allgosts.ru11. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ11.100. Лабораторная медицина

ГОСТ Р ИСО 16256-2015 Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания

Обозначение:
ГОСТ Р ИСО 16256-2015
Наименование:
Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания
Статус:
Действует
Дата введения:
06/01/2016
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
11.100.10

Текст ГОСТ Р ИСО 16256-2015 Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания



ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ


ГОСТ Р исо 162562015


НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ IN VITRO

Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные

заболевания

ISO 16256:2012

Clinical laboratory testing and in vitro

diagnostic test systems — Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases

(IDT)

Издание официальное

Москва

Стендартм и форм 2015


Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью «Медтахстамдарт» (ООО «Мед-техстандарт») на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта. указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕНТ ехническим комитетом по стандартизации ТК380 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro*

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 апреля 2015 г. No 300-ст

4    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 16256:2012 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтный метод для тестирования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания» (ISO 16256:2012 «Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems — Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases»)

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0—2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе я Национальные стандарты», а официальный текст изменении и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стан-дарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя <tНациональные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2015

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

и

Содержание

in

Введение

Испытания чувствительности in vitro проводятся на микроорганизмах, предположительно являющихся причиной заболевания, особенно если организм относят к видам, которые могут проявлять резистентность к часто используемым антимикробным препаратам. Данные исследования также важны для контроля над резистентностью, в эпидемиологических исследованиях чувствительности и при сравнении новых и существующих препаратов.

Процедуры разведения используются для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) антимикробных препаратов и представляют собой референтный метод испытания чувствительности микроорганизмов к антимикотическим препаратам.

Методы МПК используются:

•    для наблюдения над резистентностью.

•    при сравнительных испытаниях новых препаратов для исследовательских и регистрационных целей;

•    для определения чувствительности организмов, которые в рутинных тестах показывают сомнительные результаты:

- для испытаний на организмах, для которых рутинные тесты могут быть ненадежными, и в случае, когда для клинической практики необходим количественный результат.

В методах разведений микроорганизмы проверяются на способность к видимому росту на ряде агариэоваиных сред (разведение в агаре) или в бульоне (разведение в бульоне), содержащих последовательные разведения антимикробного препарата.

Наименьшую концентрацию антимикробного препарата (в мг/л). которая при определенных условиях испытаний in vitro подавляет видимый или оптически измеримый рост микроорганизмов в течение определенного промежутка времени, называют МПК.

МПК служит руководством для определения чувствительности организма к антимикробным препаратам для практикующего врача и помогает в принятии решения о проведении лечения. Необходимы тщательный контроль и стандартизация внутри- и межлабораторной воспроизводимости, поскольку результат в значительной степени зависит от методов испытания.

Общепринято, что при анализе МПК в бульонных тестах, воспроизводимых в пределах единственного двукратного разведения, результат достоверен (т. в. ± 1 лунка или пробирка в серии двукратных разведений).

Разведение в бульоне — техника, при которой емкости, содержащие идентичные объемы растворов бульона с антимикробными препаратами в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), инокулированы известным количеством микроорганизмов.

Микроразведение в бульоне — тестирование в бульоне, выполняемое в планшетах для микроразведения.

Референтные методы настоящего стандарта предназначены для испытаний чистых культур дрожжевых грибов. Методы микроразведения в бульоне, описанные в настоящем стандарте, по существу аналогичны методам Clinical and Laboratory Standards Institute (Института клинических и лабораторных Стандартов) (CLSI) (1) и методам European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (Европейского комитета no вопросам исследования Чувствительности к Антимикробным препаратам) (EUCAST) (2).

Настоящими методами была показана схожесть, вплоть до идентичности, в определении значений МПК для флуконазоладо2 мг/л (3). Исследования с некоторыми другими антимикотическими препаратами запланированы или находятся в процессе подготовки. Лаборатории, желающие использовать настоящий стандарт для проведения исследований новейших антимикотических препаратов, либо в качестве референтного метода для сопоставления МПК, проводимого с помощью диагностических приборов, должны выбрать процедуры испытания, основываясь на варианте прочтения МПК. установленного путем визуального анализа (CLSI метод) или при использовании спектрофотометра (EUCAST метод), в обоих случаях должны в точности соблюдаться процедурные детали для выбранного параметра.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ

IN VITRO

Референтный метод для тестирования активности In vitro антимикробных препаратов в отношении дрожжевых грибов, вызывающих инфекционные заболевания

Clinical laboratory testing and m vitro diagnostic test systems. Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved In infectious diseases

Дата введения — 2016—06—01

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ! Применение настоящего стандарта может быть связано с использованием опасных материалов, процедур и оборудования. Настоящий стандарт не предусматривает решения проблем безопасности, связанных с его применением. Ответственность за введение соответствующих правил техники безопасности, мер по охране здоровья и определение применимости регулятивных ограничений до начала использования полностью лежит на пользователе настоящего стандарта.

1 Область применения

Настоящий стандарт описывает метод испытания чувствительности к антимикотическим препаратам дрожжевых культур, вызывающих инфекции, включая Candida spp. и Cryptococcus neoformans. Референтный метод, описанный в настоящем стандарте, не использовался в исследованиях дрожжевых форм диморфных грибов, таких как в. dermatitidis и/или Н. capsulatum. разновидность capsulatum. Кроме того, исследования мицелиальных грибов (плесени) позволили выявить несколько дополнительных проблем в стандартизации, которые не учтены в данной методике. Референтные методы разведения в бульоне для тестирования чувствительности к антимикотическим препаратам мицелиальных грибов разработаны и в настоящее время доступны в виде CLSI документа М38 и EUCAST документа E.DEF 9.1 (4), [5), (6). ГП- [8].

