allgosts.ru11. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ11.080. Стерилизация и дезинфекция

ГОСТ Р 58151.4-2018 Средства дезинфицирующие. Методы определения показателей эффективности

Обозначение:
ГОСТ Р 58151.4-2018
Наименование:
Средства дезинфицирующие. Методы определения показателей эффективности
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2019
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
11.080.20

Текст ГОСТ Р 58151.4-2018 Средства дезинфицирующие. Методы определения показателей эффективности


ГОСТ Р 58151.4-2018

Группа Т58



НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ


СРЕДСТВА ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИЕ


Методы определения показателей эффективности


Disinfectants. Methods for determining efficiency factor


ОКС 11.080.20*
________________

* Поправка (ИУС N 8-2018)

Датавведения 2019-01-01

Предисловие

Предисловие

1РАЗРАБОТАН Федеральным бюджетным учреждением науки"Научно-исследовательский институт дезинфектологии" Федеральнойслужбы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучиячеловека

2ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 339 "Безопасностьсырья, материалов и веществ"

3УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства потехническому регулированию и метрологии от 5 июня 2018 г. N317-ст

4ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Правила применениянастоящего стандарта установлены в статье26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "Остандартизации в Российской Федерации". Информация обизменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (посостоянию на 1 января текущего года) информационном указателе"Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок- в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты".В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандартасоответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпускеежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты".Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются такжев информационной системе общего пользования - на официальном сайтеФедерального агентства по техническому регулированию и метрологии всети Интернет (www.gost.ru)


ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2018год

Поправка внесенаизготовителем базы данных

1Область применения


Настоящий стандартраспространяется на химические дезинфицирующие средства (далее ДС)и устанавливает методы исследования дезинфицирующих средств дляразработки эффективных режимов дезинфекции, обеспечивающихэпидемиологическую безопасность жизни и здоровья населения, охрануокружающей среды и предупреждение действий, вводящих в заблуждениепотребителей путем предоставления недостоверной информации осредствах.

Настоящий стандартраспространяется на методы исследований эффективностидезинфицирующих средств, предназначенных для обеззараживанияповерхностей в помещениях, мебели, аппаратов, приборов,санитарно-технического оборудования, транспортных средств; белья идругих изделий из текстильных материалов; посуды столовой,лабораторной и др., контаминированных бактериями (включаямикобактерии), грибами и вирусами, с целью разработки режимов ихдезинфекции.

2Нормативные ссылки


Внастоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующиестандарты:

ГОСТ6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 11683 Пиросульфит натриятехнический. Технические условия

ГОСТ 27068 Реактивы. Натрийсерноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Техническиеусловия

ГОСТ 32770 Добавки пищевые. Эмульгаторыпищевых продуктов. Термины и определения

ГОСТ Р 56990 Химические дезинфицирующиесредства и антисептики. Дезинфицирующие средства. Критерии ипоказатели эффективности

ГОСТ Р 56994 Дезинфектология идезинфекционная деятельность. Термины и определения

Примечание - Припользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действиессылочных стандартов и классификаторов в информационной системеобщего пользования - на официальном сайте Федерального агентства потехническому регулированию и метрологии в сети Интернет или поежегодно издаваемому информационному указателю "Национальныестандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущегогода, и по выпускам ежемесячно издаваемого информационногоуказателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если замененссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, торекомендуется использовать действующую версию этого стандарта сучетом всех внесенных в данную версию изменений. Если замененссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, торекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным вышегодом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящегостандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированнаяссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое данассылка, то это положение рекомендуется применять без учета данногоизменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, тоположение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять вчасти, не затрагивающей эту ссылку.

3Термины и определения


Внастоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 56994.

4Микробиологические методы исследований и критерии оценкиэффективности дезинфицирующих средств

4.1Общие положения


Объем микробиологическихисследований определяют в соответствии с предполагаемой сферойприменения дезинфицирующих средств (ДС).

Микробиологическиеисследования начинают только после получения результатовхимико-аналитических исследований, подтверждающих соответствиесредства требованиям нормативно-технической документации (НТД):технических условий - на отечественные средства, спецификации - назарубежные.

Критерии эффективности ДСустановлены в ГОСТ Р 56990.

