ГОСТ Р 59786-2021 Клинические лабораторные исследования. Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам

    ГОСТ Р 59786-2021/ISO/TS 16782:2016

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам

Clinical laboratory testing. Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing

ОКС 11.100.20

Дата введения 2022-04-01

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией специалистов и организаций лабораторной службы "Федерация лабораторной медицины" (Ассоциация "ФЛМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы ин витро"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 октября 2021 г. N 1262-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 16782:2016* "Клинические лабораторные исследования. Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам" (ISO/TS 16782:2016 "Clinical laboratory testing - Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing", IDT).

Международный документ разработан Техническим комитетом ТК 212 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro" Международной организации по стандартизации (ИСО).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

Введение

Для оценки чувствительности микроорганизмов были рекомендованы различные среды, но исторически сложилось, что бульон Мюллера-Хинтон был выбран в качестве эталонной среды для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) методом последовательных микроразведений (см. ИСО 20776-1), а агар Мюллера-Хинтон наиболее широко используется для определения чувствительности быстрорастущих бактерий к антибиотикам диско-диффузионным методом.

Среда Мюллера-Хинтон обеспечивает удовлетворительный рост большинства неприхотливых патогенов (с обычными питательными потребностями), приемлемую воспроизводимость от партии к партии, низкий уровень ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина, а также при использовании этой среды в ходе исследований чувствительности к антимикробным препаратам в течение нескольких десятилетий было собрано большое количество данных.

Настоящий стандарт разработан с целью описания питательных сред и протокола, при помощи которых производители дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон могут определить приемлемые рабочие характеристики сред.

Результаты исследований должны соответствовать установленным предельным диапазонам контроля качества для каждой комбинации антимикробного препарата и контрольных штаммов. Каждая производственная партия проходит проверку, по крайней мере, при помощи данных комбинаций антимикробных препаратов и контрольных штаммов.

ISO/TS 16782 был разработан, в частности, на основе двух документов Института клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute - CLSI): CLSI M6-A2 [1] (протоколы оценки дегидратированного агара Мюллера-Хинтон) и CLSI М32-Р [2] (оценка партий дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон для определения чувствительности к антимикробным препаратам) с разрешения CLSI. После опубликования ИСО 16782 документы CLSI М6-А2 [1] и М32-Р [2] больше не будут доступны. Производители могут руководствоваться ИСО 16782 при оценке рабочих характеристик производственных партий агара и бульона Мюллера-Хинтон.

1 Область применения

Настоящий стандарт описывает физические свойства дегидратированного агара Мюллера-Хинтон и дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон и критерии, по которым производители могут оценить качество производственных партий агара Мюллера-Хинтон и бульона Мюллера-Хинтон. Производственные партии бульона Мюллера-Хинтон или агара Мюллера-Хинтон после оценки могут быть использованы всеми потребителями, включая производителей питательных сред для оценки чувствительности к антимикробным препаратам in vitro, в качестве среды для проведения исследований чувствительности к антимикробным препаратам.

Настоящий стандарт не распространяется на добавки (например, кровь или препараты крови), которые добавляют в питательную среду для поддержания роста прихотливых бактерий (со сложными питательными потребностями) [3]-[6]. Внесение добавок осуществляют после того, как из дегидратированной среды приготавливают конечный продукт в жидком виде, который настоящим стандартом не рассматривается. Агар Мюллера-Хинтон можно использовать для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) методом последовательных разведений в агаре [4], [6] или методом градиентной диффузии, настоящий стандарт включает только оценку рабочих характеристик агара Мюллера-Хинтон с использованием диско-диффузионного метода, как описано в нормативных документах Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [5] и Европейского комитета по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST) [3].

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты [для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения)]:

ISO 20776-1:2006*, Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices - Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases (Клинические лабораторные исследования и тест-системы для диагностики in vitro. Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни)

________________

* Действует ISO 20776-1:2019 "Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод микроразведений в бульоне для лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни". Однако для однозначного соблюдения требования настоящего стандарта, выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использовать только указанное в этой ссылке издание.

CLSI М100, Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Informational Supplement (Стандарты определения чувствительности к антимикробным препаратам; Информационное приложение)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 антимикробный препарат (antimicrobial agent): Вещество биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которое ингибирует рост бактерий или убивает их и, таким образом, может быть использовано для лечения инфекций.

