База ГОСТовallgosts.ru » 67. ПРОИЗВОДСТВО ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ » 67.050. Общие методы проверки и анализа пищевых продуктов

ГОСТ 34136-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Обозначение: ГОСТ 34136-2017
Наименование: Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Статус: Принят
Дата введения: 07/01/2018
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 67.050, 67.100, 67.120.10, 67.120.20, 67.120.30
Скачать PDF: ГОСТ 34136-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.pdf
Скачать Word:ГОСТ 34136-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.doc

Текст ГОСТ 34136-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ 34136— 2017

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим

детектированием

Издание официальное

Москва

Стандартииформ

2017

ГОСТ 34136—2017

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ ло межгосударственной стан* дартизации установлены в ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосудар* ственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, при* нятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 30 августа 2017 г. Не 102*П)

За принятие проголосовали:

Кратко* наименование страны по МК {ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3160)004—97

Сокращенное нанменоеамие национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандврт

Россия

RU

Росстандарт

Украина

UA

Минэкономразвития Украины

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 сентября 2017 г. № 1160-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34136—2017 введен в действие в качестве на* ционального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стамдартинформ. 2017

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ 34136—2017

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим

детектированием

Food products, food raw materials.

Method for determination of the residual content of macrolides. linoosamides and pleuromutilins by high performance

liquid chromatography — mass spectrometry

Дата введения — 2018—07—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и продовольственное сырье: мясо (все виды животных), в том чиспе мясо птицы, субпродукты, мясные продукты, полуфабрикаты, рыбу, креветки, молоко, молочные продукты, в том числе сыр и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения остаточного содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов.

Диапазон измерений для макролидов в мясе, мясных продуктах и полуфабрикатах, рыбе, креветках. молоке, молочных продуктах, в том числе сыре — от 1 до 320 мкг/кг. в субпродуктах — от 1 до 3200 мкг/кг. для линкозамидов в мясе, мясных продуктах и полуфабрикатах, рыбе, креветках — от 1 до 160 мкг/кг. в молоке, молочных продуктах, в том числе сыре — от 1 до 240 мкг/кг. в субпродуктах — от 10 до 2400 мкг/кг: для плевромутилинов — в мясе, мясных продуктах и полуфабрикатах, рыбе, креветках. молоке, молочных продуктах, в том числе сыре — от 1 до 160 мкг/кг. в субпродуктах — от 5 до 1600 мкг/кг.

Примечания

1    Макролиды: слирамицин. эритромицин, кпаритромицин. гулзтромицин. тилмикоэин. тилоэин. тилвалозик.

2    Линкозамиды: линкомицик. клиндамицин. пирлиыицин.

3    Плевромутилины: валнемулин. тиамулин.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005—86 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты’

ГОСТ 12.2.085—2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009.

Издание официальное

1

ГОСТ 34136—2017

ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 4268—76 Изделия кулинарные и полуфабрикаты из рубленого мяса. Правила приемки и методы испытаний

ГОСТ ИСО 5725-6—2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике*

ГОСТ 5846—73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия ГОСТ 6700—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 699S—77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 7269—2015 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 9293—74 (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия ГОСТ 9792—73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 22300—76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия ГОСТ 26809.1—2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты ГОСТ 26809.2—2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31339—2006 Рыба, нерыбкые объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31467—2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет игы по ежегодному информационному указателю «Национагъные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочньы стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется е части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на извлечении макроподов, линкозамодов и плевромутилинов из анализируемой пробы, их идентификации и количественном определении методом 8ЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (ММР). Количественное определение проводят методом внутреннего стандарта.

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007. при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробеэопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085.

4.5    Применяемые при определении остаточных содержаний макроподов, линкозамодов, плевромутилинов средства измерений должны иметь свидетельства о поверке, вспомогательное оборудование—свидетельства об аттестации, оформленные в соответствии с требованиями национального за-

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002.

2

ГОСТ 34136—2017

конодательстеа в области обеспечения единства измерений, действующего на территории государства, принявшего стандарт.

4.6    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемого оборудования.

