ГОСТ 34736-2021 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Метод испытания с использованием извлеченного глаза курицы для определения химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, и химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз

        ГОСТ 34736-2021

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Метод испытания с использованием извлеченного глаза курицы для определения химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, и химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз

Methods for studying the effects of chemicals on the human body. Test method using a removed chicken eye to determine chemicals that cause serious eye damage and chemicals that do not require classification as irritating or serious eye damage

МКС 71.040.10; 13.020.01

Дата введения 2024-05-01

.

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2021 г. N 141-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2023 г. N 1407-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34736-2021 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2024 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD 438:2018* "Руководство по тестированию химической продукции. Метод испытаний с использованием извлеченного глаза курицы для определения: 1) химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, и 2) химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз" ("Guidelines for the testing of chemicals. Isolated chicken eye test method for identifying i) chemicals inducing serious eye damage and ii) chemicals not requiring classification for eye irritation or serious eye damage", MOD) путем изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

Международный документ разработан международной Организацией экономического сотрудничества и развития OECD (Organisation for Economic Cooperation and Development).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного в нем международного документа приведено в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Метод испытания с использованием извлеченного глаза курицы (Isolated Chicken Eye - ICE) прошел процедуру оценки Межведомственным координационным комитетом по валидации альтернативных методов (Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods - ICCVAM) при участии Европейского центра по валидации альтернативных методов (European Centre for the Validation of Alternative Methods - ECVAM) и Японского центра по валидации альтернативных методов (Japanese Center for the Validation of Alternative Methods - JaCVAM) дважды, в 2006 и 2010 гг. [1], [2], [3]. В первом случае применение метода ICE было признано научно обоснованным для проведения скрининговых испытаний с целью определения химической продукции (чистых веществ и смесей), способной вызывать серьезное повреждение глаз (класс опасности 1), в соответствии с требованиями Согласованной на глобальном уровне системы классификации и маркировки химической продукции (СГС) Организации Объединенных Наций (ООН) [1], [2], [4]. При повторном оценивании наборов данных, полученных в ходе проведения валидационных исследований in vitro и in vivo, был сделан вывод о допустимости применения метода исследования ICE также для определения химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках системы СГС ООН, что повлекло за собой подготовку пересмотренной редакции документа OECD 438, утвержденной в 2013 г. [4], [5]. За время, прошедшее с момента его утверждения, критерии принятия решений, которые должны применяться в процессе определения химической продукции, не требующей классификации в рамках СГС ООН, были дополнительно уточнены, исходя из последних действующих стандартов приемлемости [5], [6], [7], [8]. Кроме того, было убедительно доказано, что данные гистологического исследования могут содержать ценную вспомогательную информацию, полезную при определении моющих средств и сурфактантов, подлежащих отнесению к классу опасности 1 согласно СГС ООН и не характеризующихся экстремальными значениями pH (2<pH<11,5) [9], [10]. Документ OECD 438 (впервые принят в 2009 г. и актуализирован в 2013 и 2018 гг.) включает в себя последние рекомендации и ограничения по применению метода ICE, основанные на результатах описанных этапов оценки.

В настоящее время общепризнанно, что в обозримом будущем ни один метод in vitro на определение раздражающего воздействия на глаза не сможет заменить метод определения раздражающего воздействия на глаза Draize in vivo для прогнозирования всего диапазона раздражения для химической продукции различных классов. Тем не менее выверенное сочетание нескольких альтернативных методов исследований, реализуемое в рамках единой (многоуровневой) стратегии исследования и/или интегрированных подходов к испытаниям и оценке (Integrated Approaches to Testing and Assessment - IATA), вполне может оказаться способным заменить собой вышеупомянутый метод [7], [11]. Предполагается, что применение нисходящего подхода уместно для случаев, когда, исходя из уже имеющейся информации, химическая продукция, предположительно, должна обладать высокой раздражающей способностью, в то время как к восходящему подходу следует прибегать в ситуациях, когда способность этой химической продукции вызывать раздражение глаз, по всей вероятности, в недостаточной степени выражена для присвоения ей конкретного класса опасности [7], [11]. Метод ICE предназначен для проведения испытаний in vitro и может при соблюдении ряда условий и ограничений, согласно 3.3-3.7 настоящего стандарта, успешно применяться для классификации химической продукции по степени опасности и нанесения на нее соответствующей маркировки. При том что данный метод не следует рассматривать в качестве полноценной альтернативы методу in vivo, предусматривающему проведение испытаний на глазу кролика, его целесообразно применять на ранних этапах реализации общей стратегии исследования, включая испытания, проводимые в соответствии с нисходящим подходом, согласно [7] для определения химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, т.е. относящейся к классу опасности 1 согласно СГС ООН, без необходимости проведения дальнейших испытаний [4]. Метод ICE рекомендуется также для применения при определении химической продукции, которая не требует классификации как вызывающая раздражение или серьезное повреждение глаз согласно СГС ООН (класс опасности отсутствует), и может, таким образом, применяться на ранних этапах реализации исследовательской стратегии в рамках восходящего подхода [7]. Тем не менее, если при исследовании какой-либо химической продукции с применением метода ICE ее не удается достоверно отнести к химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз, либо к химической продукции, не классифицируемой как способной вызывать раздражение или серьезные повреждения глаз, то однозначная классификация этой химической продукции не представляется возможной без получения дополнительных сведений о ней. Выбор наиболее подходящего метода (методов) исследований, а также реализация положений настоящего метода должны осуществляться с учетом требований [7]. Кроме того, всякое применение метода ICE в соответствии с восходящим подходом в рамках схем классификации, отличных от СГС ООН, должно быть заблаговременно согласовано для применения в сфере государственного регулирования.

Метод испытаний, установленный в OECD 438, периодически актуализируется с целью включения в него новой информации и данных. В дальнейшем в документ могут быть добавлены данные гистологических исследований для испытываемой химической продукции, кроме моющих средств и сурфактантов с неэкстремальными значениями pH. В связи с этим пользователям метода испытаний рекомендуется сохранять образцы глаз и получать из них образцы для гистологических исследований, которые впоследствии могут быть пригодны для формирования соответствующей базы данных и разработки критериев принятия решений, способствующих дальнейшему повышению точности метода. Организацией экономического сотрудничества и развития (OECD) разработан документ [12], который включает подробные процедуры отбора и подготовки образцов для проведения гистологических исследований.

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод испытаний для оценивания потенциальной опасности для глаз химической продукции, исходя из ее способности оказывать или не оказывать токсическое воздействие на образцы глаз курицы, предварительно извлеченных из тела птицы. Токсическое воздействие на роговицу определяется путем: (1) качественной оценки снижения ее прозрачности, (2) качественной оценки степени повреждения эпителия, выявляемого при обработке образца глаза флуоресцеином (способность удерживать флуоресцеин), (3) количественной оценки объемного увеличения тканей (отечности), а также (4) качественной оценки макроскопических морфологических повреждений наружных оболочек используемых образцов глаз. Помутнение, отечность и видимые повреждения роговицы после воздействия исследуемой химической продукцией оцениваются по отдельности, а затем используются для присвоения этой продукции соответствующего класса опасности по ее способности вызывать раздражение глаз. Кроме того, данные гистологических исследований могут также применяться в качестве дополнительного источника информации для улучшения прогнозирования отнесения к классу опасности 1 согласно СГС ООН моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5) (см. 3.4 и 7.2.3).