Примечание 1 - Дезинфицирующие средства, антисептики и консерванты не включены в данное определение.

[ИСО 20776-1:2006, 2.1]

3.2 диск с антимикробным препаратом (antimicrobial disc): Небольшой бумажный диск, содержащий известные количества антимикробных препаратов, используемый для определения чувствительности in vitro.

3.3 концентрация (concentration): Количество антимикробного препарата в определенном объеме жидкости.

[ИСО 20776-1:2006, 2.2.2]

3.4 исходный раствор (stock solution): Раствор, используемый для дальнейших разведений.

[ИСО 20776-1:2006, 2.3]

3.5 минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimum inhibitory concentration MIC): Самая низкая концентрация антимикробного препарата, которая в определенных условиях предотвращает видимый рост бактерий in vitro в течение определенного периода времени.

[ИСО 20776-1:2006, 2.4, модифицирован - слова "самая низкая концентрация, которая" были изменены на "самая низкая концентрация антимикробного препарата, которая"]

3.6 референтный [контрольный] штамм (reference strain): Каталогизируемые, охарактеризованные микроорганизмы с устойчивыми, определенными антибактериальными фенотипами и/или генотипами чувствительности.

Примечание - Референтные штаммы сохраняют как базовые культуры, из которых получают рабочие культуры. Они могут быть получены из признанных национальных коллекций культур и использованы для контроля качества.

[ИСО 20776-1:2006, 2.7, модифицирован - слова "охарактеризованные бактерии" были изменены на "охарактеризованные микроорганизмы", а "коллекции культур" в примечании 1 были изменены на "признанные национальные коллекции культур"]

3.7 Метод определения чувствительности (Susceptibility testing method)

3.7.1 метод разведений в бульоне (broth dilution): Процедура, при которой емкости заполняют соответствующими объемами среды, содержащей антимикробный препарат в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), и известным инокулюмом.

Примечание 1 - Целью данного метода является определение МПК.

[ИСО 20776-1:2006, 2.8.1, модифицирован - формулировка "раствор антимикробного препарата, используемого в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза) и соответствующие объемы среды, содержащие" была изменена на "среды, содержащей антимикробный препарат в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), и"]

3.7.3 диско-диффузионный метод (disc diffusion): Процедура, при которой диски с антимикробным препаратом наносят на поверхность агаризованной среды, предварительно равномерно засеянную известным инокулюмом, с последующей инкубацией в определенных условиях, в результате чего формируется зона подавления роста микроорганизма, размер которой соответствует чувствительности/устойчивости микроорганизма к антимикробному препарату.

3.7.4 диаметр зоны (zone diameter): Диаметр (в мм) зоны подавления роста вокруг бумажного диска, содержащего антимикробный препарат в определенном количестве, используемого для диско-диффузионного метода.

3.8 бульон (broth): Жидкая питательная среда, используемая для выращивания бактерий.

3.9 инокулюм (inoculum): Количество жизнеспособных бактерий в суспензии в расчете на конечный объем.

[ИСО 20776-1:2006, 2.10, модифицирован - слова "количество бактерий" была заменена на "количество жизнеспособных бактерий"]

3.10 дегидратированный бульон Мюллера-Хинтон; МХБ (dehydrated Mueller-Hinton broth dMHB): Высушенная бактериологическая среда, используемая для приготовления жидкой среды для определения чувствительности к антимикробным препаратам методом разведений в жидкой питательной среде.

3.11 дегидратированный агар Мюллера-Хинтон; МХА (dehydrated Mueller-Hinton agar dMHA): Высушенная бактериологическая среда, используемая для приготовления чашек с агаром для определения чувствительности к антимикробным препаратам диско-диффузионным методом, методом градиентной диффузии и определения МПК методом разведений в агаре.

4 Требования к бульону Мюллера-Хинтон

4.1 Компоненты бульона Мюллера-Хинтон

- дегидратированный настой из 300 г говядины (то есть 2 г порошка экстракта говядины);

- кислотный гидролизат казеина - 17,5 г;

- крахмал - 1,5 г.

4.2 Физические и химические свойства

4.2.1 Дегидратированный порошок или гранулы

Цвет: от бежевого до светло-бежевого.

Однородный, сыпучий, гомогенный и не содержащий примесей.