4.7    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха..............................................................от 15 *С до 30 *С;

-    относительная влажность воздуха................................................................от 20 % до 80 %.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы,

посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточного содержания макролидов, линкозамидое и плевромутилинов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду:

•    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой погрешности не более ± 0,001 г;

•    весы высокого (II) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.02 мг:

•    масс-спектрометр, оснащенный источником ионизации с электрораспылением, кеадрупольны-ми анализаторами, с диапазоном измерений от 100 до 1100 атомных единиц массы (а. е. м.). массовым разрешением не менее 0.7 а. е. м., с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.1 а. е. м.. с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

•    систему высокоэффективной жидкостной хроматографии, оснащенную бинарным насосом со смесителем, термостатом хроматографической колонки, обеспечивающим температуру нагрева до (50 ± 1) *С;

•    колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фазным сорбентом С18 размером частиц не более 5.0 мкм. длиной 150 мм и внутренним диаметром 2.1 мм:

•    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений:

- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 60 *С;

•    устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

•    картриджи для твердофазной экстракции вместимостью не менее 3 см3, заполненные обращен-но-фазным сорбентом с диаметром частиц сорбента от 20 до 50 мкм;

•    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3:

•    встряхиватель (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм. диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин:

•    генератор азота, с объемной долей азота не менее 90 % и производительностью 200 дм3/мин;

•    измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

•    камеру лабораторную морозильную с рабочим диапазоном температур от минус 15 вС до минус 25 вС:

•    систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;

•    холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2 *С до 8 *С:

-центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 4000 об/мин и диапазоном температур от 4 ®С до 20 вС с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3;

•    центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 15000 об/мин и с адаптерами для пробирок вместимостью 1.5 см3;

•    шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 200 °С и погрешностью поддержания заданной температуры ± 5 *С;

•    пробы, не содержащие макролиды, линкозамиды и плееромутилины. подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы («чистые» пробы*);

•    фильтры нейлоновые мембранные с размером пор 0.2 мкм;

•    пробирки микроцентрифужные полипропиленовые вместимостью 1.5 см3;

* Срок хранвюя «чистых» проб при температуре от минус 15 *С до минус 25 *С — не более 3 мес.

3

ГОСТ 34136—2017

•    виалы (флаконы) для автоматического устройства ввода проб, вместимостью 2 см3, с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками 9 мм:

-виалы (флаконы) полипропиленовые или пробирки полипропиленовые вместимостью 15 и 50 см3 с завинчивающимися крышками;

-    колбы 1—25(1000>-2 по ГОСТ 1770;

-    пипетки 2—2—1—2(5.10) по ГОСТ 29227;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 5—25. 20—100. 200—1000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1 %;

-    пробирки П—2—10—14/23ХС по ГОСТ 1770;

-    цилиндры 1—25(1000)—1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов применяют следующие реактивы:

•    азот газообразный марки 60 по ГОСТ 9293. ос. ч.;

•    ацетон по ГОСТ 2603:

•    ацетонитрил для ВЭЖХ с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;

•    воду деионизированную для ВЭЖХ. полученную с использованием системы производства уль-трачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709:

•    кислоту муравьиную по ГОСТ 5648. ч. д. а.;

-    метанол по ГОСТ 6995. х. ч.;

•    эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300. ч. д. а.

5.3    При определении содержания макролидов, линкозамидов и плевромутилинов в качестве образцов сравнения применяют соединения с массовой долей основного вещества не менее 85 %.

5.3.1    Для приготовления исходных растворов:

•    слирамицин;

•    эритромицин;

•    кларитромицин:

-    тулатромицин;

-тилмикозин:

•тилозин;

•    тилвалоэик;

•    линкомицин;

-    клиндамицин:

•    пирлимицин;

-    валнемулин;

-тиамулин.

5.3.2    Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов:

•    рокситромицин-Д7;

-    азитромицин-ДЗ;

-    клиндамицин-ДЗ;

-    валнемулин-Дб.

5.4    Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения. а также оборудования, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

4

ГОСТ 34136—2017

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 *С до 110 вС.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление подвижной фазы А

Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 300 см3 деионизированной воды и 5 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят объем раствора деионизированной водой до метки на колбе.

