allgosts.ru65. СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО65.120. Корма для животных

ГОСТ ISO 14718-2017 Корма, комбикорма. Определение содержания афлатоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Обозначение:
ГОСТ ISO 14718-2017
Наименование:
Корма, комбикорма. Определение содержания афлатоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/2019
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
65.120

Текст ГОСТ ISO 14718-2017 Корма, комбикорма. Определение содержания афлатоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


ГОСТ ISO 14718-2017



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ



КОРМА, КОМБИКОРМА



Определение содержания афлатоксина методом высокоэффективной


жидкостной хроматографии


Feeds, compound feeds. Determination of aflatoxin by high-performance liquid chromatographymethod

МКС 65.120

Датавведения 2019-01-01

Предисловие

Предисловие


Цели, основные принципы иосновной порядок проведения работ по межгосударственнойстандартизации установлены в ГОСТ1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основныеположения" и ГОСТ1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандартымежгосударственные, правила и рекомендации по международнойстандартизации. Правила разработки, принятия, обновления иотмены"

Сведения остандарте

1ПОДГОТОВЛЕН Акционерным обществом "Всероссийскийнаучно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (АО"ВНИИКП") на основе официального перевода на русский языканглоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте5, который выполнен Акционерным обществом "Всероссийскийнаучно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (АО"ВНИИКП")

2ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизацииМТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"

3ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии исертификации (протокол от 25 сентября 2017 г. N 103-П)

За принятиепроголосовали:

Краткоенаименование страны по МК (ИСО3166) 004-97

Код страныпо
МК (ИСО3166) 004-97

Сокращенноенаименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики РеспубликиАрмения

Беларусь

BY

Госстандарт РеспубликиБеларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4ПриказомФедерального агентства по техническому регулированию и метрологииот 9 ноября 2017 г. N 1718-ст межгосударственный стандарт ГОСТISO 14718-2017 введен в действие в качестве национального стандартаРоссийской Федерации с 1 января 2019 г.

5Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO14718:1998* "Корма для животных. Определение содержания афлатоксина. Метод с использованием высокоэффективнойжидкостной хроматографии" ("Animal feeding stuffs - Determinationof aflatoxin content of mixed feeding stuffs - Methodusing high-performance liquid chromatography", IDT).
________________
*Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь идалее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт . - Примечаниеизготовителя базы данных.


Международный стандартразработан подкомитетом SC 10 "Корма для животных" техническогокомитета по стандартизации ТС 34 "Пищевые продукты" Международнойорганизации по стандартизации (ISO).

Наименование настоящегостандарта изменено относительно наименования указанногомеждународного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ1.5-2001 (подраздел 3.6) для увязки с наименованиями, принятымив существующем комплексе межгосударственных стандартов.

Внастоящем стандарте заменены единицы измерения объема: "литр" на"дециметр кубический", "миллилитр" на "сантиметр кубический","микролитр" на "миллиметр кубический" - для приведения всоответствие с ГОСТ1.5-2001 (пункт 4.14.1).

При применении настоящегостандарта рекомендуется использовать вместо ссылочногомеждународного стандарта соответствующий ему межгосударственныйстандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложенииДА

6ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация обизменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодноминформационном указателе "Национальные стандарты", а текстизменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе"Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отменынастоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликованов ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты".Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются такжев информационной системе общего пользования - на официальном сайтеФедерального агентства по техническому регулированию и метрологии всети Интернет (www.gost.ru)

1Область применения


Настоящий стандартраспространяется на корма и комбикорма и устанавливает методопределения содержания афлатоксина высокоэффективной жидкостной хроматографией(далее - ВЭЖХ).

Нижний предел определениясодержания афлатоксина составляет 1 мкг/кг.

Примечания

1Настоящий стандарт может применяться для определения содержанияафлатоксина в комбикормовом сырье и таких кормах, каккукурузный глютен, арахис, пальмовое ядро, копра, мякотьцитрусовых, тапиока, соя, рисовые отруби, ветки, семена рапса,нугаи и хлопчатника (см. [1] и [2]). Однако для этих продуктов непроводились межлабораторные испытания данным методом.

2Настоящий стандарт также может применяться для определениясодержания суммы афлатоксинов , , и . Однако для этого показателя не проводилисьмежлабораторные испытания метода.

2Нормативные ссылки


Внастоящем стандарте использованы нормативные ссылки намежгосударственные стандарты*, которые являются обязательными. Длядатированных ссылок применяют только указанное издание. Длянедатированных ссылок применяют последнее издание ссылочногодокумента (включая все его изменения).
________________
*Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. поссылке. - .


