания зависит от степени присутствия конденсата в чашке Петри, и оно должно быть максимально коротким;

•    во избежание загрязнения и когда слои среды высушивают не в ламинарном боксе, среду всегда высушивают таким образом, чтобы поверхность среды, инокуляция которой будет проводиться, была перевернута вниз.

На практике допускается высушивание слоя среды переворачиванием агаровой поверхности вниз, при этом крышка чашки Петри должна быть полуоткрыта; в боксе установлена температура от 25 до 50 °С. Слои высушивают до тех пор. пока с поверхности крышек чашек Петри не исчезнут капли. При достижении этого высушивание прекращают. Слои агара допускается также высушивать, когда их поверхность направлена вверх, в безопасном ламинарном боксе (при комнатной температуре) в течение 30—60 мин., или выдерживать их в течение ночи при комнатной температуре с закрытыми крышками.

4.6    Инкубирование плотных сред в чашках Петри

В процессе инкубирования агаровые среды будут терять влагу. При определенных обстоятельствах это может повлиять на рост микроорганизмов. Факторами, влияющими на потерю влаги, являются состав среды, количество среды в чашке, тип термостата (например, термостат может быть оснащен устройством, обеспечивающим движение воздуха, или иными средствами), влажность атмосферы термостата, положение и количество чашек в термостате, температура инкубирования. Потерю влаги можно уменьшить путем размещения чашек в стопки, содержащие максимум шесть чашек, в пластиковые мешки с открытым верхом (во избежание избыточной конденсации). В качестве альтернативы влажность воздуха в термостате можно увеличить путем помещения открытой емкости с водой на дно прибора. В<зду в емкости следует часто менять, а емкость подвергать дезинфекции, чтобы не допустить заражения грибками.

4.7    Утилизация сред

Использованные питательные среды необходимо утилизировать безопасным способом, в соответствии с нормативными документами, действующими на территории присоединившихся стран.

5 Тест-микроорганизмы для эксплуатационных испытаний

5.1 Общие положения

Новые или пересмотренные стандарты устанавливают эксплуатационные испытания питательных сред, в том числе технические условия на контрольные штаммы и критерии приемлемости, в соответствии с требованиями приложения J.

12

ГОСТ ISO 11133—2016

5.2    Выбор тест «микроорганизмов

Набор тест-микроорганизмое должен содержать микроорганизмы со стабильными характеристиками. которые являются представительными для данного вида и которые демонстрируют надежность оптимальных эксплуатационных характеристик конкретной приготовленной среды. Данные тест* микроорганизмы должны прежде всего содержать штаммы, которые легко доступны при их получении из эталонной коллекции культур. Вместе с тем допускается использовать штаммы, выделенные в лаборатории. если они демонстрируют требуемые характеристики. Предпочтительно следует использовать штаммы, выделенные из пищевых продуктов или воды, однако не для всех коллекций культур имеется соответствующая информация об источнике штамма.

Соответствующие характеристики контрольной исходной культуры исследуют и записывают в лаборатории. Если имеют место различия в характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду при получении одной и той же среды от различных производителей и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась.

ВАЖНОЕ ЗАМЕЧАНИЕ — Пользователи могут запрашивать информацию, касающуюся изменчивости штаммов и их эксплуатационных свойств, в ISO, ТК 34 «Пищевые продукты», ПК 9 «Микробиология», РГ 5 «Питательные среды» через секретариат ISO/TK 34/Л К 9.

Тест-микроорганизмы, используемые для тестирования каждой среды, могут включать.

•    жизнестойкие положительные штаммы с типичными характеристиками целевого микроорганизма:

•    нежизнестойкие положительные штаммы:

- отрицательные штаммы, не проявляющие требуемых характеристик, присущих целевому микроорганизму (отрицательные характеристики);

•    штаммы, частично или полностью ингибированные.

В приложении Е приведены тест-микроорганизмы, которые используют в конкретных международных стандартах на пищевую микробиологию. В приложении F приведены тест-микроорганизмы, которые используют в конкретных межаународных стандартах на микробиологию воды.

Примечание — Некоторые национальные ограничения и директивы требуют использования свроваров. отличных от приведенных в данных таблицах. При выборе ceposapoe Salmonella ссыпаются на соответствующие требования национальных нормативных документов.

5.3    Консервация и поддержание жизнеспособности тест-микроорганизмов

5.3.1    Общие положения

Существует несколько методов, например лиофилизация. хранение на шариках при температуре минус 70 "С или с использованием жидкого азота, для успешного сохранения и поддержания всех микроорганизмов, имеющих отношение к микробиологии пищевых продуктов и воды. Один и тот же метод может не подойти ко всем штаммам. Приводятся также дополнительные методы сохранения микроорганизмов в соответствии с требованиями [14], (15). [36]. (37). (38).

Количество пересевов тест-микроорганизмов следует задокументировать, чтобы предотвратить избыточное субкультивирование, которое увеличивает риск фенотипических изменений. Одной операцией считается перенос материала жизнеспособной культуры в свежеприготовленную среду, при этом должен наблюдаться рост микроорганизмов. Любой способ субкультивирования рассматривают как форму переноса. Приводится дополнительная информация в соответствии с (27). [28), (35). (38).

В приложении В приведены блок-схемы (см. рисунки В.1 и 8.2) и дополнительная информация, касающаяся сохранения и приготовления тест-микроорганизмов.

5.3.2    Тест-микроорганизмы из коммерческих источников

При получении тест-микроорганизмое из эталонных коллекций или у коммерческих поставщиков, имеющих сертификацию по (2) или иную необходимую сертификацию, когда микроорганизмы находятся в своем оригинальном контейнере, следуют указаниям изготовителя относительно их культивирования и использования.

Лаборатории необходимо удостовериться, является ли доставленный штамм контрольным штаммом или контрольной исходной культурой, и установить, какое количество пересевов материала штамма проводилось до его получения. Соответствующую информацию документируют.

Лаборатория устанавливает наличие требуемых характеристик.

13

ГОСТ ISO 11133—2016

5.3.3    Контрольные исходные культуры, приготовленные в лаборатории

Контрольные исходные культуры, которые приготавливают из контрольных штаммов (см. приложение В. рисунок В.1) для проведения эксплуатационных испытаний, поддерживают и используют таким образом, чтобы свести к минимуму возможность перекрестного заражения, а также изменения типичных характеристик. Контропьные исходные культуры хранят несколькими порциями, как правило, либо сильно замороженными (например, при температуре ниже минус 70 °С), либо в лиофилиэирован-ном виде. При более высокой температуре возможны снижение жизнеспособности микроорганизмов и генетические изменения.

Характеристики роста культур должны быть подробно задокументированы для каждой партии среды, с указанием данных о микроорганизмах, используемых в качестве твсьмикроорганизмов.

Контрольные исходные культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов.

5.3.4    Исходные культуры

Исходные культуры готовят из лиофилизированных или сильно замороженных контрольных исходных культур (см. приложение В. рисунок В.2). С порциями культуры обращаются таким образом, чтобы не допустить возможного перекрестного заражения контрольной исходной культуры и/или ее порчи. Исходные культуры готовят путем ресуспенэирования порции контрольной исходной культуры в или на неселективной среде. Среду инкубируют до получения культуры в стационарной фазе.

Информация о хранении и документировании приведена в 5.3.3.

В случае коммерчески доступных систем сохранения строго следуют инструкциям изготовителя.

Исходные культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов или контрольных исходных культур.

5.3.5    Рабочие культуры

Рабочие культуры готовят из исходных культур или контрольных исходных культур и используют для приготовления инокулята для испытаний.

Рабочие культуры не допускается использовать для приготовления контрольных штаммов, контрольных исходных культур, исходных культур или для приготовления последующих рабочих культур.

5.4 Микроорганизмы для эксплуатационных испытаний

5.4.1    Общие положения

Соответствующие микроорганизмы для стандартных эксплуатационных испытаний приведены в приложениях Е и F.

Объемы инокулятов и количества микроорганизмов являются весьма важными параметрами (см. S.4.2.4 и 5.4.2.S).

Нижеприведенные руководящие указания даны в качестве примера методик, используемых для получения стандартных объемов инокулята для контроля качества питательных сред. Данные методики применимы в общем случае, однако для приготовления некоторых микроорганизмов может потребоваться создание особых условий, например, для анаэробов, галофильных. осмофильных или ксерофильных микроорганизмов, а также для тех. у которых особые требования к росту и питанию.

5.4.2    Приготовление

5.4.2.1    Приготовление исходных культур

При необходимости инокулируют плотную среду (например, триптонный соевый агар или кровяной агар) контрольной исходной культурой таким образом, чтобы образовались отдельные колонии. Инкубируют в соответствующих условиях: например, большинство аэробных бактерий инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 37 °С.

Проверяют чистоту данной плотной исходной культуры и используют ее в течение установленного времени (например, в течение 14 дней при определенной температуре во избежание значительных изменений в микроорганизмах).

5.4.2.2    Приготовление рабочих культур

Рабочие культуры готовят из контрольных исходных культур (или при необходимости из исходных культур), используя чистую культуру в стационарной фазе в неселективном бульоне. Для большинства аэробных бактерий это достигается после инкубирования в течение 18—24 ч.

Допускается приготовление рабочей культуры из коммерчески доступного эталонного образца (сертифицированного или несертифицироеанного), либо ее готовят в лаборатории. Концентрация при

14

ГОСТ ISO 11133—2016

готовленной суспензии должна быть стабильной и однородной в течение периода ее использования в соответствии с [71. [Ю), [111. [21]. [291. [30).

Допускается применение различных методик для обеспечения чистоты инокулята, его стандартизации. что позволит использовать его на последующих стадиях.

В зависимости от размера колоний отбирают одну или две колонии от среды с исходной культурой при помощи петли. Во избежание забора слишком большого количества инокулята рекомендуется использовать петлю, позволяющую отбирать 1 мм3 материала.

Инокулят переносят в неселективную жидкую среду (например, в триптонный соевый бульон f?SB]) и тщательно перемешивают.

Инкубируют в подходящих условиях в течение необходимого времени (например. 16—24 ч при температуре 37 °С в случае большинства аэробных бактерий).

Данную рабочую культуру используют в течение установленного времени (например, в течение максимум трех дней при соответствующей температуре, чтобы не допустить значительных изменений в структуре микроорганизмов).

Информация, касающаяся приготовления и хранения спор бактерий и грибков, используемых в качестве рабочих культур, приведена в [10]. [11). [24]. [25]. (30).

5.4.2.3    Приготовление суспензий (инокулята) для испытаний

Серию разведений готовят в разбавителе (например, в растворе Ringer с концентрацией, сниженной в четыре раза, пептонном солевом растворе), при этом выбирают самый оптимальный шаг разведения для получения требуемого количества микроорганизмов (КОЕ) в установленном объеме.

Разведение, требуемое для использования в качестве инокулята в испытаниях, определяют на основе предыдущих испытаний, все стадии которых проводились в четко определенных стандартизованных условиях.

Суспензию (инокулят) используют в течение установленного времени (например, в течение 2 ч при комнатной температуре или в течение 24 ч при хранении при температуре (5 ± 3) °С; допускаются более длительные периоды хранения, если была произведена проверка пригодности материала в соответствии с [10]. [21)).

Допускается использование замороженного инокулята, если будет показано, что данный микроорганизм способен выживать при низких температурах в течение установленного периода.

5.4.2.4    Объем инокулята

Объем инокулята, используемый для проведения количественных эксплуатационных испытаний, должен соотноситься с объемом, используемым в условиях испытаний для соответствующих сред.

В случае разбавителей и жидких сред, используемых для количественных испытаний, объем инокулята должен быть пропорционален объемам, используемым при применении соответствующих стандартов. и составляет 10 % от объема исследуемой среды.

5.4.2.5    Концентрация микроорганизмов в инокуляте

5.4.2.5.1    Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на производительность

5.4.2.5.1.1    Количественное испытание

В случае количественного испытания, когда проводят подсчет микроорганизмов, для достижения приемлемой точности требуется концентрация микроорганизмов приблизительно 102 КОЕ (см. таблицу 1). Для этого может потребоваться несколько чашек Петри.

Целесообразно применять диапазон от 80 до 120 КОЕ на чашку с минимальным количеством, равным 50 КОЕ на чашку. При использовании фильтров требуется то же самое количество КОЕ (используют один или несколько фильтров). В таблице 1 приведены значения 95-процентных доверительных интервалов, имеющих отношение к подсчету колоний.

В случае количественных ислытаний разбавителей и жидких транспортных сред необходимая концентрация микроорганизмов в инокуляте должна быть от 103 до 104 КОЕ. чтобы концентрация, равная приблизительно 100 КОЕ. была в объеме, распределяемом по чашкам.

Таблица 1 — Пределы 95-лроценткых доверительных интервалов для количества колоний, подчиняющихся распределению Пуассона по [21]. [26]

Количество подсчитанных колоний

Продольная точность {с точностно до процента)

Приблизительные пределы 95-процент* ных доверительных интервалов

500

19

455—545

400

1 10

360—440

15

ГОСТ ISO 11133—2016

Окончание таблицы 1

Количество подсчитанных колоний

Предельная точность <с точность» до процента)

Приблизительные пределы 95-процент* ных доверительных интервалов

320

± 11

284—356

200

± 14

172—228

100

±20

80—120

80

±22

62—98

50

±28

36—64

30

±37

19—41

20

±47

11—29

16

±50

8—24

10

±60

4—16

6

±83

1—11

5.4.2.5.1.2    Качественные испытания

Объем, используемый для испытания, должен содержать:

•    от 103 до 10* КОЕ для качественных испытаний сред, разлитых по чашкам;

•    не менее 100 КОЕ для испытаний на производительность сред обогащения или предварительного обогащения;

•    от 10* до 10е КОЕ для качественных испытаний плотных транспортных сред.

5.4.2.5.2    Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на селективность

При испытании на селективность питательной среды суспензию нецелевых микроорганизмов, содержащую от 10* до 10е КОЕ. инокулируют на слой среды в чашке или в пробирку со средой.

5.4.2.5.3    Концентрация микроорганизмов в инокуляте при испытаниях на специфичность

При количественном испытании на специфичность питательной среды в чашке используют инокулят с концентрацией микроорганизмов от 103 до 10* КОЕ.

5.4.2.6 Инкубирование

Питательную среду инкубируют в условиях, установленных в соответствующем стандарте. В приложении Е приведены условия инкубирования, используемые при применении конкретного международного стандарта на микробиологию пищевых продуктов, в приложении F приведены условия инкубирования, используемые при применении конкретного международного стандарта на микробиологию веды.

Информация, касающаяся предотвращения потерь влаги агаровой средой в процессе инкубирования. приведена в 4.6.

Минимальное допускаемое время инкубирования, установленное в настоящем стандарте, используют в отношении целееого(ых) микроорганизма(ое). в то время как максимальное допускаемое время инкубирования для определения селективности устанавливают в соответствующем стандарте.

6 Проведение эксплуатационных испытаний питательных сред

6.1 Общие положения

Нижеследующие подпункты содержат описание требований ко всем видам питательных сред. Они применимы независимо от размера партии.

В практических условиях пробы могут содержать микроорганизмы, подверженные стрессу. Следует принять во внимание, что пригодность среды в плане восстановления данных клеток микроорганизмов проводят в соответствии с [21], [31]—[33].

Качество питательной среды зависит от качества основных ингредиентов среды, правильности рецептуры, качества методики приготовления, степени отсутствия микробного заражения, а также от надлежащих условий упаковки и хранения.

Управлете качеством питательной среды адаптируют к целям использования среды (для количественных либо качественных испытаний). Перед использованием эксплуатационные характеристики

16

ГОСТ ISO 11133—2016

каждой партии питательной среды тестируют е соответствии с категориями сред, описанными е 6.4. Если перед использованием среды проведение испытания не представляется возможным по причине нестабильности среды или добавок, проводят параллельное эксплуатационное испытание наряду с испытанием пробы.

6.2    Определение физических и химических показателей

Готовая питательная среда должна иметь определенные физикохимические характеристики, как это установлено в соответствующих стандартах. Кроме того, оценка качества, проводимая визуально, должна гарантировать, что каждая питательная среда соответствует установленным рекомендациям, например, в том. что касается:

-    объема наполнения и/или толщины;

•    внешнего вида, цвета и однородности;

-    гелеобразной консистенции;

. содержания влаги.

Кроме того, необходимо определить значение pH.

Отдельные ингредиенты и любые питательные или селективные добавки также должны подвергаться оценке их качества.

6.3    Определение микробиологических показателей

6.3.1    Общие положения

Микробиологические эксплуатационные испытания проводят на пробах, которые являются представительными для партии конечного продукта по [6], [8]. [9]. [21].

6.3.2    Контрольная среда

В целях обеспечения надежности результатов эксплуатационных испытаний используемая контрольная среда должна иметь стабильное высокое качество.

Пользователю необходимо выполнить следующие условия:

•    использовать количественный стандартный образец (см. 3.4.6). содержащий четко установленное количество микроорганизмов, при определении качества контрольной среды;

-    использовать установленный процесс приготовления, в том числе переплавку (при необходимости);

•    контактировать с одним и тем же изготовителем (или другим источником), который осуществляет поставку сред или их ингредиентов;

•    использовать широкий спектр тест-микроорганизмов в работе (включая выявляемые микроорганизмы);

-    выбирать нужную контрольную среду для определения качества:

-    проводить требуемые процедуры, гарантирующие обеспечение качества среды, используемой в качестве контрольной.

При оценке пригодности контрольной среды нет необходимости учитывать все вышеуказанные аспекты. Лаборатория должна обосновать выбор конкретной методики.

Подходящие тест-микроорганизмы, методы контроля и критерии приемлемости для контрольной среды триптонного соевого агара (TSA) приведены в приложениях Е и F. При выполнении вышеуказанных условий допускается использовать другие неселективные контрольные среды.

6.3.3    Микробное заражение

В зависимости от размера партии питательной среды испытывают требуемое количество среды на наличие или отсутствие микробного заражения (на стерильность), проводя инкубирование в определенных условиях.

Испытуемой пробой должна быть как минимум одна чашка Петри или пробирка, если партия небольшая (менее 100 шт.). В случае более крупных партий изготовители должны разработать спецификации. например на основе ингредиентов среды, параметров и пределов процессов и типа упаковки, используя соответствующие допустимые пределы качества. Дополнительная информация приведена в [6]. конкретных национальных стандартах и других источниках по [9]. [21].

Критерии приемлемости устанавливают и подтверждают для каждой среды.

6.4 Общие требования для микробиологических эксплуатационных испытаний

6.4.1 Общие положения

Для проведения оценки партии готовой питательной среды, питательных ингредиентов или добавок надлежащим образом оценивают параметры роста при помощи количественных или качественных методов, как это установлено в настоящем стандарте.

17

ГОСТ ISO 11133—2016

Плотные, полужидкие и жидкие среды инокулируют подходящим объемом (см. S.4.2.4) рабочей культуры, содержащей определенный тест-микроорганизм. используя подходящее устройство: действуют в соответствии с методикой инокуляции, установленной в соответствующих стандартах (см. приложения Е и F).

В настоящем стандарте приведены примеры количественных и качественных методов испытаний плотных и жидких питательных сред. Допускается выбор любого из приведенных методов, однако нет необходимости использовать все методы.

В случае, когда питательную среду предстоит использовать для целей подсчета, испытания проводят количественными методами.

При оценке новой среды или среды, поставляемой новым изготовителем, рекомендуется проводить количественные методы испытаний для получения дополнительной информации, чтобы обнаружить возможные изменения свойств среды.

В случае жидких сред взаимодействия, приводящие к успешному росту микроорганизмов, являются более сложными и. таким образом, выбор методов эксплуатационных испытаний будет менее очевиден, чем для плотных сред.

Информация о комбинации испытаний плотных сред с мембранными фильтрами приведена в ISO 7704.

Предполагается, что пользователь ознакомлен с основами микробиологических методов и соответствующие методы максимально не деталиэироааны.

Соответствующие тест-микроорганизмы, методы контроля и критерии приемлемости приведены в приложениях Е и F.

Частоту проведения испытаний устанавливает конечный пользователь, принимая во внимание масштабы приготовлений в лаборатории, а также уровень обеспечения качества в лаборатории.

6.4.2    Среды, готовые к использованию

Изготовители коммерчески доступных сред, готовых к использованию, особенно тех. которые соответствуют ISO 9001. должны иметь действующую программу качества и могут выпускать сертификат качества, поставляемый вместе со средой, в этом случае пользователю может не потребоваться проведение всесторонних испытаний данных сред, однако необходимо гарантировать, что условия хранения соблюдаются такими, какие были рекомендованы изготовителем.

В отношении готовых к применению сред, в которые внесены добавки и которые проходят контроль со стороны изготовителя в соответствии с настоящим стандартом, рекомендуется провести как минимум качественные испытания.

