allgosts.ru67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ67.050. Общие методы проверки и анализа пищевых продуктов

ГОСТ 33971-2016 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Обозначение:
ГОСТ 33971-2016
Наименование:
Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2018
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
67.050, 67.120

Текст ГОСТ 33971-2016 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

33971-

2016

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Издание официальное

Москва

Стенда ртмнформ 2016

ГОСТ 33971—2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 октября 2016 г. No 92-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны

Код страны по

Сокращенное наиыеноеанне национальною органа

по МК (ИСО 316*) 004—97

МК (ИСО 3166)004-97

по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Киргизия

KG

Кыргыэстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 ноября 2016 г. № 1692-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33971—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2018 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях х настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соотеетстеующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 33971—2016

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки...........................................1

3    Сущность метода..............................................2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений.....................2

5    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы...................2

6    Подготовка к проведению измерений...................................4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов...........................4

6.2    Приготовление растворов......................................4

6.3    Приготовление градуировочных растворов.............................4

7    Отбор и подготовка проб..........................................6

7.1    Отбор проб...............................................6

7.2    Подготовка проб мяса, печени, почек, включая мясо и печень птицы..............6

6 Порядок выполнения анализа.......................................7

8.1    Условия хроматографических измерений..............................7

8.2    Построение градуировочной характеристики............................8

8.3    8ЭЖХ-МС/МС измерение.......................................9

9    Обработка результатов измерений....................................9

10    Метрологические характеристики....................................9

11    Оформление результатов измерений.................................10

12    Контроль стабильности результатов измерений...........................10

in

ГОСТ 33971—2016

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим

детектором

Food products, food raw materials Method for determination of residual metabolites of carbadox and olaquindox using high-performance liquid chromatography with mass spectrometric detector

Дата введения — 201S—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на нелереработанные пищевые продукты: мясо животных всех видов, в том числе мясо птицы, субпродукты (лечены почки) и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса в диапазоне измерений от 0.5 до 8.0 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007—78 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты*

ГОСТ 12.2.085—2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИС0 1042—63.ИС04788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТИСО 5725-6—2003 Точность(правильностъилрецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике**

ГОСТ 5848—73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ7269—2015 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

*8 Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты*.

'• 8 Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Честь 6. Использование значений точности на практике».

Издание официальное

1

ГОСТ 33971—2016

ГОСТ 9293—74 (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 22300—76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические уело* еия

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835*1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31467—2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на экстракции метаболитов карбадокса и олаквиндокса раствором сульфосалици-ловой кислоты, переэкстракции в этилацетат. концентрировании и перерастворении полученного экстракта. с последующим их количественным определением методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (MRM). Количественное определение остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса (аналитов) проводят методом внутреннего стандарта.

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007. при работес ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работе токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085.

4.5    Утилизацию отходов проб и реактивов осуществляют в соответствии с требованиями законодательства государства, принявшего стандарт.

4.6    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой 8ЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.7    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха...................от 20 *С до 30 *С;

-    атмосферное давление .........................от 84 до 106 кЛа;

-    напряжение в питающей электросети..................от 200 до 240 В:

• частота переменного тока........................от 49 до 51 Гц;

-    относительная влажность воздуха....................от 40 % до 80 %.

5 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточного содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:

•    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,01 г:

•    весы утвержденноготипаснаибольшим пределом взвешивания не более 82 г. поверенные вуста-ноеленном порядке, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0.02 мг:

•    масс-спектрометр с квадруполькым анализатором диапазоном измерений от 50 до 300 атомных единиц массы (а. е. м.). массовым разрешением не менее 1 а. е. м. на полувысоте пика, с пределами

2

ГОСТ 33971—2016

допускаемой абсолютной погрешности не более ‘0,5 а. е. м.. с режимом получения и анализа фрагмент-ных ионое (режим МС/МС);

•    pH-метр или универсальный иономер диапазоном измерения от 4 до 9 ед. pH с погрешностью измерения ±0,05 ед. pH;

•    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3;

•    встряхиватвль (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения самллитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;

•    встряхиватель(шейкер) переворачивающий орбитального типа, садаптеромдляпробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

•    генератор азота высокой чистоты;

•    измельчитель-гомогенизатор лабораторный погружной:

•    камеру лабораторную морозильнуюс цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 15 вС до минус 25 ®С;