ISO 6498:1998, Animalfeeding stuffs - Preparation of test sample (Корма для животных.Подготовка проб).

_______________

Стандарт заменен на ISO 6498:2012, однакодля однозначного соблюдения требования настоящего стандарта,выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использоватьтолько указанное в этой ссылке издание.

3Сущность метода


Анализируемую пробуэкстрагируют хлороформом. Экстракт фильтруют и аликвоту очищают накартриджах Florisil® и . Окончательное разделение и определениеафлатоксина достигается с использованием ВЭЖХ наобращенно-фазовой колонке с последующей постколоночной дериватизациеййодом или бромом и флуоресцентным детектированием.

_______________

Картридж Florisil® типа Sep-Pak номерартикула 51960 и типа Sep-Pak номер артикула 51910, отWaters Associates (Милуоки, США). Эта информация приведена дляудобства пользователей настоящего стандарта и не являетсяобязательной.

4Реактивы


При анализе используютреактивы только признанной аналитической чистоты.

4.1 Вода,деминерализованная или деионизированная с удельным сопротивлениемне менее 10 МОм·см или вода эквивалентной чистоты.

4.2 Кислота сернаяконцентрированная, =18 моль/дм, =1,84 г/см.

4.3 Кислота серная,=2 моль/дм.

Осторожно добавляют 105см концентрированной серной кислоты (см. 4.2)к 895 см воды и хорошо перемешивают. Избегаютчрезмерного нагревания раствора.

4.4 Контрольнаяпроба.

Готовят контрольную пробумассой около 2 кг, содержащую приблизительно 5 мкг/кг афлатоксина, путем объединения несколькихпредварительно проанализированных проб с содержанием афлатоксина около 5 мкг/кг. Тщательно перемешивают.

Для контрольной пробыпроводят пять испытаний по два параллельных определения содержанияафлатоксина в соответствии с разделом 8. Из полученныхрезультатов вычисляют среднеарифметическое значение содержанияафлатоксина , стандартное отклонение и коэффициентвариации.

4.5 Целит® 545, промытыйкислотой, или продукт эквивалентного качества.

_______________

Продукт торговой марки Целит®. Этаинформация приведена для удобства пользователей настоящегостандарта и не является обязательной. Могут быть использованыаналогичные картриджы, если они приводят к тем же результатам

4.6 Картридж Florisil®,типа Sep-Pak, Waters No. 51960 или продукт эквивалентногокачества.

_______________

Картридж Florisil® типа Sep-Pak номерартикула 51960 и типа Sep-Pak номер артикула 51910, отWaters Associates (Милуоки, США). Эта информация приведена дляудобства пользователей настоящего стандарта и не являетсяобязательной.

4.7 Картридж , типа Sep-Pak, Waters No. 51910 или продуктэквивалентного качества.

_______________

Картридж Florisil® типа Sep-Pak номерартикула 51960 и типа Sep-Pak номер артикула 51910, отWaters Associates (Милуоки, США). Эта информация приведена дляудобства пользователей настоящего стандарта и не являетсяобязательной.

4.8 Ацетон.

4.9 Метанол.

4.10 Ацетонитрил.

4.11 Хлороформ,стабилизированный этанолом (массовая доля от 0,5% до 1,0%).

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ -Хлороформ является токсичным веществом. Необходимо избегатьвдыхания и воздействия хлороформа. Все работы с ним и егорастворами проводят в вытяжном шкафу.

Если используют другиестабилизаторы, то адсорбционные характеристики картриджа Florisil®(см. 4.6) могут измениться. В этом случае адсорбционныехарактеристики картриджа проверяют в соответствии с разделом 8.

4.12 Смесь ацетона сводой, в соотношении 98:2 по объему

Смешивают 980 см ацетона (см. 4.8) и 20 см воды (см. 4.1). Тщательно перемешивают.

4.13 Смесь ацетона сводой, в соотношении 15:85 по объему

Смешивают 150 см ацетона (см. 4.8) и 850 см воды (см. 4.1). Тщательно перемешивают.

4.14 Смесь ацетона сводой, в соотношении 5:95 по объему

Смешивают 50 см ацетона (см. 4.8) и 950 см воды (см. 4.1). Тщательно перемешивают.

4.15 Смесь метанола сводой, в соотношении 20:80 по объему

Смешивают 200 см метанола (см. 4.9) и 800 см воды (см. 4.1). Тщательно перемешивают.