4.2.2 Приготовление питательного бульона

После гидратирования рН, измеренный после автоклавирования, должен составлять 7,2-7,4 при температуре 25°С.

Жидкость светло-соломенного цвета, прозрачная, без видимых осадков.

4.2.3 Обогащение среды бульона Мюллера-Хинтон катионами и их содержание

Концентрации катионов кальция, магния, марганца и цинка следует определять с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (ИСП МС) или пламенной атомно-абсорбционной спектроскопии (ПААС) [10].

4.2.4 Другие компоненты среды

4.2.5 Специфические корректировки, выполняемые производителем

Для антимикробных препаратов, включенных в таблицу 1:

b) при исследовании тигециклина методом микроразведений в бульоне для приготовления планшетов для определения МПК необходимо использовать среду, приготовленную в день использования. Среда должна быть приготовлена не ранее 12 ч до момента подготовки планшетов; тем не менее планшеты могут быть заморожены для последующего использования. Дополнительная информация приведена в ИСО 20776-1.

Производители могут выбрать для тестирования дополнительные антимикробные препараты и штаммы, а также среду Мюллера-Хинтон, обогащенную для роста прихотливых штаммов. Ожидаемые характеристики должны быть валидированы.

Для микроорганизмов, не включенных в таблицу 1 (например, для расширенного тестирования по усмотрению производителя):

c) исследование прихотливых микроорганизмов, таких как стрептококки и Haemophilus spp. требует добавления ростовых добавок (например, крови или компонентов крови). Если партию агара или бульона Мюллера-Хинтон, прошедшую валидацию в соответствии с критериями, приведенными в настоящем стандарте, используют для тестирования прихотливых микроорганизмов, то после добавления дополнительных компонентов полученные значения МПК или диаметры зон должны попадать в приемлемые диапазоны МПК, приведенные в ИСО 20776-1 для конкретной среды и тестируемого микроорганизма.

Влияние свойств среды на результаты определения чувствительности к отдельным антимикробным препаратам изложено в приложении A (таблицы А.1, А.2).

4.3 Протокол тестирования производственных партий дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон

Процедуры подготовки исследований методом последовательных разведений приведены в ИСО 20776-1. Выполнение этих процедур следует осуществлять со следующими ограничениями (поправками), которые перечислены ниже.

a) Минимальная и максимальная концентрация каждого антимикробного препарата в каждом планшете должна выходить за пределы допустимого диапазона значений для контрольных штаммов, как минимум на два двукратных разведения с каждой стороны.

b) Для каждой из комбинаций "микроорганизм-антимикробный препарат", перечисленных в 4.4, необходимо провести тестирование одного микробного инокулюма как минимум трижды, в трех отдельных планшетах. Этот перечень комбинаций "микроорганизм-антимикробный препарат" представляет минимальные требования для тестирования и включает антибактериальные препараты, использование которых способно детектировать определенные проблемы со средой. Другие антимикробные препараты могут быть включены в исследование по усмотрению производителя и по мере необходимости для проверки стабильности среды. Среда должна соответствовать требованиям, предъявляемым к исследованию выбранных антимикробных препаратов.

c) Подробная информация о контрольных штаммах приведена в ИСО 20776-1, CLSI [6] или EUCAST [4]. Как минимум, за два дня до исследования размораживают все флаконы с необходимыми культурами контрольных штаммов (см. 4.4). Инокулируют каждую культуру на чашку Петри с неселективной питательной агаровой средой и инкубируют ее в течение 18-24 ч при температуре от 34°С до 37°С в обычной атмосфере согласно ИСО 20776-1. После инкубации проверяют чистоту культуры. За день до определения чувствительности к антибиотикам контрольные штаммы снова пересевают для получения свежих (суточных) колоний для приготовления инокулюма. Все микроорганизмы должны быть пересеяны как минимум дважды из замороженного состояния перед использованием для тестирования.

d) При использовании замороженных планшетов с антибиотиком, перед их использованием, планшеты следует полностью разморозить при комнатной температуре (обычно это занимает от 1 до 2 ч). Планшеты с антибиотиками должны использоваться в тот же день, когда они были разморожены.

e) Определение чувствительности к антибиотикам должно осуществляться в соответствии с ИСО 20776-1. Инокулюм каждого контрольного штамма должен быть подготовлен путем приготовления суспензии из одной колонии. Инокулированные планшеты с микроразведениями должны быть инкубированы в течение 16-20 ч (24 ч - для оксациллина и Staphylococcus aureus), результаты должны быть учтены в течение одного часа после извлечения планшетов из термостата.

f) Результаты оценки антибиотикочувствительности регистрируют и хранят в соответствии с порядком, используемым производителем в отношении внутреннего документооборота. Пример оценки результатов чувствительности к антибиотикам приведен в приложении C.