2 Термины, определения и сокращения

В настоящем стандарте применены следующие термины и сокращения с соответствующими определениями.

2.1 валидированный метод испытаний (validated test method): Метод испытаний, для которого завершены валидационные исследования с целью определения его ревалентности (включая точность) и надежности для конкретной цели. Важно отметить, что валидированный метод не обязательно обеспечивает достаточную результативность с точки зрения точности и надежности для признания его пригодным для конкретной цели.

2.2 вещество (substance): Химические элементы и их соединения, представленные в естественном состоянии или полученные при выполнении производственного процесса, включая любые добавки, необходимые для сохранения стабильности продукта, а также любые примеси, наличие которых обусловлено применяемым процессом, но исключая любые растворители, удаление которых не сказывается на стабильности вещества или на его составе [4].

2.3 восходящий подход (bottom-up approach): Поэтапный подход, применяемый при исследовании химической продукции, предположительно не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз, при котором в первую очередь определяется химическая продукция, не требующая классификации (отрицательный отклик), для выделения ее из числа прочей химической продукции (положительный отклик).

2.4 доля ложноположительных заключений (false positive rate): Доля всей химической продукции, дающей отрицательный отклик, которая ошибочно была идентифицирована как дающая положительный отклик. Это один из показателей результативности метода.

2.5 доля ложноотрицательных заключений (false negative rate): Доля всей химической продукции, дающей положительный отклик, которая ошибочно была идентифицирована как дающая отрицательный отклик. Это один из показателей результативности метода.

2.6 исследуемая химическая продукция (test chemical): Химическая продукция (вещества или смеси), которая подвергается испытаниям.

2.7 IATA (Integrated Approach on Testing and Assessment): Интегрированный подход к испытаниям и оценке.

2.8 многоуровневая стратегия исследования (tiered testing strategy): Стратегия, предусматривающая поэтапное проведение исследования, при котором вся существующая информация об исследуемой химической продукции анализируется в определенном порядке, с рассмотрением на каждом уровне совокупности имеющихся свидетельств с целью определения достаточности доступной информации для принятия решения о классификации по степени опасности, перед переходом на следующий уровень. Если способность исследуемой химической продукции вызывать раздражение может быть подтверждена на основе существующей информации, дальнейшее исследование не требуется. Если способность химической продукции вызывать раздражение не может быть подтверждена на основе существующей информации, исследование продолжается в виде поэтапно выполняемой серии испытаний на животных до тех пор, пока исследуемая химическая продукция не будет однозначно классифицирована.

2.9 моющие средства (detergents): Смесь, содержащая один или несколько сурфактантов (исключая растворы одного отдельно взятого сурфактанта) с конечной концентрацией >3% и предназначенная для использования при мытье и чистке. Моющие средства могут быть представлены в любой форме (в виде жидкости, порошка, пасты, бруска, таблетки, плитки, формованной фигурки и т.п.) и размещаться для использования в бытовых условиях, организациями или промышленными предприятиями.

2.10 класс опасности 1 согласно СГС ООН (UN GHS Category 1): См. термин "серьезные повреждения глаз" и/или термин "необратимые последствия для глаз".

2.11 класс опасности 2 согласно СГС ООН (UN GHS Category 2): См. термин "раздражение глаз" и/или термин "обратимые последствия для глаз".

2.12 класс опасности согласно СГС ООН отсутствует (UN GHS No Category): Химическая продукция, не удовлетворяющая критериям классификации для химической продукции класса опасности 1 или 2 (подклассы опасности 2A или 2B) согласно СГС ООН. Синоним термина "не требует классификации".

2.13 контрольная проба растворителя/вещества-носителя (solvent/vehicle control): Ничем не обработанная проба, содержащая все компоненты испытательной системы, включая растворитель или вещество-носитель, и используемая наряду с пробами, содержащими исследуемую химическую продукцию, и другими контрольными пробами для определения базового отклика для образцов, обработанных исследуемой химической продукцией, разведенной в том же растворителе или в веществе-носителе. При параллельном использовании с отрицательной контрольной пробой также позволяет выяснить, взаимодействует ли растворитель или вещество-носитель с испытательной системой.

2.14 необратимые последствия для глаз (irreversible effects on the eye): См. термин "серьезные повреждения глаз" и класс опасности 1 согласно СГС ООН.

2.15 надежность (reliability): Показатель того, что метод испытаний может быть реализован с получением воспроизводимых результатов в рамках одной или различных лабораторий, в течение продолжительного времени, при применении одного и того же протокола. Он оценивается путем вычисления внутри- и межлабораторной воспроизводимости и внутрилабораторной повторяемости.

2.16 не требует классификации (Not Classified): Химическая продукция, которая не подлежит классификации как вызывающая раздражение (класс опасности 2, подклассы опасности 2А или 2В согласно СГС ООН) или серьезное повреждение глаз (класс опасности 1 согласно СГС ООН). Синоним термина "класс опасности согласно СГС ООН отсутствует".

2.17 непрозрачность роговицы (corneal opacity): Поддающаяся измерению степень помутнения роговицы после воздействия на нее исследуемой химической продукции. Повышение непрозрачности роговицы является характерным признаком ее повреждения.

2.18 нисходящий подход (top-down approach): Поэтапный подход, применяемый при исследовании химической продукции, предположительно вызывающей серьезное повреждение глаз, при котором в первую очередь определяется химическая продукция, способная быть причиной серьезного повреждения глаз (положительный отклик), для выделения ее из числа прочей химической продукции (отрицательный отклик).

2.19 обратимые последствия для глаз (reversible effects on the eye): См. термины "раздражение глаз" и "класс опасности 2 согласно СГС ООН".

2.20 способность удерживать флуоресцеин (fluorescein retention): Субъективно воспринимаемый показатель, определяемый при проведении исследования по методу ICE и характеризующий количество флуоресцеина натрия, удерживаемого эпителиальными клетками роговицы после воздействия исследуемой химической продукции. Степень удерживания флуоресцеина свидетельствует о степени повреждения эпителия роговицы.

2.21 опасность (hazard): Изначально присущее свойство конкретной химической продукции или ситуации, заключающееся в их потенциальной способности вызывать деструктивные последствия в случаях, когда организм, система или субпопуляция подвергаются их воздействию.

2.22 отечность роговицы (corneal swelling): Объективно воспринимаемый показатель, определяемый при проведении исследования по методу ICE и характеризующий набухание роговицы после воздействия на нее исследуемой химической продукции. Она выражается в процентах и рассчитывается, исходя из результатов исходных (до нанесения продукции) измерений толщины роговицы и результатов измерений ее толщины, выполняемых с равными временными интервалами после контакта с исследуемой химической продукцией в ходе проведения испытаний по методу ICE. Степень отечности роговицы свидетельствует о степени ее повреждения.

2.23 отрицательная контрольная проба (negative control): Ничем не обработанная, используемая параллельно проба, включающая в себя все компоненты исследуемой системы. Данная проба используется наряду с пробами, содержащими исследуемую химическую продукцию, а также другими контрольными пробами, служащими для выяснения того, взаимодействует ли используемый растворитель с исследуемой системой.

