ГОСТ 10444.1-84
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОНСЕРВЫ
Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
Canned food. Preparation of reagent solutions, dyes, indicators and culture media for microbiological analysis
МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109
Дата введения 1985-07-01
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.01.84 дата введения установлена 01.07.85
Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)
ВЗАМЕН ГОСТ 10444.1-75
ИЗДАНИЕ (апрель 2010 г.) с Изменением N 1, утвержденным в июле 1990 г. (ИУС 11-90)
Настоящий стандарт распространяется на методы приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
реактивы квалификации х.ч. и ч.д.а. по ГОСТ 13867-68;
вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;
растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.
1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.
1.3. Питательные среды приготовляют в эмалированной или стеклянной посуде. Новую стеклянную посуду, в том числе колбы, пробирки, пипетки, бактериологические чашки Петри, перед употреблением выдерживают в течение 12-24 ч в растворе соляной кислоты
1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.
1.5. Необходимое значение рН питательных сред устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по ГОСТ 26668-85.
1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °С не более одного месяца.
2. АППАРАТУРА
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
автоклав для стерилизации питательных сред;
стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002.
пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;
баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °С с отклонением до 1 °С от заданной;
весы лабораторные по ГОСТ 24104-88*;
________________
* С 1 июля 2010 г. введен в действие ГОСТ Р 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
воронки для горячего фильтрования;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
гомогенизатор или смеситель лабораторный;
горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;
дистиллятор электрический марки Д N 9;
капельницы;
кастрюли разные;
колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
кюветы разные для окрашивания препаратов;
марля медицинская по ГОСТ 9412-93;
мясорубка по ГОСТ 4025-95;
ножи;
ножницы;
палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пинцеты по ГОСТ 21241-89;
пипетки Мора;
пипетки разной вместимости;
плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;
рН-метр;
пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
промывалка;
рефрактометр;
ареометр по ГОСТ 18481-81;
сетки асбестовые;
стекла часовые;
ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;
термометры химические от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90;
термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °С с отклонением до 0,5 °С от заданной;
фильтры Зейтца;
фильтры мембранные N 2;
флаконы вместимостью 100-200 см
холодильник по ГОСТ 16317-87;
центрифуга, обеспечивающая частоту вращения 50 с
цилиндры разной вместимости по ГОСТ 1770-74;
часы песочные ОСТ 25-11-38-84*;
________________
* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - .
чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;
шкаф сушильный;
шпатели металлические;
шпатели стеклянные;
шприцы по ГОСТ 22967-90.
3. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;
агар сухой питательный;
аммоний лимоннокислый;
аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712-78;
ацетон по ГОСТ 2603-79;
бром по ГОСТ 4109-79;
бромкрезолпурпур;
бромтимоловый синий;
водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;
бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;
вата гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556-81;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
глицин;
глицерин по ГОСТ 6824-96;
глюкоза по ГОСТ 6038-79;
дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171-81;
желатин пищевой по ГОСТ 11293-89;
железоаммонийные квасцы;
железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148-78;
железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147-74;
инфузорная земля;
йод по ГОСТ 4159-79;
калий азотнокислый по ГОСТ 4217-77;
калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
калий сернокислый по ГОСТ 4145-74;
калий йодистый по ГОСТ 4232-74;
калий углекислый по ГОСТ 10690-73;
калия теллурит;
калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75 или двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493-75;
кальций углекислый по ГОСТ 4530-76;
капуста по ГОСТ 1724-85;
картофель по ГОСТ 7176-85;
кислота аскорбиновая;
кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908-2004;
кислота молочная пищевая по ГОСТ 490-2006;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
кислота уксусная по ГОСТ 61-75;
крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76;
кристаллический фиолетовый;
кровь кролика;
кровь крупного рогатого скота, лошади или барана;
лакмус или лакмоид;
лактоза;
литий хлористый 6-водный;
маннит;
масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164-78;
медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165-78;
молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277-79*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52090-2003.
мясо говядина по ГОСТ 779-55, мясо баранина по ГОСТ 1935-55*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52843-2007.