Настоящий стандарт описывает референтный метод микроразведения в бульоне, который может быть выполнен двумя различными путями. Один путь подразумевает визуальное определение МПК (CLSI метод) (1); второй — спектрофотометрическое (EUCAST метод) [2]. МПК свидетельствует об активности лекарственного препарата в описанных условиях испытания и может быть интерпретирован для цепей клинической практики с учетом и других факторов, таких как фармакология лекарственных средств или механизмы антимикотической резистентности. МПК могут быть распределены последующим категориям: «чувствительные)* (Ч) («susceptible*. S). «чувствительные, доэозависимые» (ЧДЗ) («susceptible dose-dependent», S-DD). «промежуточные» (П) («intermediate», f). «нечувствительные» (НЧ) («поп-susceptible». NS), резистентные» (Р) («resistant», R). Дополнительно, классификация МПК может быть использована для определения дикого и не дикого типов грибных популяций. Клиническая интерпретация значений МПК находится вне области применения настоящего стандарта: интерпретацию категорий пограничных значений, характерных для методов, производныхот CLSI и EUCAST. можно найти, сверившись с последними пояснительными таблицами, предоставляемыми организациями [2]. |9]. Желательно сравнивать методы рутинного тестирования чувствительности или диагностических приборов для тестирования сданным референтным методом с целью гарантирования сопоставимых и надежных результатов для валидации и регистрации.

Издание официальное

2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1    антимикотический препарат (antifungal agent): Вещество биологического, полусимтетичвс-кого или синтетического происхождения, которое подавляет или полностью останавливает рост грибов, и таким образом потенциально применимо для лечения инфекций.

Примечание — Дезинфицирующие среде г ее. антисептики и консерванты не включены елейное определение.

2.2    антимикотические препараты — свойства (antifungal agents-properties)

2.2.1    активность (potency): Активная фракция тестируемого вещества, определяемая в биопробе в сравнении с референтным образцом того же вещества.

Примечание — Активность выражают как массовую долю а миллиграммах на грамм (мг/г). или как значение активности а Международных единицах (ME) на грамм, или как объемная доля а процентах, или как молярная концентрация а молях на литр компонентов е испытуемом веществе.

2.2.2    концентрация (concentration): Количество антимикотического препарата в определенном объеме жидкости.

Примечания

1    Концентрацию выражают а мг/л.

2    мг/л ■ м кг/м л. но не рекомендуется использование единицы измерения мкг/мл.

2.3    основной раствор (stock solution): Исходный раствор, используемый для дальнейших разведений.

2.4    минимальная подавляющая концентрация: МПК (minimum inhibitory concentration, MIC): Наименьшая концентрация, которая при определенных условиях испытания in vitro ослабляет рост на определенную величину в течение определенного периода времени.

Примечание — МПК выражают а мг/л.

2.5    пограничные значения (breakpoint ВР). Специфические значения МПК. которые могут быть использованы для распределения грибов по клиническим категориям: «чувствительные)» (Ч) («susceptible». S). «чувствительные, дозозависимые» (ЧДЗ) («susceptibledose-dependent». S-DD). «промежуточные» (П) («intermediate», /). «нечувствительные» (НЧ) («полsusceptible», NS) или «резистентные» (Р) («resistant». Я).

Примачани а — Для текущих интерпретаций пограничных значений можно сослаться на последние публикации организаций, применяющих данный референтный метод (например. CLSIand EUCAST)(1J, |2]. |9).

2.5.1    путь визуального чтения (visual reading pathway)

2.5.1.1    «чувствительный»; Ч («susceptible». S): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, ассоциированный с высокой вероятностью терапевтического успеха.

Примечания

1    Грибные штаммы относят к категории чувствительных при применении соответствующих пограничных значений а определенной фенотипической тест-системе.

2    Данное пограничное значение может быть изменено а определенных обстоятельствах (например, изменения а обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).

2.5.1.2    «чувствительные, дозозависимые»; ЧДЗ (susceptibledose-dependent, S-DD): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, который может быть применен in vivо при использовании повышенных доз препарата, если такие схемы применения безопасны.

Примечания

1    Грибные штаммы относят к категории «чувствительных, дозозееисимых» при применении соответствующих пограничных значений а определенной фенотипической тест-системе.

2    Данный класс чувствительности означает, что инфекция, вызванная изолятом. может быть соответствующим образом обработана а таких участках теле, где лекарственный препарат присутствует в физиологических концентрациях. или при использовании высокой дозы лекарственного препарата.

3    Данное пограничное значение может быть изменено а определенных обстоятельствах (например, изменения а обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).

2.5.1.3    «промежуточный»; П («intermediate», t): Микроорганизм, уровень лротиеомикробиой активности препарата к которому связан с неопределенным терапевтическим эффектом.

Примечание — Отсюда следует, что инфекция, вызванная м зол ртом, может быть соответствующим образом обработана а таких участках тела, где лекарственный препарат присутствует а физиологических концентрациях. или при использовании высокой дозы лекарственного препарата; он также указывает на буферную зону, которая должна предотвращать мелкие неконтролируемые технические факторы от несоответствий а интерпретации.

2.5.1.4    «нечувствительный»; H4(«nonsusceptible». NS): Категория, используемая для дрожжевых грибов, для которых е настоящее время олределена только интерпретативная категория «чувствительные». но не интерлретивные категории «чувствительные, дозозависимые», «промежуточные» и «устойчивые» (тоесть исключительно интепретивная категория «чувствительные»).

Примечание — 8 данную категорию обычно включают новые антимикотические препараты, для которых еще не встречались резистентные изолягы.

2.5.1.5    резистентный; Р(« resistant»./?): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, ассоциирующийся с высокой вероятностью отсутствия терапевтического успеха.

Примечания

1    Штаммы грибов относятся к категории резистентных при применении соответствующих пограничных значений а заданной фенотипической тест-системе.

2    8 определенных обстоятельствах пограничные значения могут быть изменены (например, изменения а обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).

2.5.2 путь спвктрофотомвтричвского чтения (spectrophotometric reading pathway)

2.5.2.1    чувствительный; Ч («susceptible», S): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с высокой вероятностью терапевтического успеха.

2.5.2.2    промежуточный; П(« intermediate»,/): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с сомнительным терапевтическим эффектом.

Примечание — Отсюда следует, что инфекция, вызванная м зол атом, может быть соответствующим образом обработана а таких участках тела, где лекарственный препарат присутствует в физиологических концентрациях, и л и при использовании высокой дозы лекарственного препарата: он также указывает на буферную зону, которая должна предотвращать мелкие неконтролируемые технические факторы от несоответствий а интерпретации.

