ГОСТ 34821-2021 Мед натуральный. Определение содержания глюфосината, глифосата и его метаболита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

        ГОСТ 34821-2021

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ

Определение содержания глюфосината, глифосата и его метаболита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения

Natural honey. Determination of the content of glyphosinate, glyphosate and its metabolite by high-performance liquid chromatography with time-of-flight mass spectrometry high resolution detector

МКС 67.180.10

Дата введения 2022-06-15

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность" (МТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 24 декабря 2021 г. N 146-П)

За принятие проголосовали:

(Поправка. ИУС N 9-2022).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 февраля 2022 г. N 89-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34821-2021 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 15 июня 2022 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 9, 2022 год

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на натуральный мед и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с времяпролетным масс-спектрометрическим детектором высокого разрешения (далее - ВЭЖХ-ВПМС/МС) для определения содержания глифосата в диапазоне измерений от 0,05 до 2,00 мг/кг, его метаболита - от 0,10 до 2,00 мг/кг и глюфосината в диапазоне измерений от 0,50 до 20,00 мг/кг.

Примечание - Метаболит глифосата: аминометилфосфоновая кислота (далее - АМФК).

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085 Арматура трубопроводная. Клапаны предохранительные. Выбор и расчет пропускной способности

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 19792-2017 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 34037 Упаковка стеклянная для химических реактивов и особо чистых химических веществ. Общие технические условия

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Метод основан на экстракции глифосата, аминометилфосфоновой кислоты (АМФК), глюфосината из анализируемой пробы меда с последующей очисткой методом твердофазной экстракции и количественным определением их методом ВЭЖХ-ВПМС/МС. Детектирование анализируемых веществ проводят в режиме получения ионов фрагментов (MS/MS). Количественное определение анализируемых веществ выполняют методом внутреннего стандарта по площадям пиков идентифицированных соединений относительно градуировочной характеристики, полученной при анализе матричных градуировочных растворов.

4 Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1 При работе с химическими реактивами необходимо соблюдать общие требования безопасности обращения с вредными веществами, установленные в ГОСТ 12.1.007. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных в ГОСТ 12.1.005.

4.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021.

4.3 Приготовление градуировочных растворов и их изотопно-меченых аналогов проводят в вытяжном шкафу.

4.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019, правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085 и инструкций по эксплуатации приборов.

4.5 К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих высшее специальное образование, прошедших соответствующий инструктаж, владеющих техникой хромато-масс-спектрометрии и изучивших инструкции по эксплуатации используемых приборов.

4.6 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения содержания глифосата, АМФК, глюфосината применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду:

- весы высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой погрешности не более ±0,01 г;

- весы специального класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,1 мг;

- масс-спектрометр с времяпролетным детектором высокого разрешения с источником ионизации электроспреем с возможностью нагрева, и диапазоном измерений от 50 до 500 атомных единиц массы (а.е.м.) в режиме получения ионов фрагментов*;

________________

* Допускается использовать иное масс-спектрометрическое оборудование вида тройной квадруполь, позволяющее воспроизводить технические и метрологические характеристики, указанные в настоящем стандарте. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

- систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, оснащенную бинарным насосом высокого давления со смесителем, термостатом хроматографической колонки, обеспечивающим температуру нагрева до (50±1)°С;

- шейкер вортексного типа с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

- колонку хроматографическую* длиной 100 мм и внутренним диаметром 1,0 мм, заполненную сорбентом** на основе С18, с размером частиц сорбента не более 1,7 мкм;

________________

** Например, сорбент Ethylene Bridged Hybrid. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей, позволяющий проводить термостатирование при температуре 45°С;

- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 0°С до 10°С;

________________

________________

- баню ультразвуковую;

- систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 Мом·см;

- генератор азота, чистота получаемого азота не менее 90%;

- компрессор;

________________

- пробы, не содержащие глифосат, АМФК, глюфосинат, проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8, в зависимости от типа исследуемой матрицы ("чистые" пробы);

- бутыль стеклянную БТ-ГВ-1000 по ГОСТ 34037;

- колбы 1-10 (100, 200)-1 по ГОСТ 1770;

- цилиндры 1-10 (50, 250, 1000)-1 по ГОСТ 1770.