Пользователь должен быть уверен, что изготовители коммерчески доступных сред, готовых к использованию, имеют действующую программу качества для данного вида продукции и выпускают сертификаты управления качеством, соответствующие требованиям настоящего стандарта, в которых приведены ожидаемые и полученные результаты. Лаборатория пользователя также проверяет документированные данные, гарантирующие, что критерии приемлемости изготовителя, касающиеся эксплуатационных испытаний, соответствуют внутренним требованиям лаборатории.

Чтобы удостовериться, что качество сред сохраняется в процессе их транспортирования, проводят периодические проверки.

Также проводят проверки сред после их хранения и дальнейших операций со средами в лаборатории пользователя (например, плотные среды расплавляют). Частота данных проверок должна быть обоснована.

В случае не полностью готовых сред, добавки к которым вносят в лаборатории пользователя (см. 3.3.5.1). необходимо проведение дополнительной проверки — либо проверяют результаты производительности. либо проводят качественное испытание, чтобы убедиться, что была внесена подходящая добавка.

6.4.3    Среды, приготовленные из коммерчески доступных обезвоженных рецептур

Для сред, используемых для подсчета, проводят количественное испытание. Для других типов сред часто бывает достаточным качественное испытание. Количественные испытания обеспечивают большую степень гарантии качества среды.

Для сред, которые не приводятся в приложениях Е и F. процедуры контроля качества должны быть установлены в соответствии с нижеприведенными рекомендациями.

В отношении сред, которые не содержат индикаторов или селективных агентов, допускается использовать ограниченное количество штаммов. Если среды содержат индикаторы или селективные агенты, следует использовать штаммы, демонстрирующие функции индикаторов и селективность. Для

18

ГОСТ ISO 11133—2016

сложных сред, т. е. содержащих добавки, каждую партию среды проверяют с использованием штаммов с характеристиками, приведенными в S.2.

6.4.4 Среды, приготовленные из базовых индивидуальных ингредиентов

В дополнение к требованиям, изложенным в 6.4.3. количественные испытания проводят с целью мониторинга трендов состояния качества базовых материалов, производительности среды и при ведении внутренних протоколов лаборатории.

6.5    Оценка эксплуатационных характеристик и интерпретация результатов

Партия питательной среды демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики. если все используемые тест-микроорганизмы проявляют свои свойства в соответствии с установленными спецификациями. Партия считается приемлемой, если основные и микробиологические критерии качества соблюдены.

Если удовлетворительные эксплуатационные характеристики не достигнуты, см. приложение Н. где приведены возможные причины данного несоответствия.

6.6    Среды и реактивы для подтверждения

6.6.1    Среды для подтверждения

Эксплуатационные характеристики питательных сред, используемых для тестов на подтверждение. должны проверяться до их использования. Соответствующие положительные и отрицательные тест-микроорганизмы необходимо использовать для проверки таким образом, как это описано в конкретном стандарте (см. [9]. [16]).

6.6.2    Реактивы для подтверждения

Перед использованием среды выполняют проверку на функциональность с использованием растворов для окраски по Граму. реактивов Ковача. VP. нитрита, оксидаэы. каталазы и других реактивов, применяемых для демонстрации биохимических характеристик. Соответствующие положительные и отрицательные штаммы необходимо использовать для проверки, следует установить срок хранения. Для проведения тестов на подтверждение рекомендуется использовать реактивы аналитической степени чистоты. При использовании реактивов из коммерческих источников следуют инструкциям изготовителя в том, что касается хранения и использования реактивов (см. [18]. [19]).

7 Методы эксплуатационных испытаний плотных питательных сред

7.1 Общие положения

Настоящий раздел содержит описание количественных и качественных эксплуатационных испытаний плотных питательных сред, приведенных в стандартах на пищевые продукты и воду. Данные методы являются основными и пригодными для большинства питательных сред. Методы могут быть непригодными для испытаний некоторых видов сред, используемых для роста плесеней. В приложении С приведены итоговые блок-схемы каждого метода.

7.2 Методы количественных испытаний

7.2.1    Методы количественных испытаний — определения

7.2.1.1    Производительность

Производительность должна достигать определенною минимального предела (см. соответствующий конкретный международный стандарт или приложения Е и F).

См. приложение G для использования контрольных графиков при мониторинге эксплуатационных характеристик плотных питательных сред согласно методике, приведенной ниже.

Для количественных методов коэффициент производительности i>R (см. [21]) вычисляют по формуле:

w0

(1)

где .\'s — общее количество колоний, полученных в или на питательной среде, подвергнутой испытанию. например, количество колоний в чашках.

>v0 — общее количество колоний, полученных в или на определенной контрольной питательной среде. в одной или нескольких чашках: оно должно быть приблизительно 100 КОЕ (см. 5.4.2.5.1).

19

ГОСТ ISO 11133—2016

Интерпретация результатов приведена в 7.2.2.1.2.

7.2.1.2    Селективность

Селективные питательные среды и неселективную контрольную среду инокулируют различными разведениями нецелееого(ых) микроорганизма(ов).

Коэффициент селективности sF (см. {22]) вычисляют по формуле:

SF = D0-Dst    (2)

где Dq — максимальное разведение, демонстрирующее рост на неселективной контрольной среде;

0$ — максимальное разведение, демонстрирующее сопоставимый рост на селективной испытуемой среде;

£р D0 и выражены в единицах tog10.

Примечание — Например, если о0 равно 104(= togto4.0) и Ds равно 10® (* log10 3.0). то коэффициент селективности 5р = 1.0.

Интерпретация результатов приведена в 7.2.2.1.2.

7.2.2    Количественный метод для плотных питательных сред

7.2.2.1    Общие положения

Данный протокол требует использования бактериальной суспензии с возможностью подсчета бактерий (которая может являться количественным стандартным образцом или испытуемой суспензией), имеющей требуемую концентрацию микроорганизмов целевого штамма. Выход микроорганизмов от новой партии питательной среды сравнивают с выходом микроорганизмов в неселективной питательной среде (контрольной среде) или в особых случаях от предварительно принятой партии среды того же состава.

7.2.2.1.1    Методика

a)    используют рабочие культуры и инокуляты известной требуемой концентрации целевого штамма. а также при необходимости нецелевого штамма, как это описано в 5.3.2. или подходящий стандартный образец;

b)    для одного микроорганизма используют одну или несколько чашек. Их количество зависит от размера партии, достоверности методики установления гарантии качества, надежности и количества микроорганизмов в испытуемой суспензии. Оператор в лаборатории должен привести обоснование выбранного количества чашек:

c)    следует убедиться, что поверхность слоев среды должным образом высушена (см. 4.5.5);

d)    проводят инокуляцию путем распределения инокулята по поверхности среды или методом мембранной фильтрации, чтобы получить количество, которое попадает в диапазон с рекомендуемыми пределами, приведенными в 5.4.2.5.1, для количественного испытания.

Для получения в чашках колоний, подлежащих подсчету, допускается также использовать модифицированный поверхностный капельный метод Miles — Misra. другие системы добавления по каплям или спиральный дозатор.

•    Метод поверхностного посева в чашках используют для питательных сред, обычно используемых для подсчета таким образом.

-    Контрольную среду или чашки со средой предварительно принятой партии инокулируют аналогичным образом.

•    Чашки инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах.

-    Проводят подсчет колоний, присутствующих в каждой чашке. Оценивают размер и внешний вид колоний, выросших в или на среде в условиях испытаний при сравнении с ростом на неселективной питательной среде (контрольной среде) или на предварительно принятой партии среды того же состава.

7.2.2.1.2    вычисления и интерпретация результатов

В случае количественного испытания с подсчетом для достижения приемлемой точности (см. таблицу 1) необходим уровень приблизительно 100 КОЕ. Это может потребовать использования более одной чашки Петри.

Результаты считают действительными при выполнении следующих условий:

•    для каждой чашки должен быть получен положительный количественный результат (целевой бактериальный рост);

•    каждый отдельный заявленный результат попадает в стандартный диапазон анализа (не более 100 колоний для методов с фильтрацией и не более 150 колоний для поверхностных методов).

20

ГОСТ ISO 11133—2016

С целью интерпретации результатов вычисляют коэффициент производительности pR (см. 7.2.1.1) и при необходимости коэффициент селективности sF (см. 7.2.1.2).

a)    PR должен быть не менее 0,50 при сравнении селективной среды с неселективной контрольной средой, приведенной в приложениях Е и F. pR должен быть не менее 0,70 при сравнении неселективной среды с неселективной контрольной средой или как это установлено в стандарте или приложениях Е и F. Это также имеет место в особых случаях, когда сравнение проводят с предыдущей партией.

b)    Если PR превышает 1,4. устанавливают причину этого.

c)    Sf для нецелевых микроорганизмов должен быть не менее 2.

В особых случаях см. приложения Е. F и J. Данные критерии могут быть неприменимы к средам, которые не указаны в приложениях Е и F. например, к тем. которые описаны в региональных стандартах.

7.2.2.2 Использование стандартных образцов при проверке роста микроорганизмов

Применяют стандартные образцы (RM). сертифицированные стандартные образцы или стандартные образцы, произведенные в лаборатории, для получения стабильной бактериальной суспензии, содержащей известное количество колониеобразующих единиц целевых или нецелевых штаммов. Количество микроорганизмов, выросших на новой партии питательной среды, сравнивают с ожидаемым количеством КОЕ в стандартном образце, сертифицированном стандартном образце или стандартном образце, произведенным в лаборатории.

Для расчета допускаемых пределов можно использовать критическую разность (см. [34]). См. таблицу 1.

Информация о приготовлении и оценке внутренних стандартных образцов приведена в [21] и [29].

Качество стандартных образцов проверяют с использованием контрольной среды.

7.3    Испытания питательных сред, используемых для мембранной фильтрации

Проводят предварительную оценку качества используемых мембранных фильтров в соответствии с ISO 7764. чтобы установить их пригодность для использования.

При тестировании эксплуатационных характеристик питательных сред применительно к мембранной фильтрации используют рабочие культуры и инокуляты, как это описано в 5.4.2. Инокулируют среду-суспензию. е том числе жидкость-разбавитель, стерильную воду инокулятом с требуемой концентрацией микроорганизмов, приведенной в 5.4,2.5.

Жидкость фильтруют в соответствии с требованиями конкретного стандарта. Мембрану помещают на поверхность агара, который испытывают. Инокулируют достаточное количество мембран/слоее с целью получения в сумме приблизительно 100 КОЕ для испытаний на производительность. Процедуру повторяют с использованием новой мембраны и помещают вторую мембрану на поверхность контрольной среды, используя разведения, если они требуются для испытаний на селективность. Посевы инкубируют в соответствии с конкретным стандартом.

Данную процедуру повторяют каждый раз. когда меняют партию мембран или используют новую партию среды.

При необходимости с целью оценки влияния мембраны на результаты тестовый инокулят также распределяют по испытуемой среде и контрольной среде в отсутствие мембран.

7.4    Методы количественных испытаний

7.4.1    Количественный метод посева штрихом

7.4.1.1    Методика

Рабочие культуры и инокуляты используют согласно 5.4.2.

При определении производительности и специфичности используют слой испытуемой среды и проводят штриховой посев каждого тест-микроорганизма таким образом, чтобы получить отдельные колонии.

При определении селективности используют один слой испытуемой среды и проводят штриховой посев каждого тест-микроорганизма, прочерчивая единичную прямую линию при помощи петли, позволяющей отбирать 1 мм3 материала, на поверхности испытуемой среды. Для некоторых тест-микроорганизмов допускается проводить штриховой посев на том же слое среды в виде параллельных линий, избегая пересечений. Линии должны быть различимы, чтобы позволить наблюдение типичной морфологии. Допускается применять и другие стандартизованные методы штрихового посева.

Чашки инкубируют в условиях, установленных в конкретном стандарте.

21

ГОСТ ISO 11133—2016

7.4.1.2    Интерпретация результатов

Интенсивность роста на слое после инкубации оценивают следующим образом:

•    0 соответствует нулевому росту;

•    1 соответствует слабому росту (либо сокращению роста или размеров колоний):

•    2 соответствует выраженному росту.

Целевые микроорганизмы должны соответствовать уровню 2 и иметь характерный внешний вид. размеры и морфологию колоний. В испытании на селективность степень ингибирования зависит от типа среды. Рост нецелевых микроорганизмов должен быть частично или полностью подавлен.

7.4.2    Определение специфичности

Определение термина «специфичность» приведено в 3.2.6. Специфичность питательной среды — возможность при определенных условиях выявить существенные видимые физиологические характеристики. позволяющие отличить данные микроорганизмы по размеру и морфологии колоний, а также выявить их присутствие, отсутствие и/или степень выраженности биохимических реакций. Требования к рабочим культурам и инокулятам приведены в 5.4.2.

7.4.3    Другие количественные методы для плотных сред

Допускается использовать другие количественные методы {см. {9]. [21]).

8 Методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред

8.1    Общие положения

Настоящий раздел описывает количественные и качественные методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред. Блок-схема каждого метода приведена в приложении С.

8.2    Количественный метод эксплуатационных испытаний жидких питательных сред

с использованием пробирок (метод разведения до нулевого уровня)

8.2.1    Общие положения

Настоящий метод является основным методом, который допускается использовать для неселективной или селективной жидкой среды. Он также пригоден для проведения эксплуатационных испытаний жидких сред, используемых для подсчета, например, в методах наиболее вероятного числа.

8.2.2    Приготовление серии разведений

-    Выбирают репрезентативное количество пробирок (см. 6.3.1).

•    Готовят подходящую серию разведений из рабочей культуры целевых или нецелевых микроорганизмов в подходящем разбавителе, как это описано в ISO 6887-1 и ISO 8199. так. чтобы в наибольшем разведении (кулевой уровень) микроорганизмы отсутствовали (например, от 10'1 до Ю'10). Наиболее часто используют серию десятичных разведений, тем не менее серии разведений с шагом 1/5 или 1/2 также являются пригодными.

-    Серию разведений используют в течение установленного времени (см. 5.4.2.3).

•    8 течение времени выполнения работы переносят заданный объем (например. 0.1 см2 каждого разведения) на поверхность неселективной агаровой среды и распределяют по поверхности.

-    Инкубируют в заданных условиях с целью обеспечения роста конкретного микроорганизма.

•    Проводят подсчет количества колоний на поверхности агаровой среды для наименьшего разведения. содержащей не более 150 колоний, а также количество колоний для последующих разведений: результаты записывают.

8.2.3    Методика испытания жидкой среды

-    Отбирают количество пробирок с испытуемой средой, соответствующее количеству пробирок серии разведений.

•    Используя разведения, приготовленные по 8.2.2 и начиная с наибольшего разведения, иноку-лируют заданный объем суспензии тест-микроорганизма (например. 0.1 см3) в соответствующую пробирку со средой.

•    Пробирки инкубируют в условиях, установленных в соответствующем стандарте (см. 5.4.2.6).

•    После инкубирования при помощи петли, удерживающей объем материала 10 мм3, пересевают материал каждой пробирки с инкубированной средой (при этом каждый раз используют новую петлю) на неселективную агаровую среду.

-    Инокулированные слои инкубируют в условиях, обеспечивающих эффективный рост микроорганизмов.

22

ГОСТ ISO 11133—2016

•    После инкубирования исследуют каждый посев на наличие или отсутствие роста.

Примечание — Для целевых микроорганизмов, как правило, достаточно использовать разведения от 10~S до 10~в Для нецелевых микроорганизмов, как правило, достаточными являются разведения от 10'1 до 10~4.

8.2.4 Вычисления и интерпретация результатов

Производительность жидкой обогатительной среды является удовлетворительной, если наблюдается выраженный рост целевого микроорганизма (не менее 10 КОЕ из 10 мм3 материала петли) из разведений, которые позволяют получить менее 100 КОЕ при посеве 100 мм3 на поверхность среды.

Для селективных жидких сред определяют коэффициент селективности SF на основе наибольшего разведения рабочей культуры, демонстрирующего выраженный рост (не менее 10 КОЕ) на слое агара, и наибольшего разведения инокулироеакной селективной жидкой среды, демонстрирующей отсутствие роста (или рост менее 10 КОЕ) нецелевого микроорганизма на неселективном агаровом слое. Значение Sf должно быть не менее 2.

Примечание — Дополнительные методы количественного испытания жидких сред применительно к оценке разрабатываемых сред или в сравнительных исследованиях приведены в приложении I.

8.3 Качественный метод эксплуатационных испытаний жидких селективных

питательных сред с использованием пробирок

8.3.1    Общие положения

В данном методе используют целевые, нецелевые либо смесь целевых и нецелевых микроорганизмов в одной пробирке.

8.3.2    Методика

-    Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит 10 см3 среды или 10 см3 порции из каждой партии для испытаний (см. 3.1.2 и 6.3.1). Действуют в соответствии с процедурой, описанной ниже, в соответствии с требованиями, установленными в приложениях Е и F.

-    Приготовление инокулятов см. 5.4.2.3.

•    Инокуляция целевым микроорганизмом: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона инокулятом. содержащим £ 100 КОЕ целевого микроорганизма, и перемешивают.

•    Инокуляция нецелевым микроорганизмом: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона одним микроорганизмом при помощи инокулята с высокой концентрацией микроорганизма (> 1000 КОЕ) и перемешивают.

-    Инокуляция целевым и нецелевым микроорганизмами в одной пробирке, когда это требуется в соответствии с приложениями Е и F или когда проводят оценку новой среды или нового изготовителя: инокулируют одну пробирку испытуемого бульона целевым микроорганизмом в количестве £ 100 клеток и большим количеством нецелевых микроорганизмов (2 1000 клеток на каждую пробирку) и перемешивают.

•    Пробирки инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах (см. 5.4.2.6).

-    Отбирают петлей материал (приблизительно 10 мм3) из пробирки, содержащей целевой микроорганизм. и проводят посев штрихом на слое неселективной среды (например. TSA).

•    При использовании смешанной культуры целевого и нецелевых микроорганизмов отбирают петлей материал (приблизительно 10 мм3) и проводят посев штрихом на слое среды, специфичной для целевого микроорганизма.

•    Отбирают петлей материал (приблизительно 10 мм3) культуры нецелевого микроорганизма и проводят посев штрихом на поверхность селективной среды (например. XLO).

•    Посевы инкубируют в условиях, установленных в конкретных международных стандартах.

При использовании больших объемов среды пользователь может принять решение о пропорциональном увеличении размера инокулята с тем. чтобы были получены эквивалентные результаты.

8.3.3    вычисления и интерпретация результатов

Производительность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если наблюдается выраженный рост (не менее 10 КОЕ или линия сплошного роста) целевого микроорганизма на среде, специфичной для данного микроорганизма.

Селективность испытуемого жидкого бульона является удовлетворительной, если наблюдается отсутствие роста (или менее 10 КОЕ) нецелевых микроорганизмов на поверхности неселективной агаровой среды.

23

ГОСТ ISO 11133—2016

8.4 Качественный метод эксплуатационных испытаний жидких сред с использованием

одной пробирки (определение мутности)

8.4.1    Общие положения

Настоящий метод пригоден для эксплуатационных испытаний неселективных жидких питательных сред и селективных сред, используемых для испытаний с подтверждением (например, бульона с бриллиантовым зеленым, желчью и лактозой [BGBLB). см. [41]). Метод является чисто качественным, и подсчитанные баллы являются только ориентировочными. По сути, мутные среды могут тестироваться данным методом, если только с них пересевают на плотную среду с тем. чтобы продемонстрировать наличие роста.

Для прозрачных сред использована следующая градация:

•    0 соответствует отсутствию мутности;

•    1 соответствует незначительной мутности;

-    2 соответствует выраженной мутности.

8.4.2    Методика

8.4.2.1    Среда предварительного обогащения

-    Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит 10 см3 среды или 10 см3 порции каждой испытуемой партии (см. 3.1.2 и 6.3.1).

•    При эксплуатационных испытаниях среды предварительного обогащения, например буферной пептонной воды (BPW), инокулируют среду подходящим объемом инокулята (см. конкретный стандарт), содержащим s 100 КОЕ. добавляя инокулят непосредственно в испытуемую среду.

•    Приготовление инокулятов см. 5.4.2.3.

•    Пробирку инкубируют в условиях, установленных в конкретном стандарте (см. S.4.2.6).

•    Исследуют среду на наличие роста микроорганизмов.

8.4.2.2    Подтверждающая среда

•    При эксплуатационных испытаниях жидкой подтверждающей среды испытуемую среду инокулируют суспензией рабочей культуры (содержащей > 10е КОЕ/см3) при помощи петли, позволяющей отбирать 1 мм3 материала.

•    Пробирку инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах (см. 5.4.2.в).

•    Если неинокулированная среда изначально мутная, проводят пересев на плотную среду, инкубируют слои в условиях, установленных в конкретных стандартах, и исследуют среду на наличие роста.

8.4.3 Интерпретация результатов

•    Качественную оценку проводят визуально, наблюдая выраженную мутность (т. е. на уровне 2). что соответствует выраженному росту (см. 8.4.1). Качественную оценку непрозрачных сред при приготовлении проводят, наблюдая рост на плотной среде.

