ГОСТ Р 59570-2021 Продукция винодельческая. Идентификация компонентов в части определения природы этанола и других соединений физико-химического состава

ГОСТ Р 59570-2021

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКЦИЯ ВИНОДЕЛЬЧЕСКАЯ

Идентификация компонентов в части определения природы этанола и других соединений физико-химического состава

Winemaking products. Identification of components in terms of determination of the origin of ethanol and other compounds of physical-chemical composition

ОКС 67.160.10

Дата введения 2022-05-01*

________________

* См. ярлык "Примечания".

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Союз производителей коньяка" (НКО "Союзконьяк")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 162 "Виноградарство и виноделие"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 июня 2021 г. N 567-ст

4 В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения методов Международной межправительственной организации по виноградарству и виноделию (OIV), обозначения и наименования которых приведены в разделе "Введение"

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

Введение

В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения методов анализа Международной межправительственной организации по виноградарству и виноделию (OIV), опубликованных в 2019 г. в сборниках методов анализа вина и спиртных напитков виноградного происхождения (дополнительная информация - http://www.oiv.int/en/technical-standards-and-documents/methods-of-analysis):

- OIV-MA-BS-16:R2009 "Метод определения основных соединений, экстрагируемых из древесины во время созревания алкогольных напитков виноградного происхождения";

- AOAC 948.07 "Качественный тест для определения карамельного колера в винах и других спиртных напитках";

- OIV-MA-BS-19:R2013 "Метод общего определения фенольных соединений в алкогольных напитках виноградного происхождения, не содержащих добавок карамельного колера";

- OIV-MA-AS311-05:R2011 "SNIF-NMR/RMN-FINS Метод определения распределения изотопов водорода - дейтерия в этаноле, полученном брожением виноградного сусла, концентрированного виноградного сусла, виноградного сахара, ректификованного виноградного сусла, и в этаноле вина с помощью ядерного магнитного резонанса";

- OIV-MA-BS-23:R2009 "SNIF-NMR/RMN-FINS Метод определения распределения изотопа водорода - дейтерия в этаноле спиртных напитков виноградного происхождения с помощью ядерного магнитного резонанса";

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на винодельческую продукцию из винограда (Vitis vinifera L.) и гибридов, полученных скрещиванием сортов Vitis vinifera L. с сортами винограда других видов рода Vitis, которая включает наименования продуктов по [1]-[3] и устанавливает процедуру идентификации компонентов в части определения характеристик спирта (этанола) и других соединений физико-химического состава.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12494 Коньяки (бренди), поставляемые для экспорта. Технические условия

ГОСТ 31493 Дистиллят винный. Технические условия

ГОСТ 31728 Дистилляты коньячные. Технические условия

ГОСТ 31729 Напитки винные. Общие технические условия

ГОСТ 31730 Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31732 Коньяк. Общие технические условия

ГОСТ 31763 Спирт винный. Технические условия

ГОСТ 32030 Вина столовые и виноматериалы столовые. Общие технические условия

ГОСТ 33311 Вина игристые. Основные правила производства

ГОСТ 33336 Вина игристые. Общие технические условия

ГОСТ Р 1.4 Стандартизация в Российской Федерации. Стандарты организаций. Общие положения

ГОСТ Р 52195 Вина ароматизированные. Общие технические условия

ГОСТ Р 52335 Продукция винодельческая. Термины и определения

ГОСТ Р 52501 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия

ГОСТ Р 52558 Вина газированные и вина газированные жемчужные. Общие технические условия

ГОСТ Р 55242 Вина защищенных географических указаний и вина защищенных наименований места происхождения. Общие технические условия

ГОСТ Р 55458 Виноградная водка. Общие технические условия

ГОСТ Р 55459 Дистиллят виноградный. Технические условия

ГОСТ Р 55461 Спирт виноградный. Технические условия

ГОСТ Р 56547 Российское качество. Коньяки особые. Общие технические условия

ГОСТ Р 58206 Бренди. Общие технические условия

ГОСТ Р ИСО 5725-2 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по [1]-[4], ГОСТ 12494, ГОСТ 31493, ГОСТ 31728, ГОСТ 31729, ГОСТ 31730, ГОСТ 31732, ГОСТ 31763, ГОСТ 32030, ГОСТ 33311, ГОСТ 33336, ГОСТ Р 52195, ГОСТ Р 52335, ГОСТ Р 52558, ГОСТ Р 55242, ГОСТ Р 55458, ГОСТ Р 55459, ГОСТ Р 55461, ГОСТ Р 56547 и ГОСТ Р 58206, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 качество винодельческой продукции: Совокупность двух составляющих, к которым относятся внутренние свойства, образуемые физико-химическими и органолептическими признаками (формируются в ходе изготовления как продукта в целом, так и его отдельных компонентов) и обуславливающие в соответствии с установленными требованиями принадлежность продукта к определенной(ому) группе или типу, а также внешние свойства, определяющие пригодность продукции удовлетворять в соответствии со своим назначением обусловленные или предполагаемые потребности пользователя.

3.2 оценка качества винодельческой продукции: Подтверждение соответствия заявленного наименования продукта в целом или его отдельных компонентов на основе сочетания документальных, инструментальных и органолептических методов внутренним и (или) внешним свойствам, которые в виде требований установлены в национальных, межгосударственных (региональных) и (или) международных документах по стандартизации для определенной(ого) группы или типа продуктов.

3.3 идентификация компонентного состава винодельческой продукции: Взаимосвязанная с оценкой качества самостоятельная процедура для установления инструментальными методами тождественности свойств компонентов с их существенными признаками, характерными для эталонного образца компонента и (или) его описания.

3.4 существенные признаки компонентов винодельческой продукции: Количественные и качественные физико-химические показатели, их характеристики, нормы, в том числе характеристики заявленного состава, пищевой и энергетической ценности, отличительные критерии наименований, технологических процессов производства, используемого сырья и иные сведения о составе продукции, содержащиеся в нормативных правовых актах Российской Федерации, национальных, межгосударственных (региональных), международных документах по стандартизации, научно-технических документах, включающих описания винодельческой продукции и (или) ее компонентов, и (или) в единой базе данных о компонентном составе винодельческой продукции.

3.5 эталонный образец компонентов винодельческой продукции: Продукт виноделия или компонент продукта виноделия, в том числе компонент для изготовления продукта виноделия, качество и соответственно внутренние и внешние свойства которого имеют подробное описание, принимаются за исходные для сопоставления с ними других продуктов и (или) компонентов со схожими заявленным наименованием и характеристиками, изготавливаемый и определяемый в соответствии с требованиями и порядком, установленными в нормативных правовых актах Российской Федерации.

3.6 описание компонентов винодельческой продукции: Набор существенных признаков компонентов винодельческой продукции, содержащийся в нормативных правовых актах Российской Федерации, национальных, межгосударственных (региональных), международных документах по стандартизации, научно-технических документах и (или) в единой базе данных о компонентном составе винодельческой продукции.

3.7 методология идентификации компонентного состава винодельческой продукции: Сочетание инструментальных методов и интерпретации результатов их применения для установления тождественности свойств компонентов продукции с существенными признаками, характерными для эталонного образца компонента и (или) его описания.

3.8 результат идентификации компонентного состава винодельческой продукции: Подтверждение или неподтверждение тождественности свойств компонента продукции с его существенными признаками, оформляемое в виде заключения о соответствии (несоответствии) компонента его эталонному образцу и (или) их описанию.

3.9 подлинность компонентов винодельческой продукции: Тождественность свойств компонента продукции с его существенными признаками, установленная в ходе идентификации компонентного состава.

3.10 заявитель об идентификации компонентного состава винодельческой продукции: Физическое или юридическое лицо, которое является приобретателем (потребителем) или осуществляет хозяйственную деятельность, деятельность в области оценки соответствия, в том числе контроле (надзоре), или иную деятельность, соответствующую нормативным правовым актам Российской Федерации в области производства и торгового обращения винодельческой продукции.

