allgosts.ru65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО65.120. Корма для животных

ГОСТ Р 51116-2017 Комбикорма, зерно и продукты его переработки. Определение содержания дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Обозначение:
ГОСТ Р 51116-2017
Наименование:
Комбикорма, зерно и продукты его переработки. Определение содержания дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2019
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
65.120

Текст ГОСТ Р 51116-2017 Комбикорма, зерно и продукты его переработки. Определение содержания дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


ГОСТ Р 51116-2017

Группа С19

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОМБИКОРМА, ЗЕРНО И ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ

Определение содержания дезоксиниваленола методомвысокоэффективной жидкостной хроматографии

Compound feeds, grain and grain by-products. Determinationof desoxinivalenol by high-performance liquid chromatographymethod

ОКС65.120

Датавведения 2019-01-01

Предисловие

Предисловие

1РАЗРАБОТАН Акционерным обществом "Всероссийскийнаучно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (АО"ВНИИКП"), Обществом с ограниченной ответственностью"ЛЮМЭКС-МАРКЕТИНГ" (ООО "ЛЮМЭКС-МАРКЕТИНГ")

2ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 "Комбикорма,белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы"

3УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства потехническому регулированию и метрологии от 15 сентября 2017 г. N1132-ст

4ВЗАМЕН ГОСТ Р51116-97


Правила применениянастоящего стандарта установлены в статье26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "Остандартизации в Российской Федерации". Информация обизменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (посостоянию на 1 января текущего года) информационном указателе"Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок- в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты".В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандартасоответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпускеежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты".Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются такжев информационной системе общего пользования - на официальном сайтеФедерального агентства по техническому регулированию и метрологии всети Интернет (www.gost.ru)

1Область применения

Настоящий стандартраспространяется на зерно, продукты его переработки, комбикорма,кормовые смеси и устанавливает метод определения содержаниядезоксиниваленола (далее - ДОН) высокоэффективной жидкостнойхроматографией (далее - ВЭЖХ) с очисткой экстракта от примесей спомощью колоночной хроматографии:

-с использованием оксида алюминия, активированного угля и катионитав изократическом режиме элюирования;

-с использованием активированного угля в градиентном режимеэлюирования.

Диапазон измеренийсодержания ДОН от 0,2 до 5,0 млн (мг/кг).

2Нормативные ссылки

Внастоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующиестандарты:

ГОСТ12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарнаябезопасность. Общие требования

ГОСТ12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общиесанитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредныевещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарнаятехника для защиты объектов. Основные виды. Размещение иобслуживание.

ГОСТ12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системывентиляционные. Общие требования

ГОСТ1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторнаястеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие техническиеусловия

ГОСТ4204 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ4461 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия

ГОСТ5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ ISO6497 Корма. Отбор проб

ГОСТ ISO6498 Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний

ГОСТ6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ9293 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Техническиеусловия

ГОСТ13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб

ГОСТ16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общиетехнические условия

ГОСТ20298 Смолы ионообменные. Катиониты. Технические условия

ГОСТ25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы,основные параметры и размеры

ГОСТ28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие техническиетребования и методы испытаний

ГОСТ29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипеткиградуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р12.1.019 Система стандартов безопасности труда.Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видовзащиты

ГОСТ РИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность)методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значенийточности на практике

ГОСТ Р53228 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологическиеи технические требования. Испытания

Примечание - Припользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действиессылочных стандартов в информационной системе общего пользования -на официальном сайте Федерального агентства по техническомурегулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодномуинформационному указателю "Национальные стандарты", которыйопубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускамежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" затекущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дананедатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующуюверсию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версиюизменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который данадатированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этогостандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если послеутверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на которыйдана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающееположение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуетсяприменять без учета данного изменения. Если ссылочный стандартотменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него,рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3Сущность метода

Сущность методазаключается в экстракции ДОН из анализируемой пробы смесьюацетонитрила с водой, очистке экстракта с помощью колоночнойхроматографии и определении ДОН с использованием обращенно-фазовойВЭЖХ с фотометрическим детектированием.

