База ГОСТовallgosts.ru » 45. ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНАЯ ТЕХНИКА » 45.040. Материалы и компоненты для железнодорожной техники

ГОСТ 33463.6-2016 Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

Обозначение: ГОСТ 33463.6-2016
Наименование: Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения
Статус: Действует

Дата введения: 01/01/2017
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 45.040
Скачать PDF: ГОСТ 33463.6-2016 Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения.pdf
Скачать Word:ГОСТ 33463.6-2016 Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения.doc


Текст ГОСТ 33463.6-2016 Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

ГОСТ

33463.6-

2016


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

СИСТЕМЫ ЖИЗНЕОБЕСПЕЧЕНИЯ НА ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНОМ ПОДВИЖНОМ

СОСТАВЕ

Часть 6

Методы гигиенической оценки системы

водоснабжения

Издание официальное

Москва

Стенда ртмнформ 2016


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандарт тизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным унитарным предприятием «всероссийский научно-исследовательский институт железнодорожной гигиены Федеральной службы ло надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека» (ФГУП ВНИИЖГ Роспотребнадзора)

2    ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 524 «Железнодорожный транспорт»

3    ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 февраля 2016 г. № 85-П)

За принятие стандарта проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО Э1в6) 004-97

Код страны

по МК (ИСО 3100) 004- 97

Сокращеннее наименование национального органа ло стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

8Y

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

К Z

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандврт

Россия

RU

Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства ло техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2016 года № 324-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33463.6—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 года

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт может быть применен на добровольной основе для оценки соответствия требованиям технических регламентов Таможенного союза: «О безопасности железнодорожного подвижного состава». «О безопасности высокоскоростного железнодорожного транспорта»

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты» (по состоянию на 1 января текущего года), а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

7    Требования ксредствам измерений, испытательному и вспомогательному оборудованию, стандарт

Приложение В (справочное) Средства измерений, ислытательное и вспомогательное оборудование.

Приложение Е (обязательное) Подготовка мембранных фильтров и фильтровального аппарата. . . 30

in

Введение

Настоящий стандарт является частью комплекса стандартов ив семи частей, устанавливающих методы испытаний по определению значений показателей, характеризующих подвижной составе точки зрения способности системы жизнеобеспечения создать и поддерживать в его помещениях необходимые. и в первую очередь, безопасные условия для жизнедеятельности человека (условия, безопасные по параметрам микроклимата, шума, вибрации, электромагнитных излучений, по микробиологическим показателям, санитарно-химическим и эргономическим).

Настоящий стандарт устанавливает состав, методы определения и оценки санитарно-микробиологических и санитарно-химических показателей воды в системе хозяйственно-питьевого водоснабжения железнодорожного подвижного состава, порядок отбора проб для проведения санитарно-микробиологического и санитарно-химического анализа по указанным показателям, с тем чтобы дать гигиеническую оценку системы водоснабжения, то есть определить, не ухудшает ли система водоснабжения качество исходной воды, поступающей из централизованной системы водоснабжения, и оценить соответствие качества воды в системе водоснабжения объекта испытаний гигиеническим нормативам.

Требования стандарта сформированы на основе результатов анализа методов контроля качества питьевой воды, приведенных в межгосударственных стандартах, методических документах Российской Федерации, международных стандартах, а также на основе обобщения опыта проведения разработчиками гигиенической оценки систем водоснабжения железнодорожного подвижного состава, позволяющего отразить специфику этой оценки применительно к системе водоснабжения локомотивов, моторвагонного подвижного состава и специального железнодорожного подвижного состава.

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СИСТЕМЫ ЖИЗНЕОБЕСПЕЧЕНИЯ НА ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНОМ ПОДВИЖНОМ СОСТАВЕ

Часть 6

Методы гигиенической оценки системы водоснабжения Life support systems on railway rolling stock. Part 6. Methods of hygienic assessment of water supply system

Дата введения — 2017—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на локомотивы, моторвагонный подвижной состав (МВПС) испециальныйжелеэнодорожный подвижной состав (СПС). оснащенный системой хозяйствемно-питье-вого водоснабжения (далее — система водоснабжения) и устанавливает методы гигиенической оценки этой системы по санитарно-химическим и санитарно-микробиологическим показателям.

Примечание — Настоящий стандарт может быть использован для гигиенической оценки систем водоснабжения. применяемых в изотермических вагонах со служебными и вспомогательными помещениями и иных объектах железнодорожного транспорта. Методы, установленные настоящим стандартом, могут быть использованы для гигиенической оценки системы водоснабжения (или ее элементов)до установки на подвижной состав.

2 Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты: ГОСТ 12.0.004—90 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.4.004—74 Респираторы фильтрующие противогазовые РПГ-67. Технические условия ГОСТ 12.4.253—2013 (EN 166:2002) Система стандартов безопасности труда. Средства индивидуальной защиты глаз. Общие технические требования

ГОСТ 83—76 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия ГОСТ 245—76 Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия ГОСТ 1770—74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2156—76 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 2493—75 Реактивы. Калий фосфорнокислый двуэамещенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 3118—77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4159—79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4170—78 Реактивы. Натрий-аммоний фосфорнокислый деузамвщенный4-еодный. Технические условия

ГОСТ 4198—75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ 4204—77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4209—77 Магний хлористый 6-водный. Технические условия ГОСТ 4232—74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

Иэдвние официальное 4233—77 Реактивы. Натрий хлористый Технические условия

ГОСТ

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

условия

гост

гост

кие условия ГОСТ ГОСТ

деления

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

гост

вия

ГОСТ

гост

и размеры ГОСТ ГОСТ


4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

4523—77 Реактивы. Магний сернокислый 7-еодный. Технические условия

4530—76 Реактивы. Кальций углекислый. Технические условия

5556—81 Вата медицинская гигроскопическая Технические условия

5962—2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

6038—79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

6552—80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

6672—75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

9284—75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

9412—93 Марля медицинская. Общие технические условия

11773—76 Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный. Технические условия

12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

13805—76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические

17206—96 Агар микробиологический. Технические условия

17269—71 Респираторы фильтрующие гаэопылеэащитные РУ-бОм и РУ-60му. Техничес-17626—81 Казеин технический. Технические условия

17726—81 Стерилизаторы медицинские паровые, воздушные и газовые. Термины и опре

18300—87

20010—93

20015—88

21241—89

22280—76

23932—90


Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия Перчатки резиновые технические. Технические условия Хлороформ. Технические условия

Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний Реактивы. Натрий лимоннокислый 5.5-водный. Технические условия Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические уело-24849—2014 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий 25336—82 Посуда иоборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры 25706—83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

27068—86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 27384—2002 Вода. Нормы погрешности измерений показателей состава и свойств ГОСТ 29227—91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31861—2012 Вода. Общие требования котборупроб ГОСТ 31862—2012 Вода питьевая. Отбор проб

ГОСТ 31942—2012 (ISO 19458:2006) Вода. Отбор проб для микробиологического анализа ГОСТ 31955—2012 (ISO 9308-1:2000) Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, е котором дана ссыпка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссыпку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

3.1

гигиенические нормативы качества питьевой воды: Совокупность научно-обоснованных и установленных нормативной документацией предельно допустимых значений показателей органолептических свойств, содержания химических веществ и микроорганизмов в питьевой воде, гарантирующих безопасность и безвредность питьевой воды для жизни и здоровья человека независимо от продолжительности ее использования.

[ГОСТ 30813—2002, статья 2}_

3.2

проба воды: Определенный объем воды, отобранный для исследования ее состава и свойств. [ГОСТ 30813—2002, статья 33)_

3.3

точка отбора пробы воды: Зафиксированное местоположение отбора проб воды.

[ГОСТ 30813-2002, статья 37]_

3.4    водоочистка: Процесс по очистке, доочистке, обеззараживанию воды в специальных устройствах (устройства водоочистки) с целью улучшить ее качество для питьевых и хозяйственно-бытовых нужд человека.

3.5    общее микробное число; ОМЧ (total plate count): Общее число аэробных и факультативно анаэробных гетеротрофных микроорганизмов, использующих для питания органические вещества, обладающих способностью образовывать видимые при двукратном увеличении на питательном агаре колонии при температуре (36 ± 2) *С в течение 24 ч.

Примечание — входящие в ату группу микроорганизмы при превышении допустимого уровня указывает на биологическое загрязнение, напичие в воде легко усвояемых органических веществ и биообрастаний на поверхностях конструкций систем водоснабжения, на неблагоприятное санитарное состояние систем хранения и подачи воды и целостности распределительных систем, в также являются технологическим показателем аффективное™ процесса водоочистки.

3.6

индикаторные микроорганизмы: Условные группы микроорганизмов, присутствие которых свидетельствует о наличии антропогенного загрязнения и (или) недостаточной очистке воды.

[ГОСТ 30813—2002. статья 61]_

3.7    колиформные бактерии (conform bacteria): Грамотрицательные. оксидазоотрицательные. не образующие спор палочки семейства Enterobacteriaceae. относящиеся к типу ферментирующих бактерий, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селективной дифференциальной пастозной среде с образованием кислоты при температуре (36 ± 2) ®С в течение 24 ч.

Примечание — Колиформные бактерии — индикаторная группа бактерий, которая указывает на фекальное загрязнение воды и возможность присутствия возбудителей водоассоциироевнных бактериальных кишечных инфекций. 8 очищенной и дезинфицированной воде их обнаружение означает, что обработка была про-ееденв некачественно или произошло вторичное микробное загрязнение.

3.8    Esherichia coli; E.coll: Аэробные и факультативно анаэробны© колиформные бактерии, обладающие свойством ферментировать лактозу при температуре (44.0 ± 0.5) °С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, а также продуцировать индол из триптофана в течение (21 ± 3) ч.

Примечание — Индикаторная группа бактерий, включающая в себя преимущественно Eectiericnie colt — показатель фекального загрязнения, поступившего в воду недавно, наиболее опасного в эпидемическом отношении.

3.9    бактерии семейства Enterobacteriaceae: Грамотрицательные. оксидазоотрицательные. лактоэоотрицательные бактерии, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селекти вной дифференциальной лактозной среде ислособные ферментировать глюкозусобразова-нием кислоты и газа при (36 ± 2) *С в течение 24 ч.

з

Применение - Бактерии семейства Entsrobactenaceae — лактозоотрицательные бактерии, а том числе патогенные и потенциально-патогенные виды, обнаружение которых указывает не только на фекальное загрязнение. но и позволяет оценить гигиеническое состояние и эпидемическую опасность анализируемой воды.

3.10    энтерококки (Enterococcus): Грамположительные, каталаэоотрицатепьные. полиморфные. круглые или овальные с заостренными концами кокки, располагающиеся попарно или в коротких цепочках, обладающие свойством образовывать колонии на питательных средах, содержащих 0.04 % азида натрия и 2,3,5 трифенилтетраэолийхлорид (ТТХ), способностью роста на питательной среде, содержащей 6.5 % NaCI и образующие характерные колонии на средах с эскулином.

Примечание — К группе энтерококков (фекальных энтерококков) относят Enterococcus faecalts с биоаа-рами. Enterococcus faecium. Enterococcus durans. Обнаружение их в воде, даже в отсутствие E.coli. указывает на фекальное загрязнение воды. Обладают высокой устойчивостью в объектах окружающей среды.

3.11    род Псевдомонад: Аэробные грамотрицательные оксидазоположительные каталаэополо-жительные палочки, не образующие спор, распространенные в водной среде, участвующие в образовании биопленок на поверхностях конструкций систем водоснабжения.