Примечание - Заявитель об идентификации компонентного состава винодельческой продукции не должен быть юридически связан с лицом, непосредственно осуществляющим идентификацию компонентного состава винодельческой продукции, или иным образом оказывать влияние на деятельность этого лица.

3.11 лица, осуществляющие идентификацию компонентного состава винодельческой продукции: Федеральные и региональные органы исполнительной власти; организации, осуществляющие подтверждение соответствия, в область аккредитации которых входит винодельческая продукция; организации, осуществляющие производство винодельческой продукции; организации, осуществляющие закупку и продажу винодельческой продукции; отраслевые, научно-технические и иные организации в случаях, предусмотренных нормативными правовыми актами Российской Федерации, или в инициативном порядке.

3.12 недопустимая модификация компонентного состава винодельческой продукции: Умышленное или неумышленное изменение физико-химического состава и (или) свойств компонентов винодельческой продукции в ходе ее изготовления, осуществленное путем применения технологических процессов и (или) сырья, следствием которого являются нарушение тождественности свойств и существенных признаков продуктов, компонентов и (или) имитация (подделка) их свойств.

Примечание - Изменение качества винодельческой продукции и (или) ее компонентного состава, которое является следствием использования разрешенных в нормативных правовых документах сырья и (или) технологических процессов, но совершенное без указания этого изменения в маркировке на потребительской или транспортной упаковке, или при отсутствии соответствующей информации в товаросопроводительных документах, предусмотренных обязательными требованиями, относится к недопустимой модификации состава продуктов и (или) их компонентов.

3.13 географическое происхождение винодельческой продукции и ее компонентов: Характеристика внутренних свойств, относящихся к качеству продукта и (или) его компонента, которая формируется природно-климатическими и агротехническими особенностями, присущими для географического объекта, в границах которого произрастает виноград, производятся его переработка и изготовление винодельческой продукции.

3.14 ботаническое происхождение компонентов винодельческой продукции: Характеристика внутренних свойств, относящихся к качеству компонента, формируемая физиологическими и биохимическими особенностями семейства сельскохозяйственных растений, используемых в виде сырья в производстве винодельческой продукции, купажных составляющих, вспомогательных материалов.

4 Общие положения

4.1 Идентификацию компонентов винодельческой продукции в части определения природы спирта (этанола) и других соединений физико-химического состава проводят в целях предупреждения введения в заблуждение потребителей и защиты их здоровья, защиты интересов добросовестных изготовителей, а также для подтверждения соответствия продукции нормативным правовым требованиям, противодействия изготовлению и выпуску в торговое обращение продукции с недопустимым составом, соблюдения условий добросовестной конкуренции, повышения конкурентоспособности и для развития экспортного потенциала виноградарской и винодельческой отраслей Российской Федерации.

4.2 Идентификацию компонентов в продуктах проводят лица, перечисленные в 3.11, в тех случаях, когда в информации о составе продукции отсутствует или представлено неполное описание, либо необходимо подтверждение достоверности описания, представленного в документации, сопровождающей винодельческую продукцию.

4.3 Идентификацию компонентного состава винодельческой продукции в случаях, приведенных в 4.2, осуществляют лица, перечисленные в 3.11.

При проведении идентификации допускается применение документов по стандартизации: национальных, межгосударственных стандартов, сводов правил и (или) стандартов организаций (СТО).

Примечание - В соответствии с ГОСТ Р 1.4 перед утверждением стандартов организаций проводят их экспертизу. Экспертиза может быть проведена в соответствующем техническом комитете по стандартизации.

При этом используемые для идентификации документы по стандартизации должны включать методы исследований (анализа, испытаний, определения, измерений), основанные на иных аналитических принципах и обеспечивающие сопоставимость результатов исследований с результатами, полученными при исследовании соответствующих показателей методами, содержащимися в 5.1.4-5.1.17. Применение указанных документов по стандартизации должно осуществляться согласно требованиям 5.1.1-5.1.3; интерпретация полученных результатов - согласно требованиям 5.2 или соответствующих стандартов, устанавливающих требования к продукции (при наличии); представление результата идентификации - по разделу 6.

4.4 Описание компонентного состава винодельческой продукции приведено в [1]-[4], ГОСТ 12494, ГОСТ 31493, ГОСТ 31728, ГОСТ 31729, ГОСТ 31730, ГОСТ 31732, ГОСТ 31763, ГОСТ 32030, ГОСТ 33311, ГОСТ 33336, ГОСТ Р 52195, ГОСТ Р 52335, ГОСТ Р 52558, ГОСТ Р 55242, ГОСТ Р 55458, ГОСТ Р 55459, ГОСТ Р 55461, ГОСТ Р 56547 и ГОСТ Р 58206. Для идентификации могут быть использованы сведения из единой базы данных о компонентном составе винодельческой продукции (см. 6.3) и (или) документы, перечисленные в 4.3, а также иные документы по стандартизации и научно-технические документы, содержащие наборы признаков, критериев, параметров, показателей, сведений и (или) требований, характеризующих компоненты, физико-химический состав и связанные с ним свойства продукции, включая ее географическое и ботаническое происхождение, в том числе публикации в специализированных научных изданиях, отчеты о результатах научно-исследовательских работ, диссертации и иные научные документы, прошедшие рецензирование (экспертизу) и опубликованные в общедоступном формате.

Не допускается использование для проведения идентификации документов, к содержанию которых отсутствует или ограничен общий доступ.

4.5 Решение о проведении идентификации компонентного состава винодельческой продукции, а также о требуемом объеме информации для организации идентификации принимает заявитель либо лица, перечисленные в 3.11.

5 Методология идентификации

В зависимости от задач идентификации в части определения природы спирта (этанола) и других компонентов физико-химического состава винодельческой продукции специалисты - эксперты, проводящие идентификацию, используют методы аналитического исследования компонентов и критерии интерпретации результатов, приведенные в 5.1 и 5.2. Программа идентификации может быть составлена также с учетом или полностью на основе запросов заявителей (см. 3.10), направленных в адрес лица, проводящего идентификацию (см. 3.11). Настоящий стандарт основан на современных научно-технических знаниях, исходящих из результатов научно-исследовательских, экспертных и методических разработок, опубликованных в общедоступных специализированных изданиях в печатном и (или) электронном формате для технических сортов винограда и винодельческой продукции, производимой в природно-климатических и агротехнических условиях Российской Федерации, стран ЕАЭС и схожих с ними условиях зарубежных виноградарских и винодельческих регионов. В части технического обеспечения производства винодельческой продукции настоящий стандарт учитывает разрешенные в Российской Федерации и государствах - членах ЕАЭС технологические приемы и оборудование, а также принимает во внимание имеющиеся на момент разработки настоящего стандарта научные знания о техногенном влиянии используемых способов производства на физико-химический состав и свойства компонентов продуктов. Настоящий стандарт устанавливает в 5.2.1 требования к экспертам, участвующим в подготовке и проведении идентификации продукции, включая представление ее результатов в виде заключения (см. 6.2), рекомендуемая форма которого представлена в приложении А.

5.1 Инструментальные методы

5.1.1 Отбор проб

Отбор проб винодельческой продукции и (или) ее компонентов, используемых в качестве сырья, проводят в зависимости от вида продукта в соответствии с ГОСТ 31730.

5.1.2 Изучение документов

5.1.2.1 Перечень документов

Изучение документов проводят при необходимости. В перечень документов, подлежащих изучению, входят обязательные документы, предусмотренные нормативными правовыми актами Российской Федерации для обеспечения производства и торгового обращения продукции.

5.1.2.2 Критерии для изучения документов

Изучение документов предусматривает проверку содержания документов лицом, осуществляющим идентификацию, на соответствие приведенных в них сведений о винодельческой продукции нормативным правовым актам Российской Федерации, в том числе:

- соответствие наименования продукта;

- наличие ссылок о соответствии продукта нормативным правовым актам, в том числе документам по стандартизации, устанавливающим требования к винодельческой продукции и (или) ее компонентам;

- наличие сведений об области применения продукта;

- наличие сведений о составе продукта, пищевой и энергетической ценности;

- наличие сведений о сроке годности продукта;

- наличие сведений об условиях хранения продукта.