2.24 оценивание по совокупности имеющихся свидетельств (weight-of-evidence): Процесс рассмотрения преимуществ и недостатков различной имеющейся информации при подготовке и обосновании заключения о потенциальной опасности исследуемой химической продукции.

2.25 положительная контрольная проба (positive control): Используемая параллельно проба, содержащая все компоненты исследуемой системы и обрабатываемая известной химической продукцией, заведомо дающей положительный отклик. Чтобы обеспечить возможность учитывать изменчивость во времени отклика, получаемого для данной пробы, этот положительный отклик не должен быть слишком завышенным.

2.26 раздражение глаз (eye irritation): Изменения, происходящие в глазах после воздействия на их поверхность исследуемой химической продукции, которые являются полностью обратимыми по истечении 21 дня с момента такого воздействия. Синоним терминов: "обратимые последствия для глаз" или "класс опасности 2 согласно СГС ООН" [4].

2.27 роговица (cornea): Прозрачная часть передней оболочки глазного яблока, закрывающая радужную оболочку и зрачок и пропускающая лучи света внутрь глаза.

2.28 СГС (Согласованная на глобальном уровне система классификации и маркировки химической продукции (ООН) (GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN))): Система, предусматривающая классификацию химической продукции (веществ и смесей) в зависимости от характерных видов и уровней физической опасности, опасности для здоровья человека или опасности для окружающей среды, с применением соответствующих средств информирования, таких как пиктограммы, сигнальные слова, краткая характеристика опасности, меры по предупреждению опасности и паспорта безопасности, чтобы обеспечить информацией о ее негативном воздействии с целью защиты людей (в том числе сотрудников, работников, перевозчиков, потребителей и представителей аварийных служб) и окружающей среды [4].

2.29 серьезные повреждения глаз (serious eye damage): Развитие повреждений глазных тканей либо обусловленное физическими причинами существенное ухудшение зрения после воздействия на поверхность глаза испытуемой химической продукцией, которые не являются полностью обратимыми по истечении 21 дня с момента такого воздействия. Синоним терминов: "необратимые последствия для глаз" или "класс опасности 1 согласно СГС ООН" [4].

2.30 смесь (mixture): Смесь или раствор, состоящие из двух или более веществ, в которых они не вступают в реакцию друг с другом [4].

2.31 сурфактанты (surfactants): Известны также как поверхностно-активные вещества, представляющие собой вещества и/или их растворы (в соответствующем растворителе/веществе-носителе), содержащие в своей химической структуре одну или несколько гидрофильных или гидрофобных групп, которые способны вызывать уменьшение поверхностного натяжения жидкости, и формировать диффузные или адсорбционные монослои на границе раздела "вода - воздух", и/или образовывать эмульсии, и/или микроэмульсии, и/или мицеллы, и/или адсорбироваться на границе раздела "жидкость - твердое тело".

2.32 точность (accuracy): Близость результата испытаний, полученного с применением соответствующего метода испытаний, к принятому эталонному значению величины. Точность является показателем результативности метода и одним из аспектов релевантности. Данный термин часто применяется как взаимозаменяемый термину "согласованность" для указания доли корректных результатов, полученных с применением соответствующего метода испытаний.

2.33 щелевая лампа с микроскопом (slit-lamp microscope): Прибор, служащий для выполнения непосредственных измерений на образцах глаз, увеличение в котором обеспечивается бинокулярным микроскопом, способным давать прямое стереоскопическое изображение. Метод ICE предусматривает использование данного прибора при визуальном изучении структур передней части образцов глаз курицы, а также при выполнении объективных измерений толщины роговицы с помощью соответствующего глубиномерного приспособления

2.34 эталонная химическая продукция (benchmark chemical): Химическая продукция, используемая как эталон для сравнения с испытуемой химической продукцией. Эталонная химическая продукция должна (1) происходить из стабильного и надежного источника (источников); обладать следующими свойствами: (2) структурным и функциональным сходством с классом исследуемой продукции; (3) хорошо изученными физико-химическими характеристиками; (4) наличием подтверждающих данных об известных воздействиях, а также (5) известным уровнем активности в диапазоне ожидаемого отклика.

3 Исходные положения

3.1 В основе требований настоящего стандарта лежат пункты протокола, который был рекомендован документом [12], впервые принятым в 2011 г. и впоследствии актуализированным в 2017 и 2018 гг. Протокол составлен с учетом информации, взятой из ранее опубликованных протоколов [13], [14], [15], [16], [17].

3.2 При подготовке метода настоящего стандарта был исследован широкий диапазон различной химической продукции, который включает 184 наименования химической продукции, в том числе 75 веществ и 109 смесей [5]. Метод настоящего стандарта применим для исследований твердой и жидкой химической продукции, в том числе эмульсий и гелей. Жидкая химическая продукция может иметь водную или неводную основу; твердая химическая продукция может быть растворимой или нерастворимой в воде. Работы по валидации данного метода испытаний для газов и аэрозолей не проводились.

3.3 Метод ICE может применяться для определения химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз, т.е. химической продукции, которая согласно СГС ООН должна быть отнесена к классу опасности 1 [4]. В этом случае ограничения, применяемые к методу ICE, основываются на высокой доле ложноположительных заключений для спиртов и высокой доле ложноотрицательных заключений для твердых веществ и сурфактантов [1], [3], [18]. Более того, существует риск занижения оценки опасности для такой исследуемой химической продукции, воздействие которой приводит к менее тяжелым, но при этом устойчивым последствиям in vivo [22]. Доля ложноотрицательных заключений при применении метода ICE (когда химическая продукция, подлежащая отнесению к классу опасности 1 согласно СГС ООН, не была отнесена к данному классу опасности) ввиду описанных выше обстоятельств сама по себе не играет критической роли, так как вся химическая продукция, для которой были сделаны отрицательные заключения, должна подвергаться дальнейшим исследованиям с применением другого, надлежащим образом валидированного метода (методов) in vitro либо, при отсутствии иного выбора, проверяться на подопытных кроликах, в зависимости от конкретных действующих нормативных требований и с использованием последовательной исследовательской стратегии, ориентированной на оценивание по совокупности полученных свидетельств. Также установлено, что данные гистологических исследований могут содержать ценную вспомогательную информацию, способствующую уменьшению доли ложноотрицательных заключений при определении моющих средств (а также сурфактантов) [9], [10], [19], подлежащих отнесению к классу опасности 1 согласно СГС ООН и не характеризующихся экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), с доказанной способностью вызывать преимущественно устойчивые менее тяжелые последствия при воздействии in vivo. Следует иметь в виду, что условия химического воздействия при исследованиях подобной твердой продукции путем проведения тестов Дрейза на раздражение глаз in vivo, могут в отдельных случаях быть охарактеризованы как нестабильные или экстремальные и могут, таким образом, явиться причиной неверного прогноза действительной раздражающей способности данной продукции [20]. Исследователи могут применять данный метод для оценивания опасности любых видов химической продукции; при этом положительный результат должен восприниматься как убедительное свидетельство способности исследуемой химической продукции вызывать серьезные повреждения глаз, т.е. как основание для отнесения к классу опасности 1 согласно СГС ООН без проведения дальнейших испытаний. В то же время к положительным результатам, получаемым для спиртов, следует относиться с осторожностью, с учетом риска завышения оценки их потенциальной опасности при проведении исследований в соответствии с данным методом.