•    колонку хроматографическую длиной 150 мм. диаметром 2 мм, собращвно-фаэным сорбентом С18 и диаметром частиц сорбента не более 5 мкм:

> компьютерсустановленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений, аттестованный в установленном порядке;

•    систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, системы фильтрования и дегазации подвижных фаз. термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (50 ± 1) *С;

•    систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;

•    систему концентрирования растворителей, обеспечивающую поддержание температуры не менее (50 ±1) *С;

•    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 2 *С до 8 вС:

•    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 4000 об/мин и диапазоном температур от 4 вС до 20 вС с адаптерами для пробирок вместимостью 15 и 50 см3;

•    центрифугу лабораторную с диапазоном скоростей от 300 до 15000 об/мин и адаптером для мик-роцентрифужных пробирок;

•    шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 110 *С и погрешностью поддержания заданной температуры не более 5 *С;

•    пробы, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы, в которых не выявлено наличие метаболитов карба-докса и олаквиндокса («чистые» пробы)*;

•    фильтры нейлоновые мембранные с порами диаметром от 0.2 до 0,45 мкм;

•    виалы (флаконы)стеклянные вместимостью 2 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками 9 мм;

-    колбы 1-10(50.1000)-2 по ГОСТ 1770:

-    пипетки 2-2-1- 5(10) по ГОСТ 29227:

•    пипетки одноканальные переменной вместимости 5-25, 20-100, 200-1000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1 %;

•    пробирки микроцекгрифужные вместимостью 1.5 см3:

•    пробирки полипропиленовые вместимостью 15 и 50 см3 с завинчивающимися крышками;

-    цилиндры 1-500-1 по ГОСТ 1770.

5.2 При определении остаточного содержания метаболитов карбадокса иолаквиндокса применяют следующие реактивы:

•    азот газообразный марки 60 по ГОСТ 9293, ос. ч.;

•    ацетон по ГОСТ 2603;

•    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99.9 %;

•    воду деионизированную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства ультрачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709;

•    кислоту муравьиную по ГОСТ 5848. ч. д. а.;

•    метанол по ГОСТ 6995. х. ч.;

-    н-гексан. х. ч.;

•    кислоту сульфосалицилоеую с массовой долей основного вещества не менее 95 %;

•    эфир этиловый уксусной кислоты (этипацетат) по ГОСТ 22300, ч. д. а.

•    Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 15 *С до минус 25 *С — не более трех месяцев.

3

ГОСТ 33971—2016

5.3    При определении остаточного содержаний метаболитов карбадокса и олакеиндокса в качестве образцов сравнения применяют следующие соединения:

1)    для приготовления исходных растворов:

-1,4-бисдезоксикарбадокс с массовой долей основного вещества не менее 95.0 %;

-    З-метилхиноксалин-2-карбоновую кислоту с массовой долей основного вещества не менее 95.0%;

•    хиноксалин-2-карбоновую кислоту с массовой долей основного вещества не менее 97,0 %;

2)    для приготовления исходных растворов внутренних стандартов:

-    1.4-бисдвзоксикарбадокс-ОЗ с массовой долей основного вещества не менее 99,0 %;

•    хиноксалин-2-карбоновую кислоту-04 с массовой долей основного вещества не менее 97.0 %.

5.4    Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения. а также аппаратуры, реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно). ацетоном (дважды).

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 *С до 110 вС.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление подвижных фаз А и Б

6.2.1.1    Приготовление подвижной фазы А

В мерную колбу вместимостью 1000 см2 приливают 500 см3 деионизированной воды, добавляют 1 см3 муравьиной кислоты и доводят объем раствора деионизированной водой до метки.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.1.2    Приготовление подвижной фазы Б

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 500 см3 метанола, добавляют 1 см3 муравьиной кислоты и доводят объем до метки метанолом.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес.

6.2.2    Приготовление 3 %-ного раствора сульфосалициловой кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 30 г сульфосалициловой кислоты, добавляют 500 см3 деионизированной воды, перемешивают до полного растворения вещества и доводят до метки деионизированной водой.

Раствор используют свежеприготовленным.