Примечания

1    В некоторых случаях рост микроорганизмов можно наблюдать только как агрегацию клеток или образование осадка из клеток на дне пробирки или бутылки. В данном случае улучшить оценку и интерпретацию может тщательное встряхивание.

2    При помощи данного метода можно также определять другие характеристики, такие как газообразование или изменение цвета.

9 Методы эксплуатационных испытаний разбавителей

и транспортных сред

9.1    Общие положения

Микробиологические эксплуатационные испытания проводят на пробе, которая является репрезентативной для партии конечного продукта (см. 6.3.1).

9.2    Метод испытаний разбавителей

9.2.1    Метод количественного испытания разбавителей

9.2.1.1    Общие положения

Данный метед определяет способность разбавителя обеспечивать выживаемость микроорганизмов при отсутствии нежелательного размножения или сокращения их количества в течение периода контакта с разбавителем до посева на агар или инокуляции в жидкую среду.

24

ГОСТ ISO 11133—2016

9.2.1.2    Методика

Инокулируют испытуемую порцию (например. 9 см3) разбавителя 1 см3 суспензии тест» микроорганизма, содержащей приблизительно 104 КОЕ/см3. и перемешивают (информация, касающаяся приготовления инокулята, приведена в 5.4.2). Незамедлительно отбирают 0.1 см3 инокулированного разбавителя и распределяют по поверхности неселективного агара (контрольная среда), например, среды TSA (to).

Выдерживают инокулированный разбавитель при комнатной температуре в течение периода времени. установленного в соответствующей части ISO 68S7 (все части) или ISO 8199. который длится с момента окончания приготовления исходной суспензии и до момента, когда инокулят начинает контактировать с питательной средой (как правило, 45 минут). Перемешивают, отбирают тот же самый объем (0,1 см3) и повторно проводят посев на контрольной среде (Ц).

Контрольную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени (например, при температуре 30 °С в течение 72 ч).

9.2.1.3    Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают колонии в чашках и t,.

Количество микроорганизмов, ц. после инкубирования разбавителя должно быть в пределах ± 30 % от первоначального количества (t^.

9.3    Метод испытания транспортных сред

9.3.1    Общие положения

Настоящий метод устанавливает способность транспортной среды обеспечивать выживаемость инокулированных микроорганизмов в течение периода транспортирования при отсутствии нежелательного размножения или сокращения их количества.

Если транспортные системы оснащены устройством отбора проб, его используют для инокуляции транспортной среды. В иных случаях инокуляцию проводят в условиях, которые имеют место на практике.

Инокулироеанную транспортную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте [12]. [13].

Пример — Транспортные системы для транспортирования проб в условиях пониженной температуры тестируют при температуре (513) °С, когда период транспортирования стандартный (например, составляет 24 ч до проведения повторного посеве).

9.3.2    Метод количественных испытаний жидких транспортных сред

9.3.2.1    Методика

Порцию пробы (например, объемом 10 см3) жидкой транспортной среды инокулируют подходящим тест-микроорганизмом, для которого используется среда. Количество микроорганизмов для каждой пробирки на 10 см3 должно составлять от 103 до 104 клеток: инокулят готовят по 5.4.2. Незамедлительно отбирают 0.1 см3 инокулированкой среды и распределяют ее по поверхности неселективной агаровой среды (контрольной среды), например. TSA^).

При инокуляции транспортной системы устройством для отбора проб устройство помещают в подходящий объем (например, для тампонов — 0,1 см3) разведения рабочей культуры (содержащей от 103 до 104 клеток) приблизительно на 10 с и затем инокулируют транспортную среду устройством для отбора проб. Незамедлительно отбирают 0.1 см3 инокулированной жидкой транспортной среды и распределяют ее по поверхности неселективной агаровой среды (контрольной среды), например. TSA (l^.

Инокупироаакные транспортную и контрольную среды инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте: например, транспортную среду — при температуре 25°С в течение 5 сут., контрольную среду — при температуре 30 X в течение 3 сут. После этого повторно проводят посев на контрольной среде (t,).

9.3.2.2    Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают колонии в чашках t0 и t,.

Количество микроорганизмов, t,. после инкубирования транспортной среды должно быть в пределах ± 30 % от первоначального количества (Iq).

9.3.3 Метод количественных испытаний плотных транспортных сред

9.3.3.1 Методика

Инохулируют порцию пробы плотной транспортной среды подходящим тест-микроорганизмом, для которого используется среда. Количество микроорганизмов в инокуляте должно составлять от 10до 10е клеток; инокулят готовят по 5.4.2.

25

ГОСТ ISO 11133—2016

При инокуляции транспортной системы устройством для отбора проб устройство помещают е подходящий объем (например, для тампонов — 100 мм3) разведения рабочей культуры (содержащей от 104 до 10е клеток) приблизительно на 10 с и затем инокулируют транспортную среду устройством для отбора проб.

Икокулированную транспортную среду инкубируют при заданной температуре и в течение определенного периода времени, как это принято на практике или установлено в конкретном стандарте. Пересевают на неселективную агаровую среду (контрольную среду), например TSA. и инкубируют, как это принято на практике или установлено е конкретном стандарте.

9.3.3.2 Считывание и интерпретация результатов

После инкубирования исследуют неселективную агаровую среду на наличие роста микроорганизмов.

После инкубирования должен наблюдаться заметный рост.

10 Документирование результатов испытаний

10.1    Информация, предоставляемая изготовителем

Изготовитель или поставщик питательных сред по требованию должен предоставить конкретные характеристики роста микроорганизмов, а также основную информацию, касающуюся конкретной партии питательной среды.

10.2    Прослеживаемость

Все данные по повседневным эксплуатационным испытаниям должны быть задокументированы надлежащим образом и храниться в течение необходимого периода времени в соответствии с используемой системой качества. Для документирования и оценки результатов испытаний рекомендуется использование контрольных диаграмм (см. приложение D).

26

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение А

(справочное)

Обозначение ингредиентов питательных сред в международных стандартах на микробиологический анализ пищевых продуктов, кормов для животных и воды

А.1 Общие положения

С целью гармонизации описания различных ингредиентов питательных сред в мжробиопогических методах, изложенных в международных стандартах. ISO/TK 34/ПК 9 одобрил использование нижеприведенных обозначений.

А.2 Пептоны

-    Ферментативный перевар казеина.

Примечание — Данный препарат содержит панкреатический или пептический перевар казеина, триптический перевар казеина и триптон;

•    ферментативный перевар сои или соевого шрота:

•    ферментативный перевар животных тканей.

Примечание — Данный препарат содержит мясной пептон, пептичесхий перевар мяса, панкреатический перевар мяса:

•    ферментативный перевар сердца:

•    ферментативный перевар желатина:

•    ферментативный перевар животных и растительных тханей.

Примечание —Данный препарат содержит грипгозу;

-    кислотньм гидролизат казеина.

А.З Экстракты и настойки

•    Мясной экстракт и мясная настойка;

•    сердечно-мозговой экстракт и сердечно-мозговая настойка:

•    дрожжевой экстракт.

А.4 Агар

Бактериологический агар.

А.5 Другие препараты

•    Эмульсия яичного желтка;

•    сухое обезжиренное молоко:

•    цельная, дафибринироаанная или лизированная кровь, кровяная мука, плазма, фибриноген, гемин определенных видов животных:

•    бычья желчь для бактериологических целей;

•    желчные соли.

Примечание — В том числе желчные соли № 3.

27

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение В

(обязательное)

Приготовление контрольных (эталонных) исходных культур и рабочих культур

В.1 Приготовление контрольной (эталонной) исходной культуры из контрольного (эталонного) штамма

Проверка и архивирование

документации

Воспроизвел® согласно тструшиям изготовителя* *

Посев на агаре с овечьей кровью (S %). TSA-arape или другой подходящей плотной среде

Проверка чистоты и характеристик штамма*

Приготовление суспензии а подходящей среде*

I

Распределение по криопробиркам” м замораживание*

X

Эталонная исходная культура'

Рисунок В.1 — Блок-схема приготовления контрольной (эталонной) исходной культуры из контрольного (эталонного) штамма

а Как правило, повторное суспвнзирование в питательном бульоне и время контактирования для оживления. ь Проверка морфологии колоний и окраски по Граму или идентификация с использованием биохимических тестов. с Например, криоэащитная среда, такая как TSB с добавкой от 10 до 15 % (по объему) гтцерина. d Криопробирки могут содержать шарики.

*    Замораживание при температуре ниже минус 70 °С позволяет хранить длительное время. Срок хранения при более высоких температурах ограничен (36).

*    Может также использоваться как рабочая культура.

28

ГОСТ ISO 11133—2016

В.2 Приготовление рабочей культуры из контрольной (эталонной) исходной культуры

Рисунок В.2 — Блок-схема приготовления рабочей культуры из контрольной (эталонной) исходной культуры *

а Проверяют и архивируют документы, в том числе проверяют прослеживаемость по контрольному штамму и иные соответствующие характеристики в случае, если контрольная исходная культура получена из стороннего источника.

ь Данная процедура предпочтительнее.

с Данная процедура может быть необходима для некоторых штаммов, например, для количественных испытаний. Документируют все стадии.

d Например, инокулируют пробирку со средой TSA. TSA с овечьей кровью или другой подходящей средой, инкубируют в течение 24 ч и хранят при подходящей температуре (от 18 до 25 °С или от 2 д о 8 ®С в зависимости от вида микроорганизмов) в течение четырех недель [36].

* Например, криозащитная среда, такая как TSB с добавкой от 10 до 15 % (по объему) глицерина. Замораживание при температуре ниже минус 70 °С позволяет хранить длительное время. Срок хранения при более высоких температурах ограничен [36].

29

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение С

(обязательное)

Блок>схемы методов эксплуатационных испытаний

С.1 Общие положения См. раздел 7.

С.2 Количественный метод для плотных питательных сред: производительность и селективность (см. 7.2.2 и рисунок С.1)

Обозначения:

Рп — коэффициент производительное!и:

Sf — коэффициент селективности.

Коэффициент производительности PR можно использовать при сравнении:

a)    несете (пивной среды с неселективной контрольной средой:

b)    селективной среды с неселективной контрольной средой:

c)    селективной среды с селективной контрольной средой.

Примечание — Информация, касающаяся инкубирования (см. третью ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4,2.6.

Рисунок С.1 — Блок-схема количественных испытаний плотных питательных сред

30

ГОСТ ISO 11133—2016

С.З Количественный метод эксплуатационных испытаний жидких обогатительных сред с использованием пробирок. Метод разведения до нулевого уровня (см. 8.2 и рисунок С.2)

Примечание — Информация, касающаяся инхубирования (сы. пятую ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.

Рисунок С.2 — Блок-схема проведения эксплуатационных испытаний жидких обогатительных сред

(с разведением до нулевого уровня)

31

ГОСТ ISO 11133—2016

С.4 Качественный метод для жидких селективных обогатительных сред с использованием одной пробирки (используют целевые, нецелевые или смесь целевых и нецелевых микроорганизмов в одной пробирке) (см. 8.3 и рисунок С.З)

Примечание — Информация, касающаяся инкубирования (см. пятую ячейку каждой колонки данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.

Рисунок С.З — Блок-схема метода качественных испытаний для жидких селективных обогатительных сред с использованием одной пробирки

32

ГОСТ ISO 11133—2016

С.5 Качественный метод для неселективных и селективных жидких сред с использованием одной пробирки: определение мутности (см. 8.4 и рисунок С.4)

При необходимости проверяют наличие признаков бактериального роста в каждой жидкой среде (например, наличие газообразования, изменение цвета).

Примечание — Информация, касающаяся инкубирования (см. третью ячейку данной блок-схемы), приведена в 5.4.2.6.

Рисунок С.4 — Блок-схема качественного испытания жидких сред с использованием одной пробирки (определение мутности)

33

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение D

(справочное)

Пример карточки записи результатов испытаний питательных сред

D.1 Пример карточки записи результатов испытаний питательных сред приведен в таблице 0.1. Таблица 0.1

Контрольная карточка внутренних испытаний качества питательных среа

Питательная среда:

Объем:

Дата розлива:

Внутренний код партии:

Обезвоженная среда (и код):

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Добавка:

Поставщик:

Партия

Количество:

Дата/подпись:

Подробная информация о промессе

Контроль физического качества

Ожидаемый внешний вид обезвоженной питательной среды:

Цвет нормальный

Сыпучесть высокая

Качество подтверждено: да а нет а

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемое значение pH:

Измеренное значение pH:

Качество подтверждено: да а нега

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемое количество среды иГили толщина слоя:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да а нага

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемый цвет:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да а нега

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемая прозречность/на-личие оптических аномалий:

Наблюдается:

Качество подтверждено: дао нега

Дефекты:

Дата/подпись:

Ожидаемая стабильностъ/кон-систенция/влажность теля:

Наблюдается:

Качество подтверждено: да а кет а

Дефекты:

Дата/подпись:

Микробное заражение

Количество испытуемых чашек или пробирок:

Инкубирование:

Результат:

Качество подтверждено: дао нет а

Количество зараженных чашек или пробирок:

Дата/подпись:

Мифобиологический рост — Производительность

Метод контроля: количественный а качественный а

Штаммы: Инкубирование: Контрольная среда:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено: да о нет а

Дата/подпись:

34

ГОСТ ISO 11133—2016

Окончание таблицы D. 1

Контрольная карточка внутренних испытаний качества питательных среа

Микробиологический рост — Селективность

Метод контроля: количественный □ качественный з

Штаммы: Инкубирование: Контрольная среда:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено: да о нет о

Дата/подпись:

Микробиологический рост — Специфичность

Метод контроля: количественный о качественный а

Штаммы: Инкубирование: Контрольная среда:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено: да а нет а

Дата/подпись:

Разрешение на выпуск партии

Информация о храненмт:

Разрешение на выпуск партии да а нега

Дата/подпись:

35

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение Е

(обязательное)

Тест «микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, которые широко используют в пищевой микробиологии

В настоящем приложении приведена информация о питательных средах, условиях культивирования, тест-микроорганизмах. номерах культурной коллекции тест-микроорганизмов и ожидаемых реакциях при проведении эксплуатационных испытаний питательных сред.

Для проведения испытаний отбирают определенные штаммы с целью гарантирования схожести результатов в разных лабораториях и облегчения демонстрации различий между средами (от партии к партии, а также в зависимости от изготовителя). Данные штаммы прошли всестороннюю оценку с целью гарантирования их пригодности и стабильности при эксплуатации.

В случае, когда приводится более чем один штамм в каждом аспекте эксплуатационных испытаний (производительность. селективность, специфичность), должны как минимум использоваться штаммы, обозначенные символом Ь. Коммерческие и некоммерческие поставщики предполагают использование дополнительных штаммов, например, указанных е таблице Е.1. чтобы более обоснованно гарантировать качество поставляемых литательшх сред.

Таблица Е.1 была составлена с учетом контрольных штаммов, используемых в Европейской фармакопее (ЕР), и рекомендаций, касающихся питательных сред для пищевой микробиологии рабочей группы Международного комитета по пищевой микробиологии и гигиене (ICFMH). Эти критерии должны быть включены е конкретные международные стандарты при их разработке и пересмотре в будущем. Вапидированной партией питательной среды является партия, которая демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики. Номера штаммов, указанные в таблице Е.1. заимствованы из каталога универсальных идентификаторов штаммов, составленных Всемирным центром данных по микроорганизмам (WOCM) [20]. Данный каталог содержит данные о контрольных штаммах, представленных каждым номером WDCM. а также контактные данные о культурных коллекциях. Все приведенные среды описаны е европейских и международных стандартах.

Если имеют место различия 8 характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду (например, при получении одной и той же среды от различных производителей) и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась. Пользователи могут запрашивать соответствующую информацию, касающуюся изменчивости штаммов, у РГ 5 «Питательные среды» ISOtfK 34Л1К 9 через секретариат ISO/TK 34/ПК 9.

36

Таблица Е.1 —Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред широко используемых в пищевой микробиологии

Свлектиыые соедь> для подсчете микроорганизмов

Свела*

Тип*

Микроорганизм

Междупарадный стандарт

Функция

Ижубиро-

вение

Контрольный

штамм

номер

WOCM«

Контрольная среда

Метод

контроля

Критерии

Харастерная реакция

Агар для Listens в соответствии с Oita via г* и/tgosf

s

Listeria

monocyto

genes

ISO 11290-2

Произво

дитель

ность

(44*4)ч/

(37*1)«С

Listeria monocyto -genesib Usteria monocyto genes 1/2a

OOQ21b

00109

TSA

Коли

чест

венный

Pr*0.5

Сине-зеленые колонии с непрозрачным ореолом

Селектив

ность

Escherichia

coif1

Enterococcus

becabsf1

00012 или 00013

00009 или 00087

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

Специ

фичность

Usteria

mnocua

00017

Качест

венный

Сине-зеленые колонии без непрозрачною ореола

Baird*

Parker

$

Коагулаэа* положительный стафилококк

ISO 6888-1

Произво

дитель

ность

<24*2)ч-(4812)ч/ <37 * 1) ®С

Staphylococcus aureus

00034ь

00032

TSA

Коли

чест

венный

ряа0.5

Черные или серые колонии с прозрачным ореолом (реакция просветления с ЯИЧНЫМ желтхом)

Селектив

ность

(48*2)ч/ (37 * 1)*С

Escherichia

coif1

00012

00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

Специ

фичность

(24*2)ч-(48*2)ч/ (37 ± 1) °С

Staphylococ

cus

Saprophyttcus Staphylococ cus epidermkts

00159^

00036

Качест

венный

Черные или серые колонии без реакции просветления сяичным желтхом

BGBLB

L

Колиформы

ISO 4831

Произво

дитель

ность

(24* 2)ч-(48 ±2)ч/ (37 * 1) °С

Escherichia сой

Citmbacter

freundii

00012й 00013 00006

Качест

венный

Мутность (2)'и газообразование в пробирке Дорхема

Газообразование и мутность

и

ч

ГОСТ ISO 11133—2016

w Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчета микрооргмизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

ф)м«иия

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная соеда

метод

контроля

критерии

харФтерная реакция

BGBLB

L

Колиформы

ISO 4831

Селектив-

ность

(24 t 2)ч-(48*2)ч/ {37 * 1) «С

En/eracoccus

foecabtf*

00009

00087

КвЧвСТ-

еенный

Частичное ингибирование без газообразования

CFC

S

Pseuabmonas

ЗДР

ISO 13720

Произво

дитель

ность

(44 ±4)ч/ (25 * 1) *С

Pseudomonas fluoresce л$ Pseudomonas tragi

00115е

00116

TSA

Коли

чест

венный

8яг0.5

Селектив

ность

Escherichia

colfl

00012

00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

DG18

S

Дрожжи и плесени

ISO 21527-2

Произво

дитель

ность

5сут/ {25 ± 1) *43

Sacchammy-ces cerevisiae WaBemia sebi Aspergillus mtrictus Eurotium rubrum

00058й

00182й

00163

00184

SDA

Коли

чест

венный

Р„г0.5

Характерные для каждого вида коло-нии/ростки

Селектив

ность

Escherichia

cob

00012

ИЛИ

000139

КвЧвСТ-

еенный

Отсутствие роста

Bacillus subbbs subspt sptzizenu

00003

DRBC

S

Дрожжи и плесени

IS021527-1

Произво

дитель

ность

5сут/ (25 * 1) *С

Saccharomy-ces cerevisiae Asperglius brasibensis С злобой a B>i cans

Mucor racemo-sus

00058F

00053Р

00054

00181

SDA

Коли

чест

венный

Pr* 0.5

Характерные для каедого вида коло-нии/ростки

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчета микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

DRBC

S

Дрожжи и плесени

IS021S27-1

Селектив

ность

5сут/ (25 ± 1) *С

Escherichia

сой

BadOus subilis subsp. spizizenii

00012 или 000139

00003

Качест

венный

Отсутствие роста

ЕС

L

Eschenchta

cob

ISO 7251

Проиэео*

стель

ность

(24 ±2)ч-(48 ±2)ч/ (44 ± 1)°С

Escherichia cob

00012°

00013

Качест

венный

Мутность (2)*и газообразование 8 пробирке Дорхема

Газообразование и мутность

Селектив

ность

Pseudomonas

aeruginosa

00025

Качест

венный

Отсутствие роста

IS («TS»)

S

Сульфитре-

Аудирующие

бактерии

ISO 15213

Произво

дитель

ность

(24 ±3)ч-(48 ±2)ч/ (37 ± 1) *С анаэробная атмосфера

Clostridium

periringens

000076

00080

TSAwih другая населен ти 8-ная среда для анаэробных бактерий

Коли

чест

венный

рйг0.5

Черные колонии

Специ

фичность

Escherichia

colfl

00012

00013

Качест

венный

Отсутствие

почернения

LST

L

Колиформы

ISO 4631

Произво

дитель

ность

<24 ±2)ч-(46 ±2) ч/ (Э0±1)*С

Escherichia cod'

