База ГОСТовallgosts.ru » 07. МАТЕМАТИКА. ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ » 07.100. Микробиология

ГОСТ ISO 16649-1-2015 Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia сoli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида

Обозначение: ГОСТ ISO 16649-1-2015
Наименование: Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia сoli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида
Статус: Действует

Дата введения: 07/01/2017
Дата отмены: -
Заменен на: -
Код ОКС: 07.100.30
Скачать PDF: ГОСТ ISO 16649-1-2015 Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia сoli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида.pdf
Скачать Word:ГОСТ ISO 16649-1-2015 Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia сoli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида.doc


Текст ГОСТ ISO 16649-1-2015 Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia сoli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ГОСТ

ISO 16649-1-2015

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ

И КОРМОВ

Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia со//(кишечная палочка)

Часть 1

Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-6ром-4-хлор-3-индолил

бета-О-глюкуронида

(ISO 16649-1:2001, ЮТ)

Издание официальное

Москва

Стенда ртинформ 2016

ГОСТ ISO 16649-1—2015

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ)на основе собственного перевода на русский языканглояэычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2    ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 30 января 2015 г. N9 74-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК <ИСО Э1вв>004-97

Код ораны

по МК (ИСО 31S6) 004-97

Сокращенное наименование национального органа ло стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдове

МО

М олдова-Ста нда рт

Россия

RU

Росстандврт

Таджикиствн

TJ

Твджикствндарт

Узбекистан

UZ

Узстандарг

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 августа 2016 г. № 944-ст межгосударственный стандарт ГОСТ IS0 16649-1—2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту IS016649-1:2001 «Микробиология пищевых продуктови кормов дляживотных. Горизонтальный метод подсчета бвта-глюкуронидаза-поло-жительных Escherichia со// (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 X с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-0-глюкуронида» («Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of в-glucuronidase-positive Escherichia coli—Part 1: Colony-count technique at 44 *C using membranes and 5-bromo-4-chloro-3*indolyl p-D-glucuronide». IDT).

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 «Микробиология» Техничесхогокомите-та по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместоссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

ГОСТ ISO 16649-1—2015

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ. 2016

8 Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

in

ГОСТ ISO 16649-1—2015

Введение

Международный стандарт ISO 16649 состоит из следующих частей под общим наименованием «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаэа-положительных Escherichia со//(кишечная палочка)»:

•    часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44 вС с применением мембран и 5-бром-4-хлор-З-индол ил бета-0-глюкуронида;

•    часть 2. Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением 5-бром-4-хлор-3-ин-долил бета-О-глюкуронида;

•    часть 3. Метод наиболее вероятного числа с применением 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-О-глюкуронида.

Ввиду большого разнообразия пищевой продукции и кормов данный горизонтальный метод может не подходить во всех отношениях к определенным продуктам. В этом случае могут использоваться другие методы, являющиеся специфическими для этих продуктов, если это абсолютно необходимо с точки зрения обоснованных технических причин. Тем не менее необходимо предпринять все усилия, чтобы применить данный горизонтальный метод.

Во время следующего пересмотра настоящего стандарта будет учитываться вся информация, имеющаяся на тот момент, в отношении степени соблюдения данного горизонтального метода, а также причины отклонений от этого метода для определенных продуктов.

Гармонизация методов испытаний не может быть немедленной, и для определенных групп продуктов уже могут существовать международные стандарты и (или) национальные стандарты, которые не соответствуют данному горизонтальному методу. Надеемся, что во время пересмотра эти стандарты будут изменяться для обеспечения соответствия настоящему стандарту: в результате останутся только теотклонвнияот данного горизонтального метода, нвобходимостькоторых будет оправдана обоснованными техническими причинами.

В настоящем стандарте описаны два горизонтальных метода (ISO 16649-1 и ISO 16649-2) для подсчета бета-глюкуронидаэа-лоложительных Escherichia coli (кишечная палочка).

Пользователь может выбрать либо ISO 16649-1. либо ISO 16649-2. Каждая часть предназначена для общего применения. Однако необходимо использовать ISO 16649-1 для пищевой продукции, которая может содержать микроорганизмы, подвергшиеся шоковому воздействию.