2.5.2.3    резистентный; Р («resistant», R): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с высокой вероятностью терапевтической неудачи.

2.6    дикий тип (wild type): Отсутствие приобретенных механизмов резистентности к антимикотическому препарату для данного грибного штамма.

2.7    референтный штамм (reference strain): Зарегистрированный, полностью охарактеризованный грибной штамм с определенными стабильными фенотипами и/или генотипами чувствительности к антимикотикам.

Примечание — Референтные штаммы хранят а качестве исходных культур, из которых получают рабочие культуры. Они могут быть получены из коллекций культур и использованы для контроля качества.

2.8    методы испытания чувствительности

2.8.1    разведение в бульоне (broth dilution): Техника, при которой емкости заполняются соответствующими объемами антимикотического раствора, с использованием возрастающих (в два раза) концентраций антимикотического препарата и соответствующих объемов бульона заданного инокулюма.

Примечание — Цель этого метода заключается а определении МПК.

2.8.2    микроразведение (microdilution): Выполнение разведения в бульоне е планшетах для микроразведения емкостью 5300 мкл на лунку.

2.9    бульон (broth): Жидкая среда, обычно используемая для выращивания дрожжевых грибов

in vitro.

2.10    инокулюм (inoculum): Количество дрожжевых клеток в суспензии в расчете на конечный объем.

Примечание — Инокулюм выражается а колонне образуют их единицах на миллилитр (КОЕ/мл).

2.11    инокулюм -эффект (inoculum effect): Изменения в МПК. связанные с изменениями в иноку-люме.

з

3 Процедуры испытания

3.1    Общие положения

Испытания выполняют в пластиковых одноразовых планшетах для микрораэведения. Метод основан на подготовке рабочего раствора антимикотического препарата двойной концентрации объемом ЮОмклна лунку с добавлением инокулюма объемом также 100 мкл.

3.2    Питательная среда

3.2.1    Общие положения

Следует использовать бульон RPMH640 (см. приложение А для уточнений при приготовлении двух вариантов глюкозного бульона RPMM640)

3.2.2    Путь визуального чтения

Среда RPMИ 640 должна содержать 0,2 % глюкозы. Бульон RPMI-1640 готовят и разливают в одинарной концентрации с двойной концентрацией разведения антимикотического препарата и инокулюма в соответствующих объемах бульона RPMM640. содержащего суспензию заданного дрожжевого инокулюма.

3.2.3    Путь слектрофотометрического чтения

Среда RPMM640 должна содержать 2 % глюкозы. Бульон RPMM640 и антимикотический препарат готовят в двойной концентрации с инокулюмом. добавленным позже в соответствующие объемы стерильной дистиллированной воды.

3.3    Антимикотические препараты

3.3.1    Общие положения

Антимикотические препараты должны быть получены непосредственно от изготовителя либо из надежных коммерческих источников; фармацевтические препараты клинического назначения недопустимы. Антимикотические препараты должны быть снабжены номером партии, содержанием действующих веществ, сроком годности и подробными рекомендациями по условиям хранения. Вещества следует хранить в плотно закрытых контейнерах в темноте, при температуре минус 20 °С, с осушителем, если изготовителем не рекомендовано иное. Гигроскопичные препараты должны быть разделены на аликвоты, каждую из которых используют для одного испытания.

Прежде чем открывать контейнеры, их оставляют нагреваться до комнатной температуры во избежание образования конденсата и потери активности.

3.3.2    Приготовление основных растворов

Для взвешивания антимикотических препаратов требуются калиброванные аналитические весы. Расчет активности порошка для получения необходимого количества субстанции антимикотического препарата или количества разбавителя, необходимого для стандартного раствора, проводят по следующим формулам:

_тР р *


(D

(2)

где р — концентрация основного раствора, мг/л;

т — масса антимикотического препарата (порошок), г;

Р — активность антимикотического препарата (порошок), мг/г;

V — объем разбавителя, л.

Концентрация основного раствора должна быть 1000 мг/л или более, несмотря на то. что растворимость некоторых препаратов является лимитирующим фактором. Фактические концентрации основных растворов зависят от метода приготовления рабочих растворов (серийных разведений). Некоторые препараты требуют альтернативных растворителей (см. таблицу 1). Обычно нет необходимости в стерилизации растворов. Если требуется, стерилизация должна быть выполнена методом мембранной фильтрации, а образцы до и после стерилизации должны пройти сравнительный анализ для гарантии того, что не произошла адсорбция.

Таблица 1 — Растворители и разбавители для приготовления основного раствора противогрибкового препарата

Противогрибковый препарат

Растворитель (концентрированный и промежуточный растворы)

Разбавитель

Амфотерицин В

Диметилсульфоксид (ДМСО)а

Питательная среда

Анидулафуигин

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

Каспофунгин

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

Флукоцитозин

Вода

Питательная среда

Флукоиазол

Вода или диметилсульфоксид (ДМСО) а зависимости от инструкций/указаний изготовителя

Питательная среда

Итраконазол

Диметилсульфоксид (ДМСО)а

Питательная среда

Кетоконазол

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

Микафунгин

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

Поэаконазол

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

Раеуконаэол

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

ворикомазол

Диметилсульфоксид (ДМСО)4

Питательная среда

* ДМСО (диметилсульфоксид) — потенциально токсичен.

Если недоступна информация о стабильности основных растворов при определенных условиях хранения, должны быть приготовлены свежие растворы для каждой серии испытаний.

3.3.3 Приготовление рабочих растворов

Диапазон концентраций, выбранных для испытания, зависит от микроорганизмов и антимикотических препаратов. Выбранный диапазон должен в полной мере обеспечивать определение конечной точки МП К для соответствующих референтных штаммов. Серии двойного разведения на базе 1 мг/л готовятся в глюкоэном бульоне RPMM640. Процедура, представленная в таблицах 2 и 3. известна как надежная процедура достаточных серий разведения, которую следует соблюдать, кроме случаев тщательно проверенных альтернативных методов. Например, одна рабочая группа представила отчет о том, что серийное разведение более гидрофильных соединений может давать приемлемые результаты [10]. Рабочие растворы следует использовать в день их приготовления, если информация о стабильности растворов при определенных условиях хранения не предоставлена изготовителем.