Дополнительно в документах проводят проверку:

- соответствия перечня физико-химических показателей продукта заявленному наименованию и описанию винодельческой продукции и (или) ее компонентов (см. 3.6);

- значений характеристик и значений физико-химических и органолептических показателей и их связи с конкретной партией продукции, подлежащей идентификации.

5.1.2.3 Дополнительные документы

Для изучения могут быть приняты во внимание дополнительные документы, предоставляемые изготовителем и (или) поставщиком продукции по запросу лица, осуществляющего идентификацию, или заявителя об идентификации. В качестве дополнительных документов для изучения могут быть приняты во внимание международные, межгосударственные (региональные) и национальные сертификаты о соответствии других стран, международных ассоциаций и межгосударственных объединений, а также протоколы испытаний продукции и (или) ее компонентов, проведенных в Российской Федерации и (или) в зарубежных научных и экспертных организациях.

5.1.3 Программа идентификации

Перед проведением идентификации эксперт разрабатывает программу (задание на проведение исследований), содержащую(ее) перечень существенных признаков (см. 3.4), подлежащих исследованию с применением инструментальных методов, установленных в 5.1.4-5.1.17, и (или) методов, установленных документами по стандартизации - национальными, межгосударственными, стандартами, сводами правил и (или) стандартами организаций (СТО).

Примечание - В соответствии с ГОСТ Р 1.4 перед утверждением стандартов организаций проводят их экспертизу. Экспертиза может быть проведена в соответствующем техническом комитете по стандартизации.

При этом используемые для идентификации документы по стандартизации должны включать методы исследований (анализа, испытаний, определения, измерений), основанные на иных аналитических принципах и обеспечивающие сопоставимость результатов исследований с результатами, полученными при исследовании соответствующих показателей методами, содержащимися в 5.1.4-5.1.17.

Программа идентификации включает нижеприведенные основные этапы, реализуемые последовательно.

Этап 1. Исследование обязательных для соблюдения показателей физико-химического состава, установленных в [1]-[3] и стандартах для соответствующего вида винодельческой продукции и (или) ее компонента: ГОСТ 12494, ГОСТ 31493, ГОСТ 31728, ГОСТ 31729, ГОСТ 31730, ГОСТ 31732, ГОСТ 31763, ГОСТ 32030, ГОСТ 33311, ГОСТ 33336, ГОСТ Р 52195, ГОСТ Р 52335, ГОСТ Р 52558, ГОСТ Р 55242, ГОСТ Р 55458, ГОСТ Р 55459, ГОСТ Р 55461, ГОСТ Р 56547 и ГОСТ Р 58206. Для исследования обязательных для соблюдения показателей физико-химического состава используют методы, предусмотренные нормативными правовыми актами Российской Федерации и документами по стандартизации. При выявлении в ходе исследований несоответствия свойств продукта (компонента) требованиям, установленным в документах по стандартизации для соответствующего вида винодельческой продукции, исследования на этапах 2 и 3 не проводят. В данном случае идентификация считается завершенной на этапе 1. Результат идентификации представляют согласно требованиям, приведенным в разделе 6.

Примечание - При наличии протокола испытаний объекта идентификации сторонней испытательной организации, содержащего результаты исследования минимального перечня показателей физико-химического состава, установленных в нормативных правовых актах Российской Федерации и документах стандартизации для соответствующего вида винодельческой продукции и (или) ее компонента, проведение исследований по этапу 1 по решению эксперта может быть исключено из программы.

Этап 2. В зависимости от задачи идентификации исследования на этапе 2 проводят по показателям, установленным в таблице 1. Данный этап реализуется при отсутствии отклонений в обязательном для соблюдения перечне показателей физико-химического состава, исследованных на этапе 1.

Таблица 1 - Показатели идентификации компонентного состава винодельческой продукции

Этап 3. В спорных (арбитражных) случаях, возникающих в практике оценки соответствия, в том числе в рамках мероприятий по контролю (надзору) за производством и торговым обращением винодельческой продукции и (или) ее компонентов (сырья), данный этап реализуется по решению эксперта для уточнения общего результата идентификации, а также с применением дополнительных показателей (см. таблицу 1) после проведения исследований по показателям этапа 2.

Практическая реализация программы идентификации осуществляется в собственной(ых) аккредитованной(ых) лаборатории(ях) лица, проводящего идентификацию, или по запросу этого лица в сторонней аккредитованной или иной(ых) лаборатории(ях), обладающей(их) аналитическими ресурсами и квалифицированным персоналом, необходимыми и достаточными для проведения полного объема исследований или части исследований, предусмотренных программой идентификации и задачами исследований (см. таблицу 1). Для подготовки и реализации программы идентификации лица, проводящие идентификацию, вправе обращаться в сторонние экспертные и научно-исследовательские организации.

________________

5.1.4.2 Стандартные образцы

________________

5.1.4.3 Сокращения

RMN-FINS - метод ядерного магнитного резонанса для исследования фракционирования специфичных природных изотопов.

V-PDB - международный стандартный образец мрамора с установленным изотопным составом углерода**.

__________________

m/z - отношение массы молекулы к ее заряду.

5.1.4.4 Сущность метода

5.1.4.5 Стандартные образцы, реактивы и материалы

Реактивы и расходные материалы зависят от технической конфигурации оборудования, используемого для измерения (см. 5.1.4.6). Большинство аппаратных систем основаны на применении элементного анализатора. Эти системы оборудованы устройствами для ввода проб, размещенных в запечатанных металлических капсулах (капсулированные твердые пробы). Жидкие пробы вводят в прибор, используя микрошприц или автоматический податчик для жидкостей.

Поставку стандартных образцов, приведенных в таблице 2, осуществляет МАГАТЭ.

Таблица 2

Поставку стандартных образцов, приведенных в таблице 3, осуществляет IRMM (Институт стандартных образцов и измерений, г.Геель, Бельгия).

Таблица 3

________________

5.1.4.6 Аппаратура

а) Масс-спектрометр для измерения отношений изотопов (IRMS)

б) Прибор для сжигания пробы

Прибор для сжигания должен количественно преобразовывать исследуемую пробу (сахар, этанол) в диоксид углерода, отделять другие продукты горения, включая воду, не допуская при этом изотопного фракционирования (изменения изотопного состава). Прибор может быть выполнен в виде системы, интегрированной в масс-спектрометр [см. 5.1.4.6б)1)], или в виде отдельного устройства [см. 5.1.4.6б)2)]. Прибор должен обладать характеристиками, заявленными в 5.1.4.11.

1) Система непрерывного измерения в потоке гелия

Данное оборудование может быть исполнено как элементный анализатор или как газовый хроматограф, оснащенный устройством для сжигания пробы в потоке гелия.

Следующий лабораторный материал используют для системы, ввод пробы в которой осуществляют в металлических капсулах:

- объемный микродозатор с соответствующими наконечниками;

- весы с точностью взвешивания в диапазоне микрограммов или лучше;

- пинцет для капсулирования;

- капсулы из олова для жидких проб;

- капсулы из олова для твердых проб.

Следующий лабораторный материал используют при применении элементного анализатора с автоматическим податчиком для жидких проб, а также при использовании хроматографической системы подготовки проб к сжиганию:

- микрошприц для жидкостей;

- флаконы для жидких проб с герметичной укупоркой с инертной мембраной.

Указанные лабораторные материалы являются примерами. В исследовании могут быть использованы эквивалентные лабораторные материалы, пригодные для работы с оборудованием для сжигания органических проб и масс-спектрометрических измерений.