5.2 При определении содержания глифосата, АМФК, глюфосината применяют следующие реактивы:

- аммония гидроксид с массовой долей основного вещества не менее 25%;

- аммония ацетат с массовой долей основного вещества не менее 99%;

- ацетон с массовой долей основного вещества не менее 99%;

- воду деионизированную высокой чистоты с удельным сопротивлением 18,2 МОм·см при температуре 25°С;

- кислоту муравьиную с массовой долей основного вещества не менее 99%;

- кислоту соляную с массовой долей основного вещества не менее 37%;

- кислоту уксусную с массовой долей основного вещества не менее 99%;

- метанол с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- натрия гидроксид с массовой долей основного вещества не менее 97%;

- натрия тетраборат десятиводный с массовой долей основного вещества не менее 99,5%;

- 9-флуоренилметоксикарбонил хлорид (ФМОК-хлорид) с массовой долей основного вещества не менее 97%;

- эфир диэтиловый с массовой долей основного вещества не менее 99%.

5.3 При определении содержания глифосата, АМФК, глюфосината применяют следующие стандартные вещества.

5.3.1 Для приготовления исходных растворов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- глифосат;

- глюфосинат аммоний;

- аминометилфосфоновая кислота (АМФК).

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также вспомогательного оборудования, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1 Приготовление растворов

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 2 мес.

6.1.3 Приготовление боратного буферного раствора

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.

Срок хранения раствора при температуре от 0°С до 5°С - не более одной недели.

6.1.5 Приготовление 5%-ного раствора муравьиной кислоты

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более одной недели.

6.1.6 Приготовление смеси метанола, гидроксида аммония, воды в объемном соотношении (90:1:9)

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более одной недели.

6.1.7 Приготовление смеси воды, метанола, уксусной кислоты в объемном соотношении (79:20:1)

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более одной недели.

6.1.8 Приготовление подвижных фаз А и Б

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 2 мес.

Срок хранения растворов при комнатной температуре - не более 3 мес.

6.1.9 Приготовление смеси воды, метанола, муравьиной кислоты в объемном соотношении (65:30:5)

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более одной недели.

6.2 Приготовление матричных градуировочных растворов

где 5 - исходная масса определяемого аналита, мг;

с - массовая доля определяемого аналита в исходном веществе, %.

Растворы хранят в полипропиленовых пробирках с завинчивающимися крышками.

Срок хранения растворов при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.

Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при температуре от 2°С до 8°С - не более 2 мес.

Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при температуре от 2°С до 8°С - не более 2 мес.

Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.

7 Отбор и подготовка проб

7.1 Отбор проб

Отбор проб меда - по ГОСТ 19792.

7.2 Подготовка проб

7.2.1 Экстракция проб

Пробы готовят по ГОСТ 19792-2017 (подраздел 7.2). Подготовку проб проводят в соответствии с рисунком 1.

7.2.2 Очистка подготовленных проб методом ТФЭ

7.2.2.1 Очистку проводят в два этапа, используя картриджи для твердофазной экстракции с разными сорбентами.

Рисунок 1 - Подготовка анализируемых проб

8 Проведение измерений

8.1 Условия хроматографического разделения

8.1.1 Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2 Например, для колонки длиной 100 мм, диаметром 1 мм, с обращенно-фазовым сорбентом с размером частиц не более 1,7 мкм соблюдают следующие условия хроматографического анализа:

- температура колонки - 30°С;

- температура в отсеке устройства ввода проб - 20°С;

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б - по 6.1.8) в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 - Условия хроматографического разделения

8.1.3 Параметры настройки времяпролетного масс-спектрометрического детектора:

- температура источника - 350°С;

- напряжение на капилляре - 1,0 кВ;

- напряжение в источнике - 400 В;

- зарядное напряжение - 300 В;

- давление азота в распылителе - 400 кПа;

- температура газа осушения - 200°С;

- высокочастотное напряжение на воронке - 200 В;

- амплитуда напряжения - 200 В;

- амплитуда напряжения охладителя ионов - 40 В;

- время транспортировки ионов - 30 мкс;

- время накопления ионов - 10 мкс;

- скорость сканирования - 2 Гц;

- амплитуда напряжения ячейки соударений - 800 В.

8.1.4 Параметры работы времяпролетного масс-спектрометрического детектора в режиме MS/MS приведены в таблице 3.