4.2Приготовление рабочих растворов ДС и их субстанций


Рабочие растворы ДС и ихсубстанций готовят непосредственно перед проведением исследований,за исключением изучения стабильности рабочих растворов в процессехранения.

При изучении ДС,производимых в форме гранул, порошков, таблеток и др., рабочиерастворы используют только после полного растворения действующихвеществ (ДВ) ДС, если не указано на возможность выпаденияосадка.

Для оценки антимикробногодействия субстанций и ДС в лабораторных условиях и исследованияэффективности ДС, предназначенных для обеззараживания различныхобъектов, растворы готовят на стерильной питьевой воде.

Для приготовленияраствора определенной концентрации и нужного объема необходимоеколичество сухого ДС или жидкого концентрата вносят в пробирку(колбу) соответствующего или превосходящего объема и добавляютрасчетное количество воды, тщательно размешивают и закрываютпробкой.

Пример - Дляприготовления 1% раствора 1 г средства растворяют в 100 млводы.

Отмечают время полногорастворения и внешний вид приготовленного рабочего раствора.

Температура растворов ДСдолжна быть в пределах 20±2°С (если по условиям эксперимента нерекомендована другая температура) независимо от температурыокружающей среды. Для поддержания требуемой температуры используютводяную баню.

При испытании ДС впрактических условиях рабочие растворы готовят на нестерильнойпитьевой воде комнатной температуры (20±2°С) или умеренноповышенной температуры (45-50°С).

Для приготовленияраствора необходимой концентрации навеску средства или отмеренноеколичество жидкого концентрата вносят в соответствующую емкость,добавляют воду, размешивают и закрывают крышкой. Работу с растворомначинают после полного растворения ДВ. Рабочие растворы из ДС вформе таблеток готовят путем добавления в отмеренный объем водыопределенного числа таблеток

Пример - 1 таблеткана 10 л воды.

Рабочие растворысубстанций и ДС готовят с соблюдением мер предосторожности. Если ДВотносится к летучим веществам и представляет опасность приингаляционном воздействии, растворы готовят в вытяжном шкафу или вотдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией, вреспираторе РУ 60М или РПГ-67, кожу рук защищают резиновымиперчатками, глаза - защитными очками.

Исследуемые ДС (перед, вовремя и после исследований) хранят в соответствии с требованиямитехнических условий или спецификации; при отсутствии таковых - всоответствии с нормативными документами.

4.3Применение нейтрализаторов действующих веществ


Для разграничениябиоцидного и биостатического действий ДС при определенииантимикробной активности и эффективности применяют нейтрализаторы,исключающие остаточное атимикробное действие.

Для нейтрализацииантимикробного действия ДС из различных химических групп применяютследующие нейтрализаторы:

-для галоидактивных (хлор-, бром- и йодактивные) и кислородактивных(перекись водорода, ее комплексы с солями, надуксусная кислота,озон) - 0,1-1,0% растворы тиосульфата натрия по ГОСТ 27068;

-для четвертичных аммониевых солей (алкилдиметилбензиламмонийхлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид и др.), производных гуанидина(полигексаметиленгуанидин гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат идр.) - 0,1-1,0% растворы лаурилсульфата натрия (сульфонол)[1]), растворы лаурилсульфатанатрия с 10% обезжиренного молока или универсальныйнейтрализатор;

-для альдегидов (глутаровый альдегид, глиоксаль, формальдегид,ортофталевый альдегид) - 1,0% раствор пиросульфита (метабисульфита)натрия по ГОСТ 11683 илиуниверсальный нейтрализатор;

-для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;

-для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;

-для спиртов - разведение в воде до недействующей концентрации;

-для композиционных средств - универсальный нейтрализатор,содержащий Твин 80 по ГОСТ 327703%, сапонин 0,3-3%, гистидин - 0,1%, цистеин - 0,1%.

Если в состав композициивходят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфатнатрия по ГОСТ 27068.

Вкачестве универсального нейтрализатора при изучениитуберкулоцидного действия используют нейтрализующий бульон поДи-Ингли.

Растворы нейтрализаторовготовят в асептических условиях, применяя для этого стерильнуюдистиллированную воду по ГОСТ6709.

