allgosts.ru19. ИСПЫТАНИЯ19.040. Климатические испытания

ГОСТ 9.052-88 Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

Обозначение:
ГОСТ 9.052-88
Наименование:
Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов
Статус:
Действует
Дата введения:
01/01/1989
Дата отмены:
-
Заменен на:
-
Код ОКС:
19.040, 75.100

Текст ГОСТ 9.052-88 Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов



НАЦИОНАЛЬНЫЕ СТАНДАРТЫ

СМАЗОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ, ИНДУСТРИАЛЬНЫЕ МАСЛА И РОДСТВЕННЫЕ ПРОДУКТЫ

Методы анализа

Издание официальное

1-139

ОТ СТАНДАРТИНФОРМ

Сборник «Смазочные материалы, индустриальные масла и родственные продукты. Методы анализа» содержит стандарты, утвержденные до 1 марта 2006 г.

В стандарты внесены изменения, принятые до указанного срока.

Текущая информация о вновь утвержденных и пересмотренных стандартах, а также о принятых к ним изменениях публикуется в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты».

© Стандартинформ, 2006

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Единая система защиты от коррозии и старения МАСЛА И СМАЗКИ

Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

Unified system of corrosion and ageing protection. Oils and greases. Laboratory test methods for mould resistance

ГОСТ

9.052-88

МКС 19.040 75.100 ОКСТУ 0009

Дата введения 01.01.89

Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов:

1    — для установления грибостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений;

2    — для установления грибостойкости смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;

3    — для установления грибостойкости масел в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;

4    — для установления грибостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.

Смазки, применяемые для оптических приборов, испытывают только методом 1.

Методы применяют при испытании масел и смазок, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования грибостойкости.

1. МЕТОД 1

1.1.    Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных водной суспензией спор грибов, в условиях, оптимальных для развития грибов, без дополнительного источника минерального и органического питания.

1.2.    Отбор образцов

1.2.1.    Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517 массой 10—15 г.

1.2.2.    Образцами являются масла и смазки в состоянии поставки, без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3.    Количество параллельных образцов должно быть не менее пяти.

1.3.    Виды грибов

1.3.1.    Для испытаний применяют чистые культуры следующих видов плесневых грибов: Aspergillus niger van Tieghem

Penicillium chrysogenum Thom Penicillium cyclopium Westling Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier Paecilomyces varioti Bainier

1.3.2.    Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.

Издание официальное ★

Перепечатка воспрещена

1.3.3. Пересев, выращивание и хранение культур грибов — по ГОСТ 9.048.

1.4.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048.

1.5.    Подготовка к испытаниям

1.5.1.    Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048.

1.5.2.    Среды для выращивания, хранения культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ

9.048.

Рецептура сред приведена в таблице.

Наименование реактива

Среда 1

(Чапека-Докса с агаром)

Среда 2

(Чапека-Докса с агаром без сахарозы)

Среда 3 (выщелоченный агар)

Среда 4 (сусло-агар)

Среда 5 (минеральная без сахарозы)

Однозамещенный фосфорнокислый калий, г

0,7

0,7

1,0

Двузамещенный фосфорнокислый калий, г

0,3

0,3

Сернокислый магний, г

0,5

0,5

0,5

Азотнокислый натрий, г

2,0

2,0

3,0

Хлористый калий, г

0,5

0,5

2,0

Сернокислое железо, г

0,01

0,01

Сахароза, г

30,0

Агар-агар, г

30,0

Выщелочен-

Выщелочен-

30,0

ный

НЫЙ

30,0

30,0

Четырехбаллинговое неохмеленное пивное сусло (4 % сахара), см3

До 1000

Дистиллированная вода, см3

До 1000

Водопроводная вода, см3

До 1000

1.5.3 Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048, используя грибы, приведенные в и. 1.3.1.

1.5.4.    Для размещения образцов масел в чашку Петри наливают 20—30 см3 среды 3 и дают ей застыть. В застывшей среде просверливают пять лунок глубиной около 5 мм с помощью стерильного сверла диаметром 10 мм и наливают образцы масел на 1 мм ниже уровня среды.