Таблица 3

________________

Примечание - Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.2 Установление градуировочной характеристики

8.2.1 Установление и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии измерений с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра в автоматическом режиме, по наиболее интенсивному ион-продукту.

8.2.3 При установлении градуировочной характеристики, в координатах "отношение площади пика определяемого вещества к площади пика внутреннего стандарта этого вещества" - "массовая концентрация определяемого вещества в градуировочном растворе", используют линейную регрессию, при этом квадрат коэффициента корреляции должен быть не менее 0,98.

8.3 ВЭЖХ-ВПМС/МС измерение

8.3.2 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков ион-продуктов каждого аналита, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов по 8.1.4.

8.3.3 При количественном определении глифосата, АМФК, глюфосината, вычисляют отношения площадей пиков ион-продуктов в анализируемой пробе и сравнивают их с отношениями площадей пиков ион-продуктов в градуировочных растворах, отклонения не должны превышать значений, указанных в таблице 4.

Таблица 4 - Допустимые отклонения сигналов ионных интенсивностей

9 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания глифосата, АМФК, глюфосината с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k=2 и доверительной вероятности Р=0,95, указанной в таблице 5.

Таблица 5 - Показатели точности метода при проведении измерений содержания глифосата, АМФК, глюфосината

10 Обработка результатов измерений

10.1 Используя данные, полученные при анализе проб совместно с матричными градуировочными растворами, проводят обработку хроматограмм с помощью программного обеспечения, получая значения концентрации аналитов в анализируемой пробе.

10.2 За окончательный результат измерений содержания глифосата, АМФК, глюфосината принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие

r - допускаемое расхождение для двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, %, приведенное в таблице 5;

10.3 При невыполнении условия (2) получают дополнительно еще один результат измерений. За результат измерений принимают среднеарифметическое значение трех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие

10.4 При невыполнении условия (3) за окончательный результат измерений принимают медиану трех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (2).

10.5 Конечный результат округляют до второго десятичного знака.

11 Оформление результатов измерений

Содержание i-го аналита, мг/кг, представляют в виде

0,01 - коэффициент перевода значения относительной расширенной неопределенности в значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах.

12 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

12.1 Расхождение между результатами измерений, полученными в разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости

R - предел воспроизводимости, выраженный в относительных единицах. Значения предела воспроизводимости приведены в таблице 5.

12.2 При выполнении условия (5) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднеарифметическое значение.

13 Контроль качества результатов измерений

13.1 Контроль качества результатов измерений предусматривает:

- оперативный контроль процедуры измерений с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением образцов для контроля;

- контроль стабильности результатов измерений проводят с использованием контрольных карт Шухарта для контроля погрешности с применением образцов для контроля.

Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

13.2 Оперативный контроль процедуры измерений

13.2.2 Оперативный контроль процедуры измерений проводят по следующей схеме:

- проведение контрольного измерения и получение результата контрольной процедуры;

- расчет норматива контроля (K).

Реализация решающего правила контроля - сопоставление результата контрольной процедуры с нормативом контроля и выводы по результатам контроля.

13.2.3 Оперативный контроль процедуры измерений может быть проведен с применением метода добавок по 13.3.

Применение метода добавок используют при наличии условий для создания проб с введенными добавками, адекватных анализируемым пробам и при отсутствии образцов для контроля.

При организации контроля исполнитель анализа в соответствии с выбранным алгоритмом проведения контрольной процедуры анализа выбирает (при необходимости готовит) средства контроля.

Результаты контрольных измерений, полученные при оперативном контроле процедуры анализа, проводимом с каждой серией рабочих проб, могут быть использованы при реализации любой из форм контроля стабильности результатов анализа.

13.3 Оперативный контроль процедуры измерений с применением метода добавок

13.3.1 Средствами контроля являются:

- пробы, исследуемые по методу (рабочие пробы);

- пробы, исследуемые по методу с известной добавкой определяемого компонента (рабочие пробы с добавкой).

13.3.4 Норматив контроля K, мг/кг, вычисляют по формуле

13.3.5 При сопоставлении результата контрольной процедуры с нормативом контроля должно выполняться условие

При невыполнении этого условия контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (10) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительному результату, и принимают меры к их устранению.

где X - результат контрольного измерения аналита в образце для контроля;