Срок хранения раствора при температуре от 15 *С до 25 *С — не более 2 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

6.3.1 Приготовление исходных стандартных растворов макролидов, линкозамидов, плевромутилинов (растворы С0) массовыми концентрациями 200 мкг/см3

Для приготовления исходных растворов С0 с массовой концентрацией 200 мкг/см3 рассчитывают необходимую массу f-ro вещества, мг. с учетом содержания основного вещества для каждого определяемого аналита по формуле

ve-v-2/

" 1ктй*а<1ита I

-0,001.

(1)

где С — концентрация /-го аналита в стандартном растворе, мкг/см3:

V — объем мерной колбы, см3;

Р — массовая доля основного вещества в »-м стандартном образце, %;

М, — молярная масса основного вещества в ьи стандартном образце, г/моль;

^аналита ■ — молярная маеса /-го аналита. г/моль.

8 мерные колбы вместимостью 25 см3 по отдельности вносят рассчитанные массы исходных веществ (взвешивание проводят с точностью до первого десятичного знака). Приливают по 15 см3 метанола. перемешивают и после полного растворения сухого вещества доводят объем растворов метанолом до метки на колбе. Помещают в ультразвуковую баню на 5 мин в режиме перемешивания.

Срок хранения растворов при температуре от минус 15 *С до минус 25 ‘С — не более одного года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.2 Приготовление рабочих стандартных растворов макролидов, линкозамидов, плевромутилинов массовыми концентрациями 10 мкг/см3 (раствор С.,), 1 мкг/см3 (раствор С2), 0,1 мкг/см3 (раствор С3)

Рабочие растворы С,. С2. С3 готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3 в соответствии с рисунком 1.

Рисунок 1 — Приготовление рабочих растворов С,. Cj. С3

Растворы Сп. С2. С3 хранят при температуре от минус 15 ®С до минус 25 *С.

Срок хранения раствора С, — не более 6 мес. С2 — не более 3 мес. С3 — не более 1 недели. Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

5

ГОСТ 34136—2017

6.3.3 Приготовление исходных растворов внутренних стандартов макролидов, линкозамидов, плевромутилинов массовыми концентрациями 200 мкг/см3 (растворы О0)

6.3.3.1 Внутренние стандарты для макролидоа. линкозамидов. плевромутилинов выбирают в со» ответствии с таблицей 1.

Таблица 1 — Соответствие между а калигами и внутренними стандартами

Наименование анапмта

Наименование внутреннего стандарта

Спирамицин

Азитромицин-ДЭ

Тулатромицин

Тилмикозин

Эритромицин

Ро«ситромицин-Д7

Кларитромицин

Тилвалозин

Тилоэин

Линкомицин

Клицдамицин-ДЗ

Клиндамицин

Пирлимицин

Валнемулин

Валнемупин-Дб

Тиамулин

6.3.3.2 Для приготовления исходных растворов D0 массовой концентрацией 200 мкг/см3 рассчитывают необходимую массу /-го вещества, мг (взвешивание проводят с точностью до первого десятичною знака), с учетом содержания основного вещества во внутреннем стандарте по формуле 1.

В мерные колбы вместимостью 25 см3 по отдельности вносят рассчитанные массы исходных веществ. приливают по 15 см3 метанола, перемешивают до полною растворения сухого вещества. Доводят объем растворов метанолом до метки на колбе, затем помещают в ультразвуковую баню на 5 мин.

Срок хранения растворов при температуре от минус 15 вС до минус 25 °С — не более одною года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.4 Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов массовыми концентрациями 2 мкг/см3 (раствор О,) и 1 мкг/см3 (раствор 02) каждого внутреннего стандарта

Рабочие растворы внутренних стандартов О,. 02 готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3 в соответствии с рисунком 2.

Рисунок 2 — Приготовление рабочих растворов внутренних стандартов £>,, D2

Растворы О,. 02 хранят при температуре от минус 15 ®С до минус 25 ’С.

Срок хранения раствора О, — не более 6 мес. £>2 — не более 3 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.5 Приготовление матричных градуировочных растворов (растворы G,— Ge)

Матричные градуировочные растворы G,—Ge готовят в виалах или полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3 из «чистых» проб массой 1,0 г, в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов 02 и рабочие растворы определяемых аналитое С,. С2, С3 в соответствии с таблицей 2.