2) Автоматизированная система подготовки проб

- закрытая система для сжигания, заполненная циркулирующим кислородом;

- элементный анализатор с регулируемыми потоками гелия и кислорода;

- стеклянный бульбовый сосуд для герметичного запаивания с внесенным оксидом меди (II), используемым в качестве окислительного реагента.

5.1.4.7 Подготовка проб

Этанол выделяют из спиртосодержащего образца (например, вино, сброженное сусло) путем дистилляции согласно условиям, установленным в 5.1.15.6, метода RMN-FINS (см. 5.1.15). Для исследования сахаров их предварительно сбраживают для получения этанола и его последующего выделения из исследуемого образца путем дистилляции согласно 5.1.15.6.

5.1.4.8 Проведение исследования

При подготовке к исследованию избегают значительных потерь этанола через его испарение, которое может привести к изменению изотопного состава пробы. Нижеприведенное описание процедуры исследования относится к способу применения коммерческих автоматизированных систем для сжигания проб. Другие методы и оборудование могут быть использованы при условии обеспечения ими количественного преобразования этанола в диоксид углерода без потерь спирта в результате испарения.

Последовательность экспериментального исследования включает следующие операции:

а) размещение проб в капсулах:

- используют капсулы, пинцет и чистый штатив для капсул,

- капсулы соответствующего размера для внесения пробы отбирают пинцетом,

- соответствующий объем жидкой пробы вносят в капсулу микропипеткой.

Примечание - 3,84 мг абсолютного этанола или 4,17 мг дистиллята крепостью 92% мас. необходимы для получения 2 мг углерода. Соответствующее количество дистиллята должен быть рассчитано аналогичным образом для обеспечения необходимого уровня чувствительности масс-спектрометрического измерения;

- герметично запечатывают капсулы пинцетом,

- каждая капсула должна быть полностью запечатана (в противном случае капсулу с пробой не используют при измерении),

- для каждой пробы готовят две капсулы,

- запечатанные капсулы размещают в устройстве подачи проб элементного анализатора (регистрируют номера проб в капсулах),

- системным образом в начале и в конце серии капсул с пробами размещают капсулы со стандартным образцом,

- внутри серии проб регулярно также размещают капсулы со стандартным образцом;

б) контроль и регулировка элементного анализатора и масс-спектрометра:

- проводят настройку реакторов элементного анализатора, потоков гелия и кислорода для оптимального сжигания проб,

- настраивают масс-спектрометр на диапазон измерения ионных токов по массам m/z =44, 45 и 46,

- контролируют всю систему путем измерения стандартного образца с установленным изотопным составом;

в) проведение серии измерений

5.1.4.9 Расчет и выражение результатов

5.1.4.10 Обеспечение качества исследования и контроль

Для каждой пробы разница между двумя измеренными значениями пробы в двух капсулах не должна превышать 0,3‰. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение измерений пробы в двух капсулах. При отклонениях более 0,3‰ измерения повторяют.

Контроль качества измерений может быть основан на регистрации интенсивности ионного тока по массе m/z=44, которая должна быть пропорциональна количеству углерода в пробе, внесенной в элементный анализатор. В стандартных условиях измерения интенсивность ионного тока должна оставаться постоянной для всех анализируемых проб. Значительные отклонения могут указывать на испарение этанола (например, негерметичная капсула) или на нестабильную работу элементного анализатора/масс-спектрометра.

5.1.4.11 Характеристики точности метода (прецизионность)

а) Межлабораторный эксперимент с дистиллятами (см. таблицы 4, 5)

Год проведения межлабораторного эксперимента - 1996 г.

Количество лабораторий - 20.

Количество образцов - 6 образцов для сравнения "двойным слепым" методом.

Таблица 4

Таблица 5

б) Межлабораторный эксперимент с двумя образцами вина и одним образцом спирта (см. таблицу 6)

Год проведения межлабораторного эксперимента - 1996 г.

Количество образцов - 3 образца (1 образец белого вина - спирт 9,3% об., 1 образец красного вина - спирт 9,6% об., 1 образец спирта крепостью 93% мас.).

Таблица 6

в) Результаты тестов на компетентность изотопных измерений

С декабря 1994 г. на регулярной основе организовывались и проводились тесты для оценки компетентности изотопных измерений. В тестах исследовались вина и спирты (дистилляты крепостью 96% об.). Участие в тестах позволило оценить лабораториям качество своих анализов.

Таблица 7

5.1.5.2 Стандартные образцы

5.1.5.3 Сокращения

SNIF-NMR - метод ядерного магнитного резонанса для исследования фракционирования специфичных природных изотопов.

V-PDB - международный стандартный образец мрамора с установленным изотопным составом углерода.

m/z - отношение массы молекулы к ее заряду.

5.1.5.4 Сущность метода

5.1.5.5 Аппаратура, реактивы, стандартные образцы

Реактивы и расходные материалы зависят от технической конфигурации оборудования, используемого для измерения (см. 5.1.5.6). Большинство аппаратных систем основаны на применении элементного анализатора. Эти системы оборудованы устройствами для ввода проб, размещенных в запечатанных металлических капсулах. Жидкие пробы вводят в прибор, используя микрошприц или автоматический податчик для жидкостей.

Поставку стандартных образцов, приведенных в таблице 8, осуществляет МАГАТЭ.

Таблица 8

Поставку стандартных образцов, приведенных в таблице 9, осуществляет IRMM.

Таблица 9

________________

5.1.5.6 Аппаратура

а) Масс-спектрометр для измерения отношений изотопов (IRMS)

б) Прибор для сжигания пробы

Прибор для сжигания должен количественно преобразовывать исследуемую пробу (этанол) в диоксид углерода, отделять другие продукты горения, включая воду, не допуская при этом изотопного фракционирования (изменения изотопного состава). Прибор может быть выполнен в виде системы, интегрированной в масс-спектрометр [см. 5.1.5.6б)1)], или в виде отдельного устройства [см. 5.1.5.6б)2)]. Прибор должен обладать характеристиками, заявленными в 5.1.5.11.

1) Система непрерывного измерения в потоке гелия

Данное оборудование может быть исполнено как элементный анализатор или как газовый хроматограф, оснащенный устройством для сжигания пробы в потоке гелия.

Следующее вспомогательное оборудование используют для системы, ввод пробы в которой осуществляют в металлических капсулах:

- объемный микродозатор с соответствующими наконечниками;

- весы с точностью взвешивания в диапазоне микрограммов или лучше;

- пинцет для капсулирования;

- капсулы из олова для жидких проб.

Следующее вспомогательное оборудование используют при применении элементного анализатора с автоматическим податчиком для жидких проб, а также при использовании хроматографической системы подготовки проб к сжиганию:

- микрошприц для жидкостей;

- флаконы для жидких проб с герметичной укупоркой с инертной мембраной.

В исследовании могут быть использованы эквивалентные лабораторные материалы, пригодные для работы с оборудованием для сжигания органических проб и масс-спектрометрических измерений.

2) Автоматизированная система подготовки проб

Диоксид углерода, предназначенный для анализа и образующийся при сжигании пробы и стандартного образца, концентрируют в бульбовом сосуде и вводят в систему двойного напуска для проведения изотопного измерения. При этом могут быть использованы разные типы аппаратов для сжигания, которые перечислены ниже:

- закрытая система для сжигания, заполненная циркулирующим кислородом;

- элементный анализатор с регулируемыми потоками гелия и кислорода;

- стеклянный бульбовый сосуд для герметичного запаивания с внесенным оксидом меди (II), используемым в качестве окислительного реагента.

5.1.5.7 Подготовка проб

Этанол выделяют из спиртосодержащего образца (например, вино, сброженное сусло) путем дистилляции согласно условиям, установленным в 5.1.15.6 метода RMN-FINS (см. 5.1.15). Для исследования сахаров их предварительно сбраживают для получения этанола и его последующего выделения из исследуемого образца путем дистилляции согласно 3.1.