Применение — Псевдомонады, а том числе Pseudomonas aeruginosa (Синегнойная папочка), способны длительно выживать вводной среде и устойчивы ко многим обеззараживающим агентам (посравнению с колифор-мными бактериями), нетребовательны а отношении питательных веществ и температуры размножения, выживают на внутренних поверхностях трубопроводов отбО до 210 сут при температуре от 4 *Сдо44 *С. выделяют эндотоксин и другие, активно действующие вещества (эластазу. коллагеназу), ввиду чего вызывают целый ряд различных заболеваний кожных покровов, верхних дыхательных путей, глаз и других слизистых, кишечные инфекции.

3.12

колифаги: Бактериальные вирусы, способные лизировать Е. coti и формировать при температуре (36 12) *С через 18—24 ч зоны лизиса на питательном агаре.

Примечание — Благодаря сходству с кишечными вирусами человека и большей устойчивости по сравнению с индикаторными группами бактерий их рассматривают как показатели возможного вирусного загрязнения воды.

(ГОСТ 30813—2002. статья 68)_

3.13    легионеллы (Legionella pneumophila): Разновидность патогенных для человека грамотри-цательных бактерий, колонизирующих системы горячего водоснабжения, оптимальная температура для развития которых от 30 ®С до 55 *С.

Примечание — возбудители пневмонии «болезни легионеров» и лихорадки Понтиака. Путь передачи инфекции — через водные аэрозоли. Активно колонизируют поверхности водопроводного оборудования с образованием биопленок.

3.14    биопленка (биообрастание): Тип устойчивых микробных образований (сообществ), прикрепленных к субстрату (адгезия), у которых экспрессируются иные гены, чем у отдельных свободно живущих микроорганизмов, в результате чего биолленка ведет себя как отдельный «многоклеточный организм», сформированный специфическим образом, при этом каждый слой клеток выполняет определенную функцию: некультивируемое состояние части клеток, питание, защита от внешних воздействий и т. д.

Примечание — Микроорганизмы, живущие в составе биопленок, могут вызывать инфекционные заболевания у людей и биодеструкцию материалов.

3.15

централизованная система питьевого водоснабжения: Комплекс устройств, сооружений и трубопроводов, предназначенных для забора, подготовки или без нее. хранения, подачи к местам потребления питьевой воды и открытой для общего пользования.

[ГОСТ 30813—2002, статья 30)_

3.16 передвижная лаборатория: Средства (мобильного) передвижения и оснащения, предназначенные для проведения санитарно-микробиологического анализа воды на месте отбора проб на специально для этого предназначенных передвижных транспортных средствах (железнодорожный подвижной состав, автомобили), функционирующие при автономном режиме энергообеспечения.

3.17 переносная лаборатория: Комплект переносного оборудования для проведения санитар* но-микробиологичвского анализа воды на месте отбора пробе последующей доставкой в стационарную лабораторию на любом транспортном средстве, специально для этих целей не предназначенном.

4    Общие положения

4.1    Методы гигиенической оценки системы водоснабжения основываются на сравнении качества воды из системы водоснабжения железнодорожного подвижного состава, упомянутого в разделе 1 (далее — объект испытаний), и качества исходной (заправляемой) воды по санитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям.

Примечание — Материалы, из которых изготовлена конструкция системы водоснабжения объекте испытаний и оборудование, используемое для водоочистки (доочистки) и водоподготовки, в процессе его эксплуатации не должны ухудшать качество исходной (заправляемой) воды по свнитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям, ухудшать органолептические свойства воды, приводить к поступлению в воду соединений е концентрациях, превышающих гигиенические нормативы, способствовать биообрасганию деталей конструкции и развитию микрофлоры в воде, образовывать соединения и (или) продукты трвнеформвции в концентрациях. превышающих гигиенические нормативы.

4.2    Для оценки качества воды по указанным в 4.1. 6.1.1. 9.1.1 показателям используют методы санитарно-микробиологического и санитарно-химического анализа литьевой воды, позволяющие определить количественные значения и (или) качественные характеристики показателей.

4.3    Материал для анализа и оценки получают в ходе проведения испытаний, обеспечивающих отбор из системы водоснабжения объекта испытаний проб воды:

отражающих качество (состав и свойства) воды в системе;

в точках, позволяющих оценить различные участки системы (см. 5.1);

в количестве (и объемах), необходимых для последующего анализа (для определения исследуемых показателей);

при соблюдении требований к подготовке системы, к оборудованию для отбора и условиям отбора, хранения и транспортирования проб, обусловленных свойствами объектов анализа.

4.4    Результаты анализа проб воды из системы водоснабжения оценивают по гигиеническим нормативам качества питьевой воды и сравнивают с результатами анализа проб исходной (заправляемой) воды.

Примечание — Качество воды в системах водоснабжения объекта испытания должно соответствовать гигиеническим требованиям к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения*.

5    Подготовка к испытаниям

5.1    Определение точек отбора

5.1.1    Перед испытаниями проводят анализ конструкторской документации, содержащей сведения. необходимые для определения точек отбора проб (схемы, чертежи или описание планировки помещений объекта испытаний), на основании которого определяют количество и места размещения водоразборных устройств системы водоснабжения: кранов (в санузлах, служебных и бытовых помещениях. кафе, барах и т. л.), душевых модулей.

5.1.2    Отбор проб воды проводят в каждой точке лотребления воды (из всех кранов системы водоснабжения).

Кроме того, обязательна точка отбора воды (исходной), поступающей в систему водоснабжения объекта испытаний.

Примечание — 8 вагоне МВЛС. СПС салонной или купейной планировки отбирают пробы из всех кранов системы водоснабжения в санузлах, служебных и бытовых помещениях, в вагоне купейной планировки с наличием точек потребления воды в каждом купе — отбирают пробы не менее чем в трех точках лотребления (в начале, середине и конце вагона), в вагоне с барами (буфетами) отбирают также пробы в точках потребления воды для целей обслуживания посетителей (из каждого крена).

* На территории Российской Федерации действует СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

S

5.1.3 При оборудовании системы водоснабжения объекта испытания дополнительными устрой* ствами доочистки и обеззараживания воды точки отбора проб устанавливают до и после доочистки и обеззараживания.

5.2 Подготовка системы водоснабжения

5.2.1    Система водоснабжения объекта испытаний до их проведения должна быть подготовлена к отбору проб воды: проведена дезинфекция и промывка, заправка водой. Порядок проведения дезинфек* ции и промывки приведен в А.1 (приложение А), порядок заправки системы водоснабжения приведен в А.2 (приложение А).

5.2.2    Система должка быть полностью заправлена водой не менее, чем за 6 ч и не более чем за 12 ч до качала отбора проб по санитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям.

6 Отбор проб

6.1    Отбор проб воды для гигиенической оценки системы водоснабжения проводят в стационарных условиях.

6.2    Общий порядок отбора проб воды (для микробиологического и санитарно-химического анализа) по ГОСТ 31861.

6.3    В каждой точке (определенной в соответствии с 5.1) системы водоснабжения отбирают по одной пробе воды на санитарно-химические и санитарно-микробиологические показатели.

6.4    Отбор проб воды для микробиологического анализа

6.4.1    Пробы воды для микробиологического анализа отбирают в соответствии с требованиями ГОСТ 31942 (пункты 5.1,5.8.5.9—5.12.6.1.3.6.1.5.6.1.6) с учетом необходимых объемов для определения исследуемых показателей и в соответствии с ГОСТ 31862 (пункт 5.3).

6.4.2    Перед отбором проб водопроводные краны следует предварительно фламбировать (обжечь пламенем), после чего произвести спуск воды продолжительностью не менее 5 и не более 10 мин при полностью открытом кране.

6.4.3    Отбор проб воды на санитарно-микробиологические показатели проводят в стерильные емкости по ГОСТ31942 (пункты 5.3.5.7). предназначенные дляотбора проб питьевой воды, одноразового использования (из полимерных материалов) или многоразового (из стекла)с тиосульфатом натрия из расчета 20 мг/дм3 ил и 10 мг на 500см3. Емкости при отборе, не ополаскивая, заполняют на 2/3 их объема.

Примечания

1    Отбор проб воды, поступающей из разводящей сети централизованной системы питьевого водоснабжения и подвергнутой обеззараживание с помощью дезинфектанте, проводят с нейтрализатором для нейтрализации (дезактивации) остаточного количества дезинфицирующего реагента по ГОСТ 31942 (пункт 5.7. приложение ДВ).

2    Тиосульфат натрия используют для нейтрализации хлора а воде.

6.5    Отбор проб воды для санитарно-химического анализа

6.5.1    Пробы воды отбирают в соответствии стребованиями ГОСТ 31861 (пункты 3.5—3.7) и требованиями по отбору проб межгосударственных и национальных стандартов или методических документов по 9.1.2.

6.5.2    Непосредственно перед отбором проб в течение 2—3 мин осуществляют слив воды.

6.5.3    Отбор проб воды на санитарно-химические показатели проводят в емкости с плотно закрывающимися пробками, снабженными инертными прокладками одноразового или многоразового использования. которые перед заполнением ополаскивают исследуемой водой не менее трех раз. после чего заполняют емкость водой до края, не оставляя воздушного пространства между крышкой и поверхностью воды.

6.6    На емкость (этикетку) наносится маркировка, содержащая информацию о месте отбора, точке отбора, дате и времени отбора в соответствии с ГОСТ 31942 (пункт 8.2).

Допускается кодирование проб с отражением номера в акте отбора проб в соответствии с ГОСТ 31942 (пункты 8.2.8.3).

6.7    Хранение и транспортирование проб воды

6.7.1 Т ранспортирование проб воды для проведения анализа осуществляется в специальных контейнерах (термосумках), оснащенных термоэлементами, обеспечивающими поддержание температурного режима доставки по 6.7.2.

6.7.2    Допустимый срок хранения проб воды (от момента отбора проб домечала проведения анали-за) для определения значений всех санитарно-микробиологических (по 8.1) и санитарно-химических показателей (по 9.1). характеризующих качество воды в системе водоснабжения объекта испытаний на момент отбора, составпяет 6 ч при температуре от 4 С до 10 ®С.

Примечание — При необходимости определения значении отдельных показателей допустимый срок хранения проб воды по ГОСТ 31861 (пункт 5.5}. Максимальный допустимый срок хранения проб воды, в соответствии с ГОСТ 31942 (приложение А), при температуре (5 х 3} 'С составляет: для определения общего микробного числа. Е. coli. колиформных бактерий, энтерококков, патогенных микроорганизмов кишечной группы 12—18 ч. для иных потенциально-патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae — 48 ч. Pseudomonas aeruginosa 8—12 ч. Legionella spp. — 24 ч.

6.7.3    Для правильной оценки результатов анализов фиксируют температуру воздуха при отборе проб, а также дополнительные сведения или факторы и отклонения от установленной процедуры отбора. доставки, хранения, которые могут повлиять на результат анализов по ГОСТ 31942 (пункт 8.4).

6.8 Отбор проб подтверждается актом отбора. Форма акта отбора приведена в приложении Б.

7 Требования к средствам измерений, испытательному и вспомогательному оборудованию, стандартным образцам

7.1    Применяемые средства измерений и испытательное оборудование должны соответствовать требованиям национального законодательства об обеспечении единства измерений.

7.2    Измерение температуры воздуха производят средствами измерения температуры с пределами погрешности ±1 вС. относительной влажности (для целей 8.2.3) — гигрометрами с погрешностью не более 5 %.

7.3    Для регистрации времени используют часы с пределами погрешности точности хода ±1 мин в сутки, а также средства измерений температуры с функцией фиксации времени с погрешностью, не превышающей указанную.

7.4    Термостаты должны обеспечивать поддержание температуры в пределах (36 ± 2) ®С. (44.0 ±0.5) вС.

7.5    Для измерения массы применяют весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания не менее 200 г (с пределами допускаемой погрешности ±0,02 г) и не менее 1000 г (спределами допускаемой погрешности ±0.1 г).

7.6    Для измерения водородного показателя pH используется РН-метрс диапазоном измеренийот 0 до 14 ед. pH с пределами допускаемой погрешности ±0.01 ед. pH.

7.7    Для оптической стандартизации бактериальных взвесей применяют оптический стандарт мутности на Юединиц.

7.8    Вспомогательное оборудование, обеспечивающее допустимые условия доставки проб воды (термосумки, переносной термостат, термоконтейнер или иное оборудование) подвергают периодической проверке технического состояния в соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого оборудования или паспортах на них.

7.9    Оборудование для отбора проб на санитарно-химические показатели должно соответствовать требованиям ГОСТ 31861 (пункты 4.1.4.4.4.7—4.10), на санитарно-микробиологические показатели — ГОСТ 31942 (пункты 5.3.5.5.5.6).

7.10    Оборудование для санитарно-химического анализа воды должно соответствовать требованиям стандартов или методических документов по 9.1.2.

7.11    Санитарно-микробиологический анализ воды проводится в стационарной микробиологической лаборатории. Оборудование микробиологической лаборатории, расходные материалы, реактивы, питательные среды — см. приложениеВ.

Примечание — Для обеспечения сроков начале анализа по 6.7.2 допускается провести посев проб {начальный этап анализа) а условиях переносной или передвижной лаборатории (в случае, когда не предоставляется возможным в срок доставить пробы в стационарную лабораторию>лри наличии оборудования, удовлетворяющего требованиям ГОСТ 24849 (пункт 5.3).

8 Методы санитарно-микробиологического анализа

8.1    Определяемые показатели

8.1.1    При гигиенической оценке системы водоснабжения объекта испытаний посанитарно-микро-биологическим показателям определяют:

•    общее микробное число;

•    показатель «Escherichia coli»:

-    показатель «Колиформные бактерии»:

•    показатель «Энтерококки»:

•    показатель «Колифаги»;

-    показатель «Pseudomonas aeruginosa» (далее — Р. aeruginosa).

8.1.2    При микробиологическом анализе ОМЧ определяют количество колонии образующих единиц в 1 см3 исследуемой пробы воды (КОЕ/см3).

8.1.3    При определении показателей Escherichia coli (E.coli). колиформных бактерий проводят трехкратное исследование по 100 см3 отобранной пробы воды. Энтерококки определяют в 100 см3 пробы воды.

8.1.4    При отсутствии роста E.coli и (или) колиформных бактерий, но наличии роста оксидазоотри-цателькых бактерий, проводят определение их принадлежности к бактериям семейства Enterobacteriaceae по ферментации глюкозы, при обнаружении роста оксидазоположительных бактерий проводят определение показателя Р. aeruginosa и устанавливают «наличие—отсутствие» этих бактерий в исследованной пробе воды.

8.1.5    Обнаружение в пробе воды Escherichia coli и (или) колиформных бактерий более 5 КОЕЛООсм3. и (или) колифагов более 2 БОЕЛ00 см3 является показанием к определению патогенных микроорганизмов (Salmonella. Shigella. Yersinia. Legionella pneumophila. P. aeruginosa. Klebsiella. Citrobacter и другие).

8.1.6    Для санитарно-микробиологического анализа используют наборы реагентов и сред питательных микробиологических, а также иные изделия медицинского назначения, разрешенные к применению на территории государства, принявшего стандарт.

8.2 Методы определения общего микробного числа

8.2.1    Определение общего числа микроорганизмов (ОМЧ), образующих колонии

на питательном агаре

8.2.1.1    Метод определяет в питьевой воде общее число меэофильных и аэробных микроорганизмов. способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре (36 ± 2) С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

8.2.1.2    При выполнении анализа из каждой пробы воды делают посев не менее двух объемов по 1 см3 без разведения.

Посев воды проводят после тщательного перемешивания пробы. Посев производят, внося по 1 см3 воды из пробы в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу после внесения воды в каждую чашку Петри наливают небольшое количество (от 8 до 10 см3 на одну чашку Петри диаметром 90 или 100 мм) расплавленного и остуженного до температуры в пределах от 45 С до 48 С питательного агара (не касаясь посевной пробы), предварительно фламбируя край емкости, в которой он находился. После внесения агара содержимое чашки Петри плавно перемешивают, равномерно распределяя его по дну чашки, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на фая и крышку чашки, и помещают на горизонтальную поверхность.

Посев и заливку посевов питательным агаром проводят между пламенем двух горелок с целью обеспечения условий асептики.-

После застывания агара чашки Петри с посевами переворачивают (вверх дном), помещают в термостат и инкубируют при температуре (36 ± 2) С в течение (24 ± 4) ч.

После инкубации чашки Петри с посевами извлекают из термостата, подсчитывают все выросшие на чашках колонии микроорганизмов (X), видимые при увеличении в 2 раза, и регистрируют в журнале испытаний. Подсчет проводят только на тех чашках, на которых выросло не более 300 колоний.

Результат допускается представлять на основании подсчета колоний на одной чашке, если на другой чашке обнаружен ползучий рост колоний, или число колоний превышает 300.

Если на всех чашках имеет место рост расплывчатых колоний, который не распространился на всю поверхность чашки, подсчитывают колонии на секторе с изолированными колониями с последующим пересчетом на всю площадь чашки.

Если на чашке выросло более 300 изолированных колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают колонии на двух секторах, выбранных на участкахчашкис максимальным и минимальным ростом и пересчитывают на всю площадь чашки.

8 этих случаях в протоколе отмечают «Число КОЕ в 1 см3 ориентировочно».

Если подсчет колоний на чашках невозможен за счет сплошного роста изолированных колоний, в журнал испытаний вносят текст: «Сплошной рост». Если на всех засеянных чашках рост расплывчатых колоний бактерий распространился на всю поверхность чашки, то в журнал испытаний вносят текст: «Сливной рост».

Если ни на одной из засеянных чашек не выросло ни одной колонии, в протоколе исследований указывают — «КОЕ ОМЧ не обнаружено в 1 см3».

Примечание — Если рост колоний на чашках с посевами не обнаружен, то допустимо продолжить инкубацию посевов до 48 ч. после чего окончательно учесть результат.

8.2.1.3 Содержание микроорганизмов (X) в 1 см3 анализируемой пробы воды рассчитывают по формуле

х=".    О)

v

где N — число колоний, подсчитанных и зарегистрированных по 8.2.1.2;

V — объем воды. см3, использованный для посева на чашки Петри, на которых велся подсчет.

Результат округляют до целого числа и выражают числом колоний образующих единиц микроорганизмов в 1 см3 пробы воды.

8.2.2    Определение ОМЧ сиспользованием готовых к употреблению питательных подложек

Для определения ОМЧ анализируемую воду в объеме 1 см3 вносят на поверхность подложки (при использовании летрифильма в центр и аккуратно опускают верхнюю пленку). Посевы инкубируют при температуре (36 ± 2) *С в течение 18—24 ч.

Подсчет колоний по 8.2.1.2.

8.2.3    Проведение посева проб воды на месте отбора проб с последующей доставкой

в стационарную лабораторию

8.2.3.1    ПосевпробеодынаместеотборадляопределенияОМЧпроводятвсоответствиис8.2.1.2.

Посевы помещают в переносной термостат или термоконтейнере температурой внутри камеры не

ниже 30 °С и доставляют для дальнейшего анализа в стационарную лабораторию в срок не более 24 ч.

8 стационарной лаборатории посевы переносят в термостат при температуре (36 12) *С. Через 24 ч инкубации посевов проводят учет выросших колоний. При отсутствии роста колоний общее время инкубации посевов должно составлять 48 ч.

8.2.3.2    Подсчет и идентификацию обнаруженных микроорганизмов в посеве проб воды, учет, обработку проводят в стационарной лаборатории по 8.2.1.2.8.2.1.3.

8.2.3.3    Доставка посевов проб воды в стационарную лабораторию должна сопровождаться передачей акта отбора проб воды и документа, включающего информацию о процедуре посева: условия посева (температура и влажность воздуха), дата и время посева, фамилию, имя и отчество лица, проводившего отбор и посев проб воды.

8.3    Определение E.coli и колиформных бактерий

8.3.1    Показатели E.coli и колиформных бактерий определяют методом мембранной фильтрации в соответствии с ГОСТ 31955.

8.3.2    Для определения содержания колиформных бактерий и Е. coli может быть применен ускоренный метод с использованием хромогенных сред.

Метод позволяет опрвделитьсодвржание колиформных бактерий и бактерий Е. coli в пробе воды в течение промежутка времени от 18 до 24 ч без дальнейшей идентификации выросших колоний.

Определение содержания колиформных бактерий и бактерий Е. coli в пробе анализируемой воды проводят методом мембранной фильтрации по 8.3.1. используя в качестве дифференциальной питательной среды вместо среды Эндо илисредыстергитолом-7 и ТТХодну из хромогенных сред, например, хромокульт колиформ агар (см. Д.5 Приложения Д).

Инкубацию посевов проводят при температуре (36 ± 2) °С.

Хромогенные среды обеспечивают одновременное опредепение колиформных бактерий и Е. ooli в одном посеве. Для дифференциации колиформных бактерий и Е. coli использованы различия указанных видов бактерий по ферментативной активности. Колиформные бактерии имеют фермент р-галактозида-зу.а E.coli — помимо этого фермента обладают ферментом (Углюкуронидазой.

В качестве колиформных бактерий учитывают красные и красно-коричневые с окрашенным ореолом вокруг колонии. В качестве Е. coli учитывают колонии бактерий сине-фиолетового цвета.

На среде хромокульт колиформ агаре иные бактерии, за исключением бактерий Е. coli, обладающих ферментом р-глюкуронидаэой. образуют колонии светло-голубого цвета, которые при подсчете не учитывают.

Обработку и оформление результатов проводят по ГОСТ 31955 (раздел 9.10).

Примечание - Метод с использованием хроыокульт колиформ егере имеет такую же воспроизводимость реэультетое как при посеве не среды Эндо и тергитол-7 с TTX.

8.4 Определение энтерококков

8.4.1    Определение энтерококков методом мембранной фильтрации

8.4.1.1    Фильтруют 100 см3 пробы воды через мембранные фильтры с соблюдением требований, представленных в приложении Е. После фильтрования фильтры переносят, не переворачивая, на плотную агаризованную среду энтерококкагара (см. Д.9.1 приложения Д) или агариэованную плотную азидную среду Сланеца-Бертли (см. Д.9.2 приложения Д) и добиваются полного прилегания его к среде без образования пузырьковвоздуха. Чашки Петри способами помещают в термостат дном вверх иинкубиру-ют при температуре (36 ± 2) вС в течение 24—48 ч.

При отсутствии роста колоний инкубацию посевов продолжают до 48 ч.

После инкубации посевов учитывают колонии, характерные для энтерококков — выпуклые, с ровными краями, темно-малиновые, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным не четко оформленным центром и подсчитывают их число.

Очень мелкие (на л ределе видимости невооруженным глазом), плоские разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным малиновым центром и бесцветным ободком колонии не учитывают.

Регистрируют число колоний энтерококков или их отсутствие в журнале испытаний.

8.4.1.2    При необходимости подтверждают наличие энтерококков с помощью тест-систем для идентификации энтерококков (в соответствии с инструкцией производителя) или одним из следующих способов.