6

ГОСТ 34136—2017

Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G,—Gg

Обозначение и массовая концентрация мэтрич-кого градуировочного раствора

Вносимый объем рабочего раствора. скэ

с*

С2

«3

°2

G, (3200 нг/см3)

0.32

0.05

G2(1000 нг/см3)

0.1

0.05

G3(500 нг/см3)

0.05

0.05

G4(100 нг/см3)

0.1

0.05

Gs (50 нг/см3)

0.05

0.05

Ge (10 нг/см3)

0.1

0.05

G7 (5 нг/см3)

0.05

0.05

Ga(1 нг/см3)

0.01

0.05

Пробирки встряхивают в шейкере в течение 1 мин. выдерживают в темноте при комнатной температуре в течение 10 мин и проводят дальнейшую обработку растворов согласно разделу 7.

Растворы G,—Ga используют свежеприготовленными.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

7.1.1    Отбор проб мяса, печени — по ГОСТ 7269.

7.1.2    Отбор проб мяса и печени птицы — по ГОСТ 31467.

7.1.3    Отбор проб мясных продуктов — по ГОСТ 4288. ГОСТ 9792.

7.1.4    Отбор проб рыбы, креветок — по ГОСТ 31339.

7.1.5    Отбор проб молока и молочных продуктов по ГОСТ 26809.1. сыра — по ГОСТ 26809.2.

7.1.6    Отобранные пробы по 7.1.1, 7.1.2. 7.1.4 при отсутствии возможности анализа в день отбора замораживают и хранят при температуре от минус 15 *С до 25 *С до проведения анализа.

7.2    Подготовка проб

Подготовку проб молока и молочных продуктов проводят по ГОСТ 26809.1. сыра — по ГОСТ 26809.2. Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани. Рыбу предварительно очищают от крупных костей и кожи, креветки — от хитина и других нецелевых составляющих. Мясо, субпродукты, мясные продукты, рыбу, креветки измельчают на гомогенизаторе. Обработку проб проводят в соответствии с рисунком 3 (см. стр. 8).

7.3    Очистка подготовленных проб методом ТФЭ

Картриджи для твердофазной экстракции предварительно кондиционируют, последовательно пропуская 2 см3 метанола и 2 см3 деионизированной воды (вакуум или избыточное давление не применяют). Затем пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с 7.2. Промывают картридж 2 см3 деионизированной воды и сушат в вакууме водоструйного насоса в течение 10 мин. Элюируют определяемые вещества в новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 с помощью 3 смметанола. Упаривают элюат до 0,1—0.2 см3 в токе азота при температуре не более 40 *С. добавляют 0,5 см3 подвижной фазы А (см. 6.2), перемешивают и переносят в полипропиленовую пробирку вместимостью 1.5 см3. Доводят объем раствора до 1.0 см3 подвижной фазой А. центрифугируют при 15000 об/мин и температуре 4 *С в течение 10 мин. Затем фильтруют через мембранный фильтр в ей-алу вместимостью 2 см3 и используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа.

7

ГОСТ 34136—2017

Рисунок 3 — Подготовка анализируемых проб

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия хроматографического разделения

8.1.1    Масс-спектрометр и хроматограф включают е соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометричесхого детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2    Например, для колонки диаметром 2.1 мм. длиной 150 мм. с обращенно-фаэным сорбентом С18 с размером частиц не более 5.0 мкм. соблюдают следующие условия хроматографирования:

- температура колонки — 40 вС;

•    скорость потока подвижной фазы —0.2 см3/мин;

•    объем вводимой пробы — 20 мм3.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижной фазы А в соответствии с 6.2. в качестве подвижной фазы Б используют ацетонитрил) в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3 — Условия градиентного элюирования при регистрации положигегъных ионов

Время, мин

Подвижная фаза А. %

Подвижная фаза 6,16

0.0

100

0

1.0

100

0

11.0

5

95

11.1

100

0

20.0

100

0

8.1.3 Параметры режима ММР при измерении макролидов, линкозамидов. плевромутилинов приведены в таблице 4.