IV

ГОСТ ISO 16649-1—2015

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И КОРМОВ

Горизонтальный метод подсчета бота-гтохуронида за-положительных Escherichia coli (кишечная палочка)

Часть 1

Методика подсчета колоний при температуре 44 °С с применением мембран и 5-бром-4-хлор*3-индолил бета-О-глюкуронида

Microbiology of food end enlmei feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of {^-glucuronidase-positive Escherichia coU. Peru. Colony-count technique at 44 *C using membranes end 5-bromo-4-chloro-3-mdolyl

p-O-glucuronlde

Дате введения — 2017—07—01

1    Область применения

8 настоящем стандарте приводится горизонтальный метод подсчета бета-глюку ронидаэа-поло-жительных Escherichia coii в продуктах, предназначенных для потребления человеком в пищу, или в кормах для животных. В нем используется методика подсчета колоний после восстановления, с использованием мембран и инкубации при температуре 44 вС на плотной питательной среде, содержащей хромогенный компонент для обнаружения фермента бета-глюкуронидазы.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Штаммы Escherichia со//, которые не растут при температуре 44 *С, в частности бета-глюкуронидаза-отрицательные, такие как Escherichia coli 0157, не будут обнаружены.

2    Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Preparation of test samples, initial suspension and dedmaldilutions for microbiological examination. Parti: General rules forthe preparation of the initial suspension and dedmaldilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 7218:2007 Microbiology of food and animal feeding stuffs. General rules for microbiological examinations. (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

3    Термины и определения

8 настоящем стандарте применены следующие термины ссоответствующими определениями:

3.1 бета-глюкуронидаза-положительные Escherichia со//((^glucuronidase-positive Escherichia coli): Бактерии, которые при температуре 44 *С образуют типичные колонии синего цвета на среде с триптоном. солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ) в условиях, описанных в настоящем стандарте.

Издание официальное

1

ГОСТ ISO 16649-1—2015

3.2 подсчет бета-глюкуронидаза-положительиых Escherichia coll (enumeration of ({•glucuronidase-positive Escherichia со//): Определение количестеа колониеобраэующих единиц (КОЕ) бета-глюкуромидаэа-положительных Escherichia со//на кубический сантиметр или грамм образца, когда испытание и вычисления проводятся в соответствии с настоящим стандартом.

4    Сущность метода

4.1    Заданное количество исследуемого образца или исходной суспензии засевают на целлюлозные мембраны, выложенные на модифицированном минеральном агаре с глутаматом натрия (MMGA), и затем инкубируют при (37 ± 1)вСе течение 4 ч.

При таких же условиях, используя десятичные разведения исследуемого образца или исходной суспензии, засевают по две чашки Петри для каждого разведения.

4.2    Для получения изолированных колоний микроорганизмов, мембраны после стадии восстановления на MMGA агаре переносят на агар с триптоном. солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ).аэатем инкубируют при температуре (44 ± 1)вС в течение 18—24 ч.

4.3    Количество колониеобразующих единиц (КОЕ) бета-глюкуронидаэа-лоложительных Escherichia со// на грамм или кубический сантиметр образца вычисляют исходя из количества типичных колоний (КОЕ) (см. пункт 10).

5    Разбавитель и питательная среда

См. действующую лабораторную практику в ISO 7218.

5.1    Разбавитель

См. ISO 6887-1 или соответствующий стандарт, касающийся исследуемого продукта.

5.2    Питательная среда

5.2.1    Среда для восстановления: модифицированный минеральный агар с глутаматом натрия (MMGA).

5.2.1.1    Состав

Глутамат натрия

6.35 г

Лактоза

10.0 Г

Формиат натрия

0.25 Г

Ь(-ЬЦистин

0.02 г

(.•(-)-Аспарагиковая кислота

0.02 г

!.-{+)• Аргинин

0,024 г

Тиамин

0.001 г

Никотиновая кислота

0.001 г

Пантотеновая кислота

0.001 г

Гелтагидрат сульфата магния (MgSOj ■ 7Н?0)

0,100 г

Железоаммониевый (III) цитрат4'

0,010 г

Дигидрат кальция хлорид (СаСЬ 2НгО)

0.010 г

Калий фосфорнокислый двузамещенный (КгНР04)

0.900 г

Хлорид аммония

2.5 г

Агар

от 9 до 18 г®'

Вода

1000 см5

Содержание железа не менее 15 % {массовая доля). ь> В зависимости от прочности агарового геля.

Примечание — Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригодными для микробиологических исследований.

2

ГОСТ ISO 16649-1—2015

5.2.1.2    Подготовка

Растворить хлорид аммония в воде. Добавить другие компоненты и нагреть до кипения. При необходимости отрегулировать pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6.7 ± 0.2) при температуре25°С. Разлить по 500см1 в подходящие флаконы (6.10). Провести стерилизацию в автоклаве (6.1) при температуре 115 *С в течение 10 мин.