Пересевают по 2—3 колонии каждого типа:

• секторами на солевой агар с ТТХ (см. Д.9.3 приложения Д) и инкубируют при температуре (36 ± 2) *С в течение 24 ч. Энтерококки на указанной среде дают равномерный нежный рост на протяжении всего штриха. Иные бактерии на этой подтверждающей среде не растут или растут на платформе штриха:

- мембранный фильтрсвыросшими колониями стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят на поверхность желчь-эскулин-азидного агара, предварительно нагретого до 44 °С. и помещают в термостат на (44.0 ± 0,5) “С (см. Д.9.4 приложения Д). инкубируют в течение 2 ч. В течение этого времени эскулин гидролизируется энтерококками с образованием характерных продуктов, чтопроявляется окрашиванием типичных для кишечных энтерококков колоний от коричневого до черного цвета.

8.4.1.3    Подсчитывают число колоний энтерококков на фильтрах, где выросло менее 50—70 колоний. суммируют и определяют по формуле

(2)


Xsl_ioo

V

где X — число КОЕ энтерококков в 100 см3 исследуемой воды; а — число лодсчитанныхэнтерококкоевсумме;

V — объем воды, профильтрованный через фильтры, на которых велся учет.

В протоколе исследования выдают «Число КОЕ энтерококков в 100 см3 анализируемой пробы воды».

Приотсутствии в пробе анализируемой воды энтерококков влротокол испытаний вносят текст: «Не обнаружено КОЕ энтерококков в 100 см3 пробы анализируемой воды».

8.4.2    Ускоренные методы выявления энтерококков с использованием готовых

питательных сред на подложках

Подложкус питательной средой, разрешенной к применению в соответствии с 8.1.6. готовят к анализу в соответствии с технической документацией на подложку.

Пробы воды фильтруют в соответствии с приложением Е. Фильтры стерильным пинцетом накла-дывают на подложку и помещают в инкубатор или термостат.

Посевы инкубируют при температуре (36 ±2) ®С в течение 18—24 ч.

Идентификацию энтерококков среди выросших колоний проводят по морфологии, цвету колоний в соответствии с технической документацией на подложку (в зависимости от используемой питательной среды).

Обработка по 8.2.1.3.

8.4.3    Сигнальный метод определения энтерококков

Навеску питательной среды для определения энтерококков вносят в 100 см1 исследуемой воды и тщательно перемешиваютдополногорастаорения. Посевы инкубируютвтечвние 18—24 члри темпера» туре (36 ±2) *С.

Примечание — Допускаетсявсоответстеиисприлагеемойинструкцией производителя инкубирование посевов при температуре от 20 *С до 25 *С в течение 48 ч.

После инкубации посевов проводят учет результатов, при этом считают, что:

•    энтерококки отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение среды без изменения цвета:

•    бактерии обнаружены, если среда приобрела цвет, описанный в инструкции производителя во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен измениться.

8.5 Определение колифагов прямым методом

8.5.1    Общие положения

Показатель «Колифаги» предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды в отношении возможного вирусного загрязнения.

Метод основан на предварительном накоплении колифагов в среде обогащения на культуре E.colt и последующем выявлении зон лизиса (просветления) посева газоном E.coli на питательном агаре.

8.5.2    Подготовка тест — культуры E.coli K12F+ Str-r

На всех этапах исследования используют бактериальную взвесь, приготовленную следующим образом: культуру E.coli K12F+ Str-r засевают в пробирку на скошенный питательный агар. Через (1812) ч инкубации при температуре (36 ± 2) X производят смыв бактерий с косяка 5 см3 стерильного физиологического раствора и по стандарту мутности готовят взвесь E.coli в концентрации 109 бактериальных клеток в 1 см3.

Примечание — Допускается использование 4-часовой бульонной культуры E.coli К l2 F* Str-r. полученной при температуре инкубации (36 х 2) *С. для внесения в питательный агар, расплавленный и остуженный до (44.0 х 0.5) 'С. Концентрация 109 бактериальных клеток E.coli содержится в 2 см3 питательного бульона.

8.5.3    Выполнение анализа

8 исследуемую пробу воды объемом 100 см3 вносят 10 см310-кратного питательного бульона и 1 см3 подготовленного смыва тест-культуры или 2 см3 4-часовой бульонной культуры.

Для контроля культуры 0.1 см3 смыва бактерий E.coli (или 0.2 см3 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Исследуемую пробу воды (100 см3) и чашку Петри с контролем E.coli помещают в термостат при температуре (36 ± 2) *С на (18 ± 2)ч.

в зависимости от плотности используемого агара проводят посевы воды по 10 см3 на 10 чашек или по 20 см3 на 5 чашек. Для освобождения исследуемой воды от сопутствующей бактериальной флоры, ее обрабатывают хлороформом из расчета 1 см3 хлороформа на 10 см3 воды. Пробу тщательно встряхивают и отстаивают в течение 15 мин при комнатной температуре для осаждения хлороформа. На исследование берут воду над хлороформом. 8 питательный агар, расплавленный и остуженный до (44.0 ± 0.5) *С. добавляют смыв E.coli К, 2F* Str-r (см. 8.5.2) из расчета 1.0 см3 смыва на каждые 100 смагара, после чего перемешивают. Для контроля культуры E.coli на возможную контаминацию ее посторонними колифагами в одну чашку Петри вносят 10 см3 стерильной водопроводной воды, прогретой до температуры от 20 вС до 25 ®С. заливают 25 см3 приготовленного агара с E.coli K12F* Str-r и осторожно перемешивают.

и

Исследуемые объемы воды вносят в стерильные чашки Петри и заливают, слегка приоткрывая крышки, 25см3 смеси агара с кишечной палочкой. При посеве пробы воды объемом 100 см3 ее предвари* тельно нагревают до температуры (20—25) ®С.

Содержимое чашек осторожно перемешивают и оставляют при комнатной температуре до застывания. Чашки сэастывшим агаром помещают етермостат дном вверх и инкубируют при температуре (36 ± 2) *С в течение (18 ± 2) ч.

8.5.4 Учет результатов

Просмотр посевов осуществляется в проходящем свете.

При исследовании 100см3 воды (5чашекпо20 см3)подсчитываютисуммируютвсе бляшки, вырос* шие на чашках Петри.

Если посевная доза была меньше 100 см3, то число колифагов вычисляют по формуле

(3)


v _ а -ЮО

v

где а — сумма бляшек на чашках:

V — объем исследуемой воды.

При исследовании децинормальных разведений, число колифагов в 100 см3 воды вычисляют по

формуле


(4)

где а — сумма бляшек на чашке: р. — /*е разведение: п — количество р( разведений.

Результаты выражают в бляшкообраэующих единицах (БОЕ) на 100 см3 пробы воды. В контроль* ной чашке бляшки должны отсутствовать.

Предварительный учет результатов можно проводить через промежуток времени от 5 до 6 ч инку* бации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть выдан предварительный ответ о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет прямого посева проводится через (18 ±2) ч. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 см3 пробы воды.

Если отмечен сливной рост бляшек исчет затруднителен, то поданным прямого посева может быть выдан качественный результат: «Обнаружено в 100 см3 воды».

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

8.5.5 Постановка контролей

«Отрицательный контроль» — подтверждает отсутствие контаминации фагом питательных сред, лабораторной посуды, оборудования на этапах подготовки и проведения анализа, а также позволяет оценить способность тест*культуры E.coli давать равномерный газон.

«Отрицательным контролем» служит исследование стерильной водопроводной воды, проводимое аналогично анализируемой пробе воды. С этой целью, в зависимости от посевной дозы исследуемой воды, в стерильную чашку Петри вносят от 1 до 20 см3 стерильной водопроводной воды, заливают смесью мясо-пептонного агара с E.coli и инкубируют в течение 18—20 ч при температуре (38 ± 2) *С.

В случае обнаружения бляшек колифагов в чашках с «отрицательным» контролем результаты исследования всей серии проб воды не действительны.

Следует проверить стерильность лабораторного оборудования, посуды, питательных сред, а также повторить контрольный посев на лизогенностьтест-штамма E.coli К12 F *Str-r.

Для проверки культуры на лизогенность необходимо использовать новую пробирку с культурой, хранящейся на полужидком агаре. 1 см3 бактериальной взвеси помещают в стерильную чашку Петри и заливают расплавленным и остуженным до температуры в диапазоне от 45 *С до 49 ®С питательным агаром, инкубируют при температуре (36 ±2) ®С в течение (18 ± 2)ч.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Наличие зон лизиса в контрольном посеве свидетельствует о спонтанно проявившемся свойстве культуры продуцировать фаги или контаминации ее колифагом в процессе работы.

Использование в работе лизогенной культуры запрещается. Необходимо получить новую лиофи-лизированную культуру.

8.5.6    Методика подтверждения фаговой природы лизиса

С целью подтверждения фаговой природы лизиса бактериологической петлей извлекают участок агара с бляшкой колифага. вызывающей сомнение, помещают его в 5 см3 питательного бульона, куда добавляют каплю тест-культуры E.coli Kl2F* Str-r и инкубируют при (36 ± 2) *С в течение (18 ±2)ч. Полученную культуру обрабатывают хлороформом или фильтруют через мембранный фильтр и исследуют на наличие фага. Высев осуществляют петлей или пипеткой на поверхность питательного агара содержащего взвесь E.coli. чашки инкубируют в термостате при (36 ± 2) *С в течение (18 12) ч. Наличие зон лизиса на поверхности агара расценивается как подтверждение наличия фага.

8.6    Определение Р. aeruginosa

8.6.1    Метод 1

При обнаружении на мембранном фильтре, помещенном на среду Эндо, при посеве пробы воды на колиформные бактерии и (или) E.coli роста изолированных оксидаэоположительных бактерий проводят определение показателя Р. aeruginosa и устанавливают «наличие-отсутствие» этих бактерий в исследованной пробе воды.

Для подтверждения показателя Р. aeruginosa снимают с фильтра 2—3 изолированные колонии и производят посев на чашку Петри оо средой «Блеск» путем укола, затем культуру растирают вокруг укола ввиде бляшки диаметром от2.0 до 2.5см. После чего посевы инкубируют втермостате при температуре (3612)°Св течение (24 ± 2) ч.

8 случае сливного или сплошного роста оксидазоположительных бактерий проводят рассев на чашки Петри с питательным агаром с целью получения чистой культуры, посевы инкубируют в термостате при температуре (36 ± 2) *С в течение (24 ± 2) ч. После чего повторяют процедуру посева на среду «Блеск».

При наличии роста на среде «Блеск» темно-малиновых колоний с золотыми вкраплениями, имеющих специфический сладковатый цветочный запах, и подтверждении наличия диффундирующего пигмента на скошенном питательном агаре отмечают наличие Р. aeruginosa в исследуемой пробе воды.

8.6.2    Метод 2

Обнаружение Р. aeruginosa в пробе воды состоит из трех этапов:

•    накопление в жидкой среде обогащения;

•    выделение Р. aeruginosa на плотной селективно-дифференциальной среде;

•    идентификация Р. aeruginosa с использованием ограниченного набора наиболее надежных тестов.

Исследуют пробу воды объемом 1000 см3. В качестве среды накопления используют минеральную среду Бонде с кристаллическим фиолетовым.

В две стерильные емкости мерно наливают по 50 см3 концентрата среды Бонде и по 2.5 см3 0.01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового, после чего в каждую емкость наливают по 500 см3 пробы воды.

Инкубацию посевов осуществляют при температуре (36 ±2) *С в течение промежутка времени от 24 до 48 ч. Через 24 ч посевы просматривают. При отсутствии пленки и помутнения среды посевы инкубируют до48ч. Отсутствие ростав среде накоплениячереэ 48 ч позволяет еыдатьотрицательныйответ.