Параметры настройки масс-спекгрометрического детектора:

•    режим работы источника — ионизация элекгроспреем. ESt

-    напряжение на распыляющем капилляре (IS) 5500 В при регистрации положительных ионов:

•    температура источника 450 *С:

•    разрешение квадруполей Q1/Q3 — единичное:

-    давление газа для фрагментации (CAD) — 6 кПа.

8

ГОСТ 34136—2017

Таблица 4 — Параметры воздействия на ионы в режиме ММР с регистрацией положительных ионов

Анэпнт

Ион-

предшественник.

mh

Ион-продукт. mil

время

удержи

вания.

мин

Энергия

соударений.

эв

Ускоряющее напряжение ив выходе из ячейки столкновений, в

Спирамицин

422.2

100.9

174.1

7.04

22

16

25

28

Эригромицин

734.5

158

576.3

8.09

35

21

27

32

Клари громи цин

748.5

590.3

158

8.78

25

24

33

24

Тулагромицин

807.0

577.3

158

6.42

33

27

48

8

Тил МИ КОЗИН

869.6

174.2

696.3

7.53

55

23

53

35

Тилвалозин

1042.6

229

174

9.58

35

25

33

28

Типозин

916.5

772.1

174

8.20

49

22

39

36

Линкомицин

407,2

359.2

126

6.05

28

28

35

14

Клиндамицин

425.2

377.1

126

7.41

25

26

35

12

Пирлимицин

411.2

112

363

7.21

31

21

16

Валнемулин

565.4

263

147

8.96

21

30

51

26

Тиамулин

494.3

192

118.9

8.71

33

54

57

26

Рокситромицин-Д7*

844.7

686.4

8.79

31

30

Азитромицин-ДЗ*

752.7

594.5

7.09

39

27

Клиндамицин-ДЗ'

428.4

380

129

7.40

26

26

35

15

Ватвмулин-Д6‘

571.6

269.2

153.2

8.96

23

30

51

26

* Внутренний стандарт.

Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и мэсс-спектромет-ричесхого детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.1.4 Контроль чувствительности хромато-масс-спектрометрической системы осуществляют вее-дением в инжектор хроматографа 20 мм3 матричного градуировочного раствора Ge (см. 6.3.5). Полу* чекное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения хромато-масс-слектрометрической системы.

8.2.1    Проводят измерения не менее четырех матричных градуировочных растворов, выбранных исходя из ожидаемой массовой концентрации аналитов в анализируемом образце и приготовленных по 6.3.5. в порядке возрастания их концентраций. Каждый градуировочный раствор измеряют два раза. Определяют значения времени удерживания ион-продуктов аналитов и их внутренних стандартов.

8.2.2    Вычисление площади пика проводят для каждого ион-продукта анализируемых аналитов и их внутренних стандартов. Количественное определение макролидов, линкоэаминов. плевромутили-нов проводят по одному, наиболее интенсивному, ион-продукту. Для подтверждения наличия аналитов рассчитывают отношения площади пика двух ион-продуктов для каждого аналита в градуировочном растворе.

Соответствие аналитов и их внутренних стандартов указано в таблице 1.

8.2.3    Градуировочную характеристику строят в координатах «отношение площади пика определяемого соединения к площади пика внутреннего стандарта этого соединения» — «отношение концентраций аналита и внутреннего стандарта». При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у - а + Ьх, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98. Построение градуировочной характеристики проводят при каждой серии измерений заново.

8.2.4    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации макролидое. линко-замидов. плевромутилиное в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение

8.3.1 Для измерения содержания макролидое. линкозамидов. плевромутилиное проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования. Для каждого аналита проводят два параллельных измерения.

9

ГОСТ 34136—2017

8.3.2    Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

•    подвижную фазу А;

- «чистую» пробу:

•    матричные градуировочные растворы (см. 6.3.5):

•    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3    Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ион-продук-тов каждого аналита. соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуиро-еочных растворов по 8.1.2.

9 Обработка результатов измерений

9.1    8 соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения массовой концентрации макролидов, линкоэамидов. плевромутилинов в двух параллельных измерениях анализируемой пробы.