5.2.1.3    Подготовка чашек Петри с агаром

Вливают 12—15см3средывстврильные чашки Петри (6.11)и дают застыть. Подсушивают чашки с агаром (см. ISO 7218). Чашки можно хранить при температуре (3 ± 2) вС в течение пяти дней.

Поверхность агара должна быть достаточно сухой, чтобы позволить излишней влаге исчезнуть в течение 15 мин после распределения инокулята (1 см3).

5.2.2 Селективная среда: среда с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ)

5.2.2.1 Состав

Ферментативный гидролизат казеина

20.0 г

Соли желчных кислот № 3

1,5 Г

5-Бром-4-хлор-3-икдолил-бета-0-глюкуроиовая кислота (ВСЮ)

144 мкмоль®'

Диметилсульфоксид (DMSO)bl

3 см3

Агар

от 9 до 18 гл)

Вода

1000 см3

*' Например. 0.075 г соли циклогексилвммония.

*’ Диметилсульфоксид вреден при вдыхании и контакте. При работе с

ним рекомендуется использовать

вытяжной шкаф, в виду токсичности можно использовать рекомендованный изготовителем разбавитель.

’ В зависимости от прочности агарового геля.

Примечание — Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригод-

ными для микробиологических исследований.

5.2.2.2    Подготовка

Растворяют ВСЮ в диметилсульфоксиде или в рекомендованном изготовителем разбавителе. Растворяют все компоненты в воде и нагревают до кипения.

При необходимости отрегулировать pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7.210.2) при температуре 25 *С. Разливают по 500 см3 в подходящие флаконы (6.10). Проводят стерилизацию в автоклаве (6.1), при температуре 121 вС в течение 15 мин.

5.2.2.3    Подготовка чашек Петри

Производят действия, приведенные в 5.2.1.3.

6 Оборудование и стеклянная посуда

Обычное микробиологическое лабораторное оборудование (см. ISO 7218).

6.1    Устройство для суховоадушной стерилизации (сухожаровой шкаф) или стерилизации паром (автоклав).

6.2    Инкубаторы, способные поддерживать температуру (37 ± 1)вСи(44 ± 1)*С.

6.3    Шкаф сушильный или вентилируемая печь, способные поддерживать температуру от (25 ± 1) вС до (5011) *С. или ламинарный шкаф с потоком воздуха.

6.4    Холодильник (для хранения готовых сред), способный поддерживать температуру (3 ± 2) *С.

6.5    Мембраны стерильные и неингибирующие, произведенные из ацетилцеллюлозы или смешанных эфиров целлюлозы, с размером пор от 0.45 до 1.2 мкм и диаметром 85 мм.

6.6    Щипцы тупоконечные, стерильные, длиной приблизительно 12 см.

6.7    pH-метр. способный проводить измерения с точностью до ±0,1 ед.рН.

Минимальный порог измерения должен составлять 0.01 ед. pH. pH-метр должен быть оснащен устройством либо ручного, либо автоматического выравнивания температуры.

6.8    Пипетки с одной меткой (выдувные), номинальной вместимостью 1 см3, с ценой деления 0.1 см3.

6.9    Цилиндры мерные необходимой вместимости для приготовления сред.

6.10    Пробирки, бутылки или колбы необходимой вместимости для стерилизации и хранения питательных сред.

з

ГОСТ ISO 16649-1—2015

6.11    Чашки Петри, диаметром приблизительно 90 мм.

6.12    Шпатели иэстекла или пластика; например изогнутые стеклянные палочки диаметром 3.5 мм и длиной 20 см сизгибом под прямым углом на расстояниилримерноЗсмотодногокраяисотрезанными концами, запаянные посредством нагревания.

7    Отбор проб

Очень важно, чтобы лаборатория получила представительную, не поврежденную, и не измененную во время транспортировки или хранения пробу.

Отбор проб не является частью метода, описанного в настоящем стандарте. Если соответствующий стандарт отсутствует, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны пришли к определенному соглашению по данному вопросу.

8    Подготовка анализируемой пробы

Подготавливают анализируемую пробу в соответствии со стандартом, подходящим для рассматриваемого продукта. Если соответствующий стандарт отсутствует, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны пришли колределенному соглашению поданному вопросу.

9    Методика

9.1    Исследуемая часть пробы, исходная суспензия и разведения

См. ISO 6887-1 и любой соответствующий стандарт, подходящий для рассматