allgosts.ru19. ИСПЫТАНИЯ19.040. Климатические испытания

ГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения. Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость

Обозначение:
ГОСТ 9.085-78
Наименование:
Единая система защиты от коррозии и старения. Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость
Статус:
Действует
Дата введения:
07/01/1979
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
19.040, 75.100

Текст ГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения. Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Единая система защиты от коррозии и старения

ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ

Методы испытаний на биостойкость

Single corrosion and ageing protectiol system. Cooling lubricant. Bioresistance test methods

ГОСТ

9.085-78

МКС 19.040 75.100 ОКСТУ 0009

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. № 1699 дата введения установлена

с 01.07.79

Ограничение срока действия снято по протоколу № 3—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6—93)

Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

1.1.    Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.

1.2.    Отбор проб

1.2.1.    Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517—85 массой 50 г.

1.2.2.    Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3.    Проб должно быть не менее трех.

1.2.4.    Вцды бактерий

1.2.4.1.    Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:

Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;

Mycobacterium phlei Lehman and Neum;

Pseudomonas aeruginosa Migyla;

Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;

Staphylococcus aureus Rosenbach.

Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.

1.2.4.2.    Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.

1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. № 1).

1.2.4.3.    Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77. * ★

Издание официальное

Перепечатка воспрещена

Издание с Изменением № 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1—89).

1.3.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89 со следующим дополнением: термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*; электроплитка с закрытой спиралью*;

потенциометр по ГОСТ 9245—79; горелки газовые*;

цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949—75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;

чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336—82 с крышками, низкие, типа ЧБН;

груша резиновая*;

доска для сушки посуды;

аппарат для встряхивания колб и пробирок;

стандарты мутности;

pH-метр лабораторный типа ЛПУ-01, pH-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 pH; ножницы, пинцеты, скальпели*; штативы лабораторные*;

бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082—77; агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082—77;

спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300—87, высшего сорта;

кислота соляная по ГОСТ 3118—77;

кислота серная по ГОСТ 4204—77;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220—75;

натрий углекислый по ГОСТ 83—79, безводный.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.4.    Подготовка к испытаниям

1.4.1.    Посуда и материалы — по ГОСТ 9.048—89.

1.4.2.    Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.

1.4.3.    Рецептура сред приведена в табл. 1.

Таблица 1

Среда

Наименование реактивов

1

2

3

4

5

6

МПА

Агар

индикатор

ный

Сорокина

Сусло-агар

Чапека-Докса с агаром

Чапека-Докса с агаром без сахарозы

Калий фосфорнокислый одно-замещенный, г

0,5

0,7

0,7

Калий фосфорнокислый дву-замещенный, г

1,0

0,3

0,3

Магний сернокислый, г

0,2

0,5

0,5

Натрий азотнокислый, г

2,0

2,0

Натрий сернокислый, г

0,5

Калий хлористый, г

0,5

0,5

Железо сернокислое, г

0,01

0,01

0,01

Железо лимоннокислое, г

0,5

Аммоний хлористый, г

0,1

Спирт этиловый ректификованный, г

5,0

Сахароза, г

30,0

Пептон бактериологический, г

10,0

Агар микробиологический, г

20,0

12,0

20,0

20,0

Выщелочен-

Мясо-пептонный бульон, см3

До 1000

ный

20,0

Сусло пивное, см3

До 1000

Вода дистиллированная, см3

1000

До 1000

До 1000

До 1000

* По документации, утвержденной в установленном порядке.

1.4.4.    Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082—77.

1.4.5.    Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см3 водопроводной воды.

1.4.6.    Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см3.

1.4.7.    Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1—2 см3) в стерильную пробирку.

1.4.8.    Срок хранения суспензии не более 3 ч.

1.5. Проведение испытаний

1.5.1.    Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см3, содержащую 200—300 см3 среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.

Расплавленную питьевую среду охлаждают до температуры 40—50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см3 на 100 см3 среды.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.5.2.    Среду после заражения разливают по 15 см3 в чашки Петри.

1.5.3.    На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см3 испытуемой СОЖ.

1.5.4.    Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.

1.5.5.    Пробы выдерживают в термостате 24 ч.

1.5.6.    Испытания повторяют 3—4 раза.

1.5.7.    По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.

1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 2.