Citrobacter

freundii

00012°

00013

00006

Качест

венный

Мутность (2)* и газообразование в

Газообразование и мутность

Селектив

ность

пробирке

Дюрхема

Enterococcus

taecahtf*

00009

00087

Качест

венный

Отсутствие роста

ГОСТ ISO 11133—2016

§ Продолжение таблицы Е.1

Селехтиыые среди для подсчет* микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«иИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

харФтерная реакция

1ST

1

Eschenctw

cob

ISO 7251

Произво

дитель

ность

(24* 2) ч-{48 ±2) ч/ (37 * 1) ®С

Eschencbia cob

00012й

00013

Качест

венный

Мутность (2)6 и газообразование в пробирке Дюрхема

Газообразование и мутность

Селектив

ность

Enterococcus

foecabtf3

00009

00087

Качест

венный

Отсутствие роста

тССОА

$

Campylo

bacter

IS010272*2

Произво

дитель

ность

(44*4)* (41.5 * 1) «С, микроаэроб-ная етмос-

Campylobacter

jejunfi

Campylobacter

col/3

00156

00005

00004

Кровяной

агар

Коли

чест

венный

0.5

Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском

Селектив

ность

фера

Eschencbia

col/3

00012 или 00013

Качест

венный

Staphylococcus aureus

00034

Качествен шй

MRS

S

Lacbcadd

bacteria

ISO 15214

Произво

дитель

ность

(72*3)* (30 ± 1) ‘С

Lactobacillus

sakei

Lactococcus

lactis

Pedococcus

pentoeaceus

0001 & 00010 00158

Партия среды MRS уже вали-дирована

Коли-

чвст-

еенный

Р** 0.7

Колонии, характерные для каждого вида

Селектив

ность

(72 ±3)* (30 ± 1) *С

Escherichia

col/3

Bacibuscereus

00012 или 00013

00001

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

МУР

S

Bacillus

cereus

ISO 7932

Произво

дитель

ность

{24±3)ч-(44 ±4)* (30 * 1) *С

BaciBus cereus

00001

TSA

Коли

чест

венный

Р„г0.5

Розовые колонии с ореолом осадка

Селектив

ность

(44*4)* (30 ±1) *С

Escherichia

coif3

00012 или 00013

Качест-

ванный

Полное ингибирование (0)

•—

Специ

фичность

Bacillus subtihs subsp. spizrzenii

00003

Качест

венный

Желтые колонии без ореола осадка

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчета микрооргмизмав

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

ФИКЦИЯ

Ижубиро-

еание

КОНТРОЛЬНЫЙ

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

харФтернвя реакция

RPFA

S

Сооди

lase-positive

staphylococci

ISO 6688-2

Проиэво-

стель

ность

(24 t 2) ч -(4812)ч/ (37 11) *С

Staphylococ cus aureus

00034°

00032

TSA

Коли

чест

венный

рй 2 0.5

Черные или серые колонии сореолом мутности

Селектив

ность

(4812) ч/ (37 11) ’С

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

Специ

фичность

(2412)ч-(4812)4/ (37 11) *С

Staphylococ

cus

Saprophyticus Staphylococ -cusepidermids

0015SP

00036

Качест

венный

Черные илиоерые колонии без ореола мутности

РРА

S

Pseudomonas

$№

ISO/

TS 11059

Произво

дитель

ность

(4812)4/

(25 11)*С

Pseudomonas

flu&escens

Pseudomonas

aeruginosa

00115°

00025

TSA

Коли

чест

венный

рн 2 0.5

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

ТВХ

S

м-

Glucttonl

dasepostdve

Escherichia

COB

IS016649-1 и

IS016649-2

Произво

дитель

ность

(2113)ч/ (44 11) *С

Escherichia

coif1

00012й

00013s

00202°

TSA

Коли

чест

венный

Р„2 0.5

Синие колонии

Селектив

ность

Enterococcus

faecalid1

00009

00087

Качествен шй

Полное ингибирование (0)

Специ

фичность

Citrobacter

freundii

Pseudomonas

aeruginosa

00006P

00025

Качест

венный

Колонии от белого до эе лен <ъбе левого цвета

TSC (SC)

S

Clostridium

perfringens

ISO 7937

Произво

дитель

ность

(2012)4/ (37 11) *С анаэробная атмосфера

Clostridium

perfringens

00007°

00080

TSA или другая неселективная среда для анаэробных бэстерий

Коли

чест

венный

Ря2 0.5

Черные колонии

ГОСТ ISO 11133—2016

i§ Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчет* микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международные стандарт

ФИКЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

TSC (SC)

S

Clostridium

pertmgens

ISO 7937

Селектив

ность

|20±2)ч' {37 ± 1) *С анаэроб-

Escherichia

coif*

00012 или 00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

паи aiM^v*

фера

Pseudomonas

aeruginosa

00025

VRBG

S

Enterobacten а свае

IS021528-2

Произво

дитель

ность

(24±2)чГ (37 ±1) *С

Escherichia cob Salmonella T^phimuriunPSalmonella Enteritid^’

00012*

00013

00031

00030

TSA

Коли

чест

венный

ряго.5

Колонии от розового до красного цвета с или без ореола осадеа

Селектив

ность

Enterococcus beeabsfl

00009

00087

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

VRBL

S

Колиформ-ные бактерии

ISO 4832

Произво

дитель

ность

(24 ±2) s' {30 * 1)*С

Escherichia cob

11

TSA

Коли

чест

венный

ряг 0.5

Пурпурно-красные колонии с или без ореола осадка

Селектив

ность

Enterococcus

toecabrP

00009

00087

Качест

венный

Полное ингибирование (0)

Специ

фичность

Pseudomonas

aeruginosa

00025

Качест

венный

Колонии, имеющие окраску от бесцветной до бежевой

Неоелективные среды для подсчета микроорганизмов

РСА

МРСА

S

Подсчет

колоний

ISO 4633

Произво

дитель

ность

(72±3)ч/ {30 ± 1) *С

Bacillus siibblts subsp. Spizizenii Escherichia cob Staphylococcus aureus

00003*

00012*

00013

00034

TSA

Коли

чест

венный

ря й 0.7

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчета микрооргмизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная соеда

метод

контроля

критерии

хара<терная реакция

Селективные среды для обогащения

Во ft on

L

Campylo

bacter

ISO 10272-1

Произво

дитель

ность

(5± 1)ч/ (37 ± 1) *С затем (44 *4)sf (415 * 1) ‘С микроаэроб' ная атмосфера

Campylobacter

jejunfl

Campylobacter

coli

* Escherichia coif*

* Proteus mirabibs

00156 или 00005 00004

00012

00013

00023

Качест

венный

> 10 колоний на mCCDA

Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском

Селектив

ность

Escherichia

coff1

Proteus

mirabibs

00012

00013

00023

Качест

венный

Полное ингибирование (0) наТ$А

ЕЕ

1

Enterabacten -асеае

IS021528-1

Произво

дитель

ность

(2412)^ (37 ± 1) ‘С

Escherichia cob

* Enterococcus faecabsP

000126 00013 00009 или 00087

Качест

венный

> 10 колоний на VRBG

Колонии от розового до красного цвета с или без ореола осадка

Salmonella Typhimuriumi Salmonella Enteritidist * Enterococcus teecalig*

00031

или

00030

00009 или 00087

Селектив

ность

Enterococcus taecabs4

00009 или 00087

Качест

венный

Полное ингибирование (0) naTSA

*

w

ГОСТ ISO 11133—2016

£ Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчет* микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

ФИКЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

Fraser

l

Listeria mono cytogenes

ISO 11290-1

Произво

дитель

ность

(48±2)ч/

{37 ±1)*С

bsferia monocyto genes 4b + Escherichia сов1

* Enterococcus becalisf3

00021b

00012 или 00013 00009 или 00087

Качест

венный

более 10 колоний на агаре для Listeria в соответствии с Ottaviarn nAgosl

Сине-зеленые колонии сореолом мутности

Listeria monocytogenes 112a * Escherichia col/3

* Enterococcus taecaliS3

00109

00012 игм 00013 00009 или 00087

Селектив

ность

Eschenchia

col/3

00012 или 00013

*■*

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(O)HaTSA

Enterococcus

faecalitf3

00009 или 00087

Качест

венный

< 100

колоний на TSA

Giofitt Can tori

L

Coagu-

lase-positive

staphylococci

ISO 6888-3

Произво

дитель

ность

{24 ±2)ч-(48 ±2) ч/ (37 ± 1) ‘С

Staphylococcus aureus ♦ Escherichia СОЙ3

00034й

00012 или 00013

Качест

венный

>10

колоний на Baird Parker или RPFA

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 6888-1

для Bard Parker и ISO 6888-2 щи RPFA)

Staphylococcus aureus + Eschenchia col/3

00032

00012 игм 00013

Селектив

ность

48 ±2)ч/ (37 ± 1) *С

Eschenchia

col/3

00012 игм 00013

"

Качест

венный

Полное ингибирование (0) на TSA

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчета микрооргмизмав

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

Half-

Fraser

L

Listens monocytogenes

ISO 11290-1

Произво

дитель

ность

(24 * 2)ч/ (30 * 1) *С

Listens /полосу» -gene$4b ♦ Escherichia coif1

* Enterococcus faecalis^

00021b

00012 ит 00013 00009 или 00067

Качест

венный

более 10 колоний на агаре для Listeria в соответствии с Ottavian и Agosfc

Сине-зеленые колонии сореолом мутности

Listeria monocytogenes 1/2e ♦ Escherichia coif1

* Enterococcus taecabtf1

00109

00012 или 00013 00009 и гм 00087

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное ингибирование (0) на TSA

Enterococcus feeca(is41

00009 или 00067

Качест

венный

< 100

колоний на TSA

ГТС

L

Yersinia

enlemcotitica

ISO 10273

Произво

дитель

ность

(44 ±4)ч' {25 ± 1) *С

Yersinia ел -lerocohtica

*    Escherichia

coif1

♦    Pseudomo

nas

aeruginosa

00038°

00012

и гм 00013 00025

Качест

венный

более 10 колонии на CIN или SSDC

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

Селектив

ность

Pseudomonas Aeruginosa Proteus mira-biis

00025

00023

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)на

TSA

*

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчета микроорпыизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны*) стандарт

Ф)М«иИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

МКТТп

1

Salmonella

ISO 6579

Произво

дитель

ность

(24t3W

(37 11) *С

Salmonella

Entarithfsfb

Salmonella

Typhimuriurrf1*

♦    Escherichia

coif1

*    Pseudomo nas aeruginosa

00030

00031

00012 или 00013 00025

Качест

венный

> 10 колоний на XLD

или другой выбранной среде

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 6579)

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Частичное

ингибиро

вание

s 100

колоний на TSA

Enterococcus

faecalis?

00009 или 00087

Качест

венный

< 10 колоний HaTSA

MSRV*

SS

Salmonella

ISO 6579

Произво

дитель

ность

2 - {241 3) W

(41.5i1)*C

Salmonella

Enter/tict's?'

Salmonella

TyphimuriutrP'

00030

00031

Качест

венный

Серобелая мутная зона, распространяющаяся от инакули-роеантх капель (кат гм). По истечении 24—48ч мутная зона (зоны)

ПОЧТИ

полностью

распро

страняется

по чашке

Возможные явления: характерные колонии после субкугътивирова-нияна XL [ж

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчета микрооргмизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

MSRV*

SS

Salmonella

ISO 6579

Селектив

ность

2(24±ЗК {41.5 ± 1)*С

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Возможный рост в зоне инокули-ровэнных капель (капли) без зоны мутности

Enterococcus

toecabd1

00009 или 00087

Качест

венный

Отсут

ствие

роста

MMG

L

P-d-

Glucuroni-dasepositive E. cob

ISO 16649-3

Произво

дитель

ность

{24±2)ч' (37 ±1)*С

Escherichia cob

00012й

00013

Качествен шй

Выработка

кислоты

Изменение окраски на желтую

Селектив

ность

Enterococcus

toecabsP

00009 мм 00087

Качест

венный

Отсут

ствие

роста

PSB

L

Yersinia

enterocolitica

ISO 10273

Произво

дитель

ность

3-5 сут/ {25 * 1) *С

Yersinia en teroco&ica

*    Escherichia

COlP

*    Pseudomo

nas

aeruginosa

0003&

00012

иш 00013 00025

Качест

венный

> 10 колоний

HaCIN или SSDC

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

Yersinia ел -ferocoWica

♦    Escherichia

coif1

♦    Pseudomo

nas

aeruginosa

00160

00012

00013 или 00025

*

•ч

ГОСТ ISO 11133—2016

§ Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчета микрооргмизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«иИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная соеда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

PSB

1

Versmia

enterocolioca

ISO 10273

Селектив

ность

3-5 сут1 {25 * 1) *С

Pseudbmonas

Aeruginosa

Proteus

mirabibs

00025

00023

Качест

венный

Полное

жгибиро-

вание

(0)на

TSA

RVS

L

Salmonella

ISO 6579

Произво

дитель

ность

(24±3)ч^ (41,5 ± 1) *С

Salmonella

Ententtitf3*

Salmonella

Typhimuhurrf3j

*    Escherichia

cob

♦    Pseudomo

nas

aeruginosa

00030

00031

00012 или 00013 00025

Качест

венный

> 10 колоний на XLD или другой выбранной среде

Колонии, характерные для каждой среды

(см. ISO 6579)

Селектив

ность

Eschenchia

cob3

00012 и/ы 00013

Качест-

Jb-КЧ. I.M

winom

Частичное

ЖГИбИрО-вание S 100 колоний на TSA

Enterococcus

feecabs*

00009 или 00087

Качест

венный

< 10 колоний на TSA

TSPB

L

Bacillus cere us

ISO 21871

Произво

дитель

ность

(48±4)н' (30 ± 1) *С

вас/«us cere us

00001

Качест

венный

более 10 колоний на PEMBA или МУР

Колонж, характерные для каждой среды

(см. IS021871)

Селектив

ность

Escherichia

cob3

00012 или 00013

Качест

венный

Полное

жгибиро-

вание

(0)на

TSA

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Свлвктимыв среди для подсчета микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«иИЯ

Ижубиро-

ванна

КОНТРОЛЬНЫЙ

штамм

Номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

Критерии

характерная реакция

Неселективные жидше среды

BHI

L

Коагулаза-положительные стафилококки

ISO 6888-1 ISO 6888-3

Произво

дитель

ность

<24*2)ч/ (37 * 1) ‘С

Staphylococcus aureus

00034

Качест

венный

Мутность

(1-2)'

Bruce la

1

Campylo

bacter

ISO 10272 (все части)

Произво

дитель

ность

2-5 сут1 (41.5 * 1) *С м икроаэробная атмосфера

Campylobacter

jejunf*

Campylobecter

coif*

00156

00005

00004

Качест

венный

Мутность

(1-2)'

Разбавители для специальных целей. Например. BPW сбромо-крезолом пурпуровым

L

Разбавители

ISO 6887 (все части)

Разбави

тель

45 мин-1 ч/ 20-25 *С

Escherichia

coif*

Staphylococ cus aureus

00012 или 00013 000346

TSA

Качест

венный

*30% колоний/ г0(*ЭО% от первоначального количества)

Раствор Ring его концент-ра^ей. сниженной 8 4 раза

ГТептон-ньй раствор

Пептоновая соль

Фосфатный буферный раствор

L

Разбавители

ISO 6867 (все части)

Разбави

тель

45 кын-1 ч/ 20—25 *С

Escherichia

coif*

Staphylococcus aureus

00012 или 00013 000346

TSA

Коли

чест

венный

*30% колоний/ г0 (* 30 % от первоначального кол иче-ства)

ГОСТ ISO 11133—2016

g Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчет* микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная соеда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

Тиогги-

КОЛЬ

l

Clostridium

pertingens

ISO 7937

Произво

дитель

ность

(21±3)ч/

(37 ±1)*С

Clostndium

perlnngens

00007

Каче

ствен

ный

Мутность

(1-2)'

TSYEB

L

Listeria mono

cytogenes

IS011290 (все части)

Произво

дитель

ность

(21±3)ч/ (25 ± 1) *С

Ustena monocyte-genesAb Ustena monocytogenes 1/2a

00021»

00109

Каче

ствен-

НЬ*1

Мутность

(1-2)’

Селективные среды для выделения

Агар для listeria Ottavram и

Ago si/

S

Listeria monocytogenes

ISO 11290-1

Произво

дитель

ность

(44 ±4)ч/ (37 ± 1) *С

Ustena monocyto -genes 4b Listeria monocytogenes 1/2a

00021»

00109

Каче

ствен

ный

Выраженный рост (2)

Сине-зеленые колонии сореолом мутности

Селектив

ность

Escherichia

coif3

Enterococcus

faecafi^3

00012 и/ы 00013 00009 или 00087

"

Каче

ствен

ный

Полное

ингибиро

вание

(0)

"

Специ

фичность

Ustena

innocua

00017

Каче

ствен

ный

Сине-зеленые колонии без ореола мутности

mCCDA

S

Campylo

bacter

ISO 10272 (вое части)

Произво

дитель

ность

(44 ±4)ч/ (41.5 ± 1) *С микроаэробная

Campylobacter

jejunf3

Campylobacter

coif3

00156

00005

00004

Каче

ствен

ный

Выраженный рост (2)

Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском

Селектив

ность

Escherichia

coif3

000012 him 00013

Каче

ствен

ный

Частичное и гы полное ингибирование (0-1)

Характерные колонии отсутствуют

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектимые среди для подсчет* микроорлыизмае

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

mCCDA

S

Campylo bade г

ISO 10272 (все части)

Селектив

ность

(44 ±4) ч^ (41.5 ± 1) *С микро-аэробная атмосфера

$ерлу<осос Cus aureus

00034

Каче

ствен

ный

Полное

ингибиро

вание

(0)

CT-SMAC

S

Escherichia

саб

0157

ISO 16654

Произво

дитель

ность

(21 ±3)4f (37 ±1) *С

Escherichia cob 0157: H7

00014 (меток си-когеншй штамм)

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Прозрачные колонии. имеющие бледную желтовато-коричневую кораску диаметром около 1 мм

Селектив

ность

Staphylococ

cusaureusf3

00032 или 00034

"

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

"

Escherichia

coif1

00012 иш 00013

Качест

венный

Частичное

ингибиро

вание

(1)

Рост некоторых розовых КОЛОНИЙ

CIN

SSDC

S

Yersinia ел-lerocoblica

ISO 10273

Произво

дитель

ность

(21 ±3W (30 ±1) *С

Yersinia en -terocoBtica

00038°

00160

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Колонии, характерные для каждой среды (см. ISO 10273)

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное или частичное ингибирование (0-1)

Характерные колонии отсутствуют

Staphylococ cus aureus

00034

"

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

ГОСТ ISO 11133—2016

Ц Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчет* микроорлыизмав

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Ф)М«иИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

СРС

тСРС

S

Виды Vib hOSpp. отличные от Vibrio

Parahaemolyt-icus и Vibrio chol -ото

ISO/

TS 21872-2

Произво

дитель

ность

(24±3)ч/ {37 ±1) *С

Vibrio vulnificus

00187е

Качест

венный

Выражений рост (2)

Желтые колонии, окруженные желтой окраской среды

Vibrio cholerae за

исх no че ни ем 01 и 0139

00203°

Качест

венный

Выраженный рост (?)

Пурпуровые колонии, окружежые пурпуровой окра-ежой среды

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012.