4Требования безопасности

4.1 При выполнениииспытаний необходимо соблюдать требования техники безопасности приработе с химическими реактивами по ГОСТ12.1.007, требования электробезопасности при работе сэлектроприборами по ГОСТ Р12.1.019, а также требования, изложенные в техническойдокументации на используемые приборы.

4.2 Работа с химическимиреактивами должна проводиться в вытяжном шкафу.

4.3 Помещение должно бытьоснащено вентиляционными системами по ГОСТ12.4.021, средствами пожаротушения по ГОСТ12.4.009 и соответствовать требованиям пожаробезопасности поГОСТ12.1.004.

4.4. Содержание вредныхвеществ в воздухе не должно превышать допустимых значений поГОСТ12.1.005.

4.5 ДОН обладаеттоксическим действием, поэтому необходимо избегать контакта кожныхпокровов с его растворами. При попадании раствора на кожу или настол необходимо смыть загрязнение проточной водой с моющимсредством, а затем обработать участок кожи и загрязненныеповерхности этиловым спиртом.

5Требования к проведению испытаний

5.1 Условия проведенияиспытаний

При подготовке ипроведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающейсреды

от 15°С до 25°С;

- относительная влажностьвоздуха

не более 80%;

- атмосферное давление

от 84,0 до 106,7 кПа;

- напряжение в сети

от 198 до 242 В;

- частота в сети

от 49 до 51 Гц.

5.2 Требования кквалификации оператора

Квыполнению испытаний и обработке их результатов допускаютспециалиста, имеющего высшее или среднее специальное образование иопыт работы в химической лаборатории, прошедшего соответствующийинструктаж, освоившего метод в процессе обучения и показавшегоудовлетворительные результаты при выполнении процедур контролякачества результатов измерений.

6Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ ISO6497, ГОСТ13496.0 или в соответствии с нормативными документами наанализируемые продукты.

7Подготовка проб

Подготовка проб киспытанию - по ГОСТ ISO6498.

8Определение содержания ДОН в изократическом режиме элюирования

8.1 Средстваизмерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

8.1.1 Хроматографжидкостный со спектрофотометрическим детектором, позволяющимпроводить измерения в диапазоне длин волн от 200 до 300 нм,снабженный программным обеспечением для сбора и обработкихроматографических данных.

8.1.2 Хроматографическаяколонка для ВЭЖХ, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, котораяобеспечивает в условиях выполнения анализа эффективность не менее5000 теоретических тарелок по пику ДОН. Для увеличения срока использования колонкирекомендуется использовать защитную колонку (предколонку),заполненную тем же сорбентом.
________________
Примером подходящей колонки являетсяколонка длиной 150 мм и внутренним диаметром 2,1 мм, заполненнаясорбентом Alltima С18 или Kromasil С18 с размером частиц 5 мкм. Этаинформация приведена для удобства пользователей стандарта и неявляется рекламой. Могут быть использованы колонки другихтипоразмеров и (или) с иным размером частиц, если они обеспечиваютуказанные требования по эффективности.

8.1.3 Весынеавтоматического действия по ГОСТ Р53228 с пределами допускаемой погрешности взвешивания ±0,001г.

8.1.4 Колбы мерные2(2а)-25(50, 100, 500)-2 по ГОСТ1770-74 (подраздел 1.3).

8.1.5 Цилиндры мерные1(2, 3, 4)-10(25, 50, 100, 250)-2 по ГОСТ1770-74 (подраздел 1.1).

8.1.6 Пипеткиградуированные 1(2, 3, 5)-1(1а, 2, 2а)-2-0,5(1, 2, 5, 10) поГОСТ29227-91 (раздел 5).

8.1.7 Дозатор пипеточныйодноканальный переменного объема 100-1000 мм с метрологическими характеристиками поГОСТ28311.

8.1.8 Стандартный образецсостава раствора ДОН в ацетонитриле (массовая концентрация ДОН -100 мкг/см, погрешность не более ±5,0 мкг/см) или ДОН кристаллический с массовой долейосновного вещества не менее 97%.

8.1.9 Колонкахроматографическая стеклянная (внутренний диаметр 10 мм, длина 20см).