При помутнении среды «Бонде» и образовании на поверхности тонкой прозрачной пленки, поднимающейся по стенке емкости, проводят пересев из среды обогащения на сектора плотной среды «Блеск» или цетримидный агар или азидной среды. Емкость перед посевом не встряхивают. Бактериологической петлей забирают пленку с поверхности среды и производят посев уколом ближе к краю чашки Петри для снятия излишков посевного материала, потом остаток материала распределяют в виде бляшки диаметром от2.0до2.5 см. далее посев проводят частыми многочисленными штрихами по поверхности среды для получения максимального количества изолированных колоний. Посевы помещают в термостат при (36 i 2) *С на время от 24 до 48 ч с предварительным просмотром через 24 ч инкубации.

На цетримидком агаре колонии Р. aeruginosa образуют желтовато-зеленый пигмент (пиоциакин). флуоресцирующий в ультрафиолетовом свете (УФ-сеете). При нечетком результате проводят идентификацию по дополнительным тестам.

На среде «Блеск» колонии Р. aeruginosa сплошь покрыты золотистым налетом либо содержат многочисленные золотистые вкрапления. Иногда вокруг колонии отмечается просветление или светло-красное окрашивание среды. Часто колонии Р. aeruginosa принимают веретенообразную форму, как бы распространяясь по вдавлению в агаре от штриха петлей. Появление блеска можно наблюдать уже через (21 ± 1)ч инкубации при температуре (36 ± 2) *С. но максимальное проявление блеска достигается через (43 ± 1) ч. Среда «Блеск» является ингибиторной для всех грамположительных и большинства грамотрицателькых бактерий и лишь немногие ТТХ-резистентные энтеробактерии могут развиваться на среде «Блеск» е виде темно-красных разного размера колоний, лишенных блеска, или выпуклых блестящих ярко-красных колоний.

При наличии множественного роста колоний с золотистым блеском достаточно отобрать для последующего исследования 1—2 изолированные наиболее типичные колонии. При росте единичных колоний с блеском или с золотистыми вкраплениями следует отбирать все типичные колонии, но не более 5—6.

Примечание — В соответствии со стандартами ИСО допускается определение Р. aeruginosa методом мембранной фильтрации с помещением фильтров с посевами на цетримидный агар.

8.6.3 Подтверждение обнаружения Р. aeruginosa

Для подтверждения обнаружения Р. aeruginosa наиболее типичные колонии отсевают на питательный агар и идентифицируют на тест-системе «неферм-тест».

По методу 2 Р. aeruginosa не должны содержаться в 1000 см3 исследуемой воды.

8.7 Определение патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae

8.7.1    Метод 1. Посев проб воды для определения патогенных бактерий семейства

Enterobacteriaceae, в том числе сальмонелл

Для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae исследуют 1000 см3 воды, засевая по 500 см3 в две среды накопления: магниевую среду — для определения сальмонелл (см. Д. 12 приложения Д) и селенитовый бульон —для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae. в том числе сальмонелл (см. Д.15. приложения Д) или другие апробированные и разрешенные к применению для этих целей среды накопления.

При посеве пробы воды в магниевую среду в стерильную емкость с навесками по Д. 12 (приложение Д) прибавляют 500 см3 исследуемой пробы воды, после чего добавляют дрожжевой экстракт и бриллиантовый зеленый.

При посеве пробы воды в селенитовый бульон для определения патогенных энтеробактерий к 500 см3 исследуемой воды добавляют 500 см3 селенитового бульона двойной концентрации (см. Д. 15. приложения Д).

8.7.2    Метод 2. Посев проб воды для определения сальмонелл методом мембранной

фильтрации

Для посева двух объемов по 500 см3 отбирают 1000 см3 воды. Каждый объем профильтровывают через один или несколько мембранных фильтров. Затем эти фильтры помещают в любые две из перечисленных сред накопления объемом 50 и 100 см3. При затрудненной фильтрации большого объема пробы следует на фильтр с диаметром пор 0.45 мкм наложить фильтр с большим диаметром пор для задержания взвешенных частиц с последующим помещением в питательную среду накопления обоих фильтров.

8.7.3    Проведение анализа

Посевы воды в средах накопления инкубируют при температуре (36 ± 2) вС в течение промежутка времени от 18 до 20ч. При отсутствии роста втечение 24 ч пробы инкубируют48ч. При обнаружении роста (помутнения среды) производят высев бактериологической петлей на две чашки с висмут-сульфитным агаром (см. Д. 14 приложения Д) и две чашки Эндо (см. Д.4 приложения Д).

Рассев производят одним из методов получения изолированных колоний. Чашки Петри спосееами инкубируют при температуре (36 ± 2) *С в течение промежутка времени от 18 до 24 ч.

На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл круглые, черные, с металлическим блеском, с сероватым металлическим ободком вокруг колоний, так называемое «зеркало», зеленые с темным центром и без него, вызывающие потемнение среды под колонией до черного цвета.

Выросшие на среде Эндо небольшие колонии бледно-розовые, прозрачныес ровными или неровными краями идентифицируют на принадлежность к патогенным энтеробактериям. В отличие от патогенных бактерий. E.coti и колиформные бактерии образуют круглые, выпуклые, гладкие, малинового цвета колонии с металлическим блеском и без него.

При обнаружении подозрительных на сальмонеллы (Shigella или до.) колонии отсевают по 4—5 каждого вида в пробирки с комбинированными средами для определения биохимических свойств, подтверждающих принадлежность к родам Salmonella (Shigella или до.) типа Клиглера или Олькеницкого.

Окончательное определение биохимических свойств проводят по тест-системам, серологических свойств сероваров — по инструкциям производителя сывороток, разрешенных к применению в соотее-тстеиис8.1.6.

8.8 Интерпретация полученных результатов по санитарно-микробиологическим

показателям

8.8.1    Результат испытаний системы водоснабжения считается положительным, если санитарно-микробиологические показатели соответствуют гигиеническим нормативам и количественный и качественный состав микроорганизмов в пробах исходной воды идентичен количественному и качественному составу микроорганизмов в пробах воды, отобранных из системы водоснабжения объекта испытаний.

8.8.2    В случае, когда в пробах исходной воды и воды из системы водоснабжения объекта испытаний обнаруживаются идентичные по своему видовому составу микроорганизмы, но в системе водоснабжения объекта испытаний их оказывается значительно больше, значит в системе происходят процессы размножения микроорганизмов. Об интенсивности процессов размножения можно судить исходя из следующих условий испытаний:

•    если система была подготовлена (осуществлена дезинфекция, промывка и др.. см. приложение А) и пробы воды отобраны в соответствии с 5.2.2. но при этом наблюдается значительное увеличение количества микроорганизмов, можно сделать вывод, что система способствует быстрому процессу размножения и способна в короткие сроки подвергнуться биообрастанию;

•    если пробы исходной воды отличаются от проб воды из системы водоснабжения объекта испытаний по видовому составу микроорганизмов, и в пробах воды из системы водоснабжения обнаруживаются индикаторные и (или) потенциально-патогенные и (или) патогенные микроорганизмы, значит система загрязнена и должна подвергнуться дезинфекции.

9 Методы санитарно-химического анализа

9.1    Определяемые показатели и методы определения

9.1.1    При гигиенической оценке системы водоснабжения объекта испытаний по санитарно-химическим показателям определяют химический состав и свойства воды. Погрешность определения показателей состава и свойств воды не должна превышать норм, установленных ГОСТ 27384.

Номенклатура определяемых санитарно-химических показателей приведена в таблице 1.

Таблица 1

Группа определяемых показателей

Наименование показатели

Обобщенные показатели

водородный показатель

Общая минерализация (сухой остаток)

Жесткость общая

Окисляемость пермвнганатнвя

Нефтепродукты (суммарно)

Поверхностно-активные вещества (ПА8) анионо-активные

Фенольный индекс

Показатели состава

Азот аммонийный (NHJ)

Алюминий (At3*)

Железо (Fe. суммарно)

Кобальт (Со. суммарно)

Кадмий (Cd. суммарно)

Марганец (Мл. суммарно)

Медь (Си. суммарно)

Молибден (Мо. суммарно)

Мышьяк (Аз. суммарно)

Никель (Ni, суммарно)

Окончание таблицы 1

Группа определяемых показателей

Наименование показателя

Показатели состава

Нитраты (по No j)

Нитриты (NOj)

Полифосфаты (по РО|~)

Свинец (РЬ. суммарно)

Сульфаты (SO")

Фториды (F')

Формальдегид

Хлориды

Хром

Цинк (2п2)

Органолептические показатели

Запах

Привкус

Цветность

Мутность

9.1.2    Для определения показателей, приведенных в таблице 1, применяют межгосударственные и национальные стандарты на определение конкретного показателя в воде.

Приотсутствии межгосударственных (национальных) стандартов допускается использовать наци» ональные методики на определение конкретных показателей, стандартизованные и аттестованные в установленном национальным законодательством порядке, имеющие характеристики погрешности, не превышающие норм погрешности, установленных в ГОСТ 27384.

9.2    Результаты испытаний по санитарно-химическим показателям

9.2.1    Определяют значения всех указанных в таблице 1 показателей в каждой отобранной пробе воды в соответствии со стандартами или методиками по 9.1.2.

За результат принимается содержание контролируемого показателя без учета значений погреш» ности. При этом погрешность должна соответствовать нормам, установленным ГОСТ 27384.

9.2.2    Результат испытаний системы водоснабжения считается положительным, если количественный и качественный состав определяемых показателей в пробах исходной воды идентичен количественному и качественному составу этих показателей в пробах воды, отобранных из системы водоснабжения объекта испытаний, и значения этих показателей соответствуют гигиеническим нормативам.

9.2.3    Если в пробах воды из системы водоснабжения объекта испытаний определяются показатели химического состава, не обнаруженные в исходной воде, и (или) их значения больше соответствующих значений показателей в исходной воде на величину, превышающую погрешность методов определения соответствующих показателей, делается вывод о том. что система водоснабжения объекта испытаний ухудшает качество исходной воды, в частности по причинам, связанным с процессами деструкции материалов в системе.

9.2.4    Если санитарно-химические показатели в исходной воде (и. соответственно, в пробах воды из системы водоснабжения) не соответствуют санитарно-гигиеническим нормативам, результат считается недействительным.

10    Оформление результатов

Результаты испытаний (анализа) оформляют а виде протокола, который должен содержать следу* ющую информацию:

•    основание для проведения испытаний (номер договора, дата заключения, с кем заключен, или номер иного документа и его реквизиты);

•    наименование объекта испытаний, его заводской (бортовой) номер, дата выпуска:

•    наименование завода-изготовителя объекта испытаний:

•    вид и цель испытаний;

•    место и дата проведения отбора, проведения анализа;

•    перечень средств измерений, испытательного оборудования, использованных для проведения испытаний (наименование. завод-изготовитель. заводской или инвентарный номер, сведения о поверке или иные сведения о выполнении требований по 7.1);

•    условия проведения отбора проб воды, их хранения (транспортировки):

•    наименования определяемых при испытаниях показателей, нормативные значения показателей и сведения о документе, содержащем эти значения (требования);

•    обозначение и (или) наименование документа, содержащего методику проведения испытаний;

•    расположение (схема) точек отбора проб воды в помещениях объекта испытаний;

•    результаты гигиенической оценки системы водоснабжения подвижного состава с указанием фактических значений показателей, полученных в результате микробиологического и санитарно-химического анализа отобранных проб воды;

•    наименование организации, проводящей испытания:

- дату составления протокола.

11    Требования безопасности и охраны труда

11.1    К проведению испытаний допускают работников, прошедших обучение, инструктажи и про* верку знаний требований охраны труда. Порядок и виды обучения, а также организацию инструктажей участников испытаний осуществляют в соответствии с ГОСТ 12.0.004.-

8о время отбора проб работники должны соблюдать требования охраны и безопасности труда и правила внутреннего трудового распорядка, установленные в организации, на территории которой проводится отбор проб.

11.2    При проведении отбора проб обеспечивают освещенность места и средств отбора не менее 200 лк.