мясо-телятина по ГОСТ 779-55;
мясо-конина по ГОСТ 27095-86;
мука кукурузная по ГОСТ 14176-69;
натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77;
натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76;
натрия пируват;
натрий сернистокислый;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79;
натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773-76 и однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245-76;
натрий уксуснокислый 3-х водный по ГОСТ 199-78;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
натрия азид;
1-нафтол;
парадиметиламинобензальдегид;
парафин по ГОСТ 23683-89;
панкреатин (порошок, в 1 г - 25 ед.);
поджелудочная железа убойного скота;
пирогаллол;
плазма крови кроличья или человеческая;
пепсин;
пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76;
печень говяжья, телячья, кроличья, не содержащая ингибиторов, роста микроорганизмов;
рыба треска или пикша, судак, щука по ГОСТ 814-96;
сахароза по ГОСТ 5833-75;
сафранин: О или Т;
солод ячменный;
соль закиси железа и аммония двойная сернокислая - соль Мора по ГОСТ 4208-72;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
____________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
спирт этиловый сырец по ГОСТ 131-67*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52193-2003.
сок томатный по ГОСТ 937-91*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52183-2003.
трипсин;
триптон;
триптический гидролизат казеина;
триптофан;
2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорид;
уголь активный по ГОСТ 4453-74;
фенолфталеин (индикатор);
фуксин (основной и кислый);
хлороформ по ГОСТ 20015-88;
цистеина гидрохлорид;
экстракт дрожжевой сухой;
экстракт мясной;
яйца куриные по ГОСТ 27583-88*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52121-2003.
4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК, ИНДИКАТОРОВ И КОМПОНЕНТОВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
4.1. Агар голодный
2,0 г агара растворяют в 98 см
Применяют для наслаивания на посевы с целью предотвращения соприкосновения посевов с кислородом воздуха.
4.2. Взвесь (эмульсия) яично-желточная в физиологическом растворе.
Из яйца, протертого с поверхности спиртом с объемной долей 70%, извлекают пипеткой желток и смешивают его со 100 см
Добавляют к питательным средам для определения лецитиназной активности микроорганизмов.
Допускается яично-желточную эмульсию приготовлять следующим образом: свежие куриные яйца моют, ополаскивают холодной водой, опускают в раствор этилового спирта с объемной долей 70% и высушивают. Соблюдая правила асептики, разбивают каждое яйцо в стерильную чашку Петри и отделяют желток от белка. Помещают желток в стерильную колбу или флакон с четырьмя объемами стерильной воды и энергично перемешивают. Нагревают смесь на водяной бане при температуре (45±1) °С в течение 2 ч, оставляют на 18-24 ч при температуре от 0 до плюс 5 °С для формирования осадка.
Соблюдая правила асептики, собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при температуре от 0 до плюс 5 °С не более 72 ч.
4.3. Вода бромная
3-3,5 см
Применяют в качестве индикатора при определении содержания триптофана в питательных средах. При наличии триптофана в присутствии 3-4 капель бромной воды жидкость принимает розово-фиолетовую окраску.
4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
4.4. Вода пептонная
1 г пептона растворяют в 1 дм
4.5. Глюкоза концентрации 5, 10, 100 и 200 г/дм
0,5; 1; 10; 20 г глюкозы переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную колбу вместимостью 100 см
Применяют в качестве источника углеводов в питательных средах и восстанавливающего вещества в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.
4.6. Индикатор Андреде
0,5 г кислого фуксина растворяют в 100 см
Применяют для приготовления среды Гисса.
4.7. Индикатор бромкрезолпурпур - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для определения кислотообразующей способности микроорганизмов.
4.8. Индикатор бромтимоловый синий - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для контроля рН питательных сред.
4.9. Кальций углекислый стерильный
Фасуют от 2 до 100 г углекислого кальция в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют воздухом по ГОСТ 26668-85.
Добавляют к питательным средам, предназначенным для посева в них кислотных продуктов.
4.10. Раствор аскорбиновой кислоты концентрации 50 г/дм
Применяют в качестве восстановителя, связывающего кислород в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.