8.1.10 Колонкахроматографическая стеклянная (внутренний диаметр 5 мм, длина 10см) с оттянутым концом и шарообразной верхней частью вместимостью10-15 см или пластиковые колонки (внутренний диаметр5 мм).

8.1.11 Испарительротационный, снабженный водяной баней с регулятором температуры вдиапазоне от 20°С до 90°С.

8.1.12 Насос лабораторныйвакуумный, мембранный или водоструйный по ГОСТ25336, обеспечивающий разрежение от 2,5 до 10 кПа.

8.1.13 Устройство дляперемешивания проб (шейкер), обеспечивающее частоту встряхивания до120 мин.

8.1.14 Шкаф сушильный,обеспечивающий температуру до 200°С.

8.1.15 Измельчитель проб,обеспечивающий измельчение до частиц размером менее 1 мм, напримерлабораторная мельница.

8.1.16 Холодильникбытовой по ГОСТ16317.

8.1.17 КолбыП-1-25(50)-14/23, П-2-100-34 или П-1-100-19-26(29-32) по ГОСТ25336 с притертыми стеклянными или полиэтиленовымипробками.

8.1.18 Воронки В-56-80 ХСпо ГОСТ25336.

8.1.19 Стаканы В-1(2)-50ТХС по ГОСТ25336.

8.1.20 Фильтры бумажные"красная лента".

8.1.21 Вата медицинскаягигроскопическая по ГОСТ5556.

8.1.22 Штативлабораторный универсальный.

8.1.23 Водадистиллированная по ГОСТ6709.

8.1.24 Ацетонитрил дляВЭЖХ, ос.ч. (оптическая плотность при 200 нм относительнодистиллированной воды должна быть не более 0,05, массовая доля водыне более 0,05%).

8.1.25 Алюминия оксид дляхроматографии нейтральный, фракция 50-150 мкм.

8.1.26 Катионит КУ-2-8 вН-форме по ГОСТ20298.

Примечание - Если вспецификации катионита не указана его форма, то перед началомработы необходимо перевести его в Н-форму в соответствии сприложением А.

8.1.27 Угольактивированный с размером частиц от 0,08 до 0,10 мм.

8.1.28 Кислота серная поГОСТ4204, х.ч. или азотная по ГОСТ4461, х.ч.

Примечание - Допускаетсяприменение других средств измерений с метрологическимихарактеристиками не хуже вышеуказанных, вспомогательногооборудования и материалов с техническими характеристиками не хужевышеуказанных и реактивов аналогичной или более высокойквалификации.

8.2 Подготовкастеклянной лабораторной посуды

8.2.1 Лабораторную посудудля приготовления и хранения элюента моют серной или азотнойкислотой (см. 8.1.28) без применения других моющих средств,тщательно промывают водопроводной и многократно ополаскиваютдистиллированной водой (см. 8.1.23) и сушат при температуре 105°С.Категорически запрещается использовать для мытья посуды хромовуюсмесь.

8.2.2 Остальнуюстеклянную посуду моют горячей водой с моющим средством, тщательноополаскивают дистиллированной водой (см. 8.1.23) и также сушат притемпературе 105°С.

8.3 Подготовкасорбента для колоночной хроматографии

Вчистый химический стаканчик (см. 8.1.19) помещают 10,0 г оксидаалюминия и 0,5 г активированного угля (см. 8.1.27), тщательноперемешивают при помощи стеклянной палочки.

Сорбент хранят встеклянной посуде с пришлифованной или полиэтиленовой пробкой. Срокхранения - 1 мес при комнатной температуре.

8.4 Приготовлениерастворов

8.4.1 Подвижная фазадля хроматографии

8.4.1.1 Общиетребования

Подвижную фазу передиспользованием дегазируют выдерживанием в течение 1-2 ч наультразвуковой бане или с помощью вакуумного насоса.

Подвижную фазу хранят вгерметично закрытой посуде. Срок хранения - 7 сут при комнатнойтемпературе.

Для приготовления ихранения подвижной фазы не допускается использование посуды срезиновыми и корковыми пробками.