9.2    Содержание ьго аналита X,. мкг/кг, вычисляют по формуле

где С;— массовая концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику. нг/см3;

V, — объем, до которого разбавлена проба, см3; го, — масса анализируемой пробы, г.

9.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений анализируемой пробы, если выполняется условие приемлемости по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).

10 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение определения содержания макролидов, линкоэамидов и плевромутилинов с относительной расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к - 2 и доверительной вероятности Р - 0,95. указанной в таблицах 5—7.

Таблицаб — Показатели точности и прецизионности метода при определении содержания макролидов, линко-замидов. плевромутилинов в мясе, мясных продуктах и полуфабрикатах, рыбе, креветках

Аиалит

Диапазон измерений содержания, нкt(*r

Значение относительной расширенной неопределенности Uf %. при коэффициенте охвата * » 2

Показатель

повторяемости

(относительное

стандартное

отклонение

повторяемости)

0,.%

Предел

повторяе

мости

г.%

Показатель воспроизводи ы ости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) «*.%

Слирамицин

От 2 до 160 екпюч.

32

12

33

16

Се. 160 до 320 включ.

24

8

21

12

Эритромицин

От 10 до 40 включ.

34

12

33

15

Се. 40 до 320 включ.

19

6

17

9

Тилмикоэин

От 1 до 100 включ.

30

8

23

14

Са. 100 до 160 включ.

18

5

13

9

Ти лозин

От 1 до 20 включ.

33

12

34

16

Св. 20 до 160 включ.

18

4

10

8

Тилвалозин

От 5 до 80 включ.

32

12

34

16

Св. 80 до 160 включ.

16

4

12

8

10

ГОСТ 34136—2017

Окончание таблицы 5

Аналит

Диапазон измерений содержания, мкг/кг

Значение относи* тельной расширенной неопределенности Ц. %, при коэффициенте охвата к * 2

Показатель

повторяемости

(относительное

стандартное

отклонение

повторяемости)

<г,.%

Предел повторно* мости г. %

Показатель

воспроизводимости

(относительное

стандартное

отклонение

воспроизводимости!

Тулатромицин

От 1 до 40 вкгьоч.

43

16

44

22

Св.40 до 160 ехлюч.

22

6

15

10

Клари громи цин

От 1 до 80 вктч.

37

14

38

19

Се. 80 до 160 включ.

22

7

19

11

Пинкоиицик

От 1 до 160 включ.

31

10

28

15

Клиндамицин

От 1 до 20 включ.

37

13

36

19

Се. 20 до 160 включ.

14

4

10

7

Пирлимицин

От 1 до 80 включ.

26

8

22

12

Св. 80 до 160 включ.

14

4

10

7

Валнемулин

От 1 до 20 включ.

67

26

71

34

Се. 20 до 160 включ.

22

7

18

11

Тиамулин

От 1 до 160 включ.

28

10

28

14

Таблица б — Показатели точности и прецизионности метода при определении содержания макро лидов, лин-коэамидое. плеером ут или нов в субпродуктах

Аналит

Диапазон измерений содержания, мкт/хг

Значение относительной расширенной неопределенности иР Ч. при коэффициенте охвата А * 2

Показатель повторяемости (относительное стандартное отклонение повторяемости)

Предел

повторю*

мостя

л%

Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости ) «*•*

Спирамицин

От 20 до 3200 включ.

34

11

30

17

Эритромицин

От 10 до 160 включ.

48

12

33

24

Св.160 до 320 включ.

14

4

11

7

Тилмикозин

От 10 до 200 включ.

48

18

49

24

Св.200 до 1600 включ.

28

9

25

14

Типозин

От 1 до 20 включ.

48

11

31

24

Св. 20 до 160 включ.

20

7

20

10

Тилвалозин

От 5 до 160 включ.

52

19

52

26

Тулатромицин

От 20 до 400 включ.

42

14

39

21

Св. 400 до 3200 включ.

18

6

18

9

Клари громицин

От 1 до 20 включ.

72

12

34

32

Св. 20 до 160 включ.

16

5

14

8

Линкомицин

От 15 до 2400 включ.