6.2.3    Приготовление 0,5 %-ного раствора муравьиной кислоты

В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 0.25 см3 муравьиной кислоты, доводят деионизированной водой до метки, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.3    Приготовление градуировочных растворов

6.3.1 Приготовление исходных стандартных растворов метаболитов карбадокса и олак-виндокса массовой концентрацией 1000 мкг/см3 (растворы С0)

Для приготовления исходных стандартных растворов С0 концентрацией 1000 мкг/см3 для каждого аналита рассчитывают необходимую массу но вещества, эквивалентную 10.0 мг анализируемого соединения. исходя из содержания основного вещества, по формуле

ГОСТ 33971—2016

m,« 10^

’ р>

О)

где т, — масса навески /-го вещества, мг;

10 — требуемая масса чистого вещества, мг;

100 — коэффициент перевода процентов в относительное значение;

Р, — содержание основного вещества в аналитическом стандарте. %.

8 мерные колбы вместимостью 10 смэ вносят по отдельности рассчитанные массы хинокса-лин-2-карбоновой кислоты. З-метилхиноксалин-2-карбоновой кислоты. 1.4-бисдезоксикарбадокса, добавляют по 5 см3 метанола, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. затем доводят до верхней метки метанолом.

Срок хранения растворов при температуре от минус 15 °С до минус 25 *С — не более одного года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре втемном месте не менее 30 мин.

6.3.2 Приготовление рабочих стандартных растворов Cv С2, Сэ

Рабочие растворы С,, С2. С3 готовят в мерных колбах вместимостью 10 см2 согласно рисунку 1.

Рабочий раствор С, с массовой концентрацией каждого аналита 100 мкг/см3

Рабочий раствор Сг с массовой концентрацией каждого аналита 1 мкг/смэ

Рабочий раствор С, с массовой концентрацией каждого аналита 0.1 мкг/см3

Берут по 1.0 см3 каждого раствора С0(см 6.3.1)

Берут 0,1 см3 раствора С,

Берут 1,0 см3 раствора Сг

I    Г    I

Доводят до метки метанолом, закрывают пробками, перемешивают

Рисунок 1 — Приготовление рабочих растворов Cv С2. С3

Растворы С,. С2. С3 хранят при температуре от минус 15 *С до минус 25*С. Срок хранения раствора С, — не более одного года. С2 — не более 6 мес. Са — не более 3 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре втемном месте не менее 30 мин.

6.3.3 Приготовление исходных растворов внутренних стандартов метаболитов карбадокса и олаквиндокса массовой концентрацией 1000 мкг/см3 (растворы D0)

Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов 0О массовой концентрацией 1000 мкг/см3 для каждого аналита рассчитывают необходимую массу ко вещества, эквивалентную 10.0 мг чистого вещества внутреннего стандарта, по формуле (1).

8 мерные колбы вместимостью 10 см3 вносят по отдельности рассчитанную массу хинокса-лин-2-карбомовой кислоты-04 и 1,4-бисдезоксикарбадокса-03. добавляют по 5 см3 метанола, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. затем доводят до верхней метки метанолом.

Срокхранения растворов при температуре от минус 15 *С до минус 25 *С — не более одного года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре втемном месте не менее 30 мин.

Внутренние стандарты для метаболитов карбадокса и олаквиндокса выбирают в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 — Соответствие между аналитами и внутренними стандартами

Наименование определяемого аналита

Наименование внутреннего стандарта определяемою аналита

Хиноксалин-2-карбоновая кислота

Хиноксалин-2-карбоновая кислота-04

З-Метилхиноксалин-2-карбоноаая кислота

1.4-Бисдезоксикарбадокс

1.4-Бисдезоксикарбадокс-ОЗ

S

ГОСТ 33971—2016

6.3.4 Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов Dv 02

Рабочие растворы О,. D2 готовят в мерных колбах вместимостью 10 см3 согласно рисунку 2.

Рабочий раствор внутренних стандартов О, с массовой концентрацией каждого аналита 50 ыкг/да3

Рабочий раствор внутренних стандартов О, с массовой концентрацией каждого аналита 1 миг/см3

Берут по 0.5 см3 каждого раствора £>0 (см. 6.3.3)

Берут 02 см3 раствора 0,

I

Доводят до метки метанолом, перемешивают

Рисунок 2 — Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов О,. 02

Растворы D,. 02 хранят при температуре от минус 15 ®С до минус 25 °С. Срок хранения раствора О, — не более одного года. 02 — не более 3 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.5 Приготовление матричных градуировочных растворов G,—G4

Матричные градуировочные растворы G,—G4 готовят в полипропиленовых пробирках вместимостью 50 см3 из «чистых» проб массой 5.00 г. в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов D2 (см. 6.3.4) и рабочий раствор определяемых аналитов С3 (см. 6.3.2) объемом в соответствии с таблицей 2.