3.4 При определении химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз (класс опасности 1 согласно СГС ООН), метод ICE (без проведения гистологического исследования) демонстрирует общую точность на уровне 83% (142/172), долю ложноположительных заключений - на уровне 7% (9/127) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 47% (21/45) относительно метода испытаний, предусматривающего проведение испытаний на глазу кролика in vivo для целей классификации согласно СГС ООН [4], [5]. Если результаты гистологического исследования используются в качестве дополнительного источника информации для отнесения к классу опасности 1 согласно СГС ООН моющих средств и сурфактантов с экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), доля ложноотрицательных заключений для метода ICE уменьшается (с 64 до 27% (n = 22)), а его точность повышается (с 53 до 77% (n = 30)), при этом соблюдаются приемлемые значения доли ложноположительных заключений (от 0 до 12,5% (n = 8)) [10].

3.5 Метод ICE также может применяться для определения химической продукции, не подлежащей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках СГС ООН [4]. Данный метод пригоден для испытаний всех видов химической продукции, для которой отрицательный результат может рассматриваться как основание для невключения химической продукции в классификацию по способности вызывать раздражение или серьезное повреждение глаз. Тем не менее один из результатов, представленных в базе данных по валидации, позволяет сделать вывод о возможности получения заниженной оценки опасности для лакокрасочных материалов, обладающих антиобрастающими свойствами, содержащих органические растворители [5].

3.6 При определении химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз согласно СГС ООН, метод ICE демонстрирует общую точность на уровне 88% (161/184), долю ложноположительных заключений - на уровне 24% (20/83) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 3% (3/101) относительно метода, предусматривающего проведение испытаний на глазу кролика in vivo [4], [5]. Если исключить из базы данных по валидации исследуемую химическую продукцию, принадлежащую к определенному классу (т.е. лакокрасочные материалы, обладающие антиобрастающими свойствами, содержащие органический растворитель), метод ICE демонстрирует общую точность на уровне 88% (159/181), долю ложноположительных заключений - на уровне 24% (20/83) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 2% (2/99) при классификации согласно СГС ООН [4].

3.7 Применение метода ICE не рекомендуется для химической продукции, которая подлежит классификации как вызывающая раздражение глаз (т.е. относящаяся к классу опасности 2, подклассу опасности 2A согласно СГС ООН), или химической продукции, которая подлежит классификации как обладающая слабым раздражающим воздействием на глаза (относящаяся к подклассу опасности 2В согласно СГС ООН), ввиду значительного количества химической продукции класса опасности 1 согласно СГС ООН, отнесенной к классу опасности 2 (подклассам опасности 2A или 2B), а также химической продукции, для которой класс опасности отсутствует согласно СГС ООН, но отнесенной к классу опасности 2 (подклассам опасности 2A или 2B согласно СГС ООН). В данном случае может быть оправданным получение дополнительной информации, а также, если потребуется, проведение дальнейших исследований с применением другого подходящего метода.

3.8 Все операции с образцами глаз курицы должны выполняться с соблюдением действующих национальных норм и требований, применяемых в испытательной лаборатории при работе с материалами человеческого или животного происхождения, в том числе тканями и тканевыми жидкостями. Рекомендуется руководствоваться общими положениями о мерах безопасности, установленными для всех лабораторий [21].

3.9 Метод ICE не рассматривает вероятные сопутствующие повреждения конъюнктивы и радужной оболочки, как при испытаниях на глазу кролика, и пригоден только для изучения воздействия химической продукции на роговицу глаза, характер и выраженность которого являются главным основанием для классификации химической продукции in vivo, проводимой в рамках СГС ООН. Следует отметить, что оценка последствий воздействия химической продукции на радужную оболочку не имеет решающего значения при проведении классификации в соответствии с требованиями СГС ООН [8], [22]. Несмотря на то что обратимость повреждений роговицы как таковых с помощью метода ICE не может быть оценена, было доказано, что гистологические исследования могут способствовать идентификации химической продукции, вызывающей необратимые последствия, не связанные с высоким уровнем первичных повреждений, как в случае моющих средств, не характеризующихся экстремальными значениями pH (2<pH<11,5) [9]. Кроме того, метод ICE не позволяет оценивать потенциальный уровень системной токсичности веществ, связанной с воздействием на глаза.

4 Подтверждение квалификации

Все лаборатории, которые впервые внедряют у себя стандартный метод ICE, должны использовать перечень химических веществ, приведенных в приложении А, для проверки квалификации. Каждая такая лаборатория должна использовать данные вещества для подтверждения своей технической компетентности, прежде чем начать предоставлять данные, полученные с помощью метода ICE, для целей официальной классификации химической продукции по степени ее опасности. Если лаборатория имеет намерение использовать гистологический анализ в рамках применения метода ICE при исследовании моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH, для целей их официальной классификации по степени опасности, то ей следует при этом руководствоваться Атласом ICE и рекомендациями, приведенными в [12]. Для обеспечения согласованных, целостных и воспроизводимых результатов гистологических исследований рекомендуется принятие комплексных мер по обучению специалистов, обеспечению переносимости результатов метода и оцениванию компетентности лаборатории. Кроме того, следует проводить внутреннюю независимую экспертизу патологических изменений в соответствии с действующими рекомендациями [23], с учетом положений [24] и придерживаясь порядка, описанного в 6.4.10. Процесс данной независимой экспертизы позволяет подтвердить надлежащий контроль и повысить надежность, достоверность заключений и интерпретаций, касающихся патологии. Прежде чем начать предоставлять соответствующие данные для целей официальной классификации моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH, лаборатория должна проводить исследования химической продукции (см. приложение B) для подтверждения своей компетентности в части оценки результатов гистологических исследований в рамках применения метода ICE.

5 Сущность метода испытаний

Метод ICE предполагает использование органотипической модели, обеспечивающей кратковременное поддержание жизнеспособности образца глаза курицы in vitro. В соответствии с данным методом повреждение после воздействия исследуемой химической продукцией оценивают, исходя из степени отечности роговицы, изменения ее прозрачности и способности удерживать флуоресцеин. В дополнение могут проводиться гистологические исследования для повышения чувствительности метода для отнесения моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), к классу опасности 1 согласно СГС ООН [10]. В то время как определение отечности роговицы является количественной оценкой, сведения об изменении прозрачности, способности удерживать флуоресцеин и появляющихся гистологических изменениях тканей используются для качественной оценки наблюдаемого воздействия. Результат каждого определения либо преобразуется в количество баллов, учитываемое в ходе присвоения химической продукции определенного класса ICE (от I до IV), либо используется непосредственно для отнесения ее по качественному признаку на основании испытаний in vitro к классу опасности по воздействию на глаза, т.е. принадлежащей к классу опасности 1 согласно СГС ООН или к химической продукции, для которой класс опасности отсутствует согласно СГС ООН (см. критерии принятия решений). В то же время при применении метода ICE не представляется возможным спрогнозировать степень опасности в отношении химической продукции, которую не идентифицируют как относящуюся к классу опасности 1 согласно СГС ООН или как не имеющую класса опасности согласно СГС ООН (см. 3.7). В этих случаях полученный результат испытаний по методу ICE "Прогнозирование не представляется возможным" подразумевает необходимость сбора дополнительной информации для дальнейшей классификации исследуемой продукции (подробнее см. [7]).