4.11. Раствор лимонной кислоты концентрации 200 г/дм
20 г лимонной кислоты переносят в мерную колбу, доводят водой объем до 100 см
Применяют для подкисления питательных сред.
4.10, 4.11. (Измененная редакция, Изм. N 1).
4.12. Кусочки мяса, фарша, мясная вода, мясной отвар
Освобожденное от костей, жира, сухожилий мясо говядины или конины для приготовления мясного отвара режут на мелкие кусочки или для приготовления мясной воды пропускают через мясорубку, заливают водой из расчета 1 дм
Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности смеси фильтруют сначала небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр; если жидкость прозрачна, кипячение прекращают. Смесь вновь оставляют до следующего дня в холодильнике. рН охлажденной смеси доводят до 7,0-7,2, фильтруют через ткань, отжимая из кусочков мяса или фарша всю жидкость. Мясную воду или мясной отвар и кусочки мяса или фарша стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют в качестве компонентов питательных сред.
4.13. Кусочки печени, печеночная вода, печеночные отвар и бульон
Свежую печень освобождают от пленок и жира. Для приготовления печеночного отвара режут на кусочки массой 30-40 г, для приготовления печеночной воды пропускают через мясорубку. Печень заливают водой из расчета 1 дм
Кусочки печени разрезают на более мелкие по 1,5-3 г, заливают раствором двууглекислого натрия и кипятят в течение 10-15 мин (не допуская бурного кипения). После этого кусочки печени промывают в дуршлаге под струей водопроводной воды в течение 1 ч и несколько раз дистиллированной водой. Кусочки печени: должны иметь рН 7,0-7,2; значение рН печени контролируют погружением кусочков в индикатор; бромтимоловый синий индикатор должен иметь сине-зеленую окраску. Кусочки печени фасуют в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют при (121±1) °С в течение 20 мин. Применяют в качестве компонентов питательных сред для анаэробных микроорганизмов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.14. Лакмус водно-спиртовой раствор (лакмусовая настойка), приготовляют по ГОСТ 4919.1-77.
Добавляют в питательные среды для определения способности микроорганизмов к редукции лакмуса.
4.15. Масло вазелиновое
Масло разливают по 20-50 см
Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.
4.16. Молоко обезжиренное
Молоко доводят до кипения, оставляют на сутки в холодильнике, освобождают от сливок, вторично доводят до кипения, вновь оставляют на 1 сут в холодильнике и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное молоко может быть приготовлено путем сепарирования. Обезжиренное молоко разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре 100 °С в течение 3 сут по 30 мин или однократно при температуре (116±1) °С в течение 20 мин. После стерилизации молоко не должно принимать коричневый оттенок.
Обезжиренное молоко применяют в качестве компонента питательных сред.
4.17. Раствор гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм
Применяют для подщелачивания питательных сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.18. Пептонно-солевой раствор, готовят по ГОСТ 26669-85.
Применяют для приготовления разведений.
4.19. Пирогаллол, щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4517-87.
Применяют для поглощения кислорода в емкостях, предназначенных для анаэробных микроорганизмов.
4.20. Цитратная плазма крови
5 см
Плазма кролика может быть заменена человеческой. Не допускается использовать плазму крови человека, которому незадолго до взятия крови вводилась глюкоза.
Человеческая плазма не может быть использована, если исследуемая культура выращивалась в атмосфере углекислоты. В обоих случаях происходит угнетение реакции плазмокоагуляции. Допускается использовать сухую цитратную плазму кролика.
Применяют для определения коагулазной способности микроорганизмов.
4.21. Растворы для определения сульфитредуцирующей способности клостридий: сернистокислый натрий - раствор концентрации 10 г/дм
Оба раствора стерилизуют раздельно при температуре (115±1) °С в течение 30 мин.
Добавляют по 5 см
4.22. Раствор Люголя
2 г йодистого калия растворяют в 5-10 см
Применяют для контроля степени осахаривания сусла.
4.23. Раствор I-нафтола
5 г I-нафтола, имеющего точку плавления 92,5 °С, вносят в мерную колбу вместимостью 100 см
Раствор применяют свежеприготовленным для контроля ацетилметилкарбинола.