43

15

40

21

Клиндамицин

От 15 до 300 включ.

34

11

31

17

Св. 300 до 2400 включ.

24

8

23

12

Пирлимицин

От 10 до 200 включ.

85

14

40

38

Св.200 до 1500 включ.

23

8

22

10

11

ГОСТ 34136—2017

Окончание таблицы 6

Аиапит

Диапазон измерений содержания, мкг/кг

Значение относительной расширенной неопределенности U'р, %. при коэффициенте охвата *■ 2

Показатель повторяемости {относительное стандартное отклонение повторяемости) 0,.%

Предел повторяемости г. %

Покеэатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводи У ости |

Валнемулин

От 5 ДО 100 8КЛЮЧ.

28

9

24

14

Св.100 до 800 включ.

16

4

11

8

Тиамулин

От 10 до 800 включ.

58

11

29

26

Св.800 до 1600 включ.

28

9

26

14

Таблица 7 — Показатели точности и прецизионности метода при определении содержания макролидоа. лин-козамидоа. плевромутилинов в молоке, молочных продуктах, в том числе сыре

Аналит

Диапазон измерении содержания, мкг/кг

Значение относительной расширенной неопределенности %. при коэффициенте охвата А■ 2

Показатель повторяемости (относительное стандартное отклонение повторяемости) о,.%

Предел

повторяемости

г.%

Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) Од, %

Спирамицин

От 2 до 320 включ.

21

6

18

10

Эритромицин

От 10 до 40 включ.

28

9

26

14

Св. 40 до 320 включ.

18

5

14

9

Тилмикозин

От 1 до 20 включ.

59

12

34

27

Се. 20 до 160 включ.

28

9

25

14

Тилозин

От 5 до 20 включ.

24

в

22

12

Се. 20 до 160 включ.

18

6

17

9

Тилвалозин

От 1 до 160 включ.

19

7

20

9

Тулатромицин

От 1 до 40 включ.

41

9

26

18

Се. 40 до 160 включ.

20

7

10

Кларит ромицин

От 1 до ВО включ.

30

7

14

Се. 80 до 160 включ.

10

3

7

5

Линкомицин

От 1.5 до 30 включ.

33

в

23

15

Се. 30 до 240 включ.

16

5

14

8

Клиндамицин

От 1 до 20 включ.

27

9

26

14

Се. 20 до 160 включ.

12

4

12

6

Пирлимицин

От 1 до 20 включ.

22

7

20

10

Се. 20 до 160 включ.

17

5

13

8

Валнемулин

От 20 до 160 включ.

16

5

13

8

Тиамугын

От 1 до 160 включ.

24

6

15

11

11 Оформление результатов измерений

Содержание /-го аналита. мкг/кг. представляют в виде

^ ±0.01 • U, X, при Р = 0.95.    (3)

где X, — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений содержания /-го аналита в анализируемой пробе, мкг/кг (см. 9.3);

12

ГОСТ 34136—2017

Ц — значение относительной расширенной неопределенности содержания /-го аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицами 5—7);

0,01 - U, X, — значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, мкг/кг.

Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности, содержащее не более четырех значащих цифр и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

12 Контроль стабильности результатов измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) с использованием контрольных карт Шухарта.

13

ГОСТ 34136—2017

УДК 637.07:614.3:006.354    МКС 67.050

67.100

67.120.10

67.120.20

67.120.30

Ключевые слова: пищевые продукты, продовольственное сырье, макролиды, линкоэамиды и плвврому-тилины, метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с массюпвктрометрическим детектированием

БЗ в—2017Г91

Редактор Л. В. Коретникова Технический редактор И.Е. Черепкова Корректор О.В. Лазарева Компьютерная верстка Е.О. Асташина

Сдано в иа6ор21.09.2017. Подписано а печать 12.10.2017. Формат 60»&4'/г Гарнитура Ариап. Уел. леч.л. t.66. Уч.*иад. л. 1.66. Тираж 27 эо Зак. 1749.

Подготовлено иа основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано ао ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123001 Москва. Гранатный лер.. 4 wwMr.gostinlb.ru infbQgoslinfo.ru