Таблица 2 — Схема приготовления разведений водорастворимых антимикотических препаратов для использования в испытаниях чувствительности методом разведения в бульоне

Антимикотические растворы

Шот

Концент

рация.

мг/л

Источник

Обьем.

мл

Среда, мл

W

Промежу

точная

концент

рация.

мг/л

Ш

Конечная

рация 1:10. мг/л

log2

1

5120

Раствор

1.0

3.0

1280

128

7

2

5120

Раствор

1.0

7.0

640

64

6

3

640

Шаг 2

1.0

1.0

320

32

5

4

640

Шаг 2

1.0

3.0

160

16

4

5

160

Шаг 4

1.0

1.0

80

8

3

6

160

Шаг 4

0.5

1.5

40

4

2

7

160

Шаг 4

0.5

3.5

20

2

1

а

20

Шаг 7

1.0

1.0

10

1

0

Окончание таблицы 2

Шаг

Кенией т-рация, мг/п

Источник

Объем.

мл

Среда, мл

Промежуточная «виден »• рация, мг/л

Конечно* концентрация 1 . 10. мг/п

Log,

9

20

Шаг 7

0.5

1.S

S

0.5

-1

10

20

Шаг 7

0.5

3.S

2.5

0.25

-2

11

2.S

Шаг Ю

1.0

1.0

1.25

0.125

-3

12

2.5

Шаг 10

0.S

1.5

0,625

0.0625

-4

13

2.5

Швг Ю

0.5

3.S

0,3125

0.03125

-5

ТаблицеЗ— Схема приготовления серий разведения нерастворимых в воде антимикробных препаратов для использования в испытаниях чувствительности методом разведения в бульоне

Антими«отичес«ие растворы

Шаг

Концент

рация.

мг/п

Источник

Объем.

МП

Растворитель (например, ДМСО*). мл

9

Промежуточная «анион т-рация, мг/л

9

Конечная концентрация 1 : 10. мг/п

Log,

1

1600

Раствор

1600

16

4

2

1600

Раствор

0.5

0.S

800

8

3

3

1600

Раствор

0.S

1.5

400

4

2

4

1600

Раствор

0.5

3.S

200

2

1

i

5

200

Шаг 4

0.5

0.5

100

1

0

6

200

Шаг 4

о

1.S

50

0.5

-1

7

200

Шаг 4

0.5

3.S

25

0.25

-2

6

25

Шаг 7

0.5

0.S

12.5

0.125

-3

9

25

Шаг 7

0.5

1.5

6.2S

0.0625

-4

10

25

Шаг 7

0.5

3.5

3.13

0.0313

-5

* Диметилсульфоксид.

3.3.4 Приготовление тестовых планшетов для микроразведения в бульоне для визуального чтения

3.3.4.1 Путь визуального чтения

Рабочие растворы распределяются по 10 лункам каждого ряда планшетов для микроразведения по 100 мкл на лунку с двойной конечной концентрацией антимикотического препарата в 96-луночиых круглодонных одноразовых пластиковых планшетах.

При испытании каждого штамма для контроля роста должна быть включена как минимум одна лунка в каждом ряду, содержащая 100 мкл среды без антимикробного препарата. Также для каждого испытуемого штамма должна быть использована неинокулироеанная лунка, содержащая 200 мкл среды без антимикотического препарата, как лунка отрицательного контроля.

3.3.5 Приготовление тестовых планшетов для микроразведеиия в бульоне для прочтения с помощью спектрофотометра

3.3.5.1    Путь спектрофотометрического чтения

Рабочие растворы распределяют в 96* л у ночные плоскодонные одноразовые пластиковые планшеты для микроразведения по 100 мкл на лунку с двойной конечной концентрацией антимикотического препарата в растворе двойной концентрации.

При испытании каждого штамма для контроля роста должна быть включена как минимум одна лунка в каждом ряду, содержащая 100 мкл среды без антимикотического препарата. Также, для каждого испытуемого штамма, должна быть использована неииокулироеанная лунка, содержащая 200 мкл среды без антимикотического препарата, как лунка отрицательного контроля.

3.4    Хранение планшетов для микроразведения

Заполненные планшеты можно использовать сразу же. либо незамедлительно поместить в морозильную камеру в запечатанных пластиковых пакетах (CLSI метод, визуальное чтение: при температуре минус70°Сдо6мес; EUCAST метод, спектрофотометрическое чтение: при — 70 °С и ниже до 6 мес или при температуре минус 20 °С не более чем на один месяц). Допустимый срок хранения устанавливают на основании предписаний изготовителя лекарственного средства для отдельных соединений и в соответствии с допустимыми пределами КК (контроля качества). Планшеты не следует хранить в само размораживающихся морозильных камерах и допускать их таяния. Антимиотические препараты не должны повторно замораживаться, так как повторные циклы замораживания — оттаивания ускоряют инактивацию некоторых антимикотических препаратов.

3.5    Приготовление ииокулюма

3.5.1    Общие положения

Стандартизация ииокулюма необходима для точных и воспроизводимых тестов чувствительности методом разведения в бульоне.

Все изоляты должны быть пересеяны на неингибироеанную агаризованную среду в целях обеспечения чистоты и жизнеспособности.

3.5.2    Приготовление ииокулюма для визуального чтения тестов

Инокулюм должен быть приготовлен путем отбора пяти колоний диаметром приблизительно 1мм из 20-часовых (±2 ч) культур Candida spp. либо 46-часовых (±2 ч) культур С. neoformans. Колонии должны быть суспендированы в 5 мл стерильного 0.85 % физиологического раствора либо стерильной воды. Следует учесть, что у С. neoformans низкая скорость роста. Оптимальная температура для роста С. Neoformans составляет 30 *С.