4.16 Кислота азотнаяконцентрированная, =14 моль/дм, =1,40 г/см, для ВЭЖХ с дериватизацией бромом.

4.17 Калия бромид (КВr),для ВЭЖХ с дериватизацией бромом.

4.18 Подвижная фазадля ВЭЖХ

4.18.1 Подвижная фазадля ВЭЖХ с дериватизацией йодом

Смешивают 120 см ацетонитрила (см. 4.10), 210 см метанола (см. 4.9) и 390 см воды (см. 4.1) и перемешивают. Фильтруютраствор через мембранный фильтр из политетрафторэтилена (ПТФЭ) сразмером пор 0,45 мкм, используя систему фильтрации растворителя(см. 5.1), перед использованием дегазируют в течение 10 мин вультразвуковой бане (см. 5.2).

Примечание - Допускаетсяизменять состав подвижной фазы растворителя в зависимости отхарактеристик используемой колонки ВЭЖХ.

4.18.2 Подвижная фазадля ВЭЖХ с дериватизацией бромом

Смешивают 400 см ацетонитрила (см. 4.10), 700 см метанола (см. 4.9) и 1300 см воды (см. 4.1) и перемешивают. Добавляют вэту смесь 286 мг бромида калия (см. 4.17) и 152 мм концентрированной азотной кислоты (см.4.16). Тщательно перемешивают и дегазируют потоком инертного газа втечение 15 мин.

4.19 Насыщенныйраствор йода для ВЭЖХ с дериватизацией йодом

Добавляют 2 г йода в 400см воды. Перемешивают не менее 90 мин ифильтруют через мембранный фильтр из ПТФЭ с размером пор 0,45 мкм(см. 5.1). Раствор готовят в день использования.

Насыщенный растворзащищают от света для предотвращения фотодеградации.

4.20 Раствор натриягипохлорита (для бытового использования), (активного хлора)=100 г/дм.

4.21 Раствор натриягипохлорита, объемной долей 1%

Смешивают 10 см раствора гипохлорита натрия (см. 4.20) и990 см смеси воды с ацетоном (см. 4.14).

4.22 Инертный газ,например азот.

4.23 Афлатоксин образец сравнения (), 2,3,6а,9а-тетрагидро-4-метоксицикло-пента[с]фуро[3',2': 4,5]фуро [2,3-h] [1] бензопиран-1,11-дион; ChemicalAbstracts Service Registry (CAS) номер 1162-65-8.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ

1 Микотоксины являютсячрезвычайно токсичными веществами. Все манипуляции с ниминеобходимо выполнять в вытяжном шкафу. Следует принимать особыемеры предосторожности при использовании микотоксинов в сухой формеиз-за их электростатической природы и тенденции к диспергированию врабочих зонах.

2 Афлатоксинычувствительны к УФ-излучению. Поэтому все процедуры следуетпроводить при отсутствии солнечного или искусственного белогосвета. Достаточное, но не чрезмерное, освещение обеспечиваютлампами накаливания. Допускается использование энергосберегающих илюминесцентных ламп, но при этом следует использовать посуду изтемного стекла (виалы, мерные колбы).

3 Стеклянную посуду,используемую в работе с растворами афлатоксина , перед мытьем следует залить на ночьраствором гипохлорита натрия (см. 4.21) для удаления следовафлатоксина .

4.24 Стандартныйраствор афлатоксина , (афлатоксина )=10 мкг/см

Содержимое ампулы сафлатоксином (см. 4.23) переносят в колбу и растворяют вхлороформе (см. 4.11).

Вмерную колбу необходимого объема переносят раствор афлатоксина и разбавляют до метки хлороформом так,чтобы получить раствор массовой концентрации афлатоксина около 10 мкг/см и перемешивают.

Раствор помещают в виалуили герметичную емкость из темного стекла, плотно закрываюткрышкой, заворачивают в алюминиевую фольгу и хранят в темноте притемпературе 4°С.

4.25 Основной растворафлатоксина

Вмерную колбу вместимостью 50 см количественно переносят 2,5 см стандартного раствора афлатоксина (см. 4.24) и разбавляют до меткихлороформом (см. 4.11).

Раствор помещают в виалуили герметичную емкость из темного стекла плотно закрывают крышкой,заворачивают в алюминиевую фольгу и хранят в темноте притемпературе 4°С.