11.3    Анализ воды на наличие возбудителей инфекционных заболеваний имеют право проводить испытательные центры (лаборатории), имеющие лицензию на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, и аккредитованные на проведение санитарно-микробиологических исследований воды.-

Анализ воды по санитарно-химическим показателям проводят испытательные центры (лаборатории). аккредитованные на проведение исследований по методикам определения количественного химического анализа воды.

Подготовка системы водоснабжения

А.1 Дезинфекция и промывка

А.1.1 вся воре, имеющаяся в системе водоснабжения объекта испытаний, должна быть слита.

Дезинфекцию и промывку системы водоснабжения объекте испытаний проводят, используя физические или химические методы воздействия.

Физические методы основаны не обработке системы текучим паром при температуре 100 *С в течение промежутка времени от 30 до 40 мин или использовании иных технологий, разрешенных для применения в системе хозяйственно-питьевого водоснабжения.

Химические методы основаны на обработке системы дезинфицирующими средствами, разрешенными для дезинфекции трубопроводов систем хозяйственно-питьевого водоснабжения и систем водоснабжения железнодорожного подвижного состава.

А.1.2 Дезинфекцию паром следует осуществлять в следующем порядке.

Провести пропарку в течение промежутка времени от 30 до 40 мин при закрытых кранах. После пропарки открыть все краны, слить конденсат. Заправить систему чистой водопроводной водой при условии, что все краны в вагоне должны быть открыты. После заправки слить всю воду. Допускается через 20 мин после начала слива открыть патрубки для быстрого спуска воды.

Заполнить подготовленную систему водоснабжения чистой водопроводной водой, при этом в начале заполнения водопроводные краны в течение 5—10 мин должны быть открыты. После заполнения водой система готова к проведению испытаний по отбору проб воды (или эксплуатации).

А.1.3 Дезинфекцию (при использовании дезинфицирующих средств) нужно осуществлять средствами, разрешенными для профилактической дезинфекции систем питьевого водоснабжения и систем водоснабжения желез-нодорожного подвижного состава, на основании разрешительных документов е следующем порядке.

На всех водопроводных кранах во время дезинфекции и промывки системы водоснабжения прикрепить таблички «Внимание — дезинфекция! Водой не пользоваться!».

Подготовить чистые емкости, соответствующие объему заправочных баков системы водоснабжения вагоне, заполнить их на 1/3 водой, влить необходимое количество дезинфицирующего средства и заполнить емкость до необходимого объема водой.

Заправить систему водоснабжения дезинфицирующим раствором из емкости через шлвнги при помощи насоса.

Открыть все краны вввгонеи слить воду в течение 5—Юмин до появления дезинфицирующего средства (слабый запах, характерный для используемого средства). Подтвердить наличие средства и необходимую концентрацию при помощи индикаторных тест-полосок, прилагающихся к средству, или прибором-индикатором.

Закрыть все краны.

Выдержать раствор дезинфицирующего средства в системе водоснабжения в соответствии с установленными в Инструкции по применению дезинфицирующего средства режимами дезинфекции, но не менее 2 ч.

Открыть все краны и спускать дезинфицирующий раствор в течение 15—20 мин. после чего допускается дополнительно открыть патрубки для быстрого спуска воды.

Промыть систему водоснабжения чистой водой согласно Инструкции по применению дезинфицирующего средства, без экспозиции слить воду в канализацию, при условии, что все краны в вагоне открыты. Подтвердить отсутствие дезинфицирующего средства а воде при помощи индикаторных тест-полосок или прибором-индикатором.

После промывки системы водоснабжения снять таблички «Внимание — дезинфекция! водой не пользоваться!».

в журнале регистрации дезинфекционных мероприятий систем водоснабжения провести соответствующую запись.

Шланги, через которые заправляется система водоснабжения объекта испытаний, должны дезинфицироваться тем же средством и в тех же концентрациях, что и система водоснабжения, с установленной на железнодорожном транспорте периодичностью.

Примечание — При необходимости возможно осуществить оценку эффективности дезинфекции системы водоснабжения объекта испытаний с привлечением лвборатории. имеющей лицензию на осуществление деятельности. связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, и аккредитованный (аттестованный)на проведение санитарно-микробиологмческих исследований воды.

А.1.4 Работы ло проведению дезинфекционных мероприятий проводят с выполнением требований безопасности. указанных а Инструкции по применению используемого дезинфицирующего средства.

Дезинфицирующее средство необходимо хранить плотно закрытым, в сухом прохладном, хорошо проветриваемом помещении, избегать попадания прямых солнечных лучей, отдельно от продуктов питания, лекарственных препаратов, а местах, недоступных посторонним лицам, держать вдали от взрывоопасного материала.

Приготовление рабочих растворов из концентрата дезинфицирующего средства рекомендуется проводить в помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией, или на открытом воздухе, в отсутствие посторонних лиц. с защитой органов дыхания (респираторами типа РЛГ-67 поГОСТ 12.4.004 ипи РУ-бОм по ГОСТ 17269 с патроном марки А или в), кожи рук (резиновыми перчатками по ГОСТ 20010). при оснащении индивидуальными средствами защиты глвз (герметичные очки по ГОСТ 12.4.263), спецодеждой.

Следует избегать попадания средства в глазе и на кожу.

При работе со средством необходимо соблюдать правила личной гигиены. Запрещается курить, пить, принимать пищу. После работы лицо и руки следует вымыть водой с мылом.

Проведение профилактической дезинфекции систем водоснабжения проводят в присутствии людей без средств защиты органов дыхания и глаз.

Все работы с рабочими растворами дезинфицирующего средства должны проводиться с защитой кожи рук резиновыми перчатками.

К проведению дезинфекции систем водоснабжения объекта испытания допускают работников, прошедших инструктажи и проверку знаний по проведению дезинфекционных мероприятий.

А.2 Порядокзапраекисистемы водоснабжения

А.2.1 Заправка системы водоснабжения объекта испытания водой осуществляется из еодозвлравочных колонок, предназначенных для заправки систем водоснабжения железнодорожного подвижного состава.

А.2.2 Систему водоснабжения после дезинфекции и промывки заправляют водой из централизованной системы питьевого водоснабжения, качество которой соответствует требованиям национального законодательства. От начала заправки в течение 5—10 мин все краны в вагоне должны быть открыты, после выдержанной экспозиции краны закрывают.

Примечания

1    Заправка водой осуществляется сразу после дезинфекции и промывки, допускаемое время отсрочки заправки не более 18 ч.

2    Установки для доочистки и дообеззврвживения воды, используемые при заправке системы водоснабжения объекта испытаний, должны иметь разрешительные документы к применению, выданные органами исполнительной власти.

Акт отбора проб

от «    «_20_г.

Наименование и адрес изготовителя объекте испытаний:

Наименование продукции:во^а из системы водоснабжения_(

___на coo/neerr.cmeue требованиям НД

наименование объекта испытаний

Объектиспытаниймоделиа_Зае№_ Дата выработки; _

Дата отбора проб:_ Время отбора:_

Наименование места проведения испытаний:_

Проведение отбора проб: отбор проведен а соответствии с ГОСТ 31861—2012: ГОСТ 31862—2012.

ГОСТ 31942—2012. ГОСТ__сотрудниками

ссыпка на настоящий стандарт

наименование учреждения, проводившего испытания

в присутствии представителей изготовителя_

Количество отобранных проб, номери ыесто(точки)отбора:_

Дополнительные сведения

Цельотборапроб:

Подписи исполнителей:

От «Организации, проводившей испытания»

От нОоганизаиии производителя»

Количество проб, емкости, характерупаковки

Условия транспортировки_

Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование, лабораторная посуда, расходные материалы, реактивы, питательные среды, эталонные микроорганизмы'

8.1 Перечень основных средств измерений, испытательного и вспомогательного оборудования для микробиологической лаборатории

Термостат с температурным режимом (36 ± 2) 'С.

Термостат с температурным режимом (44.0 х 0.S) С.

Водяная баня или термостат с температурным режимом в диапазоне от 46 С до 49 С (для питательных

сред).

Прибор для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и устройство для создания разрежения в диапазоне от 0.05 до 0.10 МПа.

Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания не менее 10ОО г (с пределами допускаемой погрешности ±0.1 г).

Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания не менее 200 г(с пределами допускаемой погрешности >0.02 г).

Весы торсионные с диапазоном измерений от 0 до 500 мг.

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 'С до 50 С с ценой деления шкалы 0.5 С.

Термометр ртутный с диапазоном измерения отО С до 200 С сценой деления шкалы 1 С.

Термометр спиртовой с диапазоном измерения от минус 50 ‘С до плюс 50 'С с ценой деления шкалы 1 'С. PH-метр с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH. с пределами допускаемой погрешности ±0,01 ед. pH. Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды по ГОСТ 6709.

Стерилизатор суховоздушный, с температурным режимом (160 х 5) С.

Стерилизатор паровой, с рабочим давлением от 0 до 2.5 кгс/см3 по ГОСТ 17726.

Холодильники бытовые электрические с температурой в камере (5 ± 1) 'С.

Холодильник глубокого замораживания (минус 20 ‘С).

Вытяжной шкаф.

Нагревательный прибор для варки питательных сред, либо магнитные мешалки с подогревом до 300 С.

Прибор для счета колоний

Лупа с двукратным увеличением по ГОСТ 25706.

Дозаторы для разлива жидких питательных сред и растворов.

Дозаторы автоматические бактериологические.

Облучатель бактерицидный.

Оптический стандарт мутности на 10 ед.

Микроскоп профессиональный биологический (с диапазоном увеличения от 40 до 2000. объективами 4х. 10х. 40х.100х).

Часы сигнальные или песочные.

В.2 Посуда лабораторная

Пипетки вместимостью 1.2.5,10 см3 с ценой деления 0.1 мл (многоразового или одноразового использования^ ГОСТ 29227.

Пробирки бактериологические (многоразового или одноразового использования) по ГОСТ 25336.

Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го клвсса точности вместимостью 100. 250. 500, 1000 мл по ГОСТ 1770.

Чашки Петри бактериологические одноразовые или стеклянные многократного применения по ГОСТ 23932. Воронки стеклянные по ГОСТ 25336.

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Стекла покровные по ГОСТ 6672.

В.З Расходные материалы

Мембранные фильтры для микробиологических целей с диаметром пор не более 0.45 мкм и размером диска 35 или 47 мм или другие фильтрующие мембраны с аналогичной способностью фильтрации.

Индикаторы для определения pH в диапазоне 6—8 с интервалом определения 0.2.

Петли бактериологические.

Пинцеты для работы с мембранными фильтрами по ГОСТ 21241.

Штативы для пробирок.

Емкости с крышкой из нержавеющей стали или эмалированные для стерилизации мембранных фильтров методом кипячения.

Емкости из нержавеющей степи или эмалированные для приготовления питательных сред.

Горелки газовые, спиртовые стеклянные или металлические с подставкой по ГОСТ 25336.

Пробки и колпачки различных размеров: силиконовые или иные, выдерживающие стерилизацию сухим жвром или автоклавированием.

Вата хлопковая медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Меряя медицинская по ГОСТ 9412.

Бумага фильтровальная лабораторная ГОСТ 12026.

Маркеры водостойкие.

Лейкопластырь.

В.4 Реактивы

Бромтимоловый синий.

Кислота соляная по ГОСТ 3116.-

Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) 5-еодный по ГОСТ 27068.-Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрий гидрат окиси по ГОСТ 4326.

Спирт этиловый ректификованный медицинский по ГОСТ 5962.

Спирт этиловый технический по ГОСТ 16300.

Глюкоза по ГОСТ по 6038.

«•нафтол.

Розоловая кислота.