Таблице 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G,—G4

Обозначение и массовая концентрация приготовляемою матричного градуировочного раствора

Концентрациа о пересчете на исследуемый образец. мктАсг

Вносимый объем рабочего растворе, сы*

сз

*>г

G, (2.5 нг/см3)

0.5

0.025

0.1

02(Ю нг/см3)

2.0

0.100

0.1

Gj (20 нг/см3)

4.0

0,200

0.1

G4 (40 нг/см3)

8.0

0.400

0.1

Пробирки встряхивают в шейкере 1 мин. выдерживают в темноте при комнатной температуре в течение 10 мин и проводят дальнейшую обработку проб согласно разделу 7. указанную на рисунке 3.

Растворы G,—G4 используют свежеприготовленными.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб мяса, печени, почек — по ГОСТ 7269.

7.1.2    Отбор проб мяса птицы, печени и продуктов из мяса птицы — по ГОСТ 31467.

7.1.3    Пробы, отобранные по 7.1.1.7.1.2. при отсутствии возможности анализа в день отбора замораживают и хранят при температуре минус 25 °С до проведения анализа, но не более 90 сут.

7.2 Подготовка проб мяса, печени, почек, включая мясо и печень птицы

Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани. Обработку анализируемой пробы проводят в соответствии с рисунком 3.

6

ГОСТ 33971—2016

Рисунок 3 — Подготовка проб мяса, печени, почек, включая мясо и печень птицы

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографических измерений

8.1.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по экс* плуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2    Например, для колонки диаметром 2 мм. длиной 150 мм. с обращеннофазным сорбентом С18 с размером частиц не более 5,0 мкм соблюдают следующие условия хроматографирования:

•    температура колонки — 40 *С;

•    скорость потока подвижной фазы — 0.25 см3/мин;

•    температура в отсеке устройства ввода проб —10 °С;

•    объем вводимой пробы — 40 мм3.

7

ГОСТ 33971—2016

Разделение проводят е режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б по 6.2.1) в соответствии с таблицей 3.

Таблице 3 — Условия градиентного элюирования

Вр«ыя. мим

Подвижная фаза А. %

Подвижная фаза Б. 14

0.0

100

1.4

100

37.0

30

70

37.1

100

46.0

100

8.1.3 Параметры воздействия на ионы в режиме мониторинга множественных реакций (MRM) приведены в таблице 4.

Таблицей — Параметры воздействия на ионы в режиме MRM при ионизации электрорвслылением с регистрацией положительных ионов

Аналит

Ион-предшестаоикнк mfi

Ион-продуст mil

Хиноксалин-2-карбоновая кислота

17S

131

129

З-Метипхиноксалин-2-карбоновая кислота

189

145

92

1.4-Бисдезоксикарбадокс

231

199

143

Хиноксалин-2-карбоновая кислота-04*

179

133

151

1.4-Бисдезоксикарбадокс-ОЗ*

234

199

143

* Внутренний стандарт.

Примечание — Приведенные параметры хроматографического разделения и мвсс-спектрометрическо-го детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.1.4    Параметры настройки масс-спектрометрического детектора:

•    температура источника — 500 *С;

•    напряжение на распыляющем капилляре (IS) — 4500 в;

•    разрешение кеадруполей Q1/Q3 — единичное.

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектромет-рического детектирования могут отличаться в зависимости от используемой аппаратуры.

8.1.5    Контроль чувствительности хромато-масс-спектрометра осуществляют введением в инжектор хроматографа 40 мм3 градуировочных растворов G2 и G3 (см. 6.3.5) в зависимости от типа анализируемой матрицы. Полученное соотношвнивсигнал/шум для каждогоаналитадолжнобыть не менеетрех к одному.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения хромато-масс-слекгрометра.

8.2.1    Проводят измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5. в порядке возрастания их концентраций.

8.2.2    Вычисление площади пика проводят для каждого иона-продукта анализируемых метаболитов карбадокса и олаквиндокса и их внутренних стандартов. Допускается проведение количественных измерений ло одному, наиболее интенсивному, иону-лродукту.