или 00013. и гы 00090

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

MYPI

S

Bacillus core us

ISO 21871

Произво

дитель

ность

{21 ±3)ч-48 ч/

(30 ±1) *С

Bacillus corpus

00001

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Розовые колонии с ореолом осадка

Селектив

ность

(44 ±4)ч/ {30 ± 1) *С

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

Специ

фичность

Bacillus subtBis subsp.

sptzizenii

00003

Качест

венный

Желтые колонии без ореола осадка

PEMBA

S

Bacillus

corpus

ISO 21871

Произво

дитель

ность

{21 ±3)ч-{44 ±4) ч/ (37 ± 1) *С

Bacillus corpus

00001

Качест

венный

Выраженный рост (21

Бирюзово-синие колонии сореолом осадка

Селектив

ность

(44 ±4)ч/ (37 ± 1) *С

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

Специ

фичность

Bacillus subtilis subsp. spizizenii

00003

Качест

венный

Белые колонии без ореола осадка

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчет* микроорпыизмсй

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны*) стандарт

ф)м<иия

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

SDS

S

Виды Vib riospp.. отличные от Vibrio

parahaemolyt icusn Vibrio cholerae

ISO/

TS 21872-2

Произво

дитель

ность

(24 ±3)ч/ (37 ±1)*С

Vibrio vulnificus

00187й

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Пурпуровые/эе-леные колонии с ореолом мутности

VJbno cholerae за

исключением 01 и 0139

00203P

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Желтые колонии с ореолом мутности

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012, или 00013. или 00090

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

TBXI

S

B-d-

Ghjaroni-

daseposriive

Escherichia

cob

IS016649-3

Произво

дитель

ность

(21 ±3)ч/ (44 ± 1) *С

Escherichia

colt

ooS

888

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Синие колонии

Селектив

ность

Enterococcus

feecaftsd

00009 или 00087

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

Специ

фичность

CHrobacter

freundH

Pseudomonas

aeruginosa

0000€P

00025

Качест

венный

Колонии, имеющие окраску от белой до зелено-бежевой

VRBQi

S

Enlerobacleri -aceae

IS021528-1

Произво

дитель

ность

(24 ± 2)ч/ (37 ± 1) *С

Escherichia ccti Salmonella Typhimuriunf Salmonella Typhimunurrf

00012й

00013

00031 или 00032

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Колонии от розового до красного цвета с или без ореола осадка

Селектив

ность

Enterococcus

taecebsf1

00009 или 00087

'

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

'

ГОСТ ISO 11133—2016

g Продолжение таблицы Е.1

Селектиыые среди для подсчета микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны*) стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

еание

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

XLD

S

Salmonella

ISO 6579

Произво

дитель

ность

(24±3)W

{37 ±1)*С

Salmonella 7yphimuriutrfl* Salmonella Еп(егНкЬ&

00031

00030

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Колонии, имеющие черный центр нелегка прозрачную зону красноватого цвета из-за изменения цвета среды

Селектив

ность

Escherichia

col/1

00012 или 00013

Качест

венный

Рост или частичное ингибирование (0-1)

Желтые колонии

Enterococcus

faecabsfl

00009 иш 00087

"

Качест

венный

Полное

ингибиро

вание

(0)

"

Неселективные среды для выделения

Nuinem ag art

S

Enterohacien

aceae

ISO 21528 (все части)

Произво

дитель-

(24±2)чГ (37 ± 1) ‘С

Eschenchia cob

00012й

00013

Качест

венный

Выраженный рост (2)

Salmonella

ISO 6579

nUwl D

{24±2)ч/ {37 ±1)*С

Salmonella

Typhimuriun/lj Salmonella Enter itiefis4-’

00030

00031

Yersinia en-lerocolitica

ISO 10273

(24±2)ч< {30 11) *С

Yersinia ел -ferocottfjca

00030й

00160

TSYEA

S

Listeria monocytogenes

ISO 11290 (все части)

Произво

дитель

ность

{21 ±3)ч' {37 t1)»С

Lisfena monocytogenes ЛЬ Listeria monocytogenes 1/2a

00021b

00109

Качест

венный

Выраженный рост (2)

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы Е.1

Селектиыыя среди для подсчета микрооргмитмав

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны* стандарт

Ф)М«ЦИЯ

Ижубиро-

ванна

Контрольный

штамм

Номер

WDCM«

контрольная соеда

метод

КОНТРОЛЯ

Критерии

харФтерная реакция

го целевые среда

BPWm

1

Разбавитель для всех способов подсчета микроорганизмов

ISO 686? (вое части). ISO 6887-5

Разведе

ние

45 мин-

1 ч/

20-25 *С

Escherichia cob Staphylococ cus aureus

00012й

00013

00034й

TSA

Качест-

11»» лГл

*30% колоний/ г0 (* 30 % от первоначальною количества)

Разбавитель для подсчета Listeoa monocytogenes

ISO 11290-2

Разведе

ние

(1ч*

5 мин)/ (20 * 2)*С

Listeria monocyto -genes 4b Listeria monocyto genes 1/2 a

00021й

00109

TSA

Качест

венный

*30% колоний/ г0 (* ЭО % от первоначального количества)

Предв врите гъ нов обогащение для выявления Salmonella

ISO 6579

Проиэео-

дотель-

ность

(18 ±2)ч/ (37 ± 1) *С

Salmonella

Typhimuriunfii

Salmonella

Enteritkbsf1'

00031

00030

Качест

венный

Мутность

(1-2)'

Предварительное обогащение для выявления Еп/влоЬас/ел а свае

IS021528-1

Произво

дитель

ность

(18*2)ч/ (37 * 1) *С

Eschenchia cob Salmonella Typhimuriurri Salmonella Enteritid&

00012й 00013 00031 и гм 00030

Качест

венный

Мутность <1—2)f

Контрольные среда для подсмета мюсроорганиэмов

Агаре

кровью

S

Campylo

bacter

ISO 10272-2

Произво

дитель

ность

(44 ±4)ч/ (41,5 * 1) *С

Campylobacter

jejunfl

Campylobacter

coif*

00156

00005

00004

Партия среда агара с кровью уже валидиро-вана

Коли

чест

венный

РЯ*0.7

8

ГОСТ ISO 11133—2016

g Скончание таблицы £ f

Селектиыые среди для подсчета микроорпыизмсе

Среде*

Тип*

Микроорганизм

международный стандарт

Фумвдия

и мутирование

КОНТРОЛЬНЫЙ

штамм

номер WDC M*

контрольная среда

метод

контроля

критерии

херытернея реакция

TSAC

S

Подсчет

колоний

Проиэво-

дотель-

ноеть

Как установлено е методе, е котором TS А используют в качестве контрольной среды

BaciBus се reus Bacillus subtHis subsp. spizizenii Escherichia ccA Escherichia соft 0157:H7 bsiaria monocyte genes4b Staphyiococ -cus aureus

00001

00003

00012

00014

(нетокси-

когенный

штамм)

00021

00034

Партия среды TSA уже вали-дирована

Коли

чест

венный

РЯ 2 О-7

Колонии, характерные для каждого вида

SDA

S

Подсчет

колоний

Произво

дитель

ность

Как установлено в методе, в котором SDA используют в качестве контрольной среды

Saccharomy

ces

ceravisiae

Aspergillus

brasihensis

00056P

Партия среды SDA уже вали-дироеана

Кодаче-ст венный

лпг0.7

Колонии/ростки/ проростки в соответствии с каждым видом

а Полные наименования сред и соответствующие им аббревиатуры сред приведены в табледе Е.2.

0    Данный штамм используется как необходамый кынимум.

с Для получения информации о номерах штаммов культурных коллекдой и контактной информации следует обратиться по адресу , где имеется ссыгка на каталог контрольных штаммов.

d Безальтернативный штамм: один из данных штаммов используют как необходамый минимум.

4 L жидкая среда; $: плотная среда: $$: полужидкая среда.

г Рост/мутность характеризуют следующим образом: 0 — отсутствие роста/отсутствие мутности: 1 — незначительный рост/нвэнэчительная мутность: 2 — выраженный рост/вьражениая мутность (см. 7.4.1.2, 64.1).

9 Штамм WDC М 00013 Escherfche ooh описан в конкретном стандарте.

h Штамм WDCM 00013 Escherichia сок является активным продуцентом р-О-глкжуронидаэы, а штамм WDCM 00202 — неактивным продуцентом 6-0-</»окуронидаэы.

* Некоторые надаональше офаничения и директивы требуют использования иных содоваров. При выборе сероваров Saknonela ссылаются на соответствующие требования национальных нормативных документов.

> При проведении количественных и качественных испытаний среды необходимы результаты только количественных испытаний (см. таблицу Е.1).

k Более подробная информация о контроле качества среды MSRV. в том числе о конечной концентрации инокулята и критериях приведена в ISO 657S.

1    В случае, если питательный агар используют в деухили трех этих различных испытаниях, обязательно проводят испытание на наличие роста Sdmanela (если лаборатория проводит испытания в отношении данного микроорганизма).

л> Если буферную пептонную воду используют в двух или трехэтих различных испытаниях, обязательно проводят испытание на обогащение Salmonela (если лаборатория проводит испытания в отношении данного микроорганизма).

л Штамм(ы) выбирают в соответствии с методом, в котором TSA испо/ьэуют в качестве контрольной среды.

ГОСТ ISO 11133—2016

ГОСТ ISO 11133—2016

Таблица Е.2 —Аббревиатуры сред, приведенных в таблице Е.1

Аббревиатура среды

Поливе наиыенованне среды

С&отаетстаующий международный стандарт

Baird-Parker

Среда Бэрда — Паркера

ISO 6888-1

BGBLB

Бульон с бриллиантовым зеленым, лактозой и жельчью

ISO 4831

BHI

Бульон настойки мозга и сердца

ISO 6888-1 и ISO 6888-3

Bolton

Бульон Болтона

ISO 10272-1

BPW

Буферная пептонная вода

ISO 6887 (все части) ISO 6579 ISO 11290-2 IS021528-1

Brucella

Бульон для бруцвлл

ISO 10272 (все части)

CFC

Агар с цефзлогином. фуцидином и цетримидом

ISO 13720

CIN

Агар с цефзулодином. иргазаном и новобиоцином

ISO 10273

CPC

Агар с целлобиоэой. полимихсином В и колистином

ISO/TS 21872-2

CT-SMAC

Агар Мак-Конки с цефиксимом. геллуритом и сорбитолом

ISO 16654

DG18

Агар с дихлораном и глицерином

ISO 21527-2

DRBC

Бенгальский агар с дихлоран-розой и хлорамфенихолом

ISO 21527-1

EC

Бульон ЕС

ISO 7251

EE

Буферный бульон с бриллиантовым зеленым, желчью и глюкозой

ISO 21528-1

Fraser

Бульон Фразера

ISO 11290-1

Half-Fraser

Бульон Фразера лолуконцентрироаанный

ISO 11290-1

IS («TS»)

Агар с железом и сульфитом (Трилтозный сульфитный агар)

ISO 15213

ITC

Бульон с иргазаном, тикарциллином и хлоратом

ISO 10273

LST

Бульон с лаурилсульфагом. бульон с лаурилом и трипто-зой

ISO 4831 и ISO 7251

mCCOA

Модифицированный агар с активированным углем, цефо-пвразоном и деэоксихолзтом

ISO 10272 (все части)

mCPC

Модифицированный агар с целлобиоэой. полимихсином В и колистином

ISOTTS 21872-2

MKTTn

Бульон Мюллера — Кауфмана с тегратиоиатом и новоби-оцтом

ISO 6579

MMG

Глутаматная среда, модифицированная минеральными соединениями

ISO 16649-3

MPCA

Агар для подсчета колоний с сепарированным молоком! агар для подсчета с молоком

ISO 4833

MRS

Среда MRS (Мэн. Рогоза и Шарп)

ISO 15214

MSRV

Модифицированная полужидкая среда Ралпапорта — Вассилиэдиса

ISO 6579

MYP

Агар с матитолом. яичным желтком и полимихсином

ISO 7932

PCA

Агар для подсчета в чашке

ISO 4833

57

ГОСТ ISO 11133—2016

Окончание таблицы Е.2

Аббревиатура среды

Поливе наименование среды

Соответствующий международный стандарт

PEMBA

Агар с полимиксином. лируватом. яичным желтком, манки гопом и бром тимоловым синим

ISO 21871

РРА

Агар с пенициллином и лимарицином

IS07TS 11059

PSB

Бульон с пептоном, сорбитолом и желчными солями

ISO 10273

RPFA

Агар с фибриногеном плазмы кролика

ISO 6888-2

RVS

Пепгокный соевый бульон Раппа порта — Василиадиса

ISO 6579

SDA

Агар Сабо рода с декстрозой

SDS

Агар с натрия додецилсульфатом, полимиксином и сахарозой

ISOjTS 21872-2

SSOC

Агар для сальмонелл и шигелл с деэоксихолатом кальция

ISO 10273

ТВХ

Агар с триптоном. желчью и Х-глюкуронидом

ISO 16649 (вое части)

TCBS

Агар с тиосульфатом, цитратом, желчными солями и сахарозой

ISO/TS 21872-1

Thioglycollate

Жидкая среда с тиотиколлятом

ISO 7937

TSA

Триптонный соевый агар

TSC/SC

Агар с сульфитом и цикпосерином/агар с трилтоэой. сульфитом и циклосерином без яичного желтка

ISO 7937

TSPB

Триптонный соевый бульон с полимиксином

ISO 21871

TSYEA

Триптонный соевый агар с экстрактом дрожжей

ISO 11290 (все части)

TSYEB

Триптожый соевый бульон с экстрактом дрожжей

ISO 11290 (все части)

VRBG

Фиолетово-красный агар с желчью и глюкозой

ISO 21528 (все части)

VRBL

Фиолетово-красный агар с желчью и лактозой

ISO 4832

XLD

Агар с ксилозой, лизином и деэоксихолатом

ISO 6579

58

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение F (обязательное!

Тест «микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, которые широко используют в микробиологии воды

Для проведения испытаний отбирают определенные штаммы с целью гарантирования схожести результатов в разных лабораториях и облегчения демонстрации различий между средами (от партии к партии, а также в зависимости от изготовителя). Данные штаммы, приведенные в таблице F. 1. прошли всестороннюю оценку с целью гарантирования их пригодности и стабильности при эксплуатации.

В случав, когда приводится более чем один штамм в каждом аспекте эксллуатащюнных испытаний (производительность. селективность, специфичность), должны как минимум использоваться штаммы, обозначенные символом Ь. Коммерческие и некоммерческие поставщики предполагают использование дополнительных штаммов, например, указанных в таблице F.1. чтобы более обоснованно гарантировать качество поставляемых питательных сред

Эти критерии должны быть включены 8 конкретные стандарты при их разработке и пересмотре в будущем. Взлидированной партией питательной среды является партия, которая демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики. Номера штаммов, указанные в таблице F.1, заимствованы из каталога универсальном идентификаторов штаммов, составленных Всемирным центром данных по микроорганизмам (WDCM) (20]. Данный каталог содержит данные о контрольных штаммах, представленных каждым номером WDCM. а также контактные данные о культурных коллекциях. Все приведенные среды описаны в европейских и международных стандартах.

Если имеют место различия в характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду (например, при получении одной и той же среды от различных производителей) и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась. Пользователи могут запрашивать соответствующую информацию, касающуюся изменчивости штаммов, у РГ 5 «Питательные среды» ISQfTK 34/ПК 9 через секретариат 1SO/TK 34/ПК 9.

59

g Таблица F.1 — Тест-микроорганизмы и эксллуатадоотые критерии для питательных сред, широко используемых е микробиологии воды

Селективные среды для подсчета микроорганизмов путем сравнения с неселективной контрольной средой

Среда*

Тип*

Микроорганизм

Междунаездный стандарт

Функция

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WOCM«

Контрол ы«ая среда

Метод

контроля

Критерии

Хврастернея реакция

CoWert

L

Escherichia

СО/ЛШЫ-

формные

бактерии

ISO9308-2

Производи

тельность

(20±2W {36 ± 2) *С

Escherichia cob

00013й

00090

TSA

Количе

ствен

ный

ряг 0.5

Желтая окраска и флуоресивндоя (Е Cob)

Klebsiella

pneumoniae

00206

TSA

Ко/ыче-ст венный

f я а 0.5

Желтая окраска, такая же или более интенсивная, чем образец сравнения (ко гы формные бастерии)

Селектив

ность

Pseudomonas

aeruginosd*

«яв

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Более бледная желтая окраска, чем уобраэца сравнения

GVPC*

S

Legionella

IS011731 и

ISO 11731-2

Производи

тельность

2—5 сут/ (36 ± 2) *С

Legionella

pneimophila

00107й

00180

BCYE

Количе

ствен-

'я* 0.5

Бело-серо-сине-малиновые

5—10 сут1 {36 ±2) *С

Legionella

amsa

00106

ныи

колонии с полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла

Селектив

ность

Зсут/ (36 12) *С

Enterococcus

feecafs*1

00009 или 00067

Каче

ствен-

ньм

Полное ингибирование (0)

Pseudomonas

aeruginosa11

00026 и гы 00025

Кяе-ст венный

Полное и частичное ингибирование (0-1)

£sc/ienc/iia

colfi

00026 или 00025

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы F. 1

Селектншые среды для лад счета микроорганизме* путей сражения с ««селективной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная

среда

метод

контроля

критерии

харФтерная реакция

Lactose

ттс

S

Escherichia

сой/коли-

формные

бактерии

ISO 9308*1

Производи

тельность

(21*ЗК {36 ± 2) *С

Escherichia сой

Enferoba cfer автодел es Cttrobacter freundii

00179P

00012

00013

00175

00006

Т$А

Количе

ствен

ный

Рпг0.5

Желтая окраска среды под мембраной

Селектив

ность

Enterococcus

feecabs'*

00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Спешфич-

ность

Pseudbmonas

aenignosd*

00025 или 00026

Каче

ствен

ный

Красные колонии, синяя офасха среды

тСР

S

Clostridium

pertringens

Директива

Совета

98/83/ЕС

Производи

тельность

(21 ±ЗК

(44 ± 1) *С анаэробная атмосфера

Clostridium

pertringens

00007®

00080

00174

Т$Аили другая насел активная среда для анаэробных бактерий

Ко/ыче-ст венный

pfi г 0.5

Желтые колонии; тест на фосфатазу положчтельный

Специфич

ность

Clostridium

bifermentans

00079

Каче

ствен

ный

Синие колонии; тест на фосфатазу отрицательный

Селектив

ность

Escherichia

coif*

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Pseudo

monas

CN

S

Pseudomonas

aeruginosa

ISO 16266

Производи

тельность

(44 * 4) V (36 * 2) *С

Pseudomonas

aeruginosa

00024®

00025

00026

TSA

Когыче-ст венный

Ря г 0.5

Сине-зеленые колонии. флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете при длине ео/ыы 360 1 20 нм

Селектив

ность

Escherichia

coffl

Enterococcus

becab'd1

00012 иш 00013 00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

о

ГОСТ ISO 11133—2016

j§ Продолжение таблицы F.1

Селе«ти»шв среды для лад счета ми1фооргани1моа путем сражения с ««селективной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрол ы*ая среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

S 1а пей and Barttey

S

Кише'*ые

энтерококки

ISO 7699-2

Производи

тельность

{44±4)W {36 * 2) *С

Enterococcus

faecalis

Enterococcus

faecwnfl

00009!»

00087

00176

00177

00178

TSA

Количе

ствен

ный

Ря г 0.5

Красно-ко рмчнеео-розоеые колонии

Селектив

ность

Escherichia

colfi

Staphylococ -cus

au,eusd

00012 ит 00013 00032 или 00034

Каче

ствен

ный

Полное тмгибиро-вание (0)

Siime

Iron

Tryptose

Siifite

(TS)

S

Сульфит-

восстанав

ливающие

анаэробные

бактерии

(клостридии)

ISO 6461-2

Производи

тельность

(44±4)ч/ (37 * 1) *С ^аэробная атмосфера

Clostridium

perfringens

00007*

00080

TSA, агар с кровью или другая неселективная среда для анаэробных бэстерий

Количе

ствен

ный

р„г0.5

Черше колонии

Специфич

ность

Eschenchia

cotfi

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Отсутствие почер-не тмя

TSC

$

Clostridium

perfringens

ISO 14189

Производи

тельность

(21t3W

(44 11) *С анаэробная атмосфера

Clostridium

perfringens

00007*

00080

00174

TSA, агар с кровью или другая не-селективная среда для ана-эро&тых бактерий

Количе

ствен

ный

Рц £ 0.5

Черные колонии

Селективн

ость

Bacillus subftfis subsp. spizizenii

00003

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы F. 1

Селектншые среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрол ы*вя среда

метод

КОНТРОЛЯ

критерии

характернее реакция

Селективные среды для подсчета «мкроорганиэмов путем сравнения с партией, принятой ранее (для использования в особых случаях)

CoHeri

L

Escherichia

cofitoom*

формные

бактерии

ISO 9308-2

Производи

тельность

<20±2)ч' {36 t2)«С

Escherichia cob

0001

00090

Партия среды CoHeri ранее ва лидировала

Количе

ствен

ный

ряго.7

Желтая офэсжа и флуоресмен1Ыя (£ Cob)

Klebsiella

pneumoniae

00206

Партия среды Соiierl ранее вали-дирована

Ко/ыче-ст венный

Рщ* 0.7

Желтая окраска, такая же или более интенсивная, чем образец сравнения (ко ли формные бактерии)

Селективн

ость

Pseudomonas

aerupnosd3

00207 и/м 00025

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Более бледная желтая окраска, чем образец сравнения

GVPC*

S

LegioneOa

ISO 11731 и

ISO 11731-2

Производи

тельность

2-5 сут/ {36 ± 2) *С

Legionella

pneumophila

00107°

00180

Партия среды GVPC уже валцдиро-вана

Количе

ствен

ный

Рйг0.7

Бело-серо-сине-маты новые колонии с

5-10 сут/ (36 * 2) *С

LegioneOa

anise

00106

полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла

Селектив

ность

Зсут/ (36 12) 'С

Enterococcus

faecabd1

00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Pseudomonas

aeruginostP

Escherichia

coif1

00026 и гы 00025 00012 иты 00013

Каче

ствен

ный

Полное или частичное ингибирование (0-1)

Lactose

ТТС

S

Escherichia

cofilnom-

формные

бактерии

ISO 9X8-1

Производи

тельность

{21 ±3)ч( (36 12) *С

Escherichia cob

Enterobacter aerogenes Ciirobacier troundи

0017tf>

00012

00013

00175

00006

Партия среда Lactose ТТС

уже вали-дирована

Количе

ствен-

нь«

РЯ г 0.7

Желтая окраска среды под мембраной

ГОСТ ISO 11133—2016

g Продолжение таблицы F.1

Селе«ти»шв среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны»! стандарт

Ф)МКЦИЯ

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрольная

среда

метод

КОНТРОЛЯ

критерии

хармтерная реакция

Lactose

ттс

S

Escherichia

confront-

формные

бактерии

ISO 9X8-1

Селектив

ность

<21 ±3)ч/ <Э6 * 2) *С

Enterococcus

becalisf1

Pseudomonas

aerugmosad

00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Спедофич-

ность

00025 или 00026

Каче

ствен

ный

Красные колонии, синяя окраска среды

тСР

S

Clostridium

per&ingens

Директива

Совета

98/83/ЕС

Производи

тельность

(21±3W

(44 ± 1) *С анаэробная атмос-фера

Clostridium

perfringens

00007®

00080

00174

Партия среды тСР уже вали-дирована

Кошче-

ствен-

ньм

pnfe0.7

Желтые колонии; тест на фосфатазу полохмтелыъм

Спештфич-

ность

Clostridium

bifermentans

00079

"

Каче

ствен-

шй

"

Синие колонии; тест на фосфатазу отрицательный

Селектив

ность

Escherichia

coif*

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

Pseudo

monas

CN

S

Pseudomonas

aerugmosa

ISO 16266

Производи

тельность

{44 ± 4) {X ± 2) *С

Pseudomonas

aeruginosa

00024ь

00025

00026

Партия среды Pseudomonas С N уже вали-дирована

Ко/ыче-ст венный

Р„г0.7

Сине-зеленые колонии. флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете при длине волны 360 * 20 нм

Селектив

ность

Escherichia

coif1

Enterococcus

faecalisd

00012 или 00013 00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное ингибуро-вание (0)

"

Stanetz

and

Bartley

S

Кишечные

энтерококки

ISO 7899-2

Производи

тельность

(44 ±4)ч< (36 ± 2) 'С

Enterococcus faecal is

Enterococcus

faeciunP

00009Р

00087

00176

00177

00178

Партия среды Stan-etz and Bartley уже вали-дирована

Ко/ыче-

ствен-

ньм

ряг0.7

Красно-коричнево-роэоеые колонии

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы F. 1

Селекти»4ые среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

м«»<ду народны»! стандарт

Ф)МКЦИЯ

Инкубирова

ние

КОНТРОЛЬНЫЙ

штамм

Номер

WDCM«

контрол ы*вя среда

метод

КОНТРОЛЯ

критерии

хара<терная реакция

Stenetz

and

Bartley

S

Кишечные

энтерококки

ISO 7699-2

Селектив

ность

<44t4K {36 ± 2) *С

Escherichia

coif*

Staphylococ

cus

aureus?