8.4.1.2 Приготовлениеподвижной фазы

Вмерную колбу (см. 8.1.4) вместимостью 100 см при помощи градуированной пипетки (см.8.1.6) помещают 6 см ацетонитрила, объем раствора в колбедоводят до метки дистиллированной водой (см. 8.1.23) и тщательноперемешивают.

8.4.2 Приготовлениесмеси ацетонитрил - вода в соотношении 84:16 по объему дляэкстракции ДОН из пробы

Вмерную колбу (см. 8.1.4) вместимостью 500 см помещают 420 см ацетонитрила (см. 8.1.24), объем раствора вколбе доводят до метки дистиллированной водой (см. 8.1.23) итщательно перемешивают.

Срок хранения смеси вгерметично закрытой посуде - 1 мес при комнатной температуре.

8.4.3 Приготовлениерастворов ДОН

8.4.3.1 Общиетребования

Растворы ДОН хранят вхолодильнике при температуре от 2°С до 8°С в герметично закрытойпосуде, исключающей возможность испарения растворителя и контактраствора с материалами, отличными от стекла или фторопласта.

Допускается приготовлениеградуировочных растворов в меньших объемах (в виалах) сиспользованием пипеточных дозаторов (см. 8.1.7) и использованиеградуировочных растворов с иными значениями массовой концентрации вдиапазоне линейности градуировочной характеристики от 0,4 до 10,0мкг/см.

8.4.3.2 Приготовлениезапасного раствора ДОН

Вмерную колбу (см. 8.1.4) вместимостью 25 см помещают 1 см раствора стандартного образца составараствора ДОН в ацетонитриле (см. 8.1.8) и доводят до меткиацетонитрилом (см. 8.1.24).

Номинальное значениемассовой концентрации ДОН в запасном растворе составляет 4мкг/см.

Если значение массовойконцентрации ДОН, приведенное в паспорте на стандартный образец,отличается от номинального значения 100 мкг/см или для приготовления запасного раствораДОН отбирается менее 1 см стандартного образца, то фактическоезначение массовой концентрации ДОН в приготовленном растворе, мкг/см, вычисляют по формуле

, (1)


где - значение массовой концентрации ДОН врастворе стандартного образца, использованном для приготовлениязапасного раствора, мкг/см;

- объем стандартного образца, отобранныйдля разбавления, см;

- объем приготовленного раствора,см (25 см).

Срок хранения запасногораствора - 6 мес.

Примечание - Допускаетсяприготовление запасного раствора ДОН с использованием основногораствора, приготовленного по 9.3.2.2.

8.4.3.3 Приготовлениеградуировочных растворов ДОН

Вколбу для упаривания помещают указанный в таблице 1 объем раствораДОН с номинальным значением массовой концентрации 4 мкг/см (см. 8.4.3.2), удаляют растворительупариванием в вакууме при температуре водяной бани от 40°С до 45°С.Полученный сухой остаток растворяют в соответствующем объеме (см.таблицу 1) подвижной фазы (см. 8.4.1.2).


Таблица 1

Номерградуировочного раствора

Номинальноезначение массовой концентрации ДОН, мкг/см

Объем запасногораствора ДОН (см. 8.4.3.2), , см

Объем подвижнойфазы, добавляемый к сухому остатку, см

1

10

2,5

1

2

4

1

1

3

0,4

1

10


Срок храненияградуировочных растворов N 1 и N 2 - 7 сут, раствора N 3 - 1 сут вусловиях, исключающих испарение растворителя.

Фактическое значениемассовой концентрации ДОН в градуировочных растворах вычисляют по формуле

, (2)


где - фактическое значение массовойконцентрации ДОН в запасном растворе, вычисленное по формуле (1),мкг/см;

- объем запасного раствора, отобранный дляразбавления, см;

- объем приготовленного градуировочногораствора, см.

8.4.3.4 Приготовлениеконтрольного раствора ДОН

Контрольный раствор ДОН вподвижной фазе готовят согласно 8.4.3.3, используя аликвоту 0,5см запасного раствора ДОН номинальногозначения массовой концентрации 4 мкг/см (см. 8.4.3.2) и растворяя остаток послеупаривания в 2 см подвижной фазы (см. 8.4.1.2).