4.4 Интерпретация результатов

Допустимые диапазоны МПК представлены в таблице 1 (см. [14] и [15]).

Допустимые диапазоны периодически пересматриваются и обновляются. В этой связи необходимо использовать пограничные значения последних версий EUCAST [14]. Необходимо проверять таблицы на предмет возможных изменений. Альтернативные номера контрольных микроорганизмов из различных коллекций культур приведены в приложении B.

4.5 Оценка результатов

Если все критерии эффективности для всех комбинаций "микроорганизм-антимикробный препарат" находятся в допустимых диапазонах, перечисленных в 4.4, и все физические и химические характеристики отвечают требованиям к среде (см. 4.2), производитель может отметить это специальной маркировкой, пример которой приведен в приложении D. Производители должны стремиться достигать среднестатистических значений МПК в партии тестов, близких к среднему значению контрольных диапазонов. Данные контроля качества должны храниться в архиве, а результаты должны быть доступны по запросу.

5 Требования к агару Мюллера-Хинтон

5.1 Компоненты агара Мюллера-Хинтон

- обезвоженный настой из 300 г говядины (то есть 2 г порошка экстракта говядины);

- кислотный гидролизат казеина - 17,5 г;

- крахмал - 1,5 г;

- агар - 17 г.

5.2 Физико-химические характеристики

5.2.1 Обезвоженный порошок или гранулы

Цвет: от бежевого до светло-бежевого.

Однородный, сыпучий и не содержащий посторонних примесей порошок.

5.2.2 Готовая агаровая среда

рН, измеренный после автоклавирования и гелеобразования, должен составлять от 7,2 до 7,4 при температуре 25°С.

Гелеобразная среда должна быть светло-соломенного цвета и слегка опалесцировать. Толщина среды в чашке Петри должна быть одинаковой и находиться в диапазоне от 3,5 до 5,0 мм [EUCAST указывает (4±0,5) мм и CLSI примерно 4 мм [6] или от 4 до 5 мм (CLSI М6 [1])]. Чашки Петри разных производителей могут различаться по диаметру (диаметр измеряется по внутреннему основанию дна чашки), и объем агара, необходимый для обеспечения заданной толщины, вычисляют по формуле

3,143 · радиус чашки Петри (см) в квадрате · толщина среды (см).

5.2.3 Добавка катионов и химический состав агара Мюллера-Хинтон

Агар должен содержать достаточную концентрацию катионов, чтобы обеспечить соответствующий рост и позволить исследователю определять диаметры зон подавления роста для контрольных штаммов в диапазонах, указанных в 5.4.

5.2.4 Другие компоненты среды

Плотность геля требуется для воспроизводимых размеров зон подавления роста, которые должны соответствовать требованиям контроля качества.

5.2.5 Дополнительные добавки

Определение чувствительности прихотливых микроорганизмов, таких как стрептококки и Haemophilus spp., требует добавления ростовых добавок (например, крови или компонентов крови). Агар Мюллера-Хинтон или партии бульона, которые соответствуют всем критериям контроля качества, приведенным в настоящем стандарте, могут быть использованы для исследования прихотливых микроорганизмов. При этом, после добавления конкретных добавок в среду, необходимо проводить тестирование контрольных штаммов. Полученные значения МПК или диаметры зон подавления роста должны быть в границах допустимых значений, приведенных в [5] или [3] для соответствующих контрольных штаммов и тестируемой среды с добавкой.

В A.2 (приложение A) приведена информация о специфическом влиянии отдельных компонентов среды и условий тестирования на активность антимикробных препаратов. Микрорганизмы/антимикробные* препараты, данные о которых не указаны в таблице A.2 (приложение A), могут быть исследованы производителем по своему усмотрению.