5.1 Происхождение образцов глаз курицы и возраст особей, используемых для получения образцов

5.1.1 Согласно установившейся практике для испытаний обычно используются образцы глаз, отбираемые при убое птицы, который производится с целью последующего потребления мяса птицы человеком, что избавляет от необходимости задействовать для этой цели лабораторных животных. Источником образцов могут служить только здоровые птицы, мясо которых пригодно для включения в рацион человека.

5.1.2 Поскольку контролируемые исследования по определению оптимального возраста кур для отбора у них образцов глаз до настоящего времени не проводились, возраст и масса используемых птиц должны соответствовать возрасту цыплят-бройлеров, подлежащих убою в традиционной практике птицеводства (т.е. приблизительно 7 недель, 1,5-2,5 кг).

5.2 Отбор образцов глаз и их транспортировка в лабораторию

5.2.1 Голову птицы следует отделять от тушки сразу после того, как курица была каким-либо из доступных гуманных способов оглушена и горло ее было перерезано с целью обескровливания. Упомянутые гуманные способы включают в себя оглушение электрическим током, а также оглушение в контролируемой атмосфере, при условии, что может быть доказано отсутствие отрицательного влияния данного процесса на качество получаемых образцов глаз. Бойня, поставляющая образцы, должна быть расположена таким образом, чтобы доставка голов в лабораторию могла осуществляться в достаточно короткий срок, снижающий вероятность их порчи и/или бактериального заражения. Промежуток времени между отбором куриных голов и помещением извлеченных из них образцов глаз в камеру суперфузии должен быть минимальным (обычно не более двух часов), чтобы гарантировать соблюдение критериев приемлемости. Все образцы глаз, используемые при испытаниях, должны представлять одну и ту же группу образцов, отобранных в один и тот же день.

5.2.2 Поскольку препарирование глаз осуществляется непосредственно в лаборатории, взятые на бойне неповрежденные головы транспортируют при температуре окружающего воздуха (обычно от 18°C до 25°C) в пластиковых боксах, используя для увлажнения ткань, смоченную изотоническим физиологическим раствором.

5.3 Критерии выбора и количество образцов глаз для проведения исследования по методу ICE

5.3.1 Образцы глаз, которые после извлечения демонстрируют высокое исходное значение показателя способности удерживать флуоресцеин (т.е. >0,5) или показателя непрозрачности (т.е. >0,5), отбраковывают.

5.3.2 Каждая обрабатываемая исследуемой химической продукцией "опытная" группа образцов и параллельно используемая положительная контрольная проба должны состоять не менее чем из трех образцов глаз. Для отрицательной контрольной пробы или контроля растворителя (если в качестве растворителя не используется физиологический раствор) используют как минимум один образец.

5.3.3 В случае если исследуется твердая химическая продукция и полученный для нее результат позволяет отнести ее к химической продукции, для которой класс опасности согласно СГС ООН отсутствует, испытания рекомендуется провести повторно на трех дополнительных образцах глаз, чтобы окончательно подтвердить или опровергнуть данное отрицательное заключение.

6 Методика испытаний

6.1 Подготовка образцов глаз

6.1.2 Если повреждений не обнаружено, препарирование образцов глаз продолжают, отделяя их от черепа и все так же стараясь не повредить при этом роговицу. Глазное яблоко освобождают из орбиты, прочно удерживая за мигательную перепонку хирургическим пинцетом и разрезая глазные мышцы при помощи изогнутых ножниц с тупыми концами. На этом этапе важно не допустить повреждений роговицы, вызываемых приложением избыточного усилия (так называемым дефектом сдавливания).

6.1.3 К глазу, извлеченному из орбиты, следует оставить прикрепленным фрагмент зрительного нерва визуально различимых размеров. После извлечения образец глаза выкладывают на гигроскопическую салфетку и срезают с него мигательную перепонку и другие соединительные ткани.

6.1.4 Извлеченный образец глаза помещают в держатель (изготовленный из нержавеющей стали или другого подходящего материала) так, чтобы роговица располагалась вертикально, при этом следят за тем, чтобы давление держателя на глаз не было чрезмерным (благодаря тому что глазное яблоко курицы снабжено довольно плотной склерой, для его устойчивой фиксации в держателе достаточно самого легкого усилия). Далее держатель переносят в камеру аппарата суперфузии [25]. Держатели размещают внутри аппарата суперфузии таким образом, чтобы вся площадь роговицы увлажнялась изотоническим физиологическим раствором (3-4 капли в минуту или от 0,1 до 0,15 мл/мин). Температура в камерах аппарата суперфузии должна регулироваться на уровне (32±1,5)°C. В приложении В приведен эскиз типового аппарата суперфузии и держателей для образцов глаз, которые можно приобрести или изготовить самостоятельно. Конструкция аппарата может дорабатываться в целях адаптации его возможностей к нуждам конкретной лаборатории (например, для использования его с отличающимся количеством образцов).

6.1.6 После проверки всех и отбраковки несоответствующих образцов глаз оставшиеся образцы инкубируют в течение от 45 до 60 мин для установления равновесия с испытательной системой перед нанесением химической продукции. По окончании периода установления равновесия измеряют и фиксируют значения толщины и непрозрачности роговицы, используемые в дальнейшем как исходные (т.е. временная отметка для них = 0). Для показателя способности удерживать флуоресцин в качестве исходных принимают значения, полученные ранее на этапе препарирования образцов.

6.2 Нанесение исследуемой химической продукции

6.2.1 Сразу после определения соответствующих исходных показателей образец глаза (вместе с держателем) извлекают из аппарата суперфузии, располагают горизонтально и наносят на его роговицу исследуемую химическую продукцию.

6.2.2 Жидкую исследуемую химическую продукцию при проведении испытаний обычно не разбавляют, хотя при необходимости ее разбавление допускается (например, если этого требует схема проведения исследования). В качестве разбавителя исследуемой химической продукции предпочтительно использовать физиологический (изотонический) раствор. Тем не менее при соблюдении контролируемых условий испытаний могут использоваться другие разбавители, если была подтверждена их пригодность для данной цели.

6.2.3 Жидкую исследуемую химическую продукцию наносят на роговицу таким образом, чтобы ее слой равномерно покрывал всю ее поверхность; стандартное количество жидкости, необходимое для этого, составляет 0,03 мл.

6.2.4 Твердую исследуемую химическую продукцию по возможности следует измельчить как можно лучше в ступке пестиком или с использованием другого приспособления для измельчения. Полученный порошок наносят на роговицу таким образом, чтобы он был равномерно распределен по поверхности роговицы; стандартное количество химической продукции для этой цели составляет 0,03 г.

6.2.5 Исследуемую химическую продукцию (жидкую или твердую) наносят на 10 с, а затем смывают ее изотоническим физиологическим раствором (приблизительно 20 мл) при комнатной температуре. После этого образец глаза (вместе с держателем) возвращают в аппарат суперфузии, располагая его в исходном строго вертикальном положении. Если образец нуждается в дополнительной промывке, то ее можно проводить как непосредственно после такого 10-секундного воздействия, так и на более поздних этапах (например, после обнаружения остаточных количеств химической продукции на поверхности образца). В целом количество физиологического раствора, используемого для дополнительной промывки, не играет критической роли, но важно следить за тем, чтобы остатки химической продукции не прилипали к роговице.

6.3 Контрольная химическая продукция

6.3.1 Для каждого испытания исследуемой химической продукции следует предусматривать наличие параллельно используемых отрицательных контрольных проб либо контрольных проб растворителя/вещества-носителя и положительных контрольных проб.

6.3.2 При испытаниях жидкостей (100%) или твердых веществ в качестве параллельно используемой отрицательной контрольной пробы в методе ICE применяют физиологический (изотонический) раствор для выявления неспецифических изменений в тест-системе, чтобы убедиться, что вероятное раздражающее действие в действительности не связано с ненадлежащими условиями проведения испытания.

6.3.3 При испытаниях разбавляемых жидкостей параллельно используют контрольные пробы растворителя/вещества-носителя, чтобы выявить возможные неспецифические изменения в испытательной системе и убедиться, что вероятное раздражающее действие в действительности не связано с ненадлежащими условиями их проведения. Согласно 6.2.2 только растворитель/вещество-носитель, для которого подтверждено отсутствие отрицательного влияния на испытательную систему, может использоваться в процессе испытаний.

6.3.4 В качестве параллельно используемых положительных контрольных проб в каждое испытание также включают химическую продукцию с известными свойствами, заведомо способную оказывать раздражающее воздействие на глаза, чтобы убедиться в возможности получения соответствующего отклика. Поскольку метод ICE должен применяться для определения химической продукции, вызывающей серьезные повреждения глаз, в качестве положительной контрольной пробы следует использовать такую эталонную химическую продукцию, отклик на которую отвечает критериям для отнесения ее по результатам применения данного метода к классу опасности 1 согласно СГС ООН. Тем не менее для того чтобы учитывать вариабельность во времени отклика положительной контрольной пробы, величина отклика не должна быть завышенной. Необходимо располагать достаточным объемом данных, полученных in vitro, в отношении положительной контрольной пробы, для того чтобы рассчитывать достоверно диапазон его приемлемых значений. При отсутствии надлежащих данных по применению метода ICE для конкретной химической продукции, выбираемой в качестве положительной контрольной пробы, может потребоваться проведение отдельных исследований с целью получения этой информации.

6.3.5 Примерами положительной контрольной пробы для жидкостей может служить раствор с массовой долей 10% уксусной кислоты или раствор с массовой долей 5% бензалкония гидрохлорида, а для твердой продукции - соответственно, натрия гидроксид или имидазол.

6.3.6 Эталонную химическую продукцию целесообразно использовать для оценки раздражающей способности неизвестной химической продукции, представляющей определенный класс химической продукции, или для оценки относительной раздражающей способности товарной продукции, вызывающей раздражение глаз в пределах заданного диапазона раздражающего воздействия.

6.4 Оцениваемые показатели

6.4.1 Показатели образцов роговицы оценивают непосредственно перед обработкой, а также спустя 30, 75, 120, 180, и 240 мин (±5 мин) после их промывки. Данные временные точки в совокупности обеспечивают проведение необходимого количества определений в течение четырехчасового периода наблюдения, оставляя при этом достаточно времени в промежутках между определениями для организации надлежащего наблюдения за всеми образцами роговицы.

6.4.2 К оцениваемым показателям относятся: непрозрачность роговицы, отечность, способность удерживания флуоресцеина, а также морфологические изменения (например, изъязвление или отслоение эпителия). Все показатели, за исключением способности удерживания флуоресцеина (оценивание которой выполняется только перед обработкой и спустя 30 мин после воздействия исследуемой химической продукцией), определяют в каждой из указанных выше временных точек.

6.4.3 Полученные сведения о непрозрачности роговицы, способности удерживания флуоресцеина, морфологических изменениях, данные гистологических исследований, если такие исследования выполняются, желательно подкреплять фотографиями.

6.4.4 После завершающей оценки, по истечении четырех часов, исследуемые образцы глаз рекомендуется поместить в соответствующий фиксатор (например, нейтральный забуференный раствор формалина) для возможных последующих гистологических исследований, в особенности, если объектом исследования являются моющие средства и сурфактанты, не характеризующиеся экстремальными значениями pH (2<pH<11,5) (см. 3.3, 3-й абзац введения и 7.2.3). При проведении гистологических исследований образцы глаз фиксируют, обрезают, заливают парафином, а затем делают срезы и окрашивают в соответствии с процедурами сбора и обработки образцов, описанными в [12].

6.4.5 Отечность роговицы определяют путем измерения ее толщины с помощью оптического пахиметра на щелевой лампе с микроскопом. Ее выражают в процентах и рассчитывают на основе измерений толщины роговицы по следующей формуле:

6.4.6 Среднее арифметическое значение отечности роговицы в процентах всех исследуемых образцов глаз вычисляют для всех временных точек. В зависимости от наибольшего среднего значения отечности, зафиксированного в любой временной точке, каждой исследуемой химической продукции присваивают соответствующий класс ICE (см. 7.1).

6.4.7 При оценке непрозрачности роговицы ориентируются на участки роговицы, в которых обнаруживается наиболее интенсивное помутнение, присваивая баллы в соответствии с критериями, приведенными в таблице 1. Усредненный показатель непрозрачности роговицы всех исследуемых образцов глаз определяют для всех временных точек. В зависимости от наибольшего значения усредненного показателя непрозрачности, зафиксированного в любой временной точке, каждой исследуемой химической продукции присваивают соответствующий класс ICE (см. 7.1).

Таблица 1 - Показатели непрозрачности роговицы

6.4.8 Способность к удерживанию флуоресцеина оценивают только для временной точки, соответствующей 30 мин наблюдения, присваивая баллы в соответствии с критериями, приведенными в таблице 2. Усредненный показатель способности удерживать флуоресцеин для всех исследуемых образцов глаз определяют по результатам, полученным по истечении 30-минутного периода, и используют его для присвоения каждой исследуемой химической продукции соответствующего класса ICE (см. 7.1).

Таблица 2 - Показатели способности удерживать флуоресцеин

6.4.9 Морфологические изменения включают изъязвление или отслаивание эпителия роговицы, загрубление ее поверхности, а также прилипание к ней остатков исследуемой химической продукции. Данные изменения могут иметь различную степень выраженности и могут проявляться одновременно. Классификация этих изменений осуществляется в соответствии с интерпретацией исследователя.