2.-Э.-5 — трифенилтетразолий хлорид (ТТХ).-Фуксин основной.-Хлороформ по ГОСТ 20015.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.

Калий фосфорнокислый деузвмещенный по ГОСТ 2493.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156.

Натрий углекислый по ГОСТ 83.

Натрий фосфорнокислый деузвмещенный безводный по ГОСТ 11773.

Натрий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 245.

Нвтрий лимоннокислый трехзвмещенный по ГОСТ 22280.

Натрий аммоний фосфорнокислый по ГОСТ 4170.

Нвтрияазид.

Фенол.

Бриллиантовый зеленый.

Келий теллуристокислый.

Кислоте ортофосфорная по ГОСТ 6552.

Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209.

Мвгний сернокислый (сульфат магния) по ГОСТ 4523.

Пвра-диметиламинобензвльдегид.

Кальций углекислый по ГОСТ 4530.

Йод кристаллический поГОСТ 4159.

Калий йодистый по ГОСТ 4232.

Триптофан.

Фуксин кислый.

Тетратионат калия.

Кристаллический фиолетовый водорастворимый.

Соли желчи.

Казеин трипсиновый ферментации по ГОСТ 17626.

L-триптофан.

Дрожжевой экстракт.

Бромтимоловый синий.

Триптон — желчный агар (ТЖА).

Триптон — соевый агар неселективный (ТСА)

Гептадецилсульфат натрия (тергигол).

Растворы для разведений.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709..

8$ Питательные среды для микробиологической лаборатории Питательная среда для выделения энтеробактерий, сухая (типе Эндо).

Селективная дифференциальная лактозная средастергитолом 7 по ГОСТ 31955. Хромокультколиформагар по ГОСТ 31955.

Агар питательный сухой по ГОСТ 17206.

Сухой препарат с индикатором ВР и лактозой или среда Гисса с лактозой.

Сухой препарат с индикатором ВР и глюкозой или среда Гисса с глюкозой.

Сухой питательный бульон.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Агар сэозин-метиленоаым синим, сухой (среде Левина).

Магниевая среда.

Селенитовый бульон.

Висмут-сульфит агар.

Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий (агар Клиглера).

Тест-системы для идентификации бактерий.

Индикаторные системы для проведения оксидвзного теста (диски или полоски).

Реактив или индикатор для нндольного теста.

Реактив Ковача.

Сыворотки агглютинирующие адсорбированные сальмонеллвзные О и Н (сухие).

Сыворотки агглютинирующие адсорбированные поливалентные к сальмонеллам.

Молоко обезжиренное.

Антибиотики: бензилпенициллин натриевая соль, сульфат стрептомицина.

В.6 Эталонные микроорганизмы

Штамм Escnehchia coll 675 или 1257. один изшгвмыов Pseudomonas aeruginosa 10145 АТСС или Pseudomonas fluorescens 948 АТСС'.

Контрольный колифаг MS-2 штамм 8КПМ PH 150S. штамм ВКПМ-3254 E.coli К13 F* Slr-r.

Постановка оксидазного теста

Г.1 Для подтверждения наличия в пробе воды колиформных бактерий выполняют оксидазный тест одним из следующих способов.

Г.1.1 Способ 1

В качестве реактива для оксидазного теста используют тетраметил-л-фенилендиамин гидрохлорид.

Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями (см. 8.3) с питательной среды пинцетом переносят на диск фильтровальной бумаги немного большего диаметра, чем мембранный фильтр, обильно смоченный реактивом для определения оксидвзной активности — тетраметил-п-фвнилендивмик гидрохлоридом. Оксидазный тест считают положительным, если в течение 1—4 мин появляется окрашивание колоний фиолетово-коричневого цвета. 8 случае необходимости дальнейшей идентификации изолированных оксидвэоотрицательных бактерий, пересев колоний на другие дифференциальные среды можно проводить непосредственно с мембранного фильтра, время пересева не ограничено.

Г.1.2 Способ 2

в качестве реактива для оксидазного теста используют диметил-п-фенилендиамин с и-нафтолом

Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями (см. 8.3) с питательной среды пинцетом переносят на кружок фильтровальной бумаги немногобольшего диаметра, чем мембранный фильтр, обильносмоченный реактивом диметил-п-фенилендивмином солянокислым для определения оксидвзной активности. Оксидазный тест считают положительным, если появляется окрашивание колоний в синий цвет.

После появления первых признаков положительного теста, но не позднее, чем через 3—4 мин. мембранный фильтр переносят обратно не питательную среду. В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидвзо-отрица тельных бактерий пересев колоний на дифференциальные среды проводят непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на питательной среде. Посев целесообразно проводить не сразу после определения оксидвзной активности, в после выдерживания на питательной среде свыше б мин.

Г.1.3 Способ 3

Тест проводят с использованием готовыхк употреблению дисков или полосокОХ1-тест, разрешенных к применению в соответствии св.1.6. в соответствии с инструкциями по их применению, разработанными производителем.

Приготовление питательных сред, растворов, реактивов

Д.1 Общие положения

Сухие питательные среды хранят а сухих проветриваемых помещениях, а темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по ГОСТ 6709.

Питательные среды готовят а посуде из инертного материала.

Учитывая возможное изменение pH питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный контроль pH проводят из контрольного флакона с готовой средой при температуре 25 *С с использованием индикаторных полосок или потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода.

После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре. При необходимости розлива в чашки Петри среды охлаждают до температуры (50—60) *С.

Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

Д.2 Питательный бульон

Д.2.1 Питательный бульон готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

Д.2.2 Питательный бульон (десятикратный) для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной на этикетке.

Д.З Питательный агар

Д.3.1 Питательный агар готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

Д.3.2 Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от рецептуры приготовления (см. ДЗ приложения Д).

Д.3.3 Питательный агар запрещается выдерживать а расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

Д.3.4 Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (Зг) растворить при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды. Довести pH до 7.0—7.2. разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 *С в течение 15 мин.

Д.3.5 Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 см3 питательного агара, приготовленного по стандартной рецептуре. В стерильных условиях на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 см3. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (47 i 2) X. вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0.1 см3 на 10 см3 питательного агара. Разливвютв пробирки для приготовления скошенного агара.

Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

Д.4 Фуксин-сульфитная среда Эндо

Д.4.1 Основная модификация

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы елвги. чашки перед посевом необходимо подсушить в термостате. Срок хрвнениячвшексосредой— не более 2—Э сут в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

Д.4.2 Повышение дифференцирующих свойств среды

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (66—70) *С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 см3 среды 0.2 см3 5 %-ного спиртового раствора основного фуксине. Срок хранения раствора фуксина — не более 1 мес.

Д.4.3 Модификация среды с добавлением розоловой кислоты

В случаях, когда мембранные фильтры зарастают посторонней микрофлорой, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 см3 среды Эндо 0.2 см3 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения рвствора розоловой кислоты — не более 1 мес.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

Д.5 Приготовление хромокультколиформ агара для ускоренного одновременного определения Е. coll и колиформных бактерий в одном посеве

Агар готовят из сухого препарата, разрешенного к применению по 6.1 .в. по способу, указанному производителем.

Нагревают навеску агара на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения частиц в течение 3S мин. Не допускается автоклавировать и перегревать.

Готовую сред у охлаждают до температуры (45— 50} *С и разливают в чашки Петри.

Срок хранения питательной среды при температуре от 2 *С до8 *С в защищенном отсвета месте — не более 21 сут.

Для предотвращения от высыхания чашки со средой рекомендуется поместить в пластиковые мешки.

Готовая среда должна иметь желтоватый цвет.

Д.6 Лактозо-лептонная среда

Ю гпептонв. 5 г натрия хлористого. S г лактозы растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают pH 7.4—7.6. рвзливают по 10 см3в пробирки, стерилизуют при (112 г 2)*С 12мин

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз. разливают по 1 смэв пробирки и по 10 см3 во флаконы.

Д.7 Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа

Д.7.1 Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата

Готовят по способу, указанному на зтикетке.

Срок хранения — не более двух недель при комнатной температуре.

Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается по уколу или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды «карманы* — потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

Д.7.2 Полужидкая среда с лактозой

Готовят при отсутствии сухого препарата.

8 1 п дистиллированной воды растворяют 10 г пептона. 5 г натрия хлористого. (4—5) г агар-агара, доводят до кипения. устанввливаюгрН 7.2—7.4, добавляют 1смэ 1.64-ного спиртового растворе бром тимолового си него. Стерилизуют при температуре (120 ± 2) *С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на высоту от 3 до 5 см истерилизуютлри{112 х 2) *С 12 мин. Срок хранения — не более двух недель при комнатной температуре.

Готовая среда имеет зеленый цвете синеватым оттенком. При образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

Д.8 Реактивы для оксидазного теста

Д.8.1 Вариант 1

1 4-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят непосредственно перед использованием.

Д.8.2 Вариант2

Реактив №1:1 4-ный спиртовой раствор и-нафтола.

Реактив № 2:1 %-ный водный раствор фвнкпендиаминового соединения.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками:

1 — до одного месяца. 2 — до одной недели. Перед употреблением ктрем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.

Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста.

Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать на эталонных тест-микрооргвнизмах. дающих положительную (Р. aeruginosa или Р. Ииогезсепв) и отрицательную оксидазную ревкцию(Е.соИ).

Д.9 Приготовление энтерококкагара

Д.9.1 Энтерококк агар готовят из сухого препарата по способу, указанному производителем.

При приготовлении следует обратить внимание на следующие приемы, необходимые для предохранения от разрушения ТТХ при нагревании:

•    навеску питательной среды следует предварительно замочить на время от 0.S до 1 ч а небольшом объеме дистиллированной воды:

•    раствор питательной среды довести до кипения и кипятить при постоянном помешивании а течение не более 1 мин до полного расплавления агара, строго соблюдая время кипячения:

•    раствор расплавленного агара быстро охладить до температуры от 45 'С до 50 'С следующим способом: емкость, в которой готовили энтерококкагар. поместить в сосуд с водой температурой от 45 *С до 50 “С. постоянно перемешивая питательную среду до охлаждения: затем разлить в чашки Петри до застывания. Готовую питательную дифференциальную среду в чашках Летри хранить в защищенном от света месте при температуре (5 ± 3) ®С не более двух неде ль.

Д.9.2 Приготовление азидной среды Сланеца-Бертли (модификация)

Сухой питательный агар в количестве, указанном производителем, и 4 г калия фосфорнокислого однозаме-щенного расплавляют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды. Разливают в термостойкие емкости и стерилизуют при температуре (120 2 2) 'С а течение 20 мин.

Перед применением в расплавленную и слегка остуженную основу среды из расчета на 100 см3 добавляют 2 см3 дрожжевого экстракта. 1 г глюкозы. 0.04 газида натрия и 1 см31 %-ного водного раствора 2,-3,-5-трифенилтет-разолий хлорида (ТТХ). Тщательно перемешивают, устанавливают pH раствора 7,1 и разливают вчашки Петри слоем толщиной 0,5 см. Готовую среду а чашках Петри хранить в защищенном от света месте при температуре (5 ± 3) *С не более двух недель.

Примечание — Азид натрия — высокотоксичноеимутагенноевещестао. При работесним должны применяться средства защиты органов дыхания. Азидсодержащие среды не должны смешиваться с сильными кислотами во избежание образования токсичных компонентов. Растворы, содержащие азид натрия, могут образовывать взрывоопасные компоненты при контакте с металлическими трубопроводами.

Д.9.3 Приготовление солевого агара с ТТХ для подтверждения наличия энтерококков

Сухой питательный агар в количестве, указанном производителем, и 65 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 1000ем3 дистиллирован ной воды, после чего разливают мерно втермостой кие емкости и стерилизуют при температуре (120 1 2) *С а течение 20 мин.