00012 или 00013 00032 или 00034

Каче

ствен

ный

Полное

ингибиро

вание

(0)

Sulfite

Iron

Tryptose

Sulfite

(TS)

S

Сульфит-еосста наели вающие анаэробные бактерии (клостридии)

ISO 6461*2

Производи

тельность

(44i4)4f (37 ± 1) *С анаэробная атмосфера

Clostridium

perfringens

00007*

00080

Партия среды Sulfite iron ит TS уже вали-дирована

Количе

ствен

ный

Гп* 0.7

Черные колонии

Специфич

ность

Escherichia

cotfl

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Отсутствие почернения

TSC

S

Clostridium

pertingens

ISO 14169

Производи

тельность

{21 ±3W {44 ± 1) *С ^аэробная атмос-фера

Clostridium

perfnngens

00007°

00080

00174

Партия среды TSC уже вали-дирована

Количе

ствен-

нь«

Ряго,7

Черные колонии

Селектив

ность

Bacillus subtHis subsp. $piz>zeni>

00003

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

hie селективные среды для подсчета микроорганизмов

YEA

S

Общая

микрофлора

ISO 6222

Производи

тельность

{44 ±4)чf {36 ± 2) *С

Escherichia colfl

Bacillus subtilis subsp. spoizenii

00012 или 00013 00003

Партия среда YEA уже вали-дирована

Котче-

стаей-

ный

Рпг0.7

Bolton

Preston

l

Campyfo-

bacter

ISO 17995

Производи

тельность

{44±4)W {37 ± 1) *С м икроаэробная атмосфера

Campylobacter

jejunfl

Campylobacter

cotfl

* Escherichia cotfl

♦ Proteus mirabihs

00156

00005 00004 00012 или 00013 00023

Каче

ствен

ный

более Ю

КОЛОНИЙ

на mCCDA

Мелкие, плоские или выпуклые колонии с гладкой поверхностью

ГОСТ ISO 11133—2016

g> Продолжение таблицы F.1

Селекптые среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международны»! стандарт

Ф)МКЦИЯ

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM«

контрол м*вя среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

ВоКоп

Preston

L

Campylo

bacter

ISO 17995

Селектив

ность

(44±4)ч' (37 ± 1) *С микро-аэробная атмосфера

Eschenchia

colfl

Proteus

mirabibs

00012 или 00013 00023

Каче

ствен-

шй

Полное ингибирование на TSA(0)

MU&ECg

L

Escherichia с«У </ио пи-формные бактерии

ISO9308-3

Производи

тельность

48 ч/

(44 *0.5)-С

Escherichia cob'

00179

Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/ЕС приведена в ISO 9308-3:1998. приложение Е

MUD/SFh

l

Кишечные

энтерококки

ISO 7899-1

Производи

тельность

(44±4)чГ

(44 ± 0,5) *С

Enfemcoccus

faecahs

Enterococcus

htrae

Enterococcus

faedum

00176

00089

00178

Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/SF приведена в ISO 7899-1:1998. приложение Е

Селектив

ность

Aerococcus

viridans

Lactococcus

lactis

Staphylococ

cus

epidermids

00061

00016

00132

RVS

L

Salmons Да

ISO 19250

Производи

тельность

(24 ± 3)ч1 (415 * 1) *С

SalmoneOa Enter itKfcs** SalmoneOa TyphmlrtunтlJ,

♦    Escherichia

cotid

*    Pseudomonas aemginosa

00030

00031

00012 или 00013 00025

Каче

ствен

ный

> 10 колоний на XLD или другой выбранной среде

Колонии, характерные для каждой среды (см. стандарт)

Селектив

ность

Escherichia

CQlfl

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Частичное ингибирование не более Ю0 колоний на TSA

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы F. 1

Селекптые среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

международны»! стандарт

Ф)МКЦИЯ

Инкувироаа-

ниа

Контрольный

штамм

номар

WDCM«

контрол ы*вя среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

RVS

L

Salmonella

ISO 19250

Селектив

ность

(24±3)ч! (415 ± 1)*С

&U&9COCCUS

laecaft^3

00009 или 00087

Каче

ствен-

ный

менее 10 колоний на TSA

l-leселективные жидкие среды

DRCM

1

Сульфит-

восстанав

ливающие

анаэробные

бактерии

(хлостридии)

ISO 6461-1

Производи

тельность

(44 ±4)ч1 (36 ±1)’С анаэроб-

Clostridium

peri-ingens

00007й

00080

Каче

ствен

ный

Мутность

(1-2)

Почернение

Специфич

ность

мая атмосфера

Escherichia

CO!if*

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Мутность

(0-1)

Отсутствие

почернения

Раствор

хлорида

натрия

Пептон-

ный

разбави

тель

Пептон-ный солевой раствор

Раствор Ringer с концентрацией, сниженной 8 4 раза

Фосфатный буферный раствор

L

Разбавители

ISO 6199

Разбави

тель

45 мин —

1 Ч/

20-25 ’С

Escherichia

colfl

Staphylo -coccus aureus

00012 или 00013 00034

TSA

Количе

ствен

ный

±30% колоний! т0 (± ЭО % от первоначального количества)

о>

ГОСТ ISO 11133—2016

g Продолжение таблицы F.1

Селе«ти»шв среды для лад счета ми1фооргани1моа путем сражения с месолекшаной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Инкубирова

ние

Контрольный

штамм

номер

WDCM*

контрольная

среда

метод

контроля

критерии

характерная реакция

Селективные среды для выделения

mCCDA

S

Campylo

bacter

ISO 17995

Производи

тельность

(4414)ч/ {41Si1)‘C микро* аэробная атмосфера

Campylo bacier jejunfi Campylo bacier col/3

00156 или 00005

00004

Каче

ствен

ный

Значительный рост <2)

Мелкие, плоские или выпуклые колонии с гладкой поверхностью

Селектив

ность

Escherichia

coif*

00012. или 00013. или 00179. или 00090

Каче

ствен

ный

Полное или частичное ингибирование (0-1)

Характерные колонии отсутствуют

Staphylo

coccus

aum&*

00032 или 00034

Каче

ствен

ный

Полное ингибирование (0)

XLD

S

Salmonella

ISO 19250

Производи

тельность

(24 ±3)ч/ (Э6 ±2) *С

Salmonella

TypNmuri-

unfi-'

Salmonella

Ententid(sdl

00031

00030

Каче

ствен

ный

Значительный рост (2)

Колонии счерным центром нелегка прозрачной зоной, окрашенной в красноватый цвет из-за изменения цвета среды

Селектив

ность

Escherichia

coif1

00012 или 00013

Каче

ствен

ный

Рост или частичное ингибирование (0-1)

Желтые колонии

Enlerococ

cusfaeca-

0^

00009 или 00087

Каче

ствен

ный

Полное

ингибиро

вание

(0)

ГОСТ ISO 11133—2016

Продолжение таблицы F. 1

Селекптые среды для лад счета микроорганизме* лугом сражения с мосолокт*ной контрольной средой

Среде*

Тип*

Микроорганизм

Международный стандарт

Фикция

Инкубирова

ние

контрольный номер штамм WDCM*

контрол ы*ая среда

метод

КОНТРОЛЯ

критерии

харФтерная реакция

го целевые среда

BPV/

L

Раэбаеите/ъ для подсчета всех микроорганизмов

ISO 6667

Разведе

ние

45 мин — 1 ч/

20—25 *С

Eschenchia

coff*

Staphylo -coccus aureus

00012 или 00013 00034

TSA

Ко/мче-ст венный

±30%

колони

(±30%

первона

чального

количе

ства)

Предварите гъ нов обогащение для выявления Salmonella

ISO 19250

Производи

тельность

(18±2)ч/ {36 * 2) X

Salmonella Typhimuh -unf*-1

Salmonella Ementkiiif1'

00031

00030

Каче

ствен

ный

Мутность

(1-2)»

Контрольные среда для подсчета мжроорганиэмов

BCYE

S

Подсчет

колоний

ISO 11731 и

ISO 11731-2

Производи

тельность

2-5 сут/ (36 ±2) *С

Legionella

pneimoph-

ia

00107й

Партия среды ВСУЕ уже вали-дировзна

Котче-ст венный

рп г 0.7

Бело-серо-сине-малиновые колонии с полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла

TSA1

$

Подсчет

колоний

Производи

тельность

В соответствии с методом, е котором ТЭАис-пользуют в качестве контрольной среды

Escherichia

coif*

Clostridium

Periringens

Pseudomo

nas

Aeruginosa

Enterococ-

cusfaecaiis

00012

00013

00090

00179

00007

00024

00067

Падтия среды Т$А уже вали-дирована

Количе

ствен

ный

0.7

Колонии, характерные для каждого вида

ГОСТ ISO 11133—2016

2 Окончание таблицы F. 1

а Полные наименования сред и соответствующие им аббревиатуры сред приведены в таблице F.2.

6 Данный штамм используется как необходимый минимум.

6 Для получения информации о номерах иламмов культурных коллекдой и контактной информации следует обратиться по адресу http :/Avww.wfcc.info. где имеется осылкэ на каталог контрольных штаммов.

d Безальтернативный штамм; один из данных штаммов используют как необходимый минимум.

*    I: жидкая среда: S: плотная среда; SS: полужидкая среда.

*    Более подробная информация о контроле качества среды для Legionela, включая хранение контрольных штаммов, приведена в ISO 11731.

в Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды М1Ю/ЕС приведена в ISO 9306-3:1998. приложении Е: селективность не установлена в данном стандарте.

*    Более подробная информация о контроле качества и фитериях качества среды MUG/SF приведена в ISO 7899-1:1998. приложении Е.

1 Некоторые национальные офаничения и директивы требуют использования иных сероварое. При выборе оероваров Salmonela ссылаются на соответствующие требования национальных нормативных документов.

| Рост/мутность характеризуют следоощим образом: 0 —отсутствие ростэ/отсутстеие мутности: 1 — незначительный рост*<еэ на чи тельная мутность; 2 — выраженный рост/выражен мая мутность (см. 74.1.2,84.1).

к В случае, когда среду BPW используют для двух и более различных применений, проводят как минимум испытание с обогащением Salmonela (если лаборатория проводит испытания данного микроорганизма).

*    Штамм(ы) выбирают в соответствии с методом, в котором TSA используют в качестве контрольной среда.

ГОСТ ISO 11133—2016

ГОСТ ISO 11133—2016

Таблица F.2 — Аббревиатуры питательных сред, приведенных в таблице F.1

Аббревиатура среды

Полное наименование среды

Соответствующий международный стандарт

BCYE

Буферная агаровая среда с активированным углем и дрожжевым экстрактом

ISO 11731 И ISO 11731-2

Bolton

Бульон Болтона

ISO 17995

BPW

Буферная пептонная вода

ISO 6887 (SO 19250

ORCM

Дифференциальная усиленная среда для клостридий

ISO 6461-1

GVPC

Буферная агаровая среда с активированным углем, дрожжевым экстрактом, глицином, ванкомицином. поли-миксииом В и цикпогексимидом

ISO 11731 и ISO 11731-2

Lactose ТТС

Лактозная агаровая среда с трифенилтегрэзолия хлоридом и гептадецилсульфатом натрия

ISO 9308-1

mCCDA

Модифицированный агар с активированным углем, цв-фопвразоном и деэоксихолатом

ISO 17995

mCP

Мембранная агаровая среда для Clostridium perfnngens

Директива Совета 98/8Э/ЕС

MUD/SF

Среда с 4-мегилумбеллиферил-о-О-глкжозидом и SF

ISO 7899-1

MUD/ЕС

Среда с 4-мегилумбеллиферил-р-0-глюкуронедом и ЕС

ISO 9308-3

Preston

Бульон Престона

ISO 17995

Pseudomonas CN

Агар с цегримидом и налидиксовой кислотой для Pseudomonas

ISO 16266

RVS

Соевый пептонный бульон Ралпапорта — Вассилиадиса

ISO 19250

Sianetz and Bartley

Среда Сланвца и Бартли

ISO 7899-2

Sulfite Iron

Агар с сульфитом железа

ISO 6461-2

Tryptose Sulfite (TS)

Агар с триптозой и сульфитом

ISO 6461-2

TSA

Трилгонный соевый агар

TSC

Агар с триптозой. сульфитом и циклосерином (без яичного желтка)

ISO 14189

XLD

Агар с ксилозой, лизином и деэоксихолатом

ISO 19250

YEA

Агар с дрожжевым экстрактом

ISO 6222

71

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение G (обязательное)

Использование контрольных графиков для мониторинга количественных испытаний плотных питательных сред

G.1 Общие положения

Настоящее приложение содержит описание применения контрольных графиков для мониторинга результатов, в частности тех. которые выражены в виде коэффициента производительности Рп, как это описано в 7.2, при испытаниях селективных и неселективных агаровых сред то сравнению с подходящими неселективными эталонными агаровыми средами или предварительно принятыми партиями той же селективной агаровой среды.

Необходимо внимательно применять контрольные графики в случае испытаний различных партий одного и того же агара, так как любое ухудшение качества последовательных партий может быть незаметно до тех тор. тока испытуемые суспензии не будут тщательно контролироваться в плане получения требуемого количества микроорганизмов или не будут применяться эталонные среды (см. 3.4.6). Любая система ОС среды, основанная на проверках от партии к партии, должна быть проверена на пригодность для цели предназначения перед ев использованием.

Каждый источник и партия испытуемого агара, вероятнее всего, продемонстрируют различные уровни производительности. и отдельные лаборатории могут использовать различные виды эталонного агара в сравнительных испытаниях с испытуемыми видами агара. Таким образом, отдельные лаборатории должны установить и обосновать свои собственные пределы и'или диапазоны приемлемых значений коэффициента производительности для каждого испытуемого агара при повседневном использовании в пределах значений коэффициента производительности, указанных в 7.2.2.1.2. Контрольные графики составляют на основе начальных данных валидации, пределы приемлемости устанавливают при использовании статистического анализа и затем графики используют для мониторинга последовательных партий агара. Пределы приемлемости пересматривают периодически (например, после прохождения каждых 30 испытаний) и при необходимости корректируют (соответствующая информация приведена в G.2.6).

Данные процедуры требуют использования микробной суспензии с известной концентрацией целевого штамма, установленного для питательной среды в приложении Е или F; это целевое значение для испытания. Испытуемой суспензией должна быть коммерческая эталонная среда (см. 3.4.6) или суспензия, приготовленная в лаборатории из тщательно стандартизованных рабочих культур эталонных штаммов. В течение периода использования концентрация микроорганизмов в набора горной суспензии (целевое число) должна быть стабильной и суспензия должна быть гомогенной.

В цепях оптимизации контроля дашые суспензии должш содержать приблизительно 100 КОЕ (диапазон должен быть от 80 до 120 КОЕ) в объеме инокулята, который применяют к питательной среде в чашке, и испытание, как правило. проводят то меньшей мере дважды. В таблице 1 (см. 5.4.2.5.1) приведены значеьмя прецизионности при различных уровнях инокулирования с тем. чтобы показать важность сохранения данного оптимального уровня инокулята.

Слои агара инокулируют методами распределения, добавления или мембранной фильтрации в соответствии с эталонным стандартным методом, в котором применяют агар, и инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах.

Колонии, присутствующие на или в каждом слое, подсчитывают в соответствии с эталонными стандартными методами, а коэффициенты производительности рассчитывают согласно 7.2.1.1.

G.2 Применение контрольных графиков

G.2.1 Общие методики

Для составления нового контрольного графика необходимо провести не менее 10 испытаний на различных партиях одного и того же испытуемого агара, желательно е двух повторностях, проводя испытания в разные дни и с участием различных операторов (условия мвжлзборагорной воспроизводимости). Проведение 20 испытаний (как это показано е методике в G.2.2) позволит получить более надежные значения пределов, и. таким образом, график, на котором обозначены 10 начальных испытаний (минимальное количество), необходимо пересчитать, когда станут доступны данные о 20 результатах. Индивидуальные графики используют на постоянной основе с не менее 30 испытаниями для каждой повторяющейся оценки текущего качества сред (см. G.2.6).

G.2.2 Составление контрольных графиков

Данная методика основана на стандартном инокуляте, содержащем (100 1 20) КОЕ в 0.1 см3 инокулята, используемого для испытания, проводимого методом распределения по слою. Она также пригодна при использовании других объемов инокулята и при других методах посева, таких как глубинный посев или мембранная фильтрация, при условии, что инокулят содержит количество колониеобразующих единиц, лежащее в диапазоне приемлемости — (100 ± 20) КОЕ.

72

ГОСТ ISO 11133—2016

Среднее значение двух серий дублей при испытании/равно ^КОЕ/О.1 см3 для испытуемой среды иу,КОЕ/0.1 см3 для контрольной среды. Далее, коэффициент производительности при испытании /равен x^i y-t = rf Для серии испытаний, г = 1. 2.....п. где л — минимум равно 10 и желательно, чтобы было равно 20. среднее значение коэф

фициента производительности 7 вычисляют по формуле:

7-1у г. * +    (G.1)

п“1    л

Средний диапазон значений коэффициента производигегъносги Я вычисляют по формуле:

‘>.<1

где I— номер испытания;

л — общее количество испытаний: гf— значение PR при Испытании.

Далее определяют стандартное отклонение а по формуле:

«3 2)

$= 0.B865-R ж——— 1,128

(G.3)

Примечание — Константа 0,6865 {или обратное ей число 1,128) — стандартизованное значение, ре* комендуемое ASTM для определения стандартного отклонения из среднего диапазона дубгмроеанных значений результатов испытаний.

Раосчитывэют 95 % (± 2s) и 99 % (± 3$) пределы распределения результатов.

На оси у контрольного графика отмечают общее среднее значение Рр. 7. и каждый из двух верхних (+25 и +3s) и двух нижних (-2s и -3s) пределов: затем чертят пинт. параллельные оси х Результаты каждого индивиду-ального значения PR для испытаний. /» 1. 2.....л наносят на ось х (см. пример).

Каждый раз. когда готовят новую партию среды, проводят ее испытания с использованием стандартной су* спензии инокулята, и величину Ря рассчитывают как отношение количества колониеобразующих единиц, подсчитанных после инкубирования на испытуемой и эталонной средах, как эго описано выше. Данное значение наносят на контрольный график и проверяют на соответствие установленным пределам.