5.3 Процедура тестирования производственных партий дегидратированного агара Мюллера-Хинтон

Диско-диффузионный метод должен использоваться для оценки производственных партии МХА. Процедуры приготовления чашек, проведения и учета результатов теста, а также хранения штамма приведены в [5] и [3]. Эти процедуры должны соблюдаться с ограничениями, указанными ниже.

a) Для каждой комбинации "микроорганизм-антимикробный препарат", перечисленной в 5.4, проводят исследования как минимум одного инокулюма на трех отдельных чашках. Перечень комбинаций "микроорганизм-антимикробный препарат" представляет минимальные требования для исследования и включает препараты, которые могут обнаруживать определенные проблемы со средой. Исследование других антимикробных препаратов может проводиться по усмотрению производителя по мере необходимости для обеспечения стабильной работы среды. Среда должна соответствовать требованиям, предъявляемым к исследованию выбранных антимикробных препаратов.

b) За два дня до посева на испытуемые чашки размораживают пробирки с каждой необходимой контрольной культурой (см. ниже и приложение С). Проводят рассев каждой культуры на чашку с неселективной питательной агаровой средой и инкубируют ее в течение 18-24 ч при температуре (35±2)°С (CLSI) или (35±1)°С (EUCAST). После инкубации проверяют чистоту культуры. Все микроорганизмы должны быть пересеяны как минимум дважды после замороженного состояния перед определением чувствительности.

c) Посевной материал должен быть приготовлен из суспензии колоний контрольного штамма, описанного в последней версии CLSI или EUCAST.

d) Засевают по три чашки с каждой средой посевным материалом [см. перечисление с)] из каждой контрольной культуры. Нанесение суспензии посевного материала на чашки проводят в течение 15 мин после ее приготовления.

e) После инкубации при соответствующей температуре [то есть (35±2)°С (CLSI) или (35±1)°С (EUCAST)] и в течение соответствующего времени (то есть от 16 до 20 ч) извлекают чашки из термостата и учитывают результат в течение 1 ч. Для энтерококков и ванкомицина время инкубации увеличивают до 24 ч.

f) Результаты должны быть записаны и должны храниться в соответствии с утвержденными процедурами производителя для сохранения записей. Рекомендуемая форма для регистрации результатов приведена в приложении C.

5.4 Интерпретация результатов

В приложении B приведены альтернативные идентификационные номера для контрольных микроорганизмов одного и того же вида из разных коллекций культур.

Таблица 2 - Диапазоны допустимых значений диаметров зон подавления роста (в мм) для контрольных штаммов

5.5 Оценка результатов

Если все критерии эффективности для всех комбинаций "микроорганизм-антимикробный препарат" находятся в допустимых пределах (см. 5.4) и все физические и химические характеристики соблюдены (см. 5.2), производитель может добавить на маркировку информацию, приведенную в приложении D. Производители должны стремиться к достижению средних значений диаметров зон подавления роста, близких к средним значениям контрольных диапазонов зон задержки роста.

Данные должны храниться в архиве, а результаты должны быть доступны любому по запросу.

6 Исследование новых антимикробных препаратов с производственными партиями дегидратированного бульона или агара Мюллера-Хинтон

При изучении in vitro новых антимикробных препаратов, для разработки критериев качества этих препаратов необходимо использовать производственные партии МХБ или МХА, отвечающие критериям, указанным в настоящем стандарте. Исследование производственных партий МХБ или МХА с новыми антимикробными препаратами должно осуществляться в соответствии с процедурами, изложенными в настоящем стандарте. Для МХБ содержание ионов должно быть исследовано для определения влияния на новый антимикробный препарат специфических катионов или анионов, или концентрации ионов, находящихся в среде, которые отличаются от диапазонов, предложенных в настоящем стандарте. Должны быть идентифицированы другие компоненты среды, которые могут повлиять на результаты in vitro контроля качества исследований антибиотикочувствительности. При необходимости должны быть внесены корректировки для достижения стабильных воспроизводимых результатов исследований, и эта информация должна быть широко распространена среди других специалистов, участвующих в исследовании чувствительности к антибиотикам и контроле качества, включая подкомитет CLSI по исследованию чувствительности к антибиотикам и EUCAST. Эти действия относятся к ответственности компании, производящий новый препарат.

