ГОСТ 9.085-78
Группа Т99
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Единая система защиты от коррозии и старения
ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ
Методы испытаний на биостойкость
Single corrosion and ageing protection system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods
МКС 19.040
75.100
ОКСТУ 0009
Дата введения 1979-07-01
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79
Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)
Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
1.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
1.2. Отбор проб
1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.
1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
1.2.4. Виды бактерий
1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
Pseudomonas aeruginosa Migyla;
Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
Staphylococcus aureus Rosenbach.
Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.
1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.
1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.
1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:
термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;
электроплитка с закрытой спиралью*;
потенциометр по ГОСТ 9245-79;
горелки газовые*;
цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;
груша резиновая*;
доска для сушки посуды;
аппарат для встряхивания колб и пробирок;
стандарты мутности;
рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;
ножницы, пинцеты, скальпели*;
штативы лабораторные*;
бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;
агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;
спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;
кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;
(Измененная редакция, Изм. N 1).
__________________
* По документации, утвержденной в установленном порядке.
1.4. Подготовка к испытаниям
1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.
1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
Таблица 1
Наименование реактивов | Среда | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
МПА | Агар индикаторный | Сорокина | Сусло-агар | Чапека-Докса с агаром | Чапека-Докса с агаром без сахарозы | |
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г | - | - | 0,5 | - | 0,7 | 0,7 |
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г | - | - | 1,0 | - | 0,3 | 0,3 |
Магний сернокислый, г | - | - | 0,2 | - | 0,5 | 0,5 |
Натрий азотнокислый, г | - | - | - | - | 2,0 | 2,0 |
Натрий сернокислый, г | - | 0,5 | - | - | - | - |
Калий хлористый, г | - | - | - | - | 0,5 | 0,5 |
Железо сернокислое, г | - | - | 0,01 | - | 0,01 | 0,01 |
Железо лимоннокислое, г | - | 0,5 | - | - | - | - |
Аммоний хлористый, г | - | - | 0,1 | - | - | - |
Спирт этиловый ректификованный, г | - | - | 5,0 | - | - | - |
Сахароза, г | - | - | - | - | 30,0 | - |
Пептон бактериологический, г | - | 10,0 | - | - | - | - |
Агар микробиологический, г | 20,0 | 12,0 | - | 20,0 | 20,0 | Выщело- ченный 20,0 |
Мясо-пептонный бульон, см | До 1000 | - | - | - | - | - |
Сусло пивное, см | - | - | - | До 1000 | - | - |
Вода дистиллированная, см | - | 1000 | До 1000 | - | До 1000 | До 1000 |
1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.
1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 см) в стерильную пробирку.
1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
1.5. Проведение испытаний
1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую 200-300 см среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.
Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см на 100 см среды.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см в чашки Петри.
1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытуемой СОЖ.
1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.
1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.
1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.
1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.2.
Таблица 2
Балл | Характеристика балла |
0 | При осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выраженные зоны отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилиндриков, содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1,5-2,0 см. Полная бактериостойкость. |
I | При осмотре невооруженным глазом заметны зоны отсутствия роста микроорганизмов. Диаметр зоны ингибирования 0,8-1,0 см. Удовлетворительная бактериостойкость. |
II | При осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста микроорганизмов. Небактериостойкость СОЖ. |
1.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.
Количество микроорганизмов не должно превышать 5000-7000 кл/мвоздуха.
2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ
2.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.
Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.
2.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.
Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas, Achromobacter и др.
2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п.1.3 со следующим дополнением:
аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;
натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171-76;
железо лимоннокислое, кристаллическое, ч.д.а.*;
пептон бактериологический*.
__________________
* По документации, утвержденной в установленном порядке.
2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.1-1.4.4.
2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.
Для выращивания культуры используют среду 3.
2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1-0,2 см переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
2.4.4. Срок хранения суспензии-не более 1 ч.
2.5. Проведение испытаний
2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8-9 см в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5-1 см суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.
2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.
2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 см зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С - 45 °С средой 2.
2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см бактериальной суспензии и 10 см среды 2.
2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2) °С.
2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.
2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.3.
Таблица 3
Балл | Характеристика балла |
0 | Цвет индикаторного агара не меняется, что соответствует отсутствию роста сульфатредуцирующих бактерий. Полная бактериостойкость СОЖ. |
I | Проявляются единичные черные колонии в индикаторном агаре. Удовлетворительная бактериостойкость СОЖ. |
II | По всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные колонии. Небактериостойкость СОЖ. |
2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2.7. Требования безопасности - по п.1.7.
3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
3.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
3.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
3.2.1. Виды грибов
Aspergillus niger van Thieghem;
Chaetomium globosum Kunze;
Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;
Cladosporium resinae Albida;
Penicillium chrysogenum Thom;
Penicillium ochro-cloron Biorge;
Trichoderma koningii Oudemans;
Trichoderma viride Pers. ex. Fr;
Torula convoluta Harz;
Cephalosporium acremonium Corda.
3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.
3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.
3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
3.4. Подготовка к испытаниям
3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.
3.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.3.2.1.
3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.
3.5. Проведение испытаний
3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.
3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки - 2 см на 100 см среды.
3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полых металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытательной СОЖ.
3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. N 1).
3.5.6. Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.
3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.
3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.
3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.4.
Таблица 4
Балл | Характеристика балла |
0 | Рост плесневых грибов отсутствует. Полная грибостойкость СОЖ. |
I | Рост грибов едва виден. Спорообразование не наблюдается. Удовлетворительная грибостойкость СОЖ. |
II | Рост грибов отчетливо виден, появляется спорообразование. Негрибостойкость СОЖ. |
3.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.048-89.
Текст документа сверен по:
Смазочные материалы, индустриальные
масла и родственные продукты.
Методы анализа: Сб. стандартов. -
, 2006