4.24. Раствор панкреатина
4 г панкреатина растворяют в 100 см
Полученный раствор в объеме 0,5 см
Раствор применяют для активации протоксина возбудителей ботулизма.
4.25. Растворы и реактивы для окраски по Граму
4.25.1. Основной красящий раствор по Хукеру
2 г кристалл-виолета с массовой долей сухих веществ 85-90% растворяют в 20 см
0,8 г щавелевокислого аммония растворяют в 80 см
4.25.2. Йодный раствор по Бурке
2 г йодистого калия растворяют в 5-10 см
4.25.3. Контрастный красящий раствор
0,25 г сафранина растворяют в 10 см
4.25.4. Допускается использовать: в качестве основного красящего раствора - водный раствор кристаллического фиолетового концентрации 10 г/дм
Спиртовой раствор основного фуксина концентрации 5 г/дм
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.25.5. Для удаления закрепленного основного красящего раствора используют этиловый спирт (при окраске по Хукеру) и ацетон (при окраске водным раствором кристаллического фиолетового).
4.26. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор
5 г малахитовой зелени растворяют в 100 см
Отдельно 0,5 г сафранина растворяют в 100 см
4.27. Раствор соляной кислоты концентрации 36,5 г/дм
Концентрированная соляная кислота имеет плотность 1,18-1,19 г/см
При плотности концентрированной соляной кислоты 1,18 г/см
При плотности концентрированной соляной кислоты 1,19 г/см
Раствор применяют для подкисления питательных сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.28. Смесь реактивов для создания анаэробных условий
Смешивают 1 г пирогаллола, 1 г углекислого безводного калия и 5 г инфузорной земли и фасуют в бумажные пакеты.
Применяют для создания анаэробных условий.
4.29. Физиологический раствор
0,85 г хлористого натрия растворяют в 100 см
Применяют для приготовления растворов реактивов.
4.30. Реактив йодокрахмальный, готовят по ГОСТ 4517-87. Бумагу не пропитывают.
Используют в виде раствора для контроля отсутствия нитритов в питательных средах.
4.31. Парафиновая смесь
Растапливают равные количества парафина и вазелинового масла, смешивают и стерилизуют горячим воздухом при температуре (140±1) °С в течение 60 мин.
Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.
4.32. Дрожжевой экстракт
100 г пекарских прессованных дрожжей нарезают небольшими кусочками и заливают 500 см
Добавляют в питательные среды как источник веществ, способствующих регенерации поврежденных микроорганизмов.
4.33. Раствор с объемной долей перекиси водорода 3%
10 см
Раствор применяют для определения каталазной активности.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
5.1. Агар Байрд-Паркер
Основа среды: в 1 дм
При отсутствии мясного экстракта вместо дистиллированной воды и мясного экстракта используют 1 дм
При использовании мясо-пептонного бульона триптон или пептон в среду не вносят.
Все компоненты, внесенные в 1 дм
После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.
Применяют для культивирования стафилококков.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.2. Желточный агар с ТТХ
К 500 см
Применяют для культивирования Вас. cereus.
5.3. Капустный агар
200 г размельченной свежей капусты добавляют в 1 дм
5.4. Молочно-солевой агар
Непосредственно перед посевом к 1 дм
Применяют для культивирования стафилококков.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.5. Печеночный агар
К 500 см
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.6. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру
К 100 см
Применяют для определения гемолитической активности микроорганизмов.
5.7. Яично-желточно-азидный агар
10 г пептона, 3 г хлористого натрия, 0,2 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, 15 г агара, 5,5 г мясного экстракта растворяют при подогревании в 1 дм
Применяют для культивирования стафилококков.
5.8. Яично-желточно-солевой агар
1 дм
Применяют для культивирования стафилококков.
5.7; 5.8. (Измененная редакция, Изм. N 1).