G.2.3 Рабочий пример составления контрольного графика при наличии 20 результатов

В таблице G.1 приведены результаты 20 последовательных проверок коэффициента производительности на партиях одного и того же испытуемого несепективного агара при использовании стандартного инокулята с со-держание*! микроорганизмов 110 КОЕ/0,1 см3, подсчитанных на эталонной неселективной среде (фактические значения при подсчете на эталонной среде будут отличаться ог данного значения на практике, однако эти данные используются для демонстрации принципа составления контрольных графиков только на основе рассчитанных коэффициентов производительности).

Таблица G.1 — Данные, касающиеся 20 последовательных проверок коэффициента производительности на неселвктивном агаре, используемые для составления контрольного графика (приведены фактические значения, полученные при подсчете только на испытуемо*! агаре: значения подсчета на эталонной среде, у,, во всех случаях равны 110 КОЕ)

Результаты испытаний

1

1

2

Э

4

в

в

7

8

9

to

КОЕ (испытуемый агар), х,

95

102

94

97

105

68

98

105

103

116

гг

0.86

0.93

0.85

0.88

0.95

0.62

0.89

0.95

0.94

1.05

к-м

_

0.07

0.08

0.03

0.07

0.06

0.06

0.01

0.11

Результаты испытаний

Г

и

12

13

14

15

»7

18

19

20

КОЕ (испытуемый агар), х,

95

90

89

116

114

110

114

98

86

102

г.

0.86

0.82

0.61

1.05

1.04

1.00

1.04

0.89

0.80

0.93

0.19

0.04

0.01

0.24

0.01

0.04

0.04

0.15

0.09

0.13

73

ГОСТ ISO 11133—2016

Важно заметить, что нижний результат испытания 6 в данном примере для неселективного агара оказался ниже значения допустимого диапазона, установленного для допустимых значений PR от 0.70 до 1,40 для неселек-тивного агара (см. 7.2.2.1.2). и все подобные результаты следует исключить как резко отклоняющиеся при определении среднего и стандартного отклонения для контрольного графика.

Причины, по которым результаты испытаний по определению Рд выходят за допустимый диапазон, необходимо исследовать, поскольку они часто связаны с ненадлежащим проведением испытания, а не с тем. что качество питательной среды низкое. Эго часто происходит, когда используемый инокулят содержит количество КОЕ. выпадающее из установленного диапазона от 80 до 120 КОЕ.

Среднее значение Рп вычисляют по формуле:

7 =    (0,86+ 0.93 + 0.8S+...+0.80 +0.93)/1Э =17,5^9 *0.92.    (G.4)

(Оно показано на рисунке G.1 сплошной линией.)

Значения диапазона й = |г,- гм| определяют абсолютную разктцу последа ватвлы-ых значений, за исключением случая, когда значение исключают (например, в испытании 6 таблицы G.1X т. в.: |0.93 — 0.Э6] =0,07; |0,85 - 0.93| = 0.08; |0.88 - 0.85| = 0.03 и т.д. _

Средний диапазон ft вычисляют по формуле:

R ■    ~1) = (°.°7 + 0,08 +0.03 + ... +0.09 + 0.13)/18 ■ 1,43/18 » 0,08.    (G.5)

Таким образом, стандартное отклонение s = 0.8865 - 0.08 = 0.071.

95-процектные доверительные пределы (показаны на рисунке G.1 пунктирными линиями с короткими черточками) равны:

0,92 ± 2 • 0,071 = 0.92 ± 0.14.    (G.6)

98-процентные доверительные пределы (показаны на рисунке G.1 пунктирными линиями с длинными черточками) равны:

0.92 ±3 • 0.071 =0.92± 0.21.    (G.7)

Y

Обозначения

У — козффициент производительности X — номер испытания

74

Рисунок G.1 — Контрольный график, составленный на основе значений коэффициента производительности, полученных в результате первых 20 проверок, приведенных в таблице G.1 (результат испытания 6. являющийся резко отклоняющимся значением, исключен)

ГОСТ ISO 11133—2016

6.2.4 Оценка эксплуатационных характеристик и интерпретация результатов

Партию питательной среды принимают, если выполнены критерии общего {см. 6.2) и микробиологического качества.

Новую партию среды отклоняют, если в процессе проведения количественных испытаний, выполнежых как это описано выше, получают любые из перечисленных ниже результатов, когда ситуация «выходит из-под контроля»:

•    выход за пределы ± За:

•    результаты двух из трех наблюдений подряд превышают пределы ± 2s:

- шесть наблюдений подряд демонстрируют неуклонное увеличение или уменьшение:

•    девять наблюдений подряд располагаются на одной и той же стороне от среднего значения.

Примечание — Критерий на основе четырех наблюдений подряд, когда уровень ± 1 s превышен, может также быть важным, так как свидетельствует о существовании проблемы.

G.2.S Альтернативные подходы к мониторингу эксплуатационных свойств сред

Методика использования контрольных графиков для мониторинга эксплуатационных свойств сред, приведенная выше, специально составлена для нанесения значений Рд без трансформирования подсчета колоний в единицы log1(j.

Допустимо использование альтернативных подходов, основанных на непосредственном нанесении значений подсчета колоний или подсчета колоний в единицах logic еспи они демонстрируют приемлемость. Методы проверки. соответствует ли распределение данных подсчета колоний нормальному или нет без трансформации log,,-,, с использованием теста Колмогорова — Смирнова или теста хи-квадрат, а также соответствующие практические примеры приведены в [39].

Вместе с гем следует заметить, что если в подсчеты не включен коэффициент разбавления, то маловероятно. что будет уместной трансформация (од^. Конвертирование непосредственного подсчета (например. 100 КОЕ на чашку) должно предполагать использование распределения Пуассона, для которого трансформация подсчета х равна vx. Более того, в любой ситуации, когда подсчеты колоний наносят непосредственно, важно гарантировать, чтобы уровень микроорганизмов в испытуемом инокуляте оставался постоянным в процессе проведения испытаний. иначе это приведет к получению недостоверных результатов.

G.2.6 Периодический пересмотр контрольных графиков

Первый и последующие контрольные графики для среды, проходящей отдельные испытания, должны периодически пересматриваться с целью гарантирования того, что установленные пределы остаются приемлемыми при составлении графиков в любое время. Первый график, содержащий минимум 20 значений данных, пересматривают с целью установления первоначальных пределов, и затем последующие трафики можно пересматривать с определенной частотой при наличии каждых 30 значений данных по методике, приведенной ниже (в данном подпункте).

Как только контрольный график составлен полностью, снова рассчитывают среднее значение и стандартное отклонение s, исключая результаты, которые не попадают в установленный диапазон или пределы. При использовании трансформации 1одц) все расчеты проводят, используя результаты, трансформированные в единицы log10.

Стандартное отклонение текущего графика сравнивают со стандартным отклонением всех предыдущих результатов. s^, и проверяют на вариации, используя следующий критерий:

— <Г(0.975;п-1.ли,-1).

(G.8)

где F (0.975; л-1./1^-1) — значение F испытания при вероятности а = 0.025 при количестве наблюдений величины s. и количестве наблюдений величины s^.

Вариации значительно увеличиваются, когда s не удовлетворяет данному критерию, в таком случае необходимо выяснить возможную причину данного факта.

В случае, кода стандартное отклонение составленного контрогъното графика соответствует данному критерию. для составления следующего контрольного графика эти данные объединяют с результатами предыдущих наблюдений [в качестве примера для вычислений см. формулу (G.9)].

Кроме того, сравнивают среднее значение х текущего графика со средним значением всех предыдущих наблюдений х,0| и проверяют, выполняется ли следующий критерий:

(G'9)

где х s

slol

л

среднее значение текущего контрольного графика;

среднее значение всех предыдущих контрольных графиков:

стандартное отклонение контрольного графика:

стандартное отклонение всех предыдущих контрольных графиков:

общее количество наблюдений текущего контрольного графика:

общее количество наблюдений всех предыдущих контрольных графиков.

75

ГОСТ ISO 11133—2016

Если сроднее значение текущего контрольного графика соответствует данному критерию, эти данные объединяют с данными предыдущих наблюдений для составления следующего контрольного графика.

В случае, когда данный критерий не выполняется, выясняют возможную причину этого. Если причину установить не удается, составляют новый контрольный график и устанавливают новые пределы, основанные на предыдущих наблюдениях, путем пересчета пределов для среднего значения и стандартного отклонения для всех набподений.

Пример вычислений:

Примеры данных приведены е таблице G.2. они касаются трех контрольных графиков, каждый из которых содержит 30 результатов наблюдений. Значения    и 8^, относятся к обобщенным данным из графиков 1 и 2.

Значение одного наблюдения во втором графике (номер 22. выделено курсивом) превышает предел приемлемости. установленный лабораторией на основе ее собственных данных. Таким образом, данное значение не испогъзуют в расчетах.

Таблица G.2 — Значения результатов испытаний в рамках трех контрольных графиков для оценки и сравнения с пределами, установленными лабораторией (см. [39])

Результаты испытаний

Измерения

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

График 1

100

77

108

75

83

92

70

81

90

88

График 2

74

81

60

66

109

83

73

82

74

89

График 3

89

75

67

63

90

77

90

75

53

91

Результаты испытаний

Измерения

Т1

12

13

14

15

16

17

16

19

20

График 1

78

82

90

95

75

86

100

98

75

92

График 2

80

83

95

71

98

74

76

92

84

88

График 3

99

74

88

68

100

81

97

89

80

71

Результаты испытаний

Измерения

2t

22

23

24

2S

26

27

26

29

30

График 1

74

во

98

79

82

91

78

90

65

60

График 2

67

130

97

98

64

85

101

73

67

82

График 3

63

84

82

84

99

79

86

70

72

98

Расчеты хгмонии для каждого графика

X

Расчеты значений на основе обобщения значений. относя-щихся к графикам 1 и 2

График 1

84.4

11.1

122.7

83.0

11.7

136.1

График 2

81.6

12.3

150.8

График 3

81.1

12.1

147.5

В результате проверки вариаций значений стандартного отклонения путем сравнения значения стандартного отклонения s графика 3 со значениями стандартных отклонений первых двух графиков (s^) был получен следующий результат:

1,084.    (G.10)

4.    136.1

Критическое значение F (0,975: 29.58) = 1.83. Наблюдаемое значение меньше критического, и. таким образом. не существует значительной разницы между стандартным отклонением графика 3 и графиков 1 и 2.

В результате последующей проверки того, было ли среднее значение изменено, как это описано выше для этих данных, были получены следующие результаты.

76

ГОСТ ISO 11133—2016

На основе данных, касающихся графика 3. было получено значение 1,9 (по формуле |81.1 - 83,0| = 1.9). а критическое значение равно

Рассчитанное для графика 3 значение меньше критического и. таким образом, не имеется существенной разницы между средним значением для графика 3 и для графиков 1 и 2.

Поскольку проверка вариаций была достоверной, данные для графика 3 объединяют с данными графиков 1 и 2 для расчета значений новых пределов. Таким образом, новый контрольный график составляют на основе среднего значения, равного 82.4 и стандартного отклонения, равного 11.80.

(G.11)

77

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение Н

(справочное)

Обеспечение качества питательных сред — выявление и устранение недостатков

Н.1 Сведения о видах недостатков, которые могут иметь питательные среды, а также о вероятных причинах их наличия, приведены в таблице Н.1.

Таблица Н.1

Вид недостатка

Возможная причина недостатка

Агаровая среда не застывает

Перегрев среды во время приготовления.

Низкое значение pH. приводящее к кислому гидролизу. Использована неправильная масса агара.

Агар был растворен не до конца.

Недостаточное перемешивание ингредиентов

Неверное значение pH среды

Перегрев среды во время приготовления. Неудоалетворигвгъное качество воды.

Загрязнение химическими веществами извне. pH измерен при неправильной температуре. рН-мегр неправильно калиброван.

Неудовлетворительное качество обезвоженной (сухой) среды

Некорректный цвет среды

Перегрев среды во время приготовления. Неудовлетворительное качество воды.

Неудовлетворительное качество обезвоженной (сухой) среды. Отсутствие одного или нескольких ингредиентов. Использованы неправильные ингредиенты.

Неправильное значение pH.

Загрязнение извне

Образование осадка

Перегрев среды во время приготовления.

Неудовлетворительное качество воды.

Неудовлетворительное качество обезвоженной (сухой) среды. Неудовлетворительный контроль pH.

При приготовлении из отдельных ингредиентов — примеси в сырье

Ингибирование среды или низкая производительность среды

Перегрев среды во время приготовления.

Неудовлетворительное качество обезвоженной (сухой) среды. Неудовлетворительное качество воды.

Использована неправильная рецептура, например, ингредиенты неправильно взвешены, добавки введены в неверной концентрации.

В посуде, где проводится приготовление, или в воде присутствует токсичный осадок.

Коктрольный(е) микроорганизм^) приготовлены) неправильно

Недостаточная селективность или специфичность среды

Перегрев среды во время приготовления.

Неудовлетворительное качество обезвоженной (сухой) среды. Использована неправильная рецептура.

Неправильно осуществлено добавление ингредиентов, например, если среда была слишком горячая или неправильной концентрации. Загрязнение добавок.

Конт рол ьный(е) микроорганизм(ы) пригоговлен(ы) неправильно

Загрязнение среды

Ненадлежащая стерилизация. Неэффективные методы асептики. Загрязнение добавок

76

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение I

(справочное)

Количественные испытания жидких сред

1.1    Общие положения

Настоящее приложение содержит описание методов количественных испытаний жидких сред, которые могут предоставить дополнительную информацию по сравнению с рабочими методами, описанными в разделе 8. Данные методы применимы главным образом для оценки сред, которые разрабатывают или используют в сравнительных исследованиях.

Качество жидкой среды в том. что касается обеспечения оптимального роста микроорганизмов, наиболее явно проявляется в течение ранней фазы роста микроорганизмов. Анализ продолжительности периода протекания лаг-фазы и роста микроорганизмов 8 течение ранней стадии лаг-фазы позволяет получить наиболее точную информацию о производительности и селективности целевых и нецелевых микроорганизмов как в испытуемом, так и в эталонном бульоне. Таким образом, если имеется необходимость в обнаружении лишь небольших различий в качестве питательных сред, посев штрихом из жидкой среды на поверхность плотной среды следует проводить после короткого периода инкубирования (например, продолжительностью 6 игы 12 ч).

1.2    Метод количественных испытаний неселективных жидких питательных сред

при помощи целевых микроорганизмов

1.2.1    Методика

-    Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит не менее 10 см3 среды или 10 см3 порции из каждой испытуемой партии (см. 3.1.2).

-    Используют рабочие культуры (см. S.4.2.2).

-    Проводят инокуляцию целевыми микроорганизмами: испытуемый бульон и плотную эталонную среду ино-купируют каждым тест-микроорганизмом; количество клеток должно быть не более 100.

-    Инкубирование инокулировэнных сред проводят в условиях, установленных в конкретных стандартах.

• Готовят достаточное количество разведений из каждой инкубированной среды для достижения количества колоний, которое поддается подсчету (см. 5.4.2.S).

-    Отмеренный объем (например. 10 мм3) распределяют по поверхности неингибирукнцей агаровой среды в чашке Петри (см. 7.2.2.1.1).

1.2.2    Подсчет и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают количество колоний в чашках (см. 7.2.2.1.1 и 7.2.2.1.2). Интерпретация результатов будет зависеть от цели испытания, например, сравнения с предыдущей партией, эталонной средой или эталонным материалом.

Концентрация целевых микроорганизмов а испытуемом бульоне должна быть в диапазоне от 10е до 10* КОЕ/см3.

1.2.3    Блок-схема для количественного метода для неселективных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов

На рисунке 1.1 приведена блок-схема для количественного метода для неселективных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов.

79

ГОСТ ISO 11133—2016

Рисунок 1.1 — Блок-схема для проведения эксплуатационных испытаний несвлвктивных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов (см. J.2.1 и J22)

I.3 Метод количественных испытаний селективных жидких питательных сред при помощи целевых

и нецелевых микроорганизмов

1.3.1    Методика

•    Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит не менее 10 см3 среды или 10 см3 порции из каждой испытуемой партии (см. 3.2.2).

-    Используют рабочие культуры, как это описано в 5.4.2.

•    Инокуляция целевыми микроорганизмами: инокулируют испытуемый бульон, эталонный бульон и плотную контрольную среду каждым тест-микроорганизмом, количество клеток должно быть не более 100. Плотную эталонную срцду используют для подсчета КОЕ в инокуляте.

-    Инокуляция нецелевыми мжроорганизмами: инокулируют испытуемый бугьон, эталонный бульон и плотную эталонную среду каждым тест-микроорганиэмом. количество клеток должно быть не менее 1000.

-    Инокуляция целевым и нецелевым микроорганизмами для получения смешанной культуры: для испытаний смешанных культур в селективной среде инокулируют испытуемый бульон, эталонный бульон и плотную контрольную среду целевым микроорганизмом (не более 100 клеток) и нецелевым микроорганизмом (не менее 1000 клеток) в одной и той же пробирке или на одной и той же чашке. При испытании смешанных культур распределение инокулята должно проводиться по возможности на слое несвпвктивного агара, что позволит дифференцировать микроорганизмы смешанной культуры (например, агар с MUG для подсчета Escherichia coti или Salmonella spp.). Когда нет возможности различить смешанные культуры на несвлективном агаре, необходимо использовать среды с селективным агаром при условии, что их эксплуатационные характеристики были предварительно проверены.

•    Инкубируют среды в условиях, установленных в конкретных стандартах.

Отбирают отмвреншй объем или при необходимости объем после разведения от каждого бугьока и распределяют по поверхности слоя неингибирующего агара в случае пробирок, содержащих только целевые или толью нецелевые микроорганизмы, как эго описано в 8.22. В случае пробирок, содержащих и целевые, и нецелевые микроорганизмы. инокулят распределяют по поверхности слоя той же самой селективной среды, что использовалась выше.

Для получения количества колоний в чашках, которое поддается подсчету, допускается использовать модифицированный метод поверхностого прикапывания Mites — Misra. спиральный дозатор или иные системы прикалывания,

1.3.2    Подсчет колоний, вычисления и интерпретация результатов

На каждом слое подсчитывают колонии целевых и нецелевых микроорганизмов и рассчитывают выход по сравнению с эталонным бульоном, учитывая при этом разведения, использованные для подсчета (при необходимости). В случае смешанных культур проводят различив разных видов.

Расчеты и интерпретация зависят от цепи исследования. Интерпретация результатов зависит от цепи испытания. например, в том. что касается сравнения с предыдущей партией, эталонной средой или эталонным материалом.

80

ГОСТ ISO 11133—2016

Концентрация целевого микроорганизма должна быть в диапазоне от 10е до 10е КОЕ/см3. и данный микроорганизм должен быть преобладающим в селективной среде.

В случав смешанных культур выход целевого микроорганизма не должен быть снижен по сравнению с выходом из чистой культуры целевого микроорганизма.

1.3.3 Блок-схема для количественного метода для селективных жидких питательных сред с применением целевого и нецелевого микроорганизмов

На рисунке 1.2 приведена блок-схема для количественного метода для селективных жидких питательных сред с применением целевого и нецелевого микроорганизмов.

Целевые микроорганизмы

Нецелевые микроорганизмы

Смесь целевых и нецелевых микроорганизмов

Рабочая культуре целевых

Рабочая культура неиепееых

микроорганизмов

мисроорганизмое

Рабочей купыуре целевых

в стационарной фазе

в стационарной фазе

и нецелевых микроорганизмов а стациоюрной фазе

Инокуляция испытуемого

Инокуляция испытуемого

Инскупяция испытуемого

бульона, этало***ого

бульона, эталонного

бульона, эталонного

бу/ъома и плотной

бульона и подходящей

бульона и плотной

контрольной среды

плотной коитр01ъной среды

контрольной среды не более

не более 100 клетками

не менее 1000 клетками

100 клетками целевых микроорганизмов и подходящей плотной кокгрогъной среды не менее 1000 клеткам* нецелевых микроорганизмов

Инкубирование при

№кубироевние при

Инкубирование при

температуре и е течение

темпере туре и е течение

темпере туре и в течение

периода времени.

периода ерема-ы.

периода времени.

установленной в

установленных а

установленных в

соответствующем стандарте

соответствующем стандарте

соответствующем стандарте

Отбор отмеренного объема, те 10мм:каждогобуяьсиз

{или при необходимости разведения) и распределение инокулята на слое нес еое «пеной среды

Отбор отмеренного объеме, т е. 10 мм * каждого бульона (или при необходимости разведем*») и распределение ьыокулятэ на слое неселективной среды

Отбор отмеренного объема, т е 1Q мм* каждого бульона (или при необходимости разведем*») и распределение ююкулята на слое неселективной срезы

Инкубирование при

Инкубирование при

Имкубировмие при

температур* и * течение

температуре и е течем**

температуре и а течемие

периода времени.

периода времени.

периода времени.