Образцы смазок наносят на предметные стекла, покрывая всю поверхность слоем 1,5—2,0 мм, и помещают в чашки Петри.

1.5.5.    Контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048.

Для контроля жизнеспособности спор грибов в чашку Петри наливают среду 1 или 4 в количестве 20—30 см3 и дают ей застыть.

1.6. Проведение испытаний

1.6.1.    Водную суспензию спор грибов готовят по ГОСТ 9.048, используя грибы, выращенные, как указано в и. 1.5.3.

1.6.2.    Предметные стекла в чашках Петри, чашки Петри с образцами масел помещают в бокс. Поверхность образцов заражают водной суспензией спор грибов с помощью пульверизатора, не допуская слияния капель.

1.6.3.    Образцы масел и смазок после заражения выдерживают 1—2 ч при температуре (25±10) °С.

1.6.4.    Предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри с зараженными образцами и средами помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29±2) °С.

1.6.5.    Образцы выдерживают в термостате 56 сут.

1.6.6.    Через 3—7 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри. Если на поверхности среды развитие грибов не наблюдается, споры грибов считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией спор из новой партии грибов.

1.6.7.    Через 28 сут производят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие грибов, прекращают.

1.6.8.    По окончании испытаний предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.

1.7. Обработка результатов

1.7.1.    Образцы смазок и масел осматривают под микроскопом при 50—60-кратном увеличении.

1.7.2.    Масла и смазки считают грибостойкими при отсутствии развития грибов на всех испытанных образцах.

2.    МЕТОД 2

2.1.    Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.

2.2.    Отбор образцов — по п. 1.2.

2.3.    Виды грибов — по п. 1.3.

2.4.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048.

2.5.    Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.

2.5.1.    Для размещения образцов смазок среду 2 наливают в чашку Петри в количестве 20—30 сми дают ей застыть.

2.6.    Проведение испытаний

2.6.1.    Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048.

2.6.2.    Смазки наносят скальпелем в количестве пяти образцов размером 1010 мм толщиной 1,5—2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, подготовленную, как указано в п. 2.5.1.

2.6.3.    Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп. 1.6.2—1.6.4.

2.6.4.    Образцы выдерживают в течение 28 сут.

2.6.5.    Дальнейший порядок проведения испытаний — по пп. 1.6.6—1.6.8 с промежуточным осмотром образцов через 14 сут.

2.7.    Обработка результатов — по пп. 1.7.1, 17.2.

3.    МЕТОД 3

3.1.    Сущность метода заключается в выдерживании образцов, заряженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.

3.2.    Отбор образцов — по п. 1.2.

3.3.    Виды грибов — по п. 1.3.

3.4.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048.

3.5.    Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3 и 1.5.5.

3.5.1.    Для размещения образцов масел готовят пробирки с 2—3 см3 суспензии спор грибов в среде 5.

3.5.2.    Контролем служит суспензия спор грибов в среде 5.

3.6.    Проведение испытаний

3.6.1.    Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048.

3.6.2.    Образцы масел в количестве 2 см3 вносят не менее чем в пять пробирок, приготовленных, как указано в п. 3.5.1.

3.6.3.    Пробирки помещают в наклонном положении под углом 30° и выдерживают в термостате при температуре (29±2) °С.

3.6.4.    Пробирки с образцами выдерживают в термостате 10 сут.

3.6.5.    Через 5 и 7 сут осматривают образцы. Допускается отбирать пробы минеральной среды из пробирок для оценки грибостойкости биолюминесцентным методом, при этом пробирки с образцами выдерживают в термостате 3 и 5 сут.

При появлении признаков развития грибов в образцах испытания прекращают.

3.6.6.    По окончании испытаний пробирки с образцами извлекают из термостата и осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы при 2,5—5,0-кратном увеличении.

3.7. Обработка результатов

3.7.1.    Масла считаются грибостойкими, если отсутствует развитие грибов на всех испытанных образцах (отсутствует пленка на границе раздела среда—масло, в пробирках среда прозрачна и не пигментирована, нет осадка).