Полученную суспензию перемешивают в течение 15 с. плотность клеток устанавливают спектрофотометрически путем добавления достаточного количества стерильного физиологического раствора либо стерильной воды до достижения оптической плотности, эквивалентной производственному стандарту 0.5 по МакФарланду (см. приложение В) при длине волны 530 нм. Эта процедура даст дрожжевую суспензию от 10е до 5 10е КОЕ/мл.

Заданную суспензию дрожжей перемешивают на воргексе. разбавляют 1 : 50 соответствующим вариантом среды бульона RPMI-1640 и повторно разбавляют 1 : 20 средой для получения конечного ииокулюма двойной концентрации (10э до 5-103 КОЕ/мл). Инокулюм (двойной концентрации) разводят 1:1. если лунки засеяны 100 мкл ииокулюма. что приведет к желаемому конечному количеству ино-кулюма от 0.5 Ю3 до 2,5 • 103 КОЕ/мл.

3.5.3    Приготовление ииокулюма для спектрофотометрического чтения тестов

Инокулюм должен быть приготовлен путем отбора пяти колоний диаметром приблизительно 1 мм из 18 — 24-часовых культур Candida spp. либо 46-часовых (±2 ч) культур С. neoformans. Колонии должны быть суспендированы в 5 мл стерильной дистиллированной воды.

Полученную суспензию перемешивают в течение 15 с. плотность клеток устанавливают слектро-фотометрически путем добавления достаточного количества стерильного физиологического раствора либо стерильной воды до достижения оптической плотности, эквивалентной производственному стандарту 0,5 по МакФарланду (см. приложение В) при длине волны 530 нм. Эта процедура даст дрожжевую суспензию от 10е до 5 106 КОЕ/мл.

Заданную дрожжевую суспензию перемешивают на вортексе. разбавляют 1:10 стерильной дистиллированной водой для получения тестового ииокулюма двойной концентрации (от 106 до 5 10s КОЕ/мл). Инокулюм (двойной концентрации) разводят 1:1. если лунки засеяны 100 мкл инокулю-ма. что приведет к желаемой конечной концентрации ииокулюма от 0.5 105 до 2.5 10s КОЕ/мл.

3.6    Инокулирование планшетов для микрораэведеиия

Планшеты должны быть инокулированы в течение 30 минстандартиэованной суспензией инокулю-ма в целях сохранения концентрации жизнеспособных клеток. В каждую лунку, содержащую 100 мкл разведенного в бульоне антимикотического препарата (см. 3.5.2 и 3.5.3). добавляют дрожжевую суспензию объемом 100 мкл.

Для гарантии того, что тестовые лунки содержат соответствующее КОЕ. в лунке позитивного контроля в планшетах для микроразеедения периодически следует проводить подсчет жизнеспособных клеток, основанный на методе, используемом для чтения МП К. Для этого берут 10 мкл из лунки контроля роста непосредственно после инокулирования и разводят в 1 мл бульона или физиологического раствора (для метода визуального чтения), или в 2 мл стерильной дистиллированной воды (для метода спектрофотометрического чтения). 100 мкл разведенной суспензии распределяют по поверхности подходящей агаровой пластины (агаризованной среды), которая затем инкубируется в течение ночи. Приемлемая тестовая суспензия даст в результате от 5 до 125 колоний.

3.7    Инкубирование планшетов для микроразведеиия

3.7.1    Общие положения

Планшеты для микроразведения перед инкубированием должны быть запечатаны в полиэтиленовые пакеты или зафиксированы плотной крышкой либо любым другим способом для предотвращения высушивания. В целях предотвращения неравномерности нагревания планшеты для микроразеедения не следует укладывать в стопки более чем по пять штук.

Планшеты для микроразеедения инкубируются при температуре (35 ± 2) *С в течение (22 ± 2) ч для большинства антимикотических противодрожжевых соединений. Некоторые изоляты Cryptococcus не могут расти в достаточной мере, если температура не снижена до 30 °С.

3.7.2    Визуальный путь

Время инкубации будет варьироваться в зависимости от испытуемых видов дрожжей и антимикотических препаратов. Многие тесты можно прочитать после 24 ч инкубации. Конкретные периоды инкубации см. в приложении С. Для обновления данной информации — см. текущее издание CLSI — документ М27 [1].

3.7.3    Слектрофотометрический путь

Определение МП К следует проводить после (24 ± 2) ч, если спектральное поглощение лунки позитивного контроля * 0.2. Если абсорбция менее 0.2. тесты могут быть повторно инкубированы на 12—24 ч. 6 случае отсутствия значения абсорбции 0.2 через 48 ч, испытание считается неудавшимся.

3.8    Чтение результатов МПК

3.8.1 Общие положения

Результаты следует читать только в случае достаточного роста испытуемых организмов (т. е. при явном пятне или приемлемой мутности/ абсорбции) в положительном контроле роста, при отсутствии роста в неинокулированном или негативном контроле (при наличии) и при установленной чистоте инокулята.

3.8.2    Метод визуального чтения

С некоторыми антимикотическими лекарственными препаратами и некоторыми изолятами может иметь место следовый рост (частичное ингибирование роста в расширенном диапазоне антимикотических концентраций). Предполагается, что это случается с флуконазолом примерно с 5 % иэолятов [11]. Данный следовый рост может быть у иэолята. который проявляет чувствительность через 24 ч. становится полностью резистентным, если чтение выполняется через 48 ч. По этой причине предпочтительно чтение через 24 ч.

Для визуального определения МПК лунки планшета исследуют с нижней стороны с помощью зеркального прибора для чтения. Может оказаться полезным осторожное перемешивание содержимого планшетов перед чтением конечных точек. Для препаратов флуцитозин, азолов и эхинокандинов степень роста в каждой лунке сравнивают с положительным контролем роста, а значения МПК определяют по наименьшей концентрации препарата, который ингибирует рост в значительной степени (по крайней мере 50 %) по сравнению с контролем.

Для амфотерицина МПК — это концентрация, обеспечивающая полное подавление роста.