При невозможностисоблюдения асептических условий приготовления нейтрализаторовдопускают стерилизацию готовых растворов автоклавированием при 1,1атм. (121°С) в течение 15 мин.

Температура растворовнейтрализаторов должна быть 20°С, независимо от температурыокружающей среды.

Готовые растворы должныиспользоваться в день приготовления. Допускается хранение готовыхрастворов при температуре 4°С в течение 48 ч.

Исследованиеэффективности ДС проводят в зависимости от концентрации ДВ, временивоздействия, нормы расхода, характера объекта, вида егозагрязнения, температуры, способа и кратности обработки по[2].

5Методы изучения и оценки бактерицидной активности дезинфицирующихсредств

5.1Требования к тест-микроорганизмам


При изучениибактерицидной активности дезинфицирующих субстанций и ДС в качестветест-микроорганизмов используют:

-Escherichia coli (штамм 1257);

-Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853);

-Salmonella typhimurium (штамм 00074 NCTC=13311 АТСС) - для оценкибактерицидной активности в отношении грамотрицательныхбактерий;

-Staphylococcus aureus (штамм 906) - для оценки бактерициднойактивности в отношении грамположительных бактерий.

Или другиемикроорганизмы, обладающие аналогичной устойчивостью к ДС.

Тест-микроорганизмыдолжны иметь типичные биохимические, морфологические,тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, присущиеданному виду, и обладать стандартной устойчивостью к эталоннымДС.

Музейные культурымикроорганизмов хранят при температуре 3-10°С в ампулах (послелиофильной сушки) или на плотных питательных средах (посев уколом)под слоем стерильного вазелинового масла с толщиной слоя 1,5-3 мм,рабочие культуры - на скошенном агаре или в бульоне.

Проверку устойчивоститест-микроорганизмов проводят не реже 1 раза в месяц по [2].При снижении резистентности культур делают их пересевы наобогащенные питательные среды до восстановления устойчивости.

Тест-микроорганизмыкультивируют при температуре 37°С в течение 18-24 ч на следующихпитательных средах:

-казеиновом бульоне;

-мясо-пептонном бульоне;

-агаре Эндо;

-казеиновом агаре;

-мясо-пептонном агаре.

5.2Методы приготовления суспензии тест-микроорганизмов. Определениебиологической концентрации тест-микроорганизмов в бактериальнойсуспензии


Перед изучениембактерицидной активности ДС культуры тест-микроорганизмовподвергают контролю их качества. Перед использованием тест-культурдля исследовательских целей проверяют отсутствие средитест-микроорганизмов, выросших на питательной среде, постороннеймикрофлоры. Для оценки роста тест-микроорганизмов визуальнопросматривают каждую пробирку и учитывают характер и массивностьроста, изменение цвета питательной среды. Проводят микроскопиюмазка выросших тест-микроорганизмов, окрашенных по Граму.

Рабочую суспензиютест-микроорганизмов готовят из культуры данного тест-штамма,выращенного на плотной питательной среде (МПА или казеиновый агар)при температуре (37±1)°С в течение 18-24 ч. Для приготовлениябактериальной взвеси культуру смывают с агара стерильной питьевойводой. Полученную взвесь тест-микроорганизмов фильтруют черезватно-марлевый фильтр и разводят стерильной питьевой водой доконцентрации 2x109 клеток в 1 мл, соответствующей по мутности 20единицам мутности отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-84-11(20 ME) или 6 единицам Мак-Фарланда, определяемых с помощьюденситометра.

Всвязи с тем, что суспензия может содержать наряду с живыми мертвыемикроорганизмы, необходимо определять биологическую концентрациюфактического количества живых клеток в приготовленной суспензии длякорректировки и обеспечения требуемых уровней контаминациитест-объектов жизнеспособными микроорганизмами.

Определение биологическойконцентрации тест-микроорганизмов выполняют методомпоследовательных десятикратных разведений суспензиитест-микроорганизма в стерильной питьевой воде с последующимвысевом суспензии в чашки Петри с плотной питательной средой(казеиновый агар, агар Эндо, МПА). После определенного времениинкубации при соответствующей температуре проводят подсчет выросшихколониеобразующих единиц (КОЕ) и определяют количествожизнеспособных бактерий в 1 мл суспензии.