3.7.2.    Масла считаются не стойкими к плесневым грибам, если на образцах наблюдается развитие грибов, признаком которого служит образование пленки на границе раздела среда — масло, помутнение и пигментация средьг, образование осадка.

3.7.3.    Допускается оценивать грибостойкость масел биолюминесцентным методом, приведенным в приложении.

4. МЕТОД 4

4.1.    Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.

4.2.    Отбор образцов — по и. 1.2.

4.3.    Виды грибов — по и. 1.3.

4.4.    Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048.

4.5.    Подготовка к испытаниям — по пи. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.

4.5.1.    Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в и. 2.5.1, используя среду 1 или 4.

4.5.2.    Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в и. 1.5.4, используя среду 1 или 4.

4.6.    Проведение испытаний — по и. 2.6.

4.6.1.    Образцы выдерживают в термостате в условиях, приведенных в и. 1.6.4, 14 сут.

4.6.2.    Промежуточный осмотр образцов производят через 7 сут после начала испытаний.

4.7.    Обработка результатов — по пи. 1.7.1 и 1.7.2.

5. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ - по ГОСТ 9.048

ПРИЛОЖЕНИЕ

Обязательное

БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫИ МЕТОД ОЦЕНКИ ГРИБОСТОИКОСТИ

Сущность метода заключается в определении количества внутриклеточной аденозин-5-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ) в минеральной среде после испытания масел на грибостойкость (и. 3.6.5) с помощью специфической ферментативной хемилюминесцентной реакции с использованием люциферин-лю-циферазной системы светляков. Интенсивность излучаемого свечения прямо пропорциональна концентрации АТФ. Концентрация АТФ пропорциональна количеству живых клеток, так как ее содержание во всех типах живых клеток примерно одинаково и составляет 1—10 мг/г сухого веса. Этот факт является основой биолюми-несцентного метода определения биомассы.

1. Аппаратура, материалы и реактивы

Хемилюминометр медицинский ДЛИ 31.560.000, предназначенный для измерения интенсивности сверхслабого свечения в области спектра 400—600 нм. Допускается использовать другие приборы аналогичного назначения, обеспечивающие измерение световых потоков от 104 до 108 квант/с.

Весы для статического взвешивания по ГОСТ 29329.

Термостат, обеспечивающий температуру нагрева до 200 °С.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 16317.

Дозатор для отбора проб 0,1 см3.

Лабораторный рН-метр.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.

Колбы цилиндрические мензурные вместимостью 25 см3 по ГОСТ 1770.

Пипетки вместимостью 1, 10 см3.

Аденозин-5'-трифосфорной кислоты динатриевая соль, 3-водная (АТФ).

Люцифераза светляков.

Люциферин.

Диметилсульфоксид (ДМСО), х. ч.

Трис-(оксиметил)-аминометан, х. ч.

Кислота уксусная, х. ч. по ГОСТ 61.

Магний сернокислый, 7-водный, х. ч. по ГОСТ 4523.

Соль динатриевая этилендиамин — N, N, N’, N’ — тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б) (ЭДТА) по ГОСТ 10652.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

2. Подготовка к испытаниям

2.1.    Стерилизуют посуду по ГОСТ 9.048.

2.2.    Готовят раствор АТФ 1 ммоль/дм3: 13,8 мг АТФ помещают в мерную колбу вместимостью 25 см3, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Раствор АТФ 1 ммоль/дмразливают на порции объемом 1 см3 и хранят при температуре минус 20 °С. В замороженном виде раствор АТФ допускается хранить не более 3 мес.

2.3.    Готовят стандартный раствор АТФ 10 мкмоль/дм3: порцию раствора АТФ 1 ммоль/дм3 (по и. 2.2) размораживают, отбирают с помощью дозатора 0,1 см3 раствора и помещают его в пробирку, содержащую 10 см3 дистиллированной воды. Раствор АТФ 10 мкмоль/дм3 готовят непосредственно перед применением.

2.4.    Готовят 20%-ный раствор уксусной кислоты: 10 см3 уксусной кислоты разбавляют 40 см3 дистиллированной воды.