Таблица 2

Балл

Характеристика балла

0

При осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выраженные зоны отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилиндриков, содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1,5—2,0 см. Полная бактерио-стойкость

I

При осмотре невооруженным глазом заметны зоны отсутствия роста микроорганизмов. Диаметр зоны ингибирования 0,8—1,0 см. Удовлетворительная бактерио-стойкость

II

При осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста микроорганизмов. Небактериостойкость СОЖ

1.7. Требования безопасности — по ГОСТ 9.023—74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.

Количество микроорганизмов не должно превышать 5000—7000 кл/м3 воздуха.

2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ

2.1.    Сущность метода

Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.

Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.

2.2.    Отбор проб — по пи. 1.2.1—1.2.3.

2.2.1.    Виды бактерий — культуры представителей рода Desulfovibrio.

Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов — Pseudomonas, Achromobacter и др.

2.3.    Аппаратура, материалы и реактивы по и. 1.3 со следующим дополнением:

аммоний хлористый по ГОСТ 3773—72;

натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171—76;

железо лимоннокислое, кристаллическое, ч. д. а.*;

пептон бактериологический*;

2.4.    Подготовка к испытаниям — по пи. 1.4.1—1.4.4.

2.4.1.    Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры суль-фатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.

Для выращивания культуры используют среду 3.

2.4.2.    Выращенную культуру в количестве 0,1—0,2 см3 переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см3 водопроводной воды.

2.4.3.    Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см3.

2.4.4.    Срок хранения суспензии — не более 1 ч.

2.5.    Проведение испытаний

2.5.1.    Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8—9 см3 в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5—1 см3 суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.

2.5.2.    Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.

2.5.3.    По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 см3 зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см3 предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С — 45 °С средой 2.

2.5.4.    Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см3 бактериальной суспензии и 10 см3 среды 2.

2.5.5.    Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2) °С.

2.5.6.    Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.

2.5.7.    По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.

2.5.8.    Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.

2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 3.

Таблица 3

Балл

Характеристика балла

0

I

II

Цвет индикаторного агара не меняется, что соответствует отсутствию роста суль-фатредуцирующих бактерий. Полная бактериостойкость СОЖ.

Появляются единичные черные колонии в индикаторном агаре. Удовлетворительная бактериостойкость СОЖ.

По всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные колонии. Небактериостойкость СОЖ.

2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. № 1).

2.7. Требования безопасности — по и. 1.7.

3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

3.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.

* По документации, утвержденной в установленном порядке.

3.2. Отбор проб — по пп. 1.2.1—1.2.3.

3.2.1.    Вццы грибов

Aspergillus niger van Thieghem;

Chaetomium globosum Kunze;

Cladosporium gossipicolaPidopl ct Deniak;

Cladosporium resinae Albida;

Penicillium chrysogenum Thom;

Penicillium ochro-cloron Biorge;

Trichoderma koningii Oudemans;

Trichoderma viride Pers. ex. Fr;

Torula convoluta Harz;

Cepha losporium acremonium Corda.

3.2.2.    Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.

3.2.1.    3.2.2. (Измененная редакция, Изм. № 1).

3.2.3.    Пересев, выращивание и хранение грибов — по ГОСТ 9.048—89.

3.3.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.

3.4.    Подготовка к испытаниям

3.4.1.    Посуда и материалы — по ГОСТ 9.048—89.

3.4.2.    Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.

3.4.3.    Рецептура сред приведена в табл. 1.

3.4.4.    Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048—89, используя грибы, приведенные в и. 3.2.1.

3.4.5.    Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.

3.5.    Проведение испытаний

3.5.1.    Коническую колбу вместимостью 500 см3, содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.

3.5.2.    Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40—45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки — 2 см3 на 100 смсреды.

3.5.3.    На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полных металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см3 испытательной СОЖ.

3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. № 1).

3.5.4.    3.5.5. (Исключены, Изм. № 1).

3.5.6.    Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.

3.5.7.    Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.

3.5.8.    По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.

3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 4.

Таблица 4

Балл

Характеристика балла

0

Рост плесневых грибов отсутствует. Полная грибостойкость СОЖ.

I

Рост грибов едва виден. Спорообразование не наблюдается. Удовлетворительная

грибостойкость СОЖ.

II

Рост грибов отчетливо виден, появляется спорообразование. Негрибостойкость

СОЖ

3.7. Требования безопасности — по ГОСТ 9.048—89.