5.3Исследование бактерицидной эффективности ДС, предназначенных дляобеззараживания поверхностей в помещениях, мебели, аппаратов,приборов, санитарно-технического оборудования, транспортных средстви других объектов

Исследования проводят взависимости от вида поверхностей, их положения (горизонтальное,вертикальное), способа и кратности обработки.

Вкачестве тест-поверхностей используют поверхности размером 10x10 смиз различных материалов:

-гладкие;

-шероховатые;

-впитывающие;

-не впитывающие.

Пример -Деревянные, оштукатуренные, окрашенные масляной, силикатной,водоэмульсионной или клеевой краской; оклеенные обоями, поверхностииз линолеумных покрытий, окрашенного или неокрашенного металла -нержавеющая хром-никелевая кислотостойкая сталь, из пластика,стекла, искусственной или натуральной кожи, облицовочной плитки -кафельной и метлахской, фаянса.

Для исследованияиспользуют не менее 5 видов поверхностей. Набор тест-поверхностейдля исследований определяют по назначению средства.

Вкачестве тест-микроорганизмов используют S.aureus и E.coli, принеобходимости дополнительно используют S.typhimurium, P.aeruginosaили другие виды бактерий.

Перед контаминациейтест-микроорганизмами поверхности подвергают механической очистке -моют водой с мылом и щеткой (за исключением поверхностей, оклеенныхобоями и окрашенных клеевой краской). Последние протирают несколькораз стерильной салфеткой, увлажненной стерильной питьевойводой.

Высушенные поверхностирасполагают горизонтально и на них пипеткой наносят взвесьтест-микроорганизмов из расчета 0,5 мл 2-миллиардной микробнойвзвеси на площадь в 100 см и равномерно распределяют ее по поверхностистеклянным шпателем. Поверхности подсушивают (до полного высыхания)при температуре 18-20°С и относительной влажности воздуха 50-60%,затем обрабатывают дезинфицирующим раствором.

При изученииэффективности обеззараживания горизонтально располагают:

-линолеум;

-плитку метлахскую;

-искусственную кожу;

-натуральную кожу.

Вертикальнорасполагают:

-дерево, окрашенное масляной или другими видами красок;

-поверхности, оклеенные обоями;

-пластик;

-кафельную плитку;

-фаянсовую плитку;

-стекло.

Для имитации загрязненияповерхностей используют белковое или фекальное загрязнение: 40%инактивированной сыворотки, 40% фекальной эмульсии (при разработкережимов обеззараживания санитарно-технического оборудования).

Обработку поверхностейпроводят способами протирания или орошения (крупнокапельное иаэрозольное).

Для определения нормырасхода при однократной обработке дезинфицирующий раствор наносят спомощью пипетки на поверхность размером 10х10 см при примененииспособа протирания в количестве 1,0, 1,5 или 2,0 мл, а прикрупнокапельном орошении наносят с помощью дозатора 1,5-3,0 мл. Приаэрозольном методе обработки изучают эффективность обеззараживанияпри норме расхода 1-100 мл/м (в зависимости от вида аэрозольногогенератора и применяемой аэрозольной насадки). Многократноепротирание или орошение проводят с интервалом между обработками5-15-30 мин.

Время обеззараживанияповерхностей определяют в интервале от 5 до 120 мин. Выборэкспозиции зависит от назначения и рекомендуемых условий примененияДС.

Контрольные поверхностиобрабатывают стерильной водопроводной водой так же и из того жерасчета, что и опытные.

Исследования проводят притемпературе 18-20°С. При необходимости оценивают эффективностьобеззараживания поверхностей при повышенной до 50°С или пониженнойдо минус 30°С температуре (исследования проводят в термо- илихолодильной камере).

Контроль эффективностиобеззараживания тест-поверхностей проводят следующим образом:марлевой салфеткой (размером 5x5 см), смоченной в растворесоответствующего для данного дезинфицирующего средстванейтрализатора, тщательно протирают тест-поверхность, затем еепогружают в 10 мл этого же нейтрализатора, находящегося в пробиркахс бусами. Время отмыва марлевой салфетки 10 мин при постоянномвстряхивании. Отмывную жидкость сеют (на 2-3 чашки по 0,1-0,2 мл вкаждую) на твердые дифференциально-диагностические питательныесреды.