6.4.10 При проведении гистологических исследований следует применять соответствующую полуколичественную систему оценивания согласно таблице 3. Важно уметь отличать, например, случаи вакуолизации эпителия, фактические последствия обработки от дефектов, которые могут возникать при гистологических исследованиях, и/или от особенностей строения органа птицы. Для этого при подготовке заключения следует тщательно сверяться с данными специализированного атласа, опубликованного в приложении II [12]. Кроме того, для исследования необходимо использовать оригинальные срезы (а не микрофотографии), поскольку некоторые эффекты требуют трехмерной оценки тканей. Баллы при оценке присваиваются только за действительно наблюдаемые последствия воздействия химической продукции. Вынесение предположительных заключений не допускается (например, если верхний слой эпителия отсутствует, то, соответственно, не могут быть выставлены баллы за вакуолизацию в этом слое). Деструктивные проявления/изменения, наблюдаемые на участках, примыкающих к лимбу роговицы, следует учитывать только при условии сохранения ненарушенной структуры тканей. С другой стороны, не следует учитывать аналогичного рода проявления/изменения внутри области, ограниченной лимбом, если они вызваны процессами, не связанными с воздействием химической продукции. Следует использовать систему внутренней независимой экспертизы патологических изменений в соответствии с действующими рекомендациями [23], с учетом положений [24]. В рамках данного процесса специалист-патолог (имеющий опыт работы с исследуемыми тканями) проводит независимый анализ ряда срезов и соответствующих патологических данных (например, для 1 из каждых 3 образцов глаз), способствуя тем самым усовершенствованию диагностирования и интерпретаций патологии, которые подготавливаются специалистом, непосредственно выполняющим исследования. Такая независимая экспертиза способствует подтверждению и повышению точности и надежности диагностирования и интерпретаций. Кроме того, для получения согласованных, целостных и воспроизводимых данных оценки рекомендуется проведение совместных гистологических наблюдений.

Таблица 3 - Полуколичественная система оценивания гистологических данных, применяемая для извлеченных образцов глаз курицы после их фиксации, иссечения, заливки парафином, приготовления и окрашивания срезов

6.4.11 Требования метода предусматривают равномерное нанесение исследуемой химической продукции на поверхность извлеченных образцов глаз курицы. Таким образом, воздействие исследуемой химической продукции обычно влечет за собой однородные изменения в роговице наблюдаемых образцов, что позволяет предположить о возможности формирования усредненного результата гистологического исследования по всему срезу, пригодного для последующего присвоения оценки. С другой стороны, при воздействии отдельной исследуемой химической продукции такие изменения могут локализоваться вокруг нескольких центров, принимая вид разрозненных пятен, независимо от того, насколько равномерно химическая продукция была распределена по поверхности образца (например, некоторая твердая исследуемая химическая продукция). Если при применении метода ICE были выявлены множественные очаговые поражения такого рода, то в дальнейшем на это следует обратить внимание специалиста, выполняющего гистологические исследования, чтобы в его оценке могли быть учтены указанные локальные повреждения, вызванные воздействием исследуемой химической продукции. Кроме того, при появлении сомнений (например, в случае возникновения расхождений между результатами, полученными по методу ICE, и результатами гистологического анализа), дополнительно могут быть приготовлены срезы других участков роговицы, подтверждающие присутствие локально выраженных изменений в изученном сечении.

7 Данные и отчеты об испытаниях

7.1 Оценивание данных

Соответствующий класс ICE исследуемой химической продукции присваивается по результатам оценки отдельно по каждому из следующих показателей: непрозрачности, отечности роговицы и ее способности удерживать флуоресцеин. После этого установленные классы ICE по отдельным показателям объединяют для прогнозирования класса опасности, который должен быть присвоен исследуемой химической продукции, исходя из результатов испытаний in vitro. Аналогичным образом отдельно проводят оценивание результатов гистологических исследований, если такие наблюдения выполнялись, для использования их при подготовке заключения в соответствии с требованиями 7.2.2, 7.2.3.

7.2 Критерии принятия решений

Таблица 4 - Критерии классификации ICE по отечности роговицы

Таблица 5 - Критерии классификации ICE по непрозрачности роговицы

Таблица 6 - Критерии классификации ICE по способности удерживать флуоресцеин

7.2.2 Классификацию in vitro исследуемой химической продукции проводят, выбирая такой класс опасности согласно СГС ООН, который соответствует сочетанию классов опасности, полученных в отношении отечности роговицы, непрозрачности роговицы и способности удерживать флуоресцеин в соответствии с таблицей 7.

Таблица 7 - Итоговая классификация in vitro

Таблица 8 - Критерии принятия решений при проведении гистологических исследований дополнительно к испытаниям, проведенным в соответствии со стандартным валидированным методом ICE для идентификации моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), подлежащих отнесению к классу опасности 1 согласно СГС ООН

7.2.4 Далее должна использоваться модель построения прогнозов согласно таблице 9. Критерии гистологического анализа ICE и модель построения прогнозов, приведенные в таблицах 8 и 9 соответственно, применимы только для идентификации моющих средств и сурфактантов класса опасности 1 согласно СГС ООН, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5).

Таблица 9 - Модель построения прогнозов для идентификации моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), на основе результатов гистологического анализа

7.3 Критерии приемлемости для результатов исследований

Результаты испытания рассматривают как достоверные, если параллельно используемые отрицательная контрольная проба или контрольная проба разбавителя/вещества-носителя и положительная контрольная проба идентифицируются как не требующая классификации и относящаяся к классу опасности 1 согласно СГС ООН, соответственно.

7.4 Отчет об испытаниях

Отчет об испытаниях должен включать в себя следующую информацию.

Исследуемая и контрольная химическая продукция:

- химическое наименование, а именно название (названия) по IUPAC или CAS, регистрационный номер (номера) CAS, коды SMILES или InChl, структурную формулу и/или другие идентифицирующие признаки;

- все доступные сведения о степени чистоты и составе исследуемого/контрольного вещества или смеси (в процентах по массе);

- для многокомпонентного вещества, вещества неопределенного или переменного состава (UVCB): как можно более полное химическое описание (см. выше), количественное содержание и соответствующие физико-химические характеристики компонентов (см. выше), его составляющих;

- сведения о физико-химических характеристиках, включая агрегатное состояние, летучесть, показатель pH, стабильность, класс химической продукции, растворимость в воде, важных для целей исследования;

- способ обработки исследуемой/контрольной химической продукции перед началом испытаний, если такая обработка проводилась (например, подогрев, измельчение);

- сведения об условиях хранения и стабильности, если таковые имеются.

Информация об организации, осуществлявшей финансирование, и лаборатории, проводившей испытания:

- наименование и адрес организации/лица, осуществлявших финансирование, лаборатории, где проводились испытания, имя руководителя исследования; а также имя специалиста-патолога, если таковой принимал участие в исследовании;

- сведения об источнике, из которого поступили образцы глаз (например, о предприятии, на котором они были отобраны).

Условия испытаний в соответствии с применяемым методом:

- описание использованной испытательной системы;

- сведения об использованных щелевой лампе с микроскопом и пахиметре (например, модель) и настройках, которые для них применялись;

- ссылки на результаты прошлых испытаний отрицательной и положительной контрольных проб, а также, при наличии, данные прошлых наблюдений, подтверждающие диапазоны приемлемости для параллельно используемых эталонных веществ;

- описание процедуры, применявшейся для подтверждения того, что метод испытаний продолжает обеспечивать достоверность (т.е. точность и надежность) результатов с течением времени (например, периодические испытания химических веществ для проверки квалификации);

- описание применявшегося способа фиксации тканей для гистологического анализа, если такие наблюдения выполнялись.