5.9. Глюкозо-триптонный (агар) бульон
К 1 дм
Применяют для культивирования мезофильных и кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.10. Картофельно-пептонный (агар) бульон
200 г очищенного и нарезанного кусочками картофеля заливают 1 дм
Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.11. Кислый протеозо-пептонный (агар) бульон
5 г пептона, 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 4 г двузамещенного фосфорнокислого калия растворяют при подогревании в 500 см
Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.12. Мясо-пептонный (агар) бульон
10 г пептона и 5 г хлористого натрия добавляют к 1 дм
Для приготовления мясо-пептонного агара в 1 дм
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.13. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой
К 1 дм
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и для определения общего количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри.
5.14. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой и дрожжевым экстрактом
К 1 дм
Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.15. Мясо-пептонный бульон с растворимым крахмалом
10 г крахмала добавляют в небольшую порцию воды и при помешивании вносят в кипящую дистиллированную воду, получая 100 см
Применяют для культивирования кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.16. Мясо-пептонный бульон с углекислым кальцием
В пробирки разливают по 5-6 см
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.
5.17. Мясо-пептонный бульон с нитратами
К 100 см
При анализе на выявление анаэробных микроорганизмов в среду вводят 1,5 г агара, растворяют его при нагревании, среду разливают в пробирки по 10 см
Применяют для определения нитратредуцирующей способности микроорганизмов.
5.18. Рыбо-пептонный бульон
Рыбу, освобожденную от костей и жира, пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 дм
Для приготовления рыбо-пептонного бульона к 1 дм
5.19. Рыбо-пептонный бульон с глюкозой
К 1 дм
5.20. Бульон Хоттингера и среды, его содержащие
5.20.1. Для приготовления основного раствора Хоттингера в 1 дм
5.20.2. Для приготовления бульона Хоттингера смешивают 200 см
5.20.3. Для приготовления плотной среды Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом в 1 дм
5.20.4. Плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по п.5.19.3, но без триптона и аскорбиновой кислоты.
5.20.5. Бульон Хоттингера и плотную среду Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов; плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом - для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.21. Бульон (агар)
2 кг говядины, очищенной от жира, сухожилий и пленок и пропущенной через мясорубку, смешивают с 500 г фарша из печени и 9 дм
Количество пепсина, прибавляемого к смеси мяса, печени и воды определяется его титром, но прибавляют его на 50% больше, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10 для расщепления 2,5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибавляют 0,375 г.
Пепсин оставляют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 °С в водяной бане. После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и реакцию на триптофан.
Биуретовую реакцию проверяют с 5 см
При положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавливают с бромной водой (п.5.20.1).
Расщепление прекращают нагреванием до температуры 85 °С. Фарш отделяют от смеси процеживанием через ткань. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают рН (5,6±0,1). Смесь кипятят 5 мин. После охлаждения фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают рН (7,4±0,1). Измеряют объем отвара и прибавляют к нему пептон из расчета 1,5 г на 100 см
После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанавливают рН (7,4±0,1). Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.
Для приготовления бульона с печенью кусочки вареной печени массой около 1-1,5 г вносят в пробирки и заливают бульоном до высоты 10-15 см. Стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.22. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда (жидкая, вязкая или плотная)
В 800 см
Растворы сульфита натрия Na
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.21, 5.22. (Измененная редакция, Изм. N 1).
5.23. Лакмусовое молоко
К стерильному молоку добавляют лакмусовую настойку до получения сиреневатого окрашивания (на 100 см
Применяют для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и при культивировании С. perfringens.
5.24. Пептонная среда с глюкозой (глюкозо-пептонный бульон)
5 г глюкозы, 5 г пептона, 5 г фосфорнокислого однозамещенного калия вносят в 1 дм
Применяют для культивирования микроорганизмов и определения их способности образовывать ацетилметилкарбинол.
5.25. Печеночно-глицериновая среда
К 1 дм
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.26. Плотная среда Бликфельдта
В 800 см
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.27. Жидкая среда Бликфельдта
В 800 см
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
5.28. Среда Вильсона-Блера, измененная для анаэробов
Раствор железоаммонийных квасцов концентрации 50 г/дм
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов и определения их сульфитредуцирующей способности.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.29. Среда Гисса
10 г пептона и 5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм
Устанавливают рН 7,0-7,2, прибавляют 10 см
При выявлении анаэробных микроорганизмов в среду добавляют 1,5 агара, расплавляют при нагревании и разливают в пробирки по 12-13 см
Применяют для определения сахаролитической способности микроорганизмов.