2.5.    Готовят 0,1 моль/дм3 трис-ацетатный буферный раствор с pH-7,6, содержащий 10 ммоль/дм3 сернокислого магния, 2 ммоль/дм3 ЭДТА: в мерную колбу вместимостью 50 см3 загружают 0,605 г трис-(оксиметил)-аминометана, 0,123 г сернокислого магния, 0,036 г ЭДТА, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Затем все содержимое колбы переносят в стакан вместимостью 100 см3 и титруют 20%-ным раствором уксусной кислоты до pH-7,8.

2.6.    Готовят раствор люциферазы: 10 мг люциферазы растворяют в 10 см3 0,1 моль/дм3 трис-ацетатном буферном растворе (и. 2.5). Приготовленный раствор люциферазы хранят во льду.

2.7.    Готовят раствор люциферина: 3 мг люциферина растворяют в 10 см3 0,1 моль/дм3 трис-ацетатного буферного раствора (и. 2.5).

2.8.    Готовят экстракт клеток: отбирают из пробирок с образцами после выдержки их в термостате 3 и 5 сут (и. 3.6.5) пробу минеральной среды объемом 0,1 см3 и добавляют ее в пробирку к 0,9 см3 диметилсульфоксида (ДМСО). Смесь перемешивают встряхиванием в течение 1—2 мин. Экстракт пригоден для анализа в течение 1 сут.

3.    Проведение испытаний

3.1.    Помещают в кювету люминометра с помощью дозатора последовательно 0,1 см3 раствора люциферина, 0,1 см3 раствора люциферазы, 0,7 см3 трисацетатного буферного раствора и регистрируют интенсивность фонового свечения /ф в милливольтах.

3.2.    Добавляют в ту же кювету дозатором 0,1 см3 экстракта клеток (и. 2.8), перемешивают и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции Iv

3.3.    Добавляют в ту же кювету 0,02 см3 стандартного раствора АТФ (и. 2.3) и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции /2.

4.    Обработка результатов

4.1.    Интенсивность люминесценции образца (/обр) в милливольтах вычисляют по формуле

/обр= А-^Фон-    (1)

4.2.    Интенсивность люминесценции стандартного раствора АТФ (/ст) в милливольтах вычисляют по формуле

=    (2)

4.3.    Концентрация АТФ [АТФ]обр в микромолях в образце вычисляют по формуле

Л,бр-^ст[АТФ]ст-10

обр    /СТГГ2    ’    ^

где V — объем экстракта клеток, равный 0,1 см3;

Г, — объем реакционной смеси до добавления стандартного раствора АТФ, равный 1 см3;

V2 — объем реакционной смеси после добавления стандартного раствора АТФ, равный 1,02 см3;

VCT — объем добавленного стандартного раствора АТФ, равный 0,02 см3;

[АТФ]ст — концентрация АТФ в стандартном растворе, равная 10 мкмоль;

10 — коэффициент, учитывающий разбавление пробы образца при экстракции клеток диметил сульфоксидом в 10 раз.

При упрощении формула (3) приобретает вид:

АТФ0бр = -у^-19,6.

^СТ

4.4.    Масла являются грибостойкими, если концентрация АТФ меньше или равна 10—7 моль, масла не грибостойки, если концентрация АТФ в образцах больше 10—7 моль.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством высшего и среднего специального образования СССР

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 25.03.88 № 754

3.    ВЗАМЕН ГОСТ 9.052-75

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта, подпункта, приложения

ГОСТ 9.048-89

1.3.3, 1.4, 1.5.1, 1.5.2, 1.5.3, 1.6.1, 2.4,

2.6.1, 3.4, 3.6.1, 4.4, приложение

ГОСТ 61-75

Приложение

ГОСТ 1770-74

Приложение

ГОСТ 2517-85

1.2.1

ГОСТ 4523-77

Приложение

ГОСТ 6709-72

Приложение

ГОСТ 10652-73

Приложение

ГОСТ 16317-87

Приложение

ГОСТ 25336-82

Приложение

ГОСТ 29329-92

Приложение

5.    Ограничение срока действия снято по протоколу № 3—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (НУС 5-6—93)

6.    ПЕРЕИЗДАНИЕ