3.8.3    Метод спектрофотометрического чтения

Для спектрофотометрического определения МПК панели для микроразеедения читаются с помощью микропланшетного ридера при длине волны между 405 и 530 нм. Чтение фоновой лунки кон-тропя среды должно быть отделено от чтения других лунок. Для препаратов флуцитозин. азолов и эхино-кандиное степень роста в каждой лунке сравнивают с положительным контролем роста, а значения МПК определяют по наименьшей концентрации препарата, который ингибирует рост в значительной степени (по крайней мере 50 %) по сравнению с контролем.

Дляамфотерицина МПК — это концентрация, обеспечивающая подавление 2 90% роста в сравнении с контролем.

3.9 Интерпретация МПК

Клиническая интерпретация МПК. осуществленная любым из методов настоящего стандарта, должна быть основана на утвержденных соответствующим органом по стандартизации пограничных значениях. которые легли в основу метода тестирования. Таким образом, интерпретация МПК антимикотических препаратов, установленных путем визуального чтения конечных точек, должна быть основана на последних опубликованных рекомендациях С LSI () (1). [7J. а МПК. установленные путем спектрофотометрического чтения, следует интерпретировать с использованием последних контрольных точек, имеющихся в наличии у EUCAST.

4 Контролысачествэ

Качество результатов испытания контролируют путем одновременного применения контрольных штаммов (см. таблицы 4 и 5). Запас контрольных штаммов следует хранить в лиофилиэированном либо замороженном виде (при температуре минус 70 *С — для визуального метода чтения; минус 60 °С — для спектрофотометрического метода). Рабочие культуры готовят путем пересева из запаса штаммов на неингибированную агаризованную среду. Дальнейшие субкультуры могут быть приготовлены только из первой рабочей культуры. Их регулярно заменяют новыми, приготовленными на скошенном агаре из замороженных запасов, как минимум каждые две недели. Когда возможно, следует проверятькак минимум два соответствующих контрольных штамма каждый раз в день проведения испытания. Тестовые колонии контрольных культур обрабатываются тем же способом, что и обычные культуры. МПК противогрибковых препаратов для контрольных организмов должны находиться в пределах значений, приведенных в таблицах 4 и 5 (2]. [7].

Таблица 4 — Рекомендуемые 24-часовые и 48-часовые диапазоны МПК длй двух штаммов контроля качества (ОС atrama), с применением разбавления е бульоне, для визуального чтения (12). (13)

Диапазон МПК (мг/л) для визуального чюния tec тон микроразаодеиия

Организм

Пропараг

Режим 24-часовога диапазона

% в рамках диапазона

Режим 46-часового диапазона

% о рамках диапазона

Candida parapsifosts АТССФ 22019

Амфотериции В

0.25—2.0

0.5

97.1

0.5—4.0

2.0

97.1

Амидулафумгин

0.25—2.0

1

9S.0

0.5—2.0

1.0

95.0

Квслофунгин

0.25—1.0

0.5

96.7

0.5—4.0

1.0

92.9

Флуцитозии (5-FC)

0.06—0.25

0.12

99.2

0.12—0.5

0.2S

97.9

Флуконвэол

0.5—4.0

2.0

98.2

1.0—4.0

2.0

98.1

Итраконазол

0.12—0.5

0.25

95.8

0,12—0.5

0.25

97.5

Кетвкоиаэол

0.03—0.25

0.06/0.12

97.S

0.06—0.5

0.12

98.3

Микафумгин

0

СА

1

1

100.0

0.5—4.0

1

100.0

Поза кона зол

0.06—0.25

0.12

96.7

0.06—0.25

0.12

98.8

Рввукомвэол

0.016—0.12

0.06

95.8

0.06—0.25

0.06

98.3

Вор икон азол

0.016—0.12

0.06

100.0

0.06—0,25

0.06

100.0

Окончание таблицы 4

Диапазон МПК <мг/л) дня визуального чтения тестов микрораэведеиия

Препарат

Режим 24'часового

Режим 48>часоеото

% в рамках

Candida kruaai АТСС6 6256

Амфотерицин В

0.5— 2,0

1.0

100.0

0

1

ь

о

2.0

100.0

Анидулафунгин

0.05—0.12

0.06

97.9

0.03—0.12

0.06

97.5

Каспофуигии

0.12—1.0

0.5

98.8

0.25—1,0

0.5

97.5

Флуцитозим (5-FC)

4.0—16

8.0

97,5

8.0—32

16

99.6

Флуконазол

*

1

о

«0*

16

100.0

16—128

32

100.0

Итраконазол

0.12—1.0

0.5

95.8

0.25—1,0

0.5

100.0

Кетакоиазол

0.12—1.0

0.5

95.4

0.25—1.0

0.5

99.6

Микафунгин

0.12—0.S

0.25

99.6

0.12—0.5

0.25

99.0

Позаконазол

0.06—0.5

0.25

100.0

0.12—1.0

0.5

99.6

Раеуконазол

0.06—0.5

0.25

93.3

0.25—1.0

0.5

100.0

Вориконазол

0.06—0.5

0.25

98.3

0.12—1.0

0.5

100.0

Примечания

1    АТССФ — зарегистрированная торговая марке Американской коллекции клеточных культур.

2    Данные перепечатаны с разрешения Американского Общества Микробиологии и авторов.

Таблица 5 — Рекомендуемые диалазоны МПК для контрольных штаммов, методом разведения в бульоне, для спектрофотометр инее кого чтения (2). [14]

Организм

Противогрибковый препарат

Диапазон МПК. мг/п

Candida parapsttosis АТСС6 22019

Амфотерицин В

0,12—1.0

Анидулафунгин

0,25—1.0

Каспофумгим

NA

Флуцитозим (5-FC)

0,12—0.5

Флуконазол

0.5—2.0

Итраконазол

0.03—0.12

Микафунгин

NA

Позаконазол

0.015—0.06

вориконазол

0.015—0.06

Candida *гдее/АТСС6 6258

Амфотерицин В

0.12—1.0

Анидулафунгин

*0.06

Каспофуигии

NA

Флуцмтозин(5^С)

0

1

ь.