8.2.3    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию (прямая должна проходить через ноль), при этом коэффициент корреляции допжен быть не менее 0,98.

8.2.4    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации метаболитов карбадокса и олаквиндокса в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8

ГОСТ 33971—2016

8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение

8.3.1    Для определения содержания аналитое проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ е соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2    ВЭЖХ-МС/МС анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы.

•    подвижную фазу А;

•    «чистую пробу»:

•    градуировочные растворы (см. 6.3.5):

•    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3    В инжектор хроматографа вводят 40 мм3 пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. и проводят измерения.

8.3.4    Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов-продуктов каждого аналита. соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов.

9 Обработка результатов измерений

9.1    В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения концентрации аналитое в анализируемой пробе.

9.2    Содержание /-го аналита Хг мкг/кг. вычисляют по формуле

где С} — концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику. нг/см3;

У— объем, до которого разбавлена проба, см3; т — масса анализируемой пробы, г.

9.3 Расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости. не должно превышать предела повторяемости (сходимости) г. приведенного в таблице 5 при доверительной вероятности Р- 0.95. В случае превышения предела повторяемости г полученные результаты отбрасывают и вновь проводят параллельное измерение.

За окончательный результат содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса принимают среднеарифметическое значение результатов вычислений двух параллельных измерений, выполненных в условиях повторяемости, округленное до первого десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

10 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение определения содержания метаболитов карбадокса и олаквиндокса с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к- 2. указанной в таблице 5.

Таблица 5 — Показатели качества метода

Наименование аналита

Диапазон измерений

содержания аналита.

uciAtr

Значение

относитель

ной

расширенной неопределенности tU%. при

коэффициенте охвата к-2

Пооэатель повторяв* мости (относительное стандартное отклонение повторяемости} Оу%

Показатель

воспроизво

димости

{относи

тельное

стандартное

отклонение

воспроизво

димости)

%

Предел повторяемости г. % (при

Р - 0.95. л > 2)

Хиноксалин-2-карбоноаая кислота

От 0.5 до 1.0 ахлюч.

64

15

31

42

Се. 1.0 до 8.0 еключ.

40

6

19

22

9

ГОСТ 33971—2016

Окончание таблицы 5

Наименование аналита

Диапазон измерений содержания аналита. мкг/кг

Значение

относитель

ной

расширенной неопределенности 1 и, %. при «оаффициен-те охвата *•2

Показатель повторяв' мости (относи* тельное стандартное отклонение повторив-мости) %

Показатель воспроизводимости (относительное стенда ртиое отклонение воспроизводимости)

%

Предел повторяемости г. Ч {при Р » 0.95. я» 2)

З-метилхинокселин-2-кврбоновая кислота

От 0.5 до 1.0 еключ.

45

14

21

39

Св. 1.0 до 8.0 еключ.

40

11

17

30

1.4-бисдеэоксихарбадокс

От 0.5 до 1.0 еключ.

60

14

28

39

Св. 1.0 до 4.0 еключ.

35

8

15

22

Св. 4.0 до в.О еключ.

22

6

9

17

11 Оформление результатов измерений

Содержание /-го метаболита карбадокса или олакеиндокса, мкг/кг. представляют в виде

X, ± 0.01 Ц X, при Р — 0.95,    (3)

где X,-— среднеарифметическое значение результатов вычислений двух параллельных измерений содержания i-го аналита в анализируемой пробе по 9.2, мкг/кг:

Ц — значение относительной расширенной неопределенности содержания но аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицей 5).

12 Контроль стабильности результатов измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6 с использованием контрольных карт Шухарта.

Ю

ГОСТ 33971—2016

УДК 637:614.3:006.354    МКС 67.050

67.120

Ключевые слова: пищевые продукты, продовольственное сырье, остаточное содержание, метаболиты карбадокса и олаквикдокса. метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкое» тной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

11

Редактор Л.З. Попова Технический редактор В.Н. Прусакове Корректор И.А. Королева Компьютерная еерстка Л. А. Круговой

Сдано в набор 16.11.2016. Подписано а печать 20.12.2016. Формат 60 « М'/*. Гарнитура Ариап. Уел. печ. л. 1.66. Уч.-иэд.л. 1.68 Тираж 41 эо. Эак. 3233.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта.

Издано и отпечатано ео ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ*. 123996 Москва. Гранатный лер., в.