4.26 Градуировочныерастворы афлатоксина

4.26.1 Градуировочныйраствор I, (афлатоксина )4 нг/см

Перед использованиемвиалу с основным раствором афлатоксина (см. 4.25) в алюминиевой фольге выдерживаютнесколько часов до достижения комнатной температуры.

Вотмытую кислотой мерную колбу вместимостью 50 см переносят 400 мм основного раствора афлатоксина (что эквивалентно примерно 200 нгафлатоксина ) и упаривают раствор досуха в токеинертного газа (см. 4.22). Остаток растворяют в 20 см смеси воды и ацетона (см. 4.13). Разбавляютдо метки смесью воды с ацетоном и тщательно перемешивают.

4.26.2 Градуировочныйраствор II, (афлатоксина )3 нг/см

Вотмытую кислотой мерную колбу вместимостью 10 см количественно переносят 7,5 см градуировочного раствора I (см. 4.26.1).Разбавляют до метки смесью воды с ацетоном (см. 4.13) и тщательноперемешивают.

4.26.3 Референтныйградуировочный раствор, (афлатоксина )2 нг/см

Вотмытую кислотой мерную колбу вместимостью 50 см количественно переносят 25 см градуировочного раствора I (см. 4.26.1).Разбавляют до метки смесью воды с ацетоном (см. 4.13) и тщательноперемешивают.

Этот раствор используетсядля контрольных вводов во время проведения хроматографическогоанализа (8.5).

4.26.4 Градуировочныйраствор III, (афлатоксина )1 нг/см

Вотмытую кислотой мерную колбу вместимостью 10 см количественно переносят 2,5 см градуировочного раствора I (см. 4.26.1).Разбавляют до метки смесью воды с ацетоном (см. 4.13) и тщательноперемешивают.

4.27Хроматографический тестовый раствор

Вскрывают ампулу,содержащую приблизительно 1,0; 0,5; 1,0 и 0,5 мкг/см афлатоксинов , , , соответственно в 1 см хлороформа.

Содержимое ампулыпереносят в пробирку с притертой пробкой или виалу сзавинчивающейся крышкой. В отмытую кислотой пробирку с притертойпробкой (см. 5.4) переносят 40 мм этого раствора. Хлороформ выпаривают впотоке инертного газа (см. 4.22) и остаток растворяют в 10см смеси воды с ацетоном (см. 4.13).

5Оборудование


Всю стекляннуюлабораторную посуду, которая вступает в контакт с воднымирастворами афлатоксинов, перед использованием следует выдержать врастворе серной кислоты (см. 4.3) в течение нескольких часов, азатем тщательно ополоснуть (например, три раза) водой для удалениявсех следов кислоты. Полноту удаления кислоты проверяют с помощьюиндикаторной бумаги.

Эта процедура необходимадля круглодонной колбы роторного испарителя (см. 5.12), мерныхколб, мерных цилиндров, виал или пробирок, используемых дляприготовления и хранения градуировочных растворов, полученныхэкстрактов (в частности, виал автосемплера) и пипеток Пастера,которые используются для переноса градуировочных растворов илиэкстрактов.

Примечание - Указаннаяобработка посуды необходима, так как использование не промытойкислотой стеклянной посуды может привести к потерям афлатоксина Особое внимание следует обратить на новуюстеклянную посуду и стеклянную посуду одноразового использования,например, виалы автосемплера и пипетки Пастера.


Используют следующеелабораторное оборудование:

5.1 Система фильтрациирастворителя, с ПТФЭ мембранными фильтрами с размером пор 0,45мкм.

5.2 Ультразвуковаябаня.

5.3 Микрошприц,вместимостью 100 мм, для приготовления градуировочныхрастворов.

Погрешность не должнапревышать ±2% по массе, что проверяют взвешиванием.

5.4 Градуированныепробирки вместимостью 10 см.

5.5 Спектрофотометр,предназначенный для измерений оптической плотности в УФ-областиспектра, в комплекте с кварцевыми кюветами длиной оптического пути(10±0,1) мм.

5.6 Коническая колбавместимостью 500 см, изготовленная из боросиликатного стекла, сшироким горлом и притертой пробкой или завинчивающейся крышкой,снабженной ПТФЭ прокладкой.

5.7 Механический шейкер,горизонтально вращающийся или с возвратно-поступательным движением,с частотой от 250 до 300 мин.

5.8 Складчатый бумажныйфильтр диаметром 24 см.

5.9 Трехходовой запорныйкран с разъемом типа Luer®, устойчивый к хлороформу.

_______________