5.1.5.8 Проведение исследования

При подготовке к исследованию избегают значительных потерь этанола через его испарение, которое может привести к изменению изотопного состава пробы. Нижеприведенное описание процедуры исследования относится к способу использования коммерческих автоматизированных систем для сжигания проб. Другие методы и оборудование могут быть использованы при условии обеспечения ими количественного преобразования этанола в диоксид углерода без потерь спирта в результате испарения.

Последовательность экспериментального исследования включает следующие операции:

а) размещение проб в капсулах:

- используют капсулы, пинцет и чистый штатив для капсул,

- капсулы, соответствующего размера, для внесения пробы отбирают пинцетом,

- соответствующий объем жидкой пробы вносят в капсулу микропипеткой.

Примечание - 3,84 мг абсолютного этанола или 4,17 мг дистиллята крепостью 92% маc. необходимы для получения 2 мг углерода. Соответствующее количество дистиллята должно быть рассчитано аналогичным образом для обеспечения необходимого уровня чувствительности масс-спектрометрического измерения;

- герметично запечатывают капсулы пинцетом,

- каждая капсула должна быть полностью запечатана (в противном случае капсулу с пробой не используют при измерении),

- для каждой пробы готовят две капсулы,

- запечатанные капсулы размещают в устройстве подачи проб элементного анализатора (регистрируют номера проб в капсулах),

- системным образом в начале и в конце серии капсул с пробами размещают капсулы со стандартным образцом,

- внутри серии проб регулярно также размещают капсулы со стандартным образцом;

б) контроль и регулировка элементного анализатора и масс-спектрометра:

- проводят настройку реакторов элементного анализатора, потоков гелия и кислорода для оптимального сжигания проб,

- настраивают масс-спектрометр на диапазон измерения ионных токов по массам m/z=44, 45 и 46,

- контролируют всю систему путем измерения стандартного образца с установленным изотопным составом;

в) проведение серии измерений

5.1.5.9 Расчет и выражение результатов

С учетом международного стандартного образца V-PDB корректировку значения проводят по формуле (2).

5.1.5.10 Обеспечение качества исследования и контроль

Для каждой пробы разница между двумя измеренными значениями пробы в двух капсулах не должна превышать 0,3‰. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение измерений пробы в двух капсулах. При отклонениях более 0,3‰ измерения повторяют.

Контроль качества измерений может быть основан на регистрации интенсивности ионного тока по массе m/z=44, которая должна быть пропорциональна количеству углерода в пробе, внесенной в элементный анализатор. В стандартных условиях измерения интенсивность ионного тока должна оставаться постоянной для всех анализируемых проб. Значительные отклонения могут указывать на испарение этанола (негерметичность капсулы) или на нестабильную работу элементного анализатора/масс-спектрометра.

5.1.5.11 Характеристики точности метода (прецизионность)

а) Межлабораторный эксперимент с дистиллятами (см. таблицы 10, 11)

Год проведения межпабораторного эксперимента - 1996 г.

Количество лабораторий - 20.

Количество образцов - 6 образцов для сравнения "двойным слепым" методом сравнения.

Таблица 10

Таблица 11

б) Межпабораторный эксперимент с двумя образцами вина и одним образцом спирта (см. таблицу 12)

Год проведения межлабораторного эксперимента - 1996 г.

Количество образцов - 3 образца (1 образец белого вина - спирт 9,3% об., 1 образец красного вина - спирт 9,6% об., 1 образец спирта крепостью 93% мас.).

Таблица 12

в) Результаты тестов на компетентность изотопных измерений

С декабря 1994 г. на регулярной основе организовывались и проводились тесты для оценки компетентности изотопных измерений. В тестах исследовались вина и спирты (дистилляты крепостью 96% об.). Участие в тестах позволило оценить лабораториям качество своих анализов.

Таблица 13

________________

5.1.6.2 Сущность метода

5.1.6.3 Реактивы

а) Деионизированная вода (качество ВЭЖХ) с электросопротивлением более 18 МОм.

б) Персульфат аммония для анализа (CAS 7727-54-0).

в) Ортофосфорная кислота для анализа концентрацией 85% (CAS 7664-38-2).

г) Гелий для анализа в качестве газа-носителя (CAS 07440-59-7).

д) Диоксид углерода для анализа для использования в качестве рабочего стандартного вещества (CAS 00124-38-9).

е) Международные стандартные образцы.

5.1.6.4 Аппаратура

а) Оборудование общелабораторного назначения для ежедневного использования.

б) Хроматограф ВЭЖХ.

в) Интерфейс для проведения окисления проб в жидкой среде химическим способом.

г) Масс-спектрометр для измерения отношений стабильных изотопов легких элементов (IRMS).

5.1.6.5 Проведение исследования

а) Подготовка пробы

В зависимости от концентрации сахаров, глицерина и этанола исходные образцы подлежат разбавлению деионизированной водой [5.1.6.3а)] до уровня, соответствующего условиям исследования. Также в зависимости от концентрации компонентов в определении одной пробы проводят два измерения с аналитами в разных разбавлениях.

б) Пример условий аналитического исследования

Общая длительность анализа - 20 мин.

Примерная степень разбавления образцов - виноградные соки и вина 1:200, концентрированное виноградное сусло 1:500.

Хроматограф ВЭЖХ:

________________

- подвижная фаза деионизированная вода [см. 5.1.6.3а)];

- скорость потока 0,4 мл/мин;

- температура колонки 80°C.

Интерфейс для окисления пробы:

- реактивы - раствор персульфата аммония концентрацией 15% мас. [см. 5.1.6.3б)], ортофосфорная кислота концентрацией 2,5% об.;

- температура нагревателя 93°C;

Масс-спектрометр IRMS:

- сила тока в ловушке 300 мкА.

в) Пример хроматограммы

На рисунке 1 представлена хроматограмма сладкого вина, исследованного методом ВЭЖХ в комбинации с масс-спектрометром IRMS.

Рисунок 1

5.1.6.6 Расчет и выражение результатов

5.1.6.7 Характеристики точности метода (прецизионность)

5.1.6.8 Результаты, полученные в эксперименте для каждого компонента

а) Статистическая обработка результатов межлабораторного эксперимента по подтверждению характеристик точности метода ВЭЖХ в комбинации с масс-спектрометром IRMS (повторяемость и воспроизводимость)

Перечень лабораторий с указанием страны приведен в таблице 14.

Таблица 14

Отклики - 12 лабораторий/14 откликов.

б) Обработка результатов межлабораторного эксперимента согласно ГОСТ Р ИСО 5725-2:

- образцы: 1 сухое вино (вино А), 1 сладкое вино (вино Б), 1 ректификованное концентрированное виноградное сусло (РКВС), 1 виноградный сок (ВС);

- аналитические условия: каждый образец исследован в двух повторностях (повторяемость) и двойным слепым способом (воспроизводимость);

- результаты выражены в промилях относительно стандартного образца PDB.

в) Характеристики точности метода при измерении глюкозы (повторяемость и воспроизводимость) приведены в таблице 15.

Таблица 15

г) Характеристики точности метода при измерении фруктозы (повторяемость и воспроизводимость) приведены в таблице 16.

Таблица 16

д) Характеристики точности метода при измерении глицерина (повторяемость и воспроизводимость) приведены в таблице 17.

Таблица 17

е) Характеристики точности метода при измерении этанола (повторяемость и воспроизводимость) приведены в таблице 18.

Таблица 18

5.1.7.2 Сокращения и определения

ГХ-IRMS - метод газовой хроматографии, реализованный в приборной комбинации газового хроматографа, устройства (интерфейса) для сжигания пробы и масс-спектрометра для измерения отношений стабильных изотопов легких элементов.

5.1.7.3 Сущность метода

________________

5.1.7.4 Реактивы, рабочие стандартные образцы

а) Безводный этанол (CAS 64-17-5).

в) 1,5-Пентандиол (CAS 111-29-5).

д) Ортофосфорная кислота.

е) Окислитель - пероксидсульфат натрия.

ж) Газ-носитель - гелий для анализа (CAS 07440-59).