Номинальное значениемассовой концентрации ДОН в контрольном растворе составляет - 1мкг/см, фактическое значение вычисляют по формуле(2).

Срок хранения раствора -7 сут в условиях, исключающих испарение растворителя.

8.5 Подготовкахроматографа к работе

Подготовку хроматографа кработе проводят в соответствии с руководством по эксплуатации.Необходимые настройки программного обеспечения производят всоответствии с руководством пользователя программногообеспечения.

8.6 Условия проведенияхроматографического анализа

При использованиихроматографической колонки по 8.1.2 рекомендуются следующие условияхроматографического анализа:

-подвижная фаза - смесь ацетонитрил - вода (см. 8.4.1.2);

-рабочая длина волны - 210 нм;

-объемная скорость потока подвижной фазы - 150 мм/мин;

-объем дозирования - 20 мм;

-температура термостата колонки (при его наличии) - (25±1)°С.

При использовании колонокдругих типоразмеров скорость потока подвижной фазы и объемдозирования выбирают в соответствии с указаниями изготовителяхроматографа и колонки.

Допускается варьированиеобъемной доли ацетонитрила в составе подвижной фазы в диапазоне от4% до 8% с целью оптимизации разделения пиков ДОН и компонентовматрицы пробы.

8.7 Градуировкахроматографа

Градуировку хроматографарекомендуется проводить с использованием подвижной фазы (см.8.4.1.2).

Регистрируют не менеедвух хроматограмм для каждого градуировочного раствора (см.8.4.3.3), проверяют правильность автоматической разметки и, еслинеобходимо, корректируют ее.

Далее проводят процедуруградуировки согласно руководству пользователя программногообеспечения, определяют время удерживания и параметрыградуировочной характеристики.

Градуировочнуюхарактеристику признают приемлемой, если вычисляемые программойотносительное среднеквадратическое отклонение составляет не более5%, а коэффициент корреляции - не ниже 0,99.

Если хотя бы одно из этихусловий не выполняется, заново регистрируют хроматограммыградуировочных растворов и определяют параметры градуировочнойхарактеристики. При этом допускается отбраковыватьнеудовлетворительные данные, однако число принятых в градуировкуточек должно быть не меньше двух для каждого градуировочногораствора.

Повторную градуировкухроматографа проводят при неудовлетворительных результатах ееконтроля стабильности (см. 8.8), а также после проведения ремонтаили длительного простоя хроматографа.

8.8 Контрольстабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильностиградуировочной характеристики проводят в начале рабочего дня передизмерениями.

Для контроля стабильностиградуировочной характеристики используют контрольный раствор (см.8.4.3.4). Допускается в качестве контрольного раствора использоватьрастворы с другой массовой концентрацией ДОН, приготовленныеаналогично градуировочным в диапазоне линейности градуировочнойхарактеристики (см. 8.4.3.1), исходя из предполагаемого содержанияДОН в анализируемых пробах.

Регистрируют не менеедвух хроматограмм контрольного раствора.

На полученныххроматограммах проводят автоматическую идентификацию пика ДОН. Принеобходимости вносят программную коррекцию времени удерживанияпика.

При помощи программногообеспечения к хроматографу проверяют сходимость значений времениудерживания и значений массовой концентрации ДОН по формулам (3) и(4) соответственно.

, (3)


где и - время удерживания ДОН на первой и второйхроматограммах соответственно, мин;

- среднеарифметическое значение и , мин.

, (4)


где и - значения массовой концентрации ДОН вконтрольном растворе, определенные по первой и второйхроматограммам соответственно, мкг/см;

- среднеарифметическое значение и , мкг/см.

Градуировочнаязависимость признается стабильной, если выполняется условие

, (5)


где - среднеарифметическое значение и , мкг/см;

- фактическое значение массовойконцентрации ДОН в контрольном растворе (см. 8.4.3.4),мкг/см.

Если условие (5) невыполняется, то процедуру контроля повторяют и при получениинеудовлетворительного результата контроля градуировку хроматографапо 8.7 проводят заново.