Допустимо проводитьисследования с использованием тест-поверхностей размером 5х5 см изтех же материалов, что и тест-поверхности 10х10 см. Этот методможно использовать при оценке чувствительности к ДСмикроорганизмов, выделенных с объектов окружающей среды.

Тест-поверхности помещаютна дно стерильной чашки Петри и пипеткой наносят на них 0,1 мл2-миллиардной микробной взвеси (площадь поверхности 25 см), равномерно распределяют ее по поверхностистерильным шпателем, не допуская отекания суспензии за пределытест-объекта, затем подсушивают, приоткрыв чашку Петри (до полноговысыхания) при температуре плюс 18-22°С и относительной влажности40-60%, после чего обрабатывают раствором ДС так же, как указановыше. После окончания экспозиции чашки с тест-объектами заливают 10мл раствора нейтрализатора, соответствующего данному ДС, и делаютнесколько круговых движений чашкой для лучшего смачиваниятест-объекта. Через несколько минут стерильным пинцетомпереворачивают тест-объект и повторяют круговые движения. Послеконтакта нейтрализатора с тест-объектом в течение 10 мин сноваделают несколько круговых движений чашкой, затем стерильнымпинцетом удаляют тест-объект из чашки и сбрасывают его в емкость сдезинфицирующим раствором с целью дальнейшего обеззараживания. Еслитест-объект обработан способом погружения в дезинфицирующийраствор, то по завершении экспозиции его переносят в чашку Петри с10 мл раствора нейтрализатора на 10 мин, после чего извлекают исбрасывают в емкость с дезинфицирующим раствором дляобеззараживания.

Нейтрализатор из чашкиПетри сеют (на 2-3 чашки по 0,1-0,2 мл в каждую) на твердыедифференциально-диагностические питательные среды либо заливаютчашку с нейтрализатором растопленным и остуженным до 45°Сагаром.

Посевы помещают длявыращивания в термостате при температуре (37±1)°С. Учет результатовпроводят в течение 1-2 суток путем подсчета количества выросшихколоний, затем рассчитывают плотность контаминации 100 см поверхности и процент обеззараживания,принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за100%.

Критерий эффективностиобеззараживания поверхностей - не менее 99,99% гибелитест-микроорганизмов.

Таблица 1 - Показатели эффективности ДС при обработкеповерхностей

Показатель

Значениепоказателя

Критерий эффективности

99,99% гибельтест-культуры

Время гибели S.aureus,E.coli, S.typhimurium, Paeruginosa

Не более 120мин

5.4Исследование бактерицидной эффективности ДС, предназначенных дляобеззараживания белья


Эффективностьобеззараживания белья ДС определяют с помощью тест-объектов,представляющих собой кусочки ткани из бязи размером 2х2 см. Вкачестве тест-культур используют S.aureus и E.coli.

При разработке режимаобеззараживания загрязненного белья к суспензии микроорганизмовперед контаминацией тест-объектов добавляют 40% инактивированнойсыворотки (6 мл 2-миллиардной взвеси тест-культуры смешивают с 4 млинактивированной сыворотки) или 40% фекальной эмульсии (6 мл2-миллиардной взвеси тест-культуры смешивают с 4 мл фекальнойэмульсии). Для приготовления фекальной эмульсии 8 г фекалийрастирают в ступке с 20 мл воды. Контаминированные тест-объектыподсушивают в термостате при 37°С в течение 20-25 мин или 1,5-2 чпри комнатной температуре до полного высыхания.

Стерильные тест-объектыпропитывают 2-миллиардной взвесью тест-микроорганизмов из расчета20 мл на 10 тест-объектов и подсушивают в термостате. Далееконтаминированные тест-объекты помещают в стерильные бязевыемешочки размером 5х8 см по 2 штуки в каждый.

При разработке режимовобеззараживания белья, не загрязненного выделениями, бельепогружают в емкость с дезинфицирующим раствором из расчета 4 лраствора на 1 кг сухого белья.

При разработке режимовобеззараживания белья, загрязненного выделениями, белье погружают вемкость с дезинфицирующим раствором из расчета 5 л раствора на 1 кгсухого белья.