и) Регенерирующий газ для окислительного реактора - кислород для анализа (CAS 07782-44-7).

5.1.7.5 Аппаратура

а) Масс-спектрометр IRMS

б) Газовый хроматограф

Используют газовый хроматограф, совмещенный с устройством для сжигания пробы и масс-спектрометром для измерения отношения стабильных изотопов [см. 5.1.7.5а)].

________________

Устройство (интерфейс) для сжигания пробы должно (должен) состоять из окислительного реактора (керамическая трубка с внутренним проволочным катализатором из никеля, платины и меди) и восстановительного реактора (керамическая трубка с внутренним проволочным катализатором из меди).

в) Жидкостный хроматограф

________________

________________

Устройство (интерфейс) для окислительного преобразования пробы должно(ен) быть оснащено (оснащен) окислительным реактором и мембранным обменником (три мембраны).

г) Оборудование

Используют оборудование общелабораторного назначения, в том числе:

- микрошприц для ввода проб или автоматический податчик проб;

- мерные колбы;

- мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм;

- хроматографические флаконы для проб;

Перечисленное оборудование указано в качестве примера. При исследовании может быть использовано другое оборудование со схожими характеристиками.

5.1.7.6 Подготовка проб

________________

________________

________________

5.1.7.7 Проведение исследования

а) ГХ-IRMS вариант

Процедура может быть адаптирована и изменена в соответствии с рекомендациями изготовителей конкретных инструментальных систем.

Примечание - Указанные объемы, температура, потоки и длительность являются примерами. Корректные значения должны быть установлены и оптимизированы в соответствии с указаниями изготовителей оборудования.

1) Рабочие условия

При использовании колонки и устройства для сжигания пробы, приведенных в 5.1.7.5б), действуют следующие параметры:

- температура инжектора - 270°С;

- температурная программа - начальная температура колонки 120°C, выдержка 2 мин. Затем повышают температуру со скоростью 10°C/мин до уровня 220°C с окончательной выдержкой в течение 2 мин. Длительность одного анализа составляет 14 мин (без учета времени на охлаждение оборудования);

- гелий (He) используют в качестве газа носителя;

- температура окислительного и восстановительного реакторов в устройстве для сжигания - 960°C и 640°C;

Каждый образец вина [5.1.7.6а)] исследуют в трех повторностях. В каждой серии проб должны быть предусмотрены пробы со стандартными образцами.

Типичную серию проб составляют следующим образом:

- контрольная проба;

- контрольная проба;

- проба 1;

- проба 1;

- проба 1;

- проба 2.

…

Каждую пробу измеряют в трех повторностях.

…

- проба 6;

- проба 6;

- проба 6;

- контрольная проба;

- контрольная проба.

б) Вариант ВЭЖХ-IRMS

Процедура может быть адаптирована и изменена в соответствии с рекомендациями изготовителей конкретных инструментальных систем.

Примечание - Указанные объемы, температура, потоки и длительность являются примерами. Корректные значения должны быть установлены и оптимизированы в соответствии с указаниями изготовителей оборудования.

1) Рабочие условия

При использовании колонки и устройства для сжигания пробы, приведенных в 5.1.7.5в), действуют следующие параметры:

- температура реактора и колонки - 99,9°C и 65°C соответственно;

Емкости с реагентами дегазируют гелием во время всего хроматографического анализа.

Каждый образец вина [см. 5.1.7.6в)] исследуют в трех повторностях. В каждой серии проб должны быть предусмотрены пробы со стандартными образцами.

Типичную серию проб составляют следующим образом:

- контрольная проба;

- контрольная проба;

- проба 1;

- проба 1;

- проба 1;

- проба 2.

…

Каждую пробу измеряют в трех повторностях.

…

- проба 6;

- проба 6;

- проба 6;

- контрольная проба;

- контрольная проба.

5.1.7.8 Расчет и выражение результатов

С учетом международного стандартного образца V-PDB корректировку значения проводят по формуле (2).

б) Определение концентрации глицерина в варианте ГХ-IRMS

При построении калибровочного графика и каждом вводе пробы, измеряемым параметром, принимаемым во внимание, является площадь пика S (выражена в V·s), регистрируемая на спектрометре. Вычисляют отношение R по формуле (5) и строят графическую зависимость R от соотношения C концентраций глицерина и внутреннего стандарта IS. Должен быть получен график линейной зависимости с коэффициентом корреляции не менее 0,99.

При условиях анализа, описанных в [см. 5.1.7.7а)1)], 1,5-пентандиол (время ретенции примерно 310 с) проявляет меньшую полярность, чем глицерин (время ретенции 460 с). Пример хроматограммы приведен на рисунке 2.

где K - фактор отклика, который вычисляют по формуле;

Обозначение "(стан)" относится к концентрациям и площадям пиков 1,5-пентандиола и глицерина в пяти стандартных растворах, приготовленных для калибровки [см. 5.1.7.7а)3)].

Фактор разбавления относится к этапу подготовки проб, описанных в 5.1.7.7. В этом случае фактор разбавления равен 4.

5.1.7.9 Обеспечение качества исследования и контроль

а) Вариант ГХ-IRMS

Для каждой пробы контролируют значение стандартного отклонения (SD), которое в трех измерениях не должно превышать уровня 0,6‰. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение, рассчитанное по результатам трех измерений. Если отклонение между результатами превышает 0,6‰, измерение повторяют.

Контроль качества измерений может быть основан на регистрации интенсивности ионного тока по массе m/z =44, которая должна быть пропорциональна количеству углерода в пробе, внесенной в элементный анализатор. В стандартных условиях измерения интенсивность ионного тока должна оставаться постоянной для всех анализируемых проб. Значительные отклонения могут указывать на недостаточный уровень хроматографического выделения или на окисление глицерина, а также на нестабильную работу элементного анализатора/масс-спектрометра.

б) Вариант ВЭЖХ-IRMS

Для каждой пробы контролируют значение стандартного отклонения (SD), которое в трех измерениях не должно превышать уровня 0,6‰. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение, рассчитанное по результатам трех измерений. Если отклонение между результатами превышает 0,6‰, измерение повторяют.

Контроль качества измерений может быть основан на регистрации интенсивности ионного тока по массе m/z=44, которая должна быть пропорциональна количеству углерода в пробе, внесенной в элементный анализатор. В стандартных условиях измерения интенсивность ионного тока должна оставаться постоянной для всех анализируемых проб. Значительные отклонения могут указывать на недостаточный уровень хроматографического выделения или на окисление глицерина, а также на нестабильную работу элементного анализатора/масс-спектрометра.

5.1.7.10 Характеристики точности метода (прецизионность)

а) Вариант ГХ-IRMS

1) Прецизионность

2) Определение концентрации глицерина

В дальнейшем в исследовании использованы пять образцов вина (A-E), в которых в рамках теста BIPEA по оценке компетентности лабораторий другими методами определена концентрация глицерина (см. таблицу 19).

Таблица 19 - Сравнение концентраций глицерина в пяти образцах упакованного вина

Примечания

1 Определение концентраций глицерина в тесте BIPEA проведено с использованием метода ВЭЖХ и (или) ферментативного анализа.

2 Указанные концентрации выражены в граммах на кубический дециметр (n>3, SD<0,6).

б) Вариант ВЭЖХ-IRMS

Для подтверждения характеристик метода в инструментальном варианте ВЭЖХ-IRMS использованы следующие образцы:

- стандартный образец глицерина;

- три модельных образца вина с типичными концентрациями глицерина, характерными для натурального вина;

- образец вина.

Прецизионность определения глицерина установлена путем десятикратного измерения каждой пробы в воспроизводимых условиях, а также путем проведения десяти независимых анализов одной и той же пробы в воспроизводимых условиях в течение трех произвольно выбранных дней (см. таблицу 20).

- воспроизводимость R=0,62‰.

5.1.7.11 Типичная хроматограмма ГХ-IRMS анализа глицерина в вине приведена на рисунке 2.