о

Флуконазол

16.0—64,0

Итраконазол

0.03—0.12

Микафунгин

NA

Позаконазол

0.015—0.06

вориконазол

0.03—0.25

Окончание табпииы 5

Организм

Протмоогриб«оеый препарат

Диапазон МПК. шГл

Candida albicanaCL-CNM* F 8S5S

Амфотерицин В

0.06—0.5

Амидулафунгин

NA

Каслофуигин

NA

Флуцитозим (5-FC)

0.06—0.25

Флукоиазол

32.0—128.0

Иитракоиазол

0.25—1,0

Микафумгим

NA

Позакомазол

0.12—0,5

Вориконазол

0.5—2.0

Candida krvsei CL-CNM* CL3403

Амфотерицин В

0.25—1.0

Амидулафунгин

NA

Каслофуигин

NA

Флуцитозин (5-FC)

2.0—8.0

Флукоиазол

16.0—64.0

Иитракоиазол

0.12—0,5

Микафумгим

NA

Позакомазол

0.06—0.25

Вориконазол

0.12—0,5

* Коллекция дрожжей Исламского национального центра микробиологии.

Примечания

1    ATCC6 — зарегистрированная торговая марка Американской коллекции клеточных культур.

2    N А обозначает «отсутствует».

Если обнаружены значения, выходящие за пределы контрольных, в первую очередь должно быть проведено повторное испытание, чтобы установить, что основные процедурные этапы теперь хорошо контролируются. Если продолжают наблюдаться значения, выходящие за пределы контрольных, должна быть проведена тщательная проверка всех аспектов процедуры, а дальнейшие контрольные испытания должны быть приостановлены до тех пор. пока контрольные значения не будут установлены в соответствующих пределах.

и

Приложение А (справочное)

Среда RPMM640

А.1 Общие положений

Среда RPMI-1640 с буфериостью0,165 моль/л MOPS. 1 л: 10.4 г порошка среды RPMM640 (с глютамином и феноловым красным, без бикарбоната).

34.53 г MOPS (3-[А/-Морфолиио)лропаисульфоиоеая кислоте (MOPS) буферный раствор.

Среду в виде порошка растворяют в 900 мл дистиллированной воды. Добавляют MOPS (конечная концентрация о. 16S моль/л) и перемешивают до растворения. В процессе перемешивания устанавливают pH 7.0 при температуре 25 *С с использованием 1 моль/л гидроксида натрия. Добавляя воду, доводят объем среды до 1 л. Фильтруют, стерилизуют и хранят при температуре 4 *С до момента использования.

Таблица А.1— Состав среды RPMM640 (с глютамином и феноловым красным, но без бикарбоната)

Компонент

Г/МП волы

L-аргинин (свободное основание)

0.200

L-аспарагин (безводный)

0.050

L-аспарагиновая кислота

0.020

L-цистии -2HCI

0.065 2

L-тутами нова я кислота

0.020

(.-глутамин

0.300

Глицин

0.010

(.-гистидин (свободное основание)

0.015

L-гид рокси прол и и

0.020

(.-и зол ейцин

0.050

(.-лейцин

0.050

(.-лизин • HCI

0.040

L-метионин

0.015

L-фенилаланин

0.015

L-лролии

0.020

L-серин

0.030

L-треонин

0.020

L-трилтофан

0.005

L-тирозин 2Na

0.026 63

L-еалин

0.020

L-тирозин 2Na

0.026 63

L-еалин

0.020

Биотин

0.0002

О-лантотеновая кислоте

0.000 25

Холинхлорид

0.003

Фолиевая кислота

0.001

Мио-инозитол

0.035

Ниацинамид

0.001

ПАБК (ларааминобензойная кислота)

0.001

Окончание таблицы А.1

Компонент

f/МЛ ооды

Пиридоксин HCI

0.001

Рибофлавин

0.0002

Тиамин HCI

0.001

витамин В12

0.000005

Нитрат кальция * Н?0

0.100

Хлористый кальций

0.400

Сульфат магния (безводный)

0.048 84

Хлористый натрий

6.000

Фосфат натрия, дауземещеиный (безводный)

0.800

D-глюкоза (CLS/ метод — визуальное чтение)

2.000

О-глюкоза {EUCAST метод — спектрофотометрическое чтение)

2.000

Глютатион. восстановленный

0.001

Таблица А.2 — Компоненты RPMI-1640 2 % глюкозы

Компонент

Одинарная концентрация

Двойная концентрация

Дистиллированная вода

900 МЛ

900 мп

RPMI-1640*

10.4 г

20.8 Г

MOPSD

34.53 Г

69.06 г

Глюкоза

18 Г

36 г

а См. таблицу А.1.

ь 3-(Л/-Морфолиио)пропансульфоновая кислота.

А.2 Ссылки к приложению А

a)    Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт Клинических Лабораторных Стандартов) (2008) Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts: 3rd Informational Supplement. M27-S3. Wayne. PA (Референтный метод для испытаний противогрибковой чувствительности дрожжей с применением метода разведения в бульоне: 3-е информационное приложение. М27-S3. Вэйн. Пенсильвания.)

b)    European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (Европейский Комитет no вопросам исследования чувствительности к антимикробным препаратам) (2007). EUCAST Definitive Document EDef 7.1: Method for the determination of broth dilution MlCs of antifungal agents for fermentative yeasts. Ciml Microbiol Infect: 14. pp. 398—405. 2008.

(EUCAST дефинитивный документ EDef 7.1: Метод определения МПК противогрибковых препаратов для ферментативных дрожжей с применением разведения в бульоне. Клиническая Микробиология и Инфекции: 14: с. 398—405. 2008.)

Приложение В (справочное)

Стандарт мутности МакФарланда 0,5 (сульфат бария)

Для стандартизации концентрации ииокулюма, используют стандарт мутности 8aS04 (стандарт МакФарланда 0.5)

Процедура состоит из следующих шагов:

a)    Данный стандарт мутности готовят путем добавления 0.S мл 0.048 моль/л ВаС12 (1.175 % масса/объем ВаС12 * 2Н20) к 99.5 мл 0.18 моль/л H2S04 (объемная фракция 1 %).

b)    Правильная концентрация стандарта мутности подтверждается с помощью спектрофотометра со световым потоком и подходящей кюветой 1 см для определения абсорбции. Абсорбция при 62S нм должна быть от 0.08 до 0.13 для стандарта МакФарланда O.S.

c)    От 4 до 6 мл распределяют по пробиркам с завинчивающимися крышками того же размера, как и для выращивания или разведения посевной бульонной культуры.

d)    Пробирки плотно закрывают и хранят а темноте при комнатной температуре.

e)    Непосредственно перед использованием данный стандарт мутности интенсивно встряхивают на вортексе.