установлении а

установленных а

установленных в

соответствующем стандарте

соответствующем стандарте

соответствующем стандарте

Подсчет колоний в обеих

Подсчет копомтй в обеих

Подсчет колоний в обеих

средах и расчет Рл

средах и расчет sr

средах и расчет Р„ а

в соответствии с 7 2 1 1

в соответствии с 7.2 1 2

соотввтстом* с 7 2 1.1

Концентрация нецелевых

микроорганизмов не долина превышать 10' KOEfcu3

Рисунок 1.2 — Блок-схема количественного испытания селективных жидких питательных сред с применением целевых и нецелевых микроорганизмов (см. 1.3.1 и I.3.2)

81

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение J

(обязательное)

Инструкции по установлению условий проведения микробиологических эксплуатационных испытаний для стандартизованных питательных сред

J.1 Область применения

Настоящее приложение предоставляет руководителям проектов рабочих групп по стандартизации инструкции по установлению микробиологических эксплуатационных критериев, методов и контрольных штаммов при создании или пересмотре международных стандартов, касающихся микробиологического анализа (микробиологии пищевых продуктов или воды).

J.2 Общие положения

Микробиологические эксплуатационные требования (эксплуатационные критерии, методы контроля и цели), применимые к стандартизованным питательным средам, должны быть включены в каждый стандарт, касающийся микробиологического анализа.

Данные эксплуатационные требования могут включать:

•    заимствованные или при необходимости пересмотренные требования, приведенные в настоящем стандарте. к питательным средам, изложенным в данном приложении: или

-    требования, установленные для любой новой питательной среды, в соответствии с нормами, излаженными в данном приложении.

Примечание — Данное установление условий к требованиям проведения микробиологических эксплуатационных испытаний не распространяется на реактивы или среды для подтверждения.

J.3 Эксплуатационные критерии, методы и цели

Оцениваемые критерии (производительность, селективность, специфичность), используемые методы испытаний (качественные и количественные) и поставленные цели должны быть установлены в соответствии с характеристиками каждой питательной среды, как это показано в таблице J.1.

Критерии для питательных сред могут быть следующими:

•    форма среды (бульон, агар);

-    состав среды (селективная, неселективная):

•    функция среды в стандартизованном методе (среда для обогащения, среда для разведения, среда для выявления, среда для подсчета).

Таблица J.1

Среда

Критерии и метод испытания

Селективный бульон для подсчета

Производительность (метод: количественный)0 Селективность (качественный)*

Селективный агар для подсчета

Производительность (количественный)* Селективность (качественный)Специфичность (качественный)1

Селективный бульон для обогащения

Производительность (качественный)6 Селективность (качественный)**

Селективный агар для выявления

Производительность (качественный $ Селективность (качественный)9. Специфичность (качественный)'

Неселективный агар для подсчета

Производительность (количественный)*

Неселективный бульон для обогащения

Производительность (качественный)9

82

ГОСТ ISO 11133—2016

Окончание таблицы J. 1

Среда

Критерии и метод испытании

Неселектиеный бульон для разведения

Производительность (количественный)6

Неселективный агар для выявления

Производительность (качественный )*

1    Производительность; целью данного эксплуатационного критерия является проводка способности к удовлетворительному росту целевых штаммов (и морфологии колоний) на агаровых средах.

8    Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.4.

Цель; результат должен быть равен 2 (удовлетворительный рост) для инокулята с не более 100 КОЕ целевого микроорганизма (см. 8.4.1).

ь Количественная производительность (агаровая среда): см. 7.2.1.1.

Цель: Значение рп должно быть больше или равно 0.50 при сравнении селективной среды с неселективной эталонной средой, указанной в приложениях Е и F. Значение Рп должно быть больше или равно 0,70 при сравнении неселективной среды с неселективной эталонной средой или как это установлено в стандарте или приложениях Е и F. Эго также применимо в особых случаях, когда проводят сравнение с предыдущей партией.

Колонии целевого микроорганизма должны иметь характерный внешний вид.

с Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.3.

Цель: Не менее 10 колоний целевого микроорганизма наблюдают на селективной среде для выделения, используемой для выявления после инокуляции не более 100 КОЕ.

d Качественная производительность (агаровая среда): см. 7.4.

Цель: результат должен быть равен 2 (удовлетворительный рост) для целевого микроорганизма.

Колонии целевого микроорганизма должны иметь характерный внешний вид.

е Количественная производительность (жидкая среда): см. 8.2.

Цель: для разбавителей количество микроорганизмов после периода контактирования должно быть в пределах ± 30 % от первоначального количества.

2    Селективность: целью данного эксплуатационного критерия является проверка того, что мешающие (нецелевые) штаммы частично игы полностью подавляются селективной средой.

1 Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Цель: испытуемые (нежелательные) микроорганизмы должны полностью подавляться.

9    Качественная селективность (агаровая среда): см. 7.4.

Цель, испытуемые (нежелательные) микроорганизмы должны частично или полностью подавляться.

h Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Цель: нежелательные микроорганизмы на неселективной агаровой среде, используемой для выявления, не должны проявлять никакого роста или их количество должно быть менее 10 КОЕ.

3    Специфичность: целью данного эксплуатационного критерия является проверка того, что мешающие (нецелевые) штаммы, которые не подавлены, не производят характерных колоний.

' Качественная специфичность (агаровая среда): см. 7.4.

Цель, колонии испытуемых нецелевых штаммов не имеют характерный внешний вид целевых микроорганизмов в стандартизованном методе.

Данные критерии должны быть верифицированы при соблюдении стандартизованных температуры и периода времени инкубирования.

J.4 Выбор эксплуатационных контрольных штаммов

J.4.1 Общие положения

Цели различных эксплуатационных критериев и область применения сгандартиэоеатых методов должны определить выбор контрольных штаммов:

•    целевых штаммов (производительность), выявленных и подсчитанных в рамках данного метода, и

•    нецелевых штаммов (селективность, специфичность), являющихся мешающей флорой, которая обычно присутствует в анализируемых пробах.

Необходимо по возможности использовать контрольные штэммы, описанные в приложениях Е и F, которые уже были испытаны на данной среде.

При наличии соответствующего обоснования (генетическая нестабильность, недостаточная воспроизводимость результатов на предыдущих штаммах ОС и т. п.) руководитель проекта может внести предложение по модификации требуемых штаммов в соответствии с инструкциями данного подраздела.

J.4.2 Оценка пригодности новых контрольных штаммов

Перед использованием новых штаммов их пригодность для использования в эксплуатационных испытаниях необходимо проверить и задокументировать. Это требует демонстрации воспроизводимости эксплуатационного контроля в не менее двух (а предпочтительно трех) независимых лабораториях при использовании двух или трех различных партий продукции со стандартизованной рецептурой или от различных производителей 8 каждой лаборатории.

83

ГОСТ ISO 11133—2016

J.4.3 Новые среды

Для каждой новой среды контрольные штаммы должны быть:

-    предпочтительно отобранными из тех. которые уже описаны в приложениях Е и F:

• предварительно вменены и проверены на пригодность (см. J.4.2);

-    или введены заново при следующих условиях:

•    они предпочтительно должны иметь пищевое происхождение или быть получены из проб воды:

•    они должны быть доступны из не менее двух международных коллекций штаммов (взаимно эквивалентных). по приемлемой цене:

•    они должны быть предварительно оценены и проверены на пригодность (см. J.4.2).

J.4.4 Количество штаммов, используемых в соответствии с данным микробиологическим эксплуатационным критерием

Сноска а к таблице J.1 — Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.4.

Два целевых штамма: штамм типа А и штамм типа В.

Тип А: штамм, испытываемый при эксплуатационном контроле качества производителем среды и конечным пользователем.

Тип В: штамм, требуемый для испытаний только производителем среды.

Сноска b к таблице J.1 — Количественная производительность (агаровая среда): см. 7.2.1.1.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска с к таблице J.1 — Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.3.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В. каждый изкоторыхассоциировансдвумя нецелевыми штаммами. Сноска d к таблице J.1 — Качественная производительность (агаровая среда): см. 7.4.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска е к таблице J.1 — Количественная производительность (жидкая среда): см. 8.2.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска (к таблице J.1 — Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска g к табгыце J.1 — Качественная селективность (агаровая среда): см. 7.4.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска h к табгыце J.1 — Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска i к таблице J.1 — Качественная специфичность (агаровая среда): см. 7.4.

Один нецелевой штамм: штамм А.

84

ГОСТ ISO 11133—2016

Приложение ДА

(справочное!

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочною международного стандарта

Степень

соответствии

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стенде рта

ISO 6887-1

ISO 6887-2

в

ISO 6887-3

ISO 6887-4

ISO 6887-5

ISO 6887-6

ISO 7704

ISO 7218

IDT

ГОСТ ISO 7218—2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям»

ISO 8199

Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется исполь-

эовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Официальный перевод данного междуна-

родного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов Российской Федерации.

Примечание — В нэстояи^й таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандарта:

- ЮТ — идентичный стандарт.

85

ГОСТ ISO 11133—2016

Библиография

[1]    ISO 9000. Quality management systems — Fundamentals and vocabulary

[2]    ISO 9001, Quality management systems — Requirements

[3]    ISO Guide 30:1992/Amd.1:2008. Terms and definitions used in connection with reference materials — Amd.1: Revision of definitions for reference materials and certified reference materials

[4]    ISO 6222. Water quality — Enumeration of culturabte micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium

[5]    ISO 3696. Water for analytical laboratory use — Specification and test methods

[6]    ISO 2859-1. Sampling procedures for inspection by attributes — Pari 1: Sampling schemes indexed by acceptance quality limit (AQL) for lot-by-lot inspection

[7]    ISO/TS 22117. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Specific requirements and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison

[8]    Nordic Committee on Food Analysts (NMKL) Procedure no 10. 2002. Control of microbiological media

[9]    Australian Society for Microbiology. Guidelines for assuring quality of food and water microbiological culture media. Second Edition. 2014

[10]    European Pharmacopoeia. 2010 7th ed. Council of Europe. France. Chapters 2.6.12 and 2.6.13

[11]    United States Pharmacopoeia. 2011. 35th ed. The United States Pharmacopoeial Convention. USA. Chapter 1117. Microbiological Best Laboratory Practice

[12]    DIN 58942-4:2003, Medical Microbiology — Culture media — Transport systems for specimencontaining bacteria

[13]    DIN 58942-4. Suppl. 1:2003. Medical Microbiology — Culture Media — Systems, media and conditions for the transport of selected pathogens in clinical specimens

[14]    DIN 58959-6. Suppl. 1:1997. Quality management in medical microbiology — Requirements forcontrol strains — Examples for production and preservation of bacteria used as stock cultures andworking cultures

[15]    DIN 58959-6. Suppl. 2:1997, Quality management in medical microbiology — Requirements forcontrol strains — Examples for production and preservation of fungi used as stock cultures and working cultures

[16]    DIN 58959-9, Suppl. 1:1997. Quality management in medical microbiology — Requirements for the use of control strains for testing culture media — Control strains for commonly used culture media

[17]    DIN 58959-9. Suppl. 2:1997. Quality management in medical microbiology — Requirements for the use of control strains for testing culture media — Maximum storage times for ready-to-use culture media

[18]    DIN 58959-10:1997. Quality management in medical microbiology — Requirements for the use of control strains for testing reagents, dyes and biological materials

[19]    DIN 58959-10, Suppl. 1:1997, Quality management in medical microbiology — Requirements for the use of control strains for testing reagents, dyes and biological materials — Control strains for commonly used materials

[20]    World Data Centre for Microorganisms. Reference Strain Catalogue pertaining to organisms for performance testing of culture media. Available (viewed 2013-10-14} at http:tf

[21]    Corry J.E.L.. Curtis G .D.W., Baird R.M. eds. Handbook of Culture Media for Food and Water Microbiology. Royal Society of Chemistry. UK. Third Edition. 2012

[22]    Curtis G.D.W.. Baird R.M.. Skovgaard N.P., Corry J.E.L. Int J. Food Microbiol. 1998.45 p. 65 [A statement from the JUMS-ICFMH working party on culture media II]

[23]    Bel C.. Neaves P.. Williams A.R Food Microbiology and Laboratory Practice. Blackwell Science. Oxford. 2005

[24]    Hagemann J.H. et al. Single, chemically defined spoliation medium for Bacillus subtitis. J. Bactenol. 1984.160 pp. 438—441

[25]    Sharma V.K.. & Hobson P.N.Asporulation medium for strict anaerobes. Lett.Appl. Microbiol. 1985.1 pp. 31—32

[26]    Jarvis B. Statistical aspects of the microbiological examination of foods. Academic Press. London. Second Edition. 2008

[27]    Cundetl A.M.. Chateilier S.. Schumann P.. Lilischkis R. Equivalence of quality control strains of microorganisms used in the compendial microbiological tests: are national culture collection strains identical? PDA J. Pharm. Sci. Technol. 2010. 64 pp. 137—155

[28]    Cross L.J.. Russell J.E.. Desai M. Examining the genetic variation of reference microbial cultures used within food and environmental laboratories using fluorescent amplified fragment length polymorphism analysis. FEMS Microbiol. Lett. 2011. 321 (2) pp. 100—106

[29]    Schqven J.F.. Havelaar A.H.. Bahar M. A simple and widely applicable method for preparing homogeneous and stable quality oontrol samples in water microbiology. Appl. Environ. Microbiol. 1994. 60 (11) pp. 4160—4162

[30]    Araujo R.. Rodrigues A. G.. Pina-Vaz C.Afast practicable and reproducible procedure for standardization of the cell density of an Aspergillus inoculums. J. Med. Microbiol. 2004, 53 pp. 783—786

[31]    Wesche M. et al. Stress, sublethal injury, resuscitation, and virulence of bacterial foodbome pathogens. J. Food Prot. 2009. 72 (5) pp. 1121—1138

[32]    Kell DB et al. 1998, Viability and activity in readily culturable bacteria: a review and discussion of the practical issues. Av Leeuwenhoek 73 pp. 169—187

86

ГОСТ ISO 11133—2016

[33]    Rowan N.J. Viable but norv-culturabie forms of food and waterborne bacteria: Quo Vadis? Trend Food Sciences. 2004. 15 pp. 462—467

[34]    ISO 5725-6. Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 6: Use in practice of accuracy values

[35]    Garnty G.M. ed. et al. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. 2nd ed. Springer. New York. NY. USA. 2001—2012

[36]    American Type Culture Collection. Bacterial Culture Guide. Manassas. VA USA. 2012

[37]    American Type Culture Colection. Preservation and recovery of filamentous fungi. Tech. Bud. No 2 Manassas. VA. USA. 2011

[38]    American Type Culture Collection. Reference strains — How many passages are too many? Tech. Bull. No 6 Manassas. VA. USA. 2011

[39]    NEN 6603. Environmental and Food — Internal quality control by the use of control charts with chemical and microbiological analysis

[40]    ISO 4831. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection and enumeration of ooliforms — Most probable number technique

[41]    ISO 4632. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of ooliforms — Colony-count technique

[42]    ISO 4833. Microbiology of food and anmal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of micro-organisms — Colony-count technique at 30 “C

[43]    ISO 6461 -1. Water quality — Detection and enumeration of the spores of suffite-reducing anaerobes (dostridta) — Part 1: Method by enrichment in a liquid medium

[44]    ISO 6461-2. Water quality — Detection and enumeration of the spores of suffite-reducing anaerobes (dostrkfca)— Part 2: Method by membrane filtration

[45]    ISO 6579. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Salmonella spp.

[46]    ISO 6579:2002/Amd. 1:2007. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Salmonella spp. — Amendment 1: Annex D: detection of Salmonella spp. in animal faeces and in environmental samples from the primary production stage

[47]    ISO 6868-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coag-ulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using Baird — Parker agar medium

[48]    ISO 6888-2. Microbiology of food and animat feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagu-lase-posibve staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Pari 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium

[49]    ISO 6888-3, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizon tat method for the enumeration of coag-ulase-positive staphylocooci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 3: Detection and MPN technique for low numbers

[50]    ISO 7251. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli — Most probable number technique

[51]    ISO 7899-1:1998, Water quality — Detection and enumeration of intestinal enterooocci — Pvt 1: Miniaturized method (Most Probable Number) for surface and waste water

[52]    ISO 7899-2. Water quality — Detection and enumeration of intestinal enterococci — Part 2: Membrane filtration method

[53]    ISO 7932. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 degrees C

[54]    ISO 7937. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique

[55]    ISO 9308-1, Water quality — Enumeration of Escherichia coii and colrform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora

[56]    ISO 9308-2, Water quality — Enumeration of Escherichia coli and colrform bacteria — Part 2: Most probable number method

[57]    ISO 9308-3:1998, Water quality — Detection and enumeration of Esdierichia col and conform bacteria — Part 3: Miniaturized method (Most Probable Number) for the detection and enumeration of E. coli in surface and waste water

[58]    ISO 10272-1. Microbiology of food and animal feed — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter — Pvt 1: Detection method

[59]    ISO/TS10272-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. — Part 2: Colony-count technique

[60]    ISO 10272-3. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Campylobacter spp. — Part 3: Semi-quantitative method

[61]    ISO 10273. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of pathogenic Yersinia enterocolitica

87

ГОСТ ISO 11133—2016

[62]    ISO/TS 11059|IDF/RM 225. Milk and milk products — Method tor the enumeration of Pseudomonas spp

[63]    ISO 11290-1. Microbiology of food and animal feed — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and other Listeria species — Part 1: Detection method

[64]    ISO 11290-2. Microbiology of food and animal feed — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and other Listeria species — Part 2: Enumeration method

[65]    ISO 11731. Water quality — Enumeration of Legionella

[66]    ISO 11731-2. Water quality — Detection and enumeration of Legionella — Part 2: Direct membrane filtration method for waters with low bacterial counts

[67]    ISO 13720. Meat and meat products — Enumeration of presumptive Pseudomonas spp.

[68]    ISO 14189. Water quality — Enumeration of Clostridium perfringens — Method using membrane filtration

[69]    ISO 15213, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions

[70]    ISO 15214. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of meso-philic lactic acid bacteria — Colony-count technique at 30 degrees C

[71]    ISO 16266. Water quality — Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa — Method by membrane filtration

[72]    ISO 16649-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of beta-glucuronidase-positive Escherichia coK — Part 1: Colony-oount technique at 44 degrees C using membranes and 5-bromo-4-chk)FO-3-indotyt beta-D-glucuronide

[73]    ISO 16649-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of be-ta-glucuronidase-positive Escherichia co§ — Part 2: Colony-count technique at 44 degrees C using 5-bromo-4-chk>ro-3-indolyl beta-D-glucuronide

[74]    ISO 16649-3. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of beta-glucuronidase-positive Escherichia coli — Part 3: Detection and most probable number technique using 5-bro-mo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucuronide

[75]    ISO 16654. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Escherichia coli 0157

[76]    ISO 17995. Water quality — Detection and enumeration of thermo tolerant Campylobacter species

[77]    ISO 19250. Water quality — Detection of Salmonella spp.

[78]    ISO 21527-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds — Part 1: Colony count technique in products with water activity greater than 0.95

[79]    ISO 21527-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds — Part 2: Colony count technique in products with water activity less than or equal to 0.95

[80]    ISO 21528-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae — Part 1: Detection and enumeration by MPN technique

[81]    ISO 21528-2, Microbiology of food and animal feed —Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteria ceae — Part 2: Colony-count method

[82]    ISO 21871. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the determination of low numbers of presumptive Bacillus cereus — Most probable number technique and detection method

[83]    1530Я5 21872-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection o( potentially pathogenic Vibrio spp. — Part 1: Detection of Vibrio parahaemotyticus and Vibrio cholerae

[84]    ISO/TS 21872-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of potentially pathogenic Vibrio spp. — Part 2: Detection of species other than Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae

[85]    European Culture Collections' Organisation (ECCO). available at http:tf

[66] European Council Directive 98/83/EC of 3 November 1998 on the quality of water intended for human consumption. Available (viewed 2013-10-14} at http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do7urisO-J:L:1998:330:0032:0054;EN:PDF

[87] World Federation for Culture Collections (WFCC). Available at htpp^/

88

ГОСТ ISO 11133—2016

УДК 664:636.084:579.67:006.354    МКС 07.100.30    ЮТ

Ключевые слова: пищевые продукты, корма для животных, вода, питательная среда, приготовление питательных сред, производство питательных сред, хранение питательных сред, определение рабочих характеристик, эксплуатационные испытания питательных сред, качество питательных сред, микробиологический анализ, проба окружающей среды

Корректор Е.Р. Ароян Компьютерная верстка Ю.В. Поповой

Сдано в набор 10.11.2016. Подписано а начать 25.11.2010. Формат 60 * 641/g. Гарнитура Ариал.

Уел. печ. п. 10.70.

Набрано а ИД «Юриспруденция». 115419. Москва, ул. Орджоникидзе. II. Ttrww.juii5i2dal.ru

Издано яо ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 126995. Москва. Гранатный пар.. 4. www.90slinro.1u