Рисунок 2 - Типичная хроматограмма ГХ-IRMS анализа глицерина в вине

5.1.7.12 Типичная хроматограмма ВЭЖХ-IRMS анализа глицерина приведена на рисунке 3.

Рисунок 3 - Типичная хроматограмма HPLC-IRMS анализа глицерина

5.1.8.2 Стандартные образцы

________________

5.1.8.3 Сокращения

1000 - расчетный фактор.

BCR - Официальное бюро стандартных образцов Европейского союза.

IAEA - Международное агентство по атомной энергии (Вена, Австрия).

IRMM - Институт стандартных образцов и измерений.

IRMS - масс-спектрометрия отношений стабильных изотопов легких элементов.

m/z - отношение массы к заряду.

NIST - Национальный институт стандартов и технологий.

RM - стандартный образец.

5.1.8.4 Сущность метода

5.1.8.5 Реактивы и материалы

а) Первичные стандартные образцы

________________

б) Рабочие стандартные образцы

Используют следующие рабочие стандартные образцы:

- гелий для анализа (CAS 07440-59-7).

5.1.8.6 Аппаратура

а) Масс-спектрометр для измерения отношений стабильных изотопов легких элементов (IRMS)

Масс-спектрометр, используемый в измерении, должен быть оснащен:

- или двойной системой напуска для измерения неизвестной пробы и стандартного образца;

б) Лабораторное оборудование и материалы

Используемое лабораторное оборудование должно удовлетворять требованиям метода, а также эксплуатироваться в соответствии с указаниями изготовителей. Применяют следующее оборудование или оборудование с аналогичными характеристиками:

- флаконы с герметичной укупоркой для проведения реакции изотопного уравновешивания в соответствующей аппаратной конфигурации;

- дозаторы с наконечниками соответствующей вместимости для дозирования жидких проб;

- воздушная или жидкостная система для термостатирования флаконов с пробами для проведения изотопного уравновешивания при постоянной температуре с точностью контроля ±1°C;

- вакуумный насос (если необходим для используемой аппаратной конфигурации);

- автоматический податчик проб (если необходим для используемой аппаратной конфигурации);

- устройство для удаления воды из газовой фазы (например, криоловушка, селективная мембрана или др.).

5.1.8.7 Отбор проб

Вино и сусло, а также стандартные образцы используют в определении без предварительной подготовки. При наличии признаков брожения в образцы добавляют бензойную кислоту (или другое вещество со схожим консервирующим действием) или фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм.

Предпочтительно, если при проведении определения стандартные образцы, используемые для калибровки, измеряют в начале и в конце измерения одной серии проб, а также после измерения каждой десятой пробы.

5.1.8.8 Проведение исследования

Примечание - Все значения, приведенные в настоящем методе, для определения объема, температуры, давления и длительности операций являются ориентировочными. Точные значения должны быть установлены согласно требованиям изготовителей оборудования и/или определены экспериментально.

а) Проведение уравновешивания в ручном режиме

Точный объем пробы или стандартного образца с помощью дозатора переносят в емкость, которую помещают в вакуумный манифолд. Манифолд охлаждают до температуры минус 80°C для замораживания пробы (емкость, снабженная капиллярами не нуждается в охлаждении и замораживании пробы/стандарта). Из манифолда откачивают воздух.

б) Применение автоматизированной системы изотопного уравновешивания

Точный объем пробы или стандартного образца с помощью дозатора переносят во флакон, которую(ый) размещают в системе для изотопного уравновешивания. Систему охлаждают до температуры минус 80°C для замораживания пробы (емкость, снабженная капиллярами не нуждается в охлаждении и замораживании пробы/стандарта). Затем из системы откачивают воздух.

в) Подготовка в ручном режиме. Реализация изотопного уравновешивания и анализ в автоматизированном режиме в системе двойного напуска масс-спектрометра IRMS

г) Применение автоматизированной системы для изотопного уравновешивания в условиях непрерывного потока гелия

Измерение проводят в соответствии с требованиями по использованию каждого типа аналитического оборудования.

5.1.8.9 Расчет и выражение результатов

5.1.8.10 Характеристики точности метода (прецизионность)

Воспроизводимость R равна 0,50‰.

Результаты межлабораторного эксперимента (см. [6]) по подтверждению характеристик точности метода приведены в таблице 22.

Таблица 22

5.1.9.3 Сокращения

________________

m/z - отношение массы молекулы к ее заряду.

5.1.9.4 Сущность метода

5.1.9.5 Реактивы и материалы

- жидкий азот;

- этанол;

В случае применения для исследования аналитической системы для непрерывных измерений в потоке гелия He (EA-IRMS или GC-IRMS) используют расходные материалы из нижеприведенного списка (другие материалы с аналогичными характеристиками могут заменить любой продукт из этого списка):

- гелий He для анализа (CAS 07440-59-7);

- кислород O для анализа (CAS 07782-44-7);

- в случае системы GC-IRMS капиллярная колонка и устройство для удаления воды на основе мембраны.

Таблица 23

5.1.9.6 Аппаратура

Используют обычное оборудование для измерения отношений изотопов углерода, в частности:

________________

- ГХ-IRMS (инструментальная конфигурация, основанная на ГХ и окислительно-восстановительном преобразовании пробы с масс-спектрометрией IRMS);

- EA-IRMS (инструментальная конфигурация, основанная на применении элементного анализатора ЕА, имеющего технические возможности для работы с жидкими или твердыми пробами).

- стеклянную или стальную вакуумную линию, оснащенную криоловушками и соединенную с вакуумным насосом для создания пониженного давления ниже 0,5 Па;

- герметичные флаконы для проб газа, применяемые для использования вместе с автоматическим податчиком проб в системах для непрерывного измерения в потоке гелия He;

- герметичные флаконы для аликвот игристого вина, применяемые для использования с вакуумными линиями и (или) в комбинации с автоматическим податчиком газовых проб в системах для непрерывного измерения в потоке гелия He.

5.1.9.7 Проведение исследования

Настоящий метод включает следующие три основные операции:

Приведенное ниже описание относится к тем способам, которые использованы лабораториями во время проведения межлабораторного эксперимента.

1) Отбор газовой пробы из верхней части бутылки осуществляют специальным устройством через бутылочную пробку при комнатной температуре.

2) Или отбор газовой пробы из верхней части бутылки осуществляют после удаления бутылочной пробки и герметичного укупоривания бутылки специальной пробкой, соединенной капилляром с устройством для отбора проб. При этом бутылка с игристым вином перед заменой укупорки должна быть предварительно охлаждена до температуры ниже 0°C, затем нагрета до комнатной температуры. Аликвоту газа, собранного в устройстве для отбора проб, отбирают специальным газовым микрошприцем и переносят в герметичные флаконы для газовой хроматографии.

Бутылку с игристым вином предварительно охлаждают до температуры от 4°C до 5°C перед удалением пробки. Аликвоту игристого вина переносят в специальный флакон, который подходит для подключения к вакуумной линии или к автоматическому податчику газовых проб.

Результаты статистической обработки данных, полученных в межлабораторном эксперименте, в котором использовались способы отбора (4) и (5), приведены в 5.1.9.15.

1) Неконденсированные газы и вода, присутствующие в пробе газовой смеси, удаляют в вакуумной линии с использованием криогенных ловушек.

- криогенная ловушка для удаления воды, поточно соединенная с системой непрерывных измерений в потоке гелия He;

- газовый хроматограф, соединенный или непосредственно с масс-спектрометром IRMS, или через устройство для сжигания проб.

5.1.9.8 Расчет и выражение результатов

________________

5.1.9.9 Характеристики точности метода (прецизионность)

Детали межлабораторного эксперимента по оценке прецизионности метода приведены в 5.1.9.14 и 5.1.9.15.

а) Повторяемость

В исследовании использованы способы отбора проб по 5.1.9.7а)1)-5.1.9.7а)3);

В исследовании использованы способы отбора проб по 5.1.9.7а)4), 5.1.9.7а)5).