5.30. Среда из вареного мяса (Cocked-Meat Medium)
500 г свежего, освобожденного от костей, жира и сухожилий мяса или сердца крупного рогатого скота помещают в 500 см
После кипячения устанавливают рН 7,7-7,8. Кусочки мяса фасуют в пробирки до 2,5 г и заливают 10 см
Применяют для культивирования анаэробных микроорганизмов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.31. Среда из сухого питательного агара
50 г порошка сухого питательного агара высыпают в 1 дм
5.32. Среда из сухого питательного агара с глюкозой
В 975 см
5.33. Среда из томатного сока
К 700 см
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
5.34. Среда Китт-Тароцци
Для приготовления среды Китт-Тароцци стерильные пробирки заполняют на 1,0-1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясо-пептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм
При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-1,0 см вазелинового масла.
При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0-1,5 см.
При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.
Применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
5.35. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием
В пробирки или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по ГОСТ 26668-85, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясо-пептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Тароцци по вышеописанной технологии.
Применяют для анаэробных микроорганизмов, для посева кислотных консервированных продуктов.
5.36. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой
Готовят среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием, но в мясо-пептонный бульон перед фасовкой вносят 2 г дрожжевого экстракта или 10 см
Применяют для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
Для внесения аскорбиновой кислоты в среду раствор, приготовленный по п.4.10, разводят в стерильной дистиллированной воде в 100 раз и 0,2 см
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.37. Среда Мак-Кланг и Мак-Кой (модифицированная)
В 1 дм
Применяют для выявления мезофильных анаэробных и микроорганизмов при анализе консервов с рН 4,4 и ниже.
5.38. Пептонная среда с триптофаном
10 г пептона растворяют в небольшом количестве водопроводной воды, добавляют 5 г растворимого крахмала, предварительно растворенного в 50 см
5.39. Среда Роберта
В 1 дм
Применяют для культивирования С. perfringens.
5.40. Среда Сабуро
В 1 дм
Применяют для дрожжей и плесневых грибов.
5.41. Среда Смис-Лоренца
5 г глюкозы, 10 г пептона или триптона, или триптозы (Дифко), 20 г агара растворяют при подогревании в 950 см
Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных кислотообразующих термофильных микроорганизмов.
5.42. Крахмало-пептонная среда, обогащенная триптофаном
10 г пептона растворяют в небольшом количестве воды, добавляют 5 г растворимого крахмала, предварительно растворенного в 50 см
Применяют для культивирования кислотообразующих аэробных и факультативно-анаэробных термофильных микроорганизмов.
5.43. Сульфат-лактатная (плотная, вязкая) среда
5 г пептона растворяют в 1 дм
Применяют для культивирования термофильного анаэроба D. nigrificans.
5.44. Солодовое сусло
Солодовое неохмеленное сусло готовят следующим образом.
К 1 дм
Прозрачное сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ 7-8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют 20 мин при (116±1) °С. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ этого раствора до 7-8%.
Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.
5.45. Солодовое агаризованное сусло
К 1 дм
Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.
5.46. Солодовое агаризованное сусло с углекислым кальцием
К 1 дм
Применяют для культивирования дрожжей, плесеней и молочнокислых бактерий.
5.47. Улучшенная клостридиальная среда (R. С. М.)
В 1 дм
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.48. Среда питательная для контроля стерильности, сухая.
В 33,0 г сухого порошка среды входят:
ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления 15,0 г;
витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей - 5,0 г;
натрий хлористый - 6,4 г;
глюкоза - 5,0 г;
тиогликолят натрия - 0,3 г;
цистеина гидрохлорид - 0,75 г;
агар - 0,6 г;
натрий углекислый - 0,5-0,95 г.
Приготовление:
33,0 г сухого порошка растворяют в 1000 см
Среду применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
Электронный текст документа
и сверен по:
Продукты пищевые, консервы.
Методы микробиологического анализа:
Сб. ГОСТов. - , 2010