Отбор и подготовка образцов глаз:

- возраст и массу птиц, использованных в качестве доноров, а также другие отличительные характеристики особей, у которых были отобраны образцы глаз для исследования, если эти характеристики известны (например, пол, порода);

- условия хранения и транспортирования образцов глаз (например, дата и время отбора, продолжительность периода времени между отбором куриных голов и помещением извлеченных глаз в камеру аппарата суперфузии);

- сведения о процессе подготовки образцов глаз и установки их в держатели, в том числе что касается их качества, температуры камер и критериев выбора конкретных образцов для испытаний.

Порядок испытаний:

- количество параллельно обрабатываемых образцов;

- сведения об использованных отрицательной и положительной контрольных пробах (если требуется, также о контрольных пробах разбавителя/вещества-носителя и эталонных веществ);

- использованную дозировку химической продукции, порядок нанесения и время воздействия;

- временные точки, в которых выполнялись наблюдения (предварительная и последующая обработка образцов);

- описание применявшихся критериев оценки и принятия решений, в том числе для гистологического анализа, если такой анализ был предусмотрен;

- описание независимой экспертизы для гистологических исследований, если такие наблюдения выполнялись;

- описание применявшихся критериев приемлемости результатов испытаний;

- описание любых изменений, внесенных в методику испытаний;

- дополнительно, если соответствующие сведения не нашли отражения, например, в применявшейся стандартной операционной процедуре или если подобная процедура отсутствует, в отчете должна быть представлена также следующая информация:

- описание комплексных мер по обучению специалистов и обеспечению переносимости результатов метода;

- сведения об использованных фиксирующих, обезвоживающих и осветляющих реактивах и соответствующих протоколах;

- сведения об использованных материалах для заливки образца и инфильтрирующих растворителях вместе с соответствующими значениями концентрации;

- толщина срезов тканей;

- сведения об использованном красителе (согласно отчету) и соответствующем применявшемся протоколе окрашивания;

- информация об использованном оборудовании.

Результаты:

- представление в табличной форме значений показателей отечности и непрозрачности роговицы и способности удерживать флуоресцеин, полученных для каждого отдельного образца глаз в каждой временной точке за период наблюдений, а также средних арифметических значений в каждой временной точке для всех использованных образцов;

- описание любых других морфологических изменений, выявленных в ходе испытаний;

- наибольшие средние арифметические значения отечности и непрозрачности роговицы и способности удерживать флуоресцеин (в любой временной точке) и присваиваемый в соответствии с ними класс ICE;

- представление в табличной форме полуколичественных результатов гистологических анализов и заключений, сделанных на их основе, если такие наблюдения выполнялись;

- сведения о том, учитывались ли при оценке гистологические локально выраженные изменения, если такие изменения имели место;

- описание прочих явлений, наблюдавшихся в ходе испытаний;

- присвоенные классы опасности согласно СГС ООН по итогам исследования in vitro;

- фотографии отрицательной и положительной контрольных проб глаз, если предоставление таких свидетельств целесообразно;

- дополнительно также цифровые снимки или сканированные изображения срезов образцов, использовавшихся для гистологических исследований.

Анализ результатов.

Заключение и выводы.

Приложение A

(обязательное)

Химические вещества для проверки квалификации при проведении исследований по методу ICE

До того как приступить к регулярному применению метода настоящего стандарта, лаборатории должны подтвердить свою техническую компетентность, правильно классифицировав по степени опасности для глаз 13 химических веществ, рекомендованных в таблице 10. Результаты применения метода ICE демонстрируют различные примеры отклика на воздействие химической продукции, которые наблюдались в процессе оценочных исследований и с большой вероятностью могут иметь место в дальнейшем [5], [18]. Эти химические вещества были выбраны таким образом, чтобы они представляли весь спектр степеней опасности для глаз, определяемой на основе результатов испытаний in vivo на глазу кролика [26] и отраженной в градации классов опасности согласно системе классификации СГС ООН (т.е. класс опасности 1, подклассы опасности 2А, 2В, класс опасности отсутствует согласно СГС ООН) [4], [26]. Дополнительными критериями, которые учитывались при выборе, являются получение с использованием этих химических веществ воспроизводимых результатов при применении метода ICE, их доступность для коммерческого приобретения, а также наличие для них достоверных справочных данных, полученных in vivo. С этими справочными данными можно ознакомиться в соответствующем обобщающем документе (SSD) [5]. В случаях когда лаборатория не располагает химическим веществом, приведенном в перечне, или оно не может быть использовано в силу каких-либо иных уважительных причин, вместо него допускается использовать другое химическое вещество, удовлетворяющее критериям, приведенным выше, например, из числа химических веществ, с использованием которых проводилась оценка и валидация метода ICE. Для таких отступлений от общего правила должно быть представлено убедительное обоснование.

Таблица 10 - Перечень рекомендованных химических веществ для проверки квалификации при проведении исследований по методу ICE

Приложение B

(справочное)

Химические вещества для проверки квалификации при проведении гистологических исследований, которыми может быть дополнен стандартный метод ICE в ограниченной области применения, включающей в себя моющие средства и сурфактанты, не характеризующиеся экстремальными значениями pH (2<pH<11,5)

До того как приступить к регулярным гистологическим исследованиям дополнительно к стандартному методу ICE применительно к моющим средствам и сурфактантам, не обладающим экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), в соответствии с методом настоящего стандарта лаборатории должны подтвердить свою техническую компетентность, правильно классифицировав по степени опасности для глаз 6 химических веществ, перечисленных в таблице 11. Эти химические вещества были выбраны таким образом, чтобы они представляли весь диапазон степеней опасности для глаз, определяемой на основе результатов испытаний in vivo на глазу кролика [26] и отраженной в градации классов опасности согласно системе классификации СГС ООН (а именно, класс опасности 1, подклассы опасности 2А, 2В или класс опасности отсутствует согласно СГС ООН) [4], [26]. Дополнительными критериями, которые учитывались при выборе, являются получение при использовании данных химических веществ воспроизводимых результатов при проведении гистологических исследований в рамках применения метода ICE, их доступность для коммерческого приобретения, а также наличие для них достоверных данных, полученных in vivo. В случаях когда лаборатория не располагает химическим веществом, приведенным в перечне, или оно не может быть использовано в силу каких-либо иных уважительных причин, вместо него допускается использовать другое химическое вещество, удовлетворяющее критериям, приведенным выше, например, из числа химических веществ, с использованием которых проводилась оценка гистологических исследований в рамках применения метода ICE [10]. Для таких отступлений от общего правила должны быть убедительные обоснования.

Таблица B.1 - Перечень рекомендованных химических веществ для проверки квалификации при проведении гистологического анализа в рамках применения метода ICE

Приложение C

(справочное)

Аппарат суперфузии

Рисунок C.1 - Эскизы аппарата суперфузии и держателей для образцов глаз, используемых при проведении исследований по методу ICE

Примечание - Более подробное описание общей конструкции аппарата суперфузии и держателей для образцов глаз см. в [25].

Приложение ДА

(справочное)

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой международного документа

Таблица ДА.1

Библиография