б) Воспроизводимость

В исследовании использованы способы отбора проб по 5.1.9.7а)1)-5.1.9.7а)3);

В исследовании использованы способы отбора проб по 5.1.9.7а)4), 5.1.9.7а)5).

5.1.9.10 Протокол исследования

Протокол исследования должен содержать следующие данные:

- всю информацию, необходимую для идентификации исследуемого образца;

- ссылку на международный стандартизованный метод анализа;

- описание метода, включая процедуры отбора проб и измерения, а также описание использованной инструментальной системы;

- результаты исследования, единицы измерения, включая данные о значениях отдельных измерений, среднее арифметическое значение, вычисленные согласно 5.1.9.8;

- все отклонения от предписанной процедуры;

- все необычные отклонения, которые наблюдались во время исследования;

- дату исследования;

- наличие значения повторяемости измерений;

5.1.9.11 Экспериментальная процедура, основанная на использовании внепоточной системы для отбора проб и измерения (система разработана в лаборатории, используется внепоточная вакуумная линия и масс-спектрометр IRMS с двойным напуском)

а) Аппаратура

Внепоточная вакуумная линия с двумя криогенными ловушками (Р<0,05 мбар). Может быть использована стеклянная или стальная вакуумная линия.

б) Процедура (см. рисунок 4)

- соединяют устройство для отбора проб с вакуумной линией и проверяют ее герметичность;

- погружают вращающими движениями пуансон устройства в пробку бутылки, которую держат вертикально (вентили устройства закрыты);

- соединяют устройство с вакуумной линией и удаляют из нее воздух с помощью двух вентилей (вентиль 2 открыт, вентиль 1 закрыт);

- после создания вакуума в резервуаре закрывают вентиль 2, открывают вентиль 1 и оставляют устройство в таком состоянии на 1 мин. После достижения равновесия закрывают вентиль 1. Газ, оставшийся в резервуаре, подвергают очистке.

- откачивают неконденсированный газ (до достижения давления 0,05 мбар или ниже) прежде, чем закрыть измерительное устройство.

Рисунок 4 - Схема внепоточной системы

5.1.9.12 Экспериментальная процедура, основанная на использовании поточной системы для отбора проб и измерения (CF-IRMS)

а) Способ отбора проб

б) Процедура (см. рисунок 5)

1) Удаление воздуха из системы отбора проб

Из всей системы для отбора проб откачивают воздух до достижения негативного давления 1 мбар (вентиль 3 закрыт).

2) Отбор проб

Пробку бутылки прокалывают устройством для отбора проб и весь газовый объем в верхней части бутылки подают в емкость для хранения (GV) путем создания пониженного давления с увеличением общего давления до 50 мбар. Тонкая регулировка вентиля VF осуществляет контролируемый и медленный перевод газа. Во время перевода газ подвергается очистке в криоловушке.

3) Подача газа

Рисунок 5 - Схема поточной системы

5.1.9.13 Экспериментальная процедура, основанная на использовании газового хроматографа GC-C-IRMS

а) Характеристики оборудования:

________________

________________

________________

________________

б) Процедура

Примечание - Объем флакона должен быть меньше объема шприца.

Каждую пробу исследуют в четырех повторностях. Общее время анализа одной пробы составляет 6 мин (см. рисунок 7 с типичной хроматограммой).

Рисунок 7 - Типичная хроматограмма анализа GC-C-IRMS

3) Обработка результатов

________________

5.1.9.14 Статистическая обработка результатов межлабораторного эксперимента

В соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2 для проведения межлабораторного эксперимента, в котором приняли участие 11 европейских и одна мексиканская лаборатория (см. таблицу 24), определены следующие параметры:

- период проведения межлабораторного эксперимента - 2003-2004 гг.;

- количество лабораторий - 12;

- количество образцов - 5 ("слепые двойные" пробы);

Таблица 24

5.1.9.15 Статистическая обработка результатов межлабораторного эксперимента по исследованию игристых и газированных вин [способы отбора проб 5.1.9.7а)4) и 5.1.9.7а)5)]

Ниже приведены параметры, которые определены в качестве части межлабораторного эксперимента (см. таблицы 25, 26, рисунок 8), в котором приняли участие 16 лабораторий:

- период проведения межлабораторного эксперимента - 2013-2014 гг.;

- количество лабораторий - 16;

- типы образцов - игристые и газированные вина;

- количество образцов - 3 ("слепые двойные" пробы);

Таблица 25

Таблица 26

Рисунок 8

5.1.10 Метод определения основных соединений, экстрагируемых из древесины во время созревания алкогольных напитков виноградного происхождения

5.1.10.1 Настоящий метод предназначен для определения фурфурала, 5-гидроксиметилфурфурола, 5-метилфурфурола, ванилина, сиреневого альдегида, кониферилового альдегида, синапового альдегида, галловой, эллаговой, ванильной и сиреневой кислот и скополетина с помощью ВЭЖХ.

5.1.10.2 Сущность метода

Определение с помощью ВЭЖХ с детектированием методами спектрофотометрии в ультрафиолетовой области на нескольких длинах волн и спектрофлуорометрии.

5.1.10.3 Реактивы

Следует использовать реактивы аналитической чистоты. Используемая вода должна быть дистиллированной или, по меньшей мере, эквивалентной чистоты. Предпочтительно использовать воду прошедшую микрофильтрацию и имеющую сопротивление 18,2 МОм.

Перечень используемых реактивов:

- спирт этиловый объемной долей 96%;

- метанол квалификации для ВЭЖХ (растворитель B);

- кислота уксусная, разбавленная до объемной доли 0,5% (растворитель A);

- подвижные фазы (приведены только в качестве примера). Растворитель A (0,5%-ная уксусная кислота) и растворитель B (чистый метанол) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,45 мкм), при необходимости дегазируют на ультразвуковой бане;

- стандартные образцы сравнения чистотой не менее 99%: фурфурола, 5-гидроксиметилфурфурола, 5-метилфурфурола, ванилина, сиреневого альдегида, кониферилового альдегида, синапового альдегида, галловой, эллаговой, ванильной и сиреневой кислот и скополетина;

5.1.10.4 Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, в том числе:

________________

- шприцы для ВЭЖХ;

- устройство для мембранной фильтрации малых объемов;

- интегратор, компьютер или самописец с разрешающей способностью, согласующейся с разрешающей способностью прибора в целом, и в частности имеющие несколько каналов регистрации данных.

5.1.10.5 Проведение исследования

а) Подготовка анализируемых растворов к хроматографическому анализу

Градуировочные растворы и алкогольный напиток при необходимости фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор не более 0,45 мкм.

б) Условия хроматографического анализа

В некоторых случаях во избежание наложения пиков может потребоваться корректировка градиентной программы.

в) Анализ

Проводят хроматографический анализ градуировочных растворов по отдельности, затем в смеси. Корректируют условия хроматографического анализа таким образом, чтобы факторы разделения пиков всех компонентов были не менее двух. Проводят хроматографический анализ пробы, подготовленной по 5.1.10.5а), фильтрованной через мембранный фильтр. Определяют площади пиков на хроматограммах градуировочных растворов и пробы алкогольного напитка, рассчитывают концентрации компонентов.

5.1.10.6 Выражение результатов исследования

Концентрацию каждого компонента выражают в миллиграммах на кубический дециметр.

5.1.10.7 Характеристики точности метода (прецизионность)

Приведенные в таблицах 27-38 данные получены в 2009 г. в результате межлабораторных испытаний метода на различных алкогольных напитках, которые проведены в соответствии с процедурами, согласованными на международном уровне.

Обозначения:

nLT - число лабораторий - участников испытаний;

nL - число лабораторий, чьи результаты использованы для расчета характеристик прецизионности;

R - предел воспроизводимости;

Таблица 27 - Галловая кислота

Таблица 28 - 5-Гидроксиметилфурфурал

Таблица 29 - Фурфурал