Перед применением в расплавленную основу среды из расчета на 100 смэ добавляют 1 г глюкозы. 2 см3 дрожжевого экстракта или другого дрожжевого препарата. 1 см3 водного 1 %-ного раствора ТТХ. Тщательно перемешивают и разливают вчашки Петри. Готовую среду в чашках Петри хранят в защищенном от света месте при (5 э 3) ’С не более двух недель.

Д.9.4 Приготовление желчь-эскулин-азидного агара

Компоненты среды приведены в таблице Д.1.

Таблица Д.1

Коыпоиенты среды

Масса (объем)

Трилтон, Г

17.0

Пептон, г

3.0

Дрожжевой экстракт, см3

5.0

Дегидратированная желчь, г

10.0

Хлорид натрия, г

5.0

Цитрат аммония-железа {III}, г

0.5

Эскулин,г

1.0

Азид натрия, г

0.15

Агар (в зависимости от инструкций производителя), г

От 6 до 16

Вода дистиллированная, см3

Доводится до 1000

Составляющие растворяют в воде при кипячении и стерилизуют при температуре (121 2 1) 'С а течение 15 мин. pH раствора после стерилизации (при температуре 25 ®С>— (7.1 : 0.1). Среду охлаждают, медленно выливают в стерильные чашки Петри слоем 3—5 мм и оставляют для остывания на горизонтальной поверхности.

Срок хранения готовой среды в темноте — не более двух недель при температуре (5 2 3) *С.

Д.9.5 Приготовление растворов для разведений

Д.9.5.1 Приготовление солевого (физиологического) раствора

8.5    г хлорида натрия растворяют а 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают pH рвствора. равное (7.0 ± 0.1). Раствор разливают в термостойкие емкости и стерилизуют при температуре (120 ± 2) ®С в течение 15 мин. После стерилизации при необходимости корректируют pH рвствора: значение pH раствора должно быть (7.0 ± 0.1).

Срок хранения растворе ори температуре (23 ± 2) *С — не более 1 мес.

Д.9.5.2 Приготовление лептонного раствора

1 г пептона растворяют при кипячении в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают pH раствора. Значение pH должно быть равно (7.0 ± 0.1). Раствор стерилизуют при температуре {120 * 2) ‘С в течение 20 мин. После стерилизации при необходимости корректируют pH раствора: значение pH раствора должно быть (7.0 х 0.1).

Срок хранения раствора при температуре (23 ± 2) *С— не более 1 мес.

Д.9.5.3 Приготовление пелтонио-солевого раствора

8.5    г хлориде натрия и 1 г пептона растворяют при кипячении в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают pH рвствора. Значение pH должно быть равно (7.0 ± 0.1). Стерилизуют при температуре (120 х 2) *С в течение 20 мин. После стерилизации при необходимости корректируют pH растворе: значение pH раствора должно быть (7.0 ± 0.1).

Срок хранения раствора при температуре (23 х 2) *С — не более 1 мес.

Д.10 Минеральная среда Бонде

Компоненты среды приведены в таблице Д.2.

Таблица Д.2

Компоненты

Масса (объем)

Натрий лимоннокислый трехэамещенный. г

28

Натрий аммоний фосфорнокислый, г

15

Калий фосфорнокислый однозвмещенный. г

10

Магний сернокислый (сульфат магния), г

2

Вода дистиллированная, см3

1000

Ингредиенты растворяют при нагревании, стерилизуют при 1 втм. 20 мин. Перед посевом добавляют 5 см3 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового на 100 см3 среды.

Д.11 Среда Блеск

100 см3 питательного агара, стерильного, приготовленного из сухого препарата по рецептуре на этикетке, расплавляют на водяной бане. После охлаждения до температуры (45—50) 'С добавляют 0.3 г L-аргинина. 8 см310 %-ного водного раствора трифенилтетрвзолий хлорида (ТТХ). 10 см3 стерильного обезжиренного теплого молока, тщательно перемешивают и разливают а чашки слоем не менее 25 см3.

Д.12 Магниевая среда накопления в экспедиционной модификации

Предварительно готовят навески всех ингредиентов среды в расфасованном виде, которые затем вносят е исследуемую воду в соответствии с рецептурой, указанной в таблице Д.З:

Таблице Д.З

Компоненты среды

Массе (объем) компонентов

при объеме исследуемой пробы воды:

S00 СМ3

100 см*

Магний хлористый кристаллический, г

19.5

3.9

Натрий хлористый, г

4.0

0.8

Калий фосфорно-кислый однозвмещенный безводный, г

0.8

0.16

Ю %-ный раствор пептона, см3

25.0

5.0

Дрожжевой экстракт, см3

11.0

2.5

Бриллиантовый зеленый 0.1 %-ный водный раствор, см3

2.5

0.5

Каждую навеску ингредиента вносят» исследуемый объем водыпоодному. сразу после полного растворения предыдущего. Далее добавляют 10 %-ный раствор пептона, дрожжевой экстракт и 0.1 %-ный раствор бриллиантового зеленого в соответствии с рецептурой.

Допускается использование стерильных емкостей, в которые в условиях стационврной лаборатории внесены сухие ингредиенты. Срок хранения не более 7 сут.

Д.13 Приготовление дрожжевого экстракта

1000 г прессованных (пекарских) дрожжей распределяют равномерно в 2000 см3 дистиллированной воды, прогревают в автоклаве при 100 *С 30 мин. отстаивают в холодильникеота добсут. Нвдосадочную жидкость разливают во флаконы объемом S0 и 100 см3, прибавляют на каждые 100 смэ экстракта 1.23 см3 0.01 %-го водного раствора кристаллического фиолетового, вновь прогревают при 100 *С 30 мин. Хранят экстракт в холодильнике.

Применяют также сухой дрожжевой экстракт промышленного производства (в соответствии с инструкцией производителя).

Д.14 Висмут-сульфит агар

Готовят из сухого препарата промышленного производства по указанию на этикетке.

Д.15 Селенитовый бульон для выделения патогенных энтеробактерий

Готовят из сухого препарата промышленного согласно инструкции, указанной производителем на этикетке, с соблюдением срока реализации среды.

Для приготовления селенитового бульона двойной концентрации увеличивают навеску сухого препарата в два раза на тот же объем дистиллированной воды.

Д.16 Приготовление разбавлений

Для посева объемов воды, меньших чем 1 см3, используют разбавления анализируемой воды. Перед посевом растворы для разбавления разливают по 9 см3 в пробирки с соблюдением правил стерильности. Затем в первую пробирку с 9 см3 раствора вносят 1 см3 анализируемой воды. При этом пипетка не должна быть опущена ниже поверхности воды, чтобы избежать смывания бактерий с наружной стороны. Другой стерильной пипеткой продуванием воздуха тщательно перемешивают содержимое пробирки, отбирают из нее 1 см3 и переносят в чашку Петри, что будет соответствовать посеву 0.1 см3 анализируемой воды. При необходимости посева меньших объемов этой же пипеткой переносят 1 см3 содержимого первой пробирки в следующую пробирку с 9 см3 раствора для разбавления. Другой стерильной пипеткой делают посев 1 см3 из второй пробирки, что будет соответствовать посеву 0.01 сманализируемой воды. В случвях высокого уровня загрязнения воды разбавление продолжают аналогично, каждый раз меняя пипетку.

Время от момента приготовления разбавлений и их использования не должно превышать 30 мин.

Подготовка мембранных фильтров и фильтровального аппарата

Е.1 Подготовку мембранных фильтров, разрешенных к применению в соответствии с 6.1.6. проводят в соответствии с рекомендациями производителя. Если производитель поставляет нестерильные фильтры, их стерилизуют до начала исследований. После стерилизации фильтры используют «ех tempore* (тотчас) или высушивают в асептических условиях и упаковывают стерильно в чешки Петри или стерильные пакеты. Срок хранения фильтров стерилизованных в лаборатории — 10 дней.

Перед началом проведения анализа стерильные сухие фильтры смачивают в стерильной дистиллированной воде, накладывая стерильным пинцетом отдельно каждый фильтр на поверхность воды, налитой в стерильную чашку Петри.

Е.2 воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным 96 %-ным спиртом ректификованным по ГОСТ 16300. ифлвмбируют. После сгорания спирте и охлаждения воронку снимают, в на столик фильтровального аппарата кладут фламбироввнным пинцетом стерильный мембранный фильтр и снова присоединяют фильтровальную воронку. (При использовании одноразовых стерильных фильтровальных аппаратов процедуры по стерилизации фильтровального аппарата не проводят).

в воронку аппарата для фильтрования наливают отмеренный объем воды, затем создают разрежение и отфильтровывают содержимое воронки.

После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фпвмбированным пинцетом и переносят его. не поворачивая, на дифференциальную питательную среду согласно видовой принадлежности микроорганизмов, разлитую в чашки Петри, добиваясь отсутствия пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими не ней бактериями должна быть обращена вверх.

При фильтровании 1 смэ пробы воды в воронку до внесения проб воды добавляют от Л до 5 см3 стерильного физиологического раствора, чтобы обеспечить равномерное распределение бактерий на поверхности фильтра.

При посеве нескольких объемов из одной пробы воды фильтрование проводят через один фильтровальный аппарат без повторной стерилизации фламбированием. а первую очередь фильтруют меньшие, а затем большие объемы воды, испольэуядля каждого объема отдельный фильтр. Перед фильтрованием новой пробы аппарат стерилизуют фламбированием.

УДК 629.4.018:629.4.082    МКС 45.040    ОКП318000

Ключевые слова: железнодорожный подвижной состав, методы гигиенической оиенки. система во* доснабжения. санитарно-микробиологические показатели, санитарно-химические показатели

Редактор В.А Сиволапое Технический редактор В Н. Прусакова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная еерстка А.Н. Золотаревой

Сдамо а набор 18.0S.2016. Подписано е печать Об.Ов.2016. Формат 60*84Гарнитура Ариел. Уел. леч. л. 4.18.

Уч.-иад. п. 3.79 Тираж 34 экэ Зах. 1406 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. www.90stinfo.1u    

На территории Российской Федерации утратил силу, действует ГОСТ Р 55878—2013 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия.

8 Российской Федерации действуют Федеральный закон «Об обеспечении единства измерений» № 102-ФЗ от 26 июня 2008 года, правила по метрологии ПР 50.2.006—64 «Государственная система обеспечения единства измерений. Порядок проведения поверки средств измерений» и ГОСТ Р 8.568—97 «Государственная система обеспечения единства измерений. Аттестация испытательного оборудования. Основные положения».

Не территории Российской Федерации обращение медицинских изделий (в том числе наборов реагентов и сред питательных микробиологических) включает государственную регистрацию, подтверждение соответствий, а также применение на основе технической документации производителя в соответствии с Федеральным законом «Об основах охраны здоровья граждан а Российской Федерации» № 323-ФЗ от 21.11.2011 г. (статья 38. пункты 3. 4.10).

В Российской Федерации могут применяться методики количественного химического анализа вод. аттестованные в соответствии с требованиями Федерального закона от 26.06.2008 № 102-ФЗ «Об обеспечении единства измерений» (статья 5) и ГОСТ Р 8.663—2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений», а также методики, утвержденные Министерством здравоохранения Российской Федерации.

Условия хранения_

Пробы доставил (ФИО. должность)_

Пробы принял (ФИО. должность)_

Для Российской Федерации соответствует МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. Методические указания».

Все химические реактивы должны соответствовать квалификации не ниже ч. д. а. («чистые для анализе).

На территории Российской Федерации утратил силу, действует ГОСТ Р 55878—2013 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия.

' Температура инкубации Pseudomonas fluorescens в диапазоне от 25 'С до 26 'С.