Приложение A

(справочное)

Среда Мюллера-Хинтон

A.1 Бульон

Таблица A.1 - Влияние свойств дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон на определение чувствительности к антимикробным препаратам

A.2 Агар

Таблица A.2 - Влияние свойств дегидратированного агара Мюллера-Хинтон на определение чувствительности к антимикробным препаратам

Приложение B

(справочное)

Приготовление контрольных культур

B.1 Стоковые культуры

Исходные культуры готовят из лиофилизированных культур, полученных из признанных коллекций культур. Культуры восстанавливаются в соответствии с процедурами, определенными коллекцией культур, и поддерживаются таким образом, чтобы свести к минимуму селекцию генетических вариантов. Для одного и того же микроорганизма из разных коллекций культур ниже приведены альтернативные номера (если они имеются). Ниже приведены культуры, необходимые для целей настоящего стандарта:

B.1.1 Приготовление начальной стоковой культуры

Каждый контрольный микроорганизм, перечисленный в разделе В.1, инокулируют на одну или несколько чашек с неселективным питательным агаром (в зависимости от количества замороженных пробирок, которое должно быть приготовлено). Посев на каждую чашку проводят стерильным тампоном или петлей штрихобразными движениями для получения изолированных колоний. Инкубируют чашки в течение 18-24 ч в соответствии с ИСО 20776-1 при температуре от 34°С до 37°С.

B.1.2 Приготовление замороженной стоковой культуры

После инкубации проверяют чистоту, собирают весь рост с каждого набора чашек и эмульгируют его в бульоне с гидролизатом соевого казеина [триптиказо-соевый бульон (TSB)], содержащем 15% массы к объему глицерина для приготовления однородно плотной суспензии. Хранят флаконы при температуре минус 60°С или ниже. При использовании этого метода культуры должны быть жизнеспособными в течение как минимум одного года. Могут быть использованы другие методы приготовления исходных культур, если они обеспечивают достаточную жизнеспособность и стабильность. Периодически обновляют исходные культуры из свежих лиофилизированных культур, полученных из признанных коллекций культур.

B.1.3 Приготовление тестового инокулюма

Приготовление тестового инокулюма приведено в 4.3.

Приложение C

(справочное)

Рекомендуемая форма для регистрации результатов тестирования производственных партий среды

C.1 Рекомендуемая форма для регистрации результатов тестирования производственных партий бульона Мюллера-Хинтон

Дата:

Номер партии:

Объем партии:

Описание цвета:

Прозрачность:

рН:

Диапазоны подлежат периодическому пересмотру. Необходимо проверить наличие обновлений в последней версии рекомендаций CLSI М100. CLSI, 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, PA 19087, USA [14] или в последней версии таблиц контроля качества EUCAST (http://www.eucast.org/ast_of_bacteria/qc_tables/).

C.2 Рекомендуемая форма для регистрации результатов тестирования производственных партий агара Мюллера-Хинтон

Дата:

Номер партии:

Объем партии:

Описание цвета:

Прозрачность:

Плотность геля:

рН:

Диапазоны подлежат периодическому пересмотру. Необходимо проверить наличие обновлений в последней версии рекомендаций CLSI М100. CLSI, 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, PA 19087, USA [14] или в последней версии таблиц контроля качества EUCAST (http://www.eucast.org/ast_of_bacteria/qc_tables/).

Приложение D

(справочное)

Маркировка

D.1 Дегидратированный бульон Мюллера-Хинтон

D.2 Дегидратированный агар Мюллера-Хинтон

Если все критерии для всех комбинаций микроорганизм-антимикробный препарат находятся в допустимых пределах и все физические и химические характеристики соответствуют требованиям, производитель может указать для этой производственной партии, что агар Мюллера-Хинтон (номер партии) соответствует критериям эффективности, изложенным в ИСО 16782 для оценки чувствительности к антибиотикам. На этикетку изделия или в инструкцию по применению может быть добавлена следующая информация: "Исследование данной партии дегидратированного агара/бульона Мюллера-Хинтон проведено в соответствии с ИСО 16782 и соответствует критериям контроля качества, как указано в ИСО 16782".

Данные должны храниться в архиве, и результаты должны быть доступны любому по запросу.

D.3 Маркировка

На этикетку изделия или в инструкцию по применению может быть добавлена следующая информация: "Исследование данной партии дегидратированного агара/бульона Мюллера-Хинтон проведено в соответствии с ИСО 16782 и соответствует критериям контроля качества, как указано в ИСО 16782".

Данные должны храниться в архиве, и результаты должны быть доступны любому по запросу.

Приложение ДА

(справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам

Таблица ДА.1

Библиография