I) Стандарты заменяют либо перепроверяют их интенсивность через 3 мес после приготовления.

Приложение С (справочное)

Допустимые сроки визуальной оценки для интерпретации МПК

Допустимые сроки визуальной оценки для интерпретации МПК приведены а таблице С. 1

Таблица С.1

Препарат

Приемлемые срони чтения МПК. если рост достаточный

24 ч

48 ч

Амфотерицин В

Да

Да

Эхииокаидииы

Да

Нет

Флуконазол

Да

Да-

Флуцитозин

Да

Да

Играконазол

нет

Да

Поза кона зол

нет

Да

Равуконвзол

нет

Да

Вориконазол

нет

Да

* См. 3.8.1 для обсуждения относительно различий между показаниями 24 ч и 48 ч.

Библиография

(1) CLSI М2 7-АЗ. Reference Method for Broth О ilu bon Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts. Third Edition; Approved Standard. CLSl: Wayne. PA.. 2008

(2)    European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. 2007). EUCAST Definitive Document EDef 7.1: Method for the determination of broth dilution MiCs of antifungal agents for fermentative yeasts Clinl Microbiol Infect; 14: pp. 398—405.2008

(3)    Rodngue2-Tudetia J.L.. Donnelly J.P.. PfalierM.A.. Chryssantou E.. Warn P.. Denning D.W.etal. Statistical analysis of correlation between fluconazole MlCs for Candida spp. assessed by standard methods set forth by the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (E.DIs 7.1) and CLSl (M27-A2). J. Clin. Microbiol. 2007. 4S (1). pp. 109-111

(4)    CLSl M38-A2. Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi. Second Edition; Approved Standard. CLSl: Wayne. PA.. 2008

(5)    Espinel-lngroff A . Dawson К.. Pfeller M. et al. Comparative and collaborative evaluation of standardization of antifungal susceptibility tesbng for filamentous fungi. Anbmicrob Agents Chemother. 1995.39. pp. 314—319

(6)    Espinel-lngroff A.. Bartlett M.. Bowden R. et el. Multicenter evaluation of proposed standerdizetion procedure for antifungal suscepbbility tesbng for filamentous fungi. J. Clin. Microbiol. 1997.35. pp. 139—143

J7| Rodriquez Tudele J.L.. Donnelly J.P.. Arendrup M.C.. Ankan S.. Barchieei F.. В tile J. etal. EUCAST Technical Note on the method for the determination of broth dilution minimum inhibitory concentrations of antifungal agents for conldla-formmg moulds. Clin. Microbiol. Infect. 2008 Oct. 14 (10). pp. 982—984

(8)    Cuence-Estrella M.. Arendrup M.C.. Chryssanthou E.. Dannaoui E.. Lass-Flori C.. Sandven P. et el. the AFST Subcommittee of EUCAST. Multicenter Determination of Ouelity Control Strains and Quality Control Ranges for Antifungal Suscepbbility Testing of Yeests and Filamentous Fungi Using the Methods of the Antifungal Suscepbbility Tesbng Subcommittee of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (AFST-EUCAST). Clin. Microbiol. Infect. 2007.13(10).pp. 1018—1022

(9)    CLSl M27-S3. Reference Method for Broth Dilution Anbfungal Susceptibility Testing of Yeests. Third Informabonal Supplement. CLSl: Wayne. PA.. 2008

(Ю| Lopez A.G.. Arendrup M.C.. Lass-Florl C.. Rodnguez-Tudela J.-L.. Cuenca-Estrelta M. Multicenter Comparison of the ISO Standard 20776-1 and the Serial 2-Fold Dilution Procedures to Dilute Hydrophilic and Hydrophobic Anbfungal Agents for Susceptibility Testing. J. Clin. Microbiol. 2010 May. 48(5). pp. 1918—1920

(11)    Arthington-Skaggs B.A., Warnock D.W.. Morrison C.J. Ouentltabon of Candida albicans ergosteroi content improves the correlation between m vitro anbfungal suscepbbility test results and to vivo outcome after fluconazole treatment in a munne model of invasive candidiasis. Anbmicrob. Agents Chemother. 2000.44. pp. 2081—2085

(12)    Al B. etal. Quality control limits for broth mlcrodilutlon susceptibility tests for ten antifungal agents. J. Clin. Microbiol. 2000.38. pp 3457—34S9

|13] Krisher K. et al. Quality control parameters for broth microdilutlon tests of amdulafungm. J. Clin. Microbiol. 2004. 42. p. 490

|14] Arendrup MC. & Cuenca-Estrelle MHope W and the Subcommittee on Anbfungal Susceptibility Tesbng (AFST)of the ESCMID European Committee on Antimicrobial Susceptibility Tesbng (EUCAST). EUCAST Definitive Document E.DEF 7.2: Method for the determination of broth dilution minimum inhibitory concentrations of antifungal agents for yeasts. February. 20i 2

УДК 64:003:054:006:354    ОКС 11.100.10

Ключевые слова: референтный метод, тестирование активности in vitro, антимикробные препараты, дрожжевые грибки, инфекционные заболевания

Редактор 0.-4 Стоянов сяая Технический редактор в.Н. Прусакова Корректор 6.И. Воронцова Компьютерная верстка А Н. Зопотаровой

Сдано е набор 27.06.2015. Подписано а печать 06.06 201S.    Формат 60 ■ 64Гарнитура Ариал.

Усп. пен. л. 2.32. Уч.-иад. п. 1.66. Тирах 32 а«а. Зак. 2076.

Издано и отпечатано во ФГУП <СТАНДАРТИНФОРМ>. 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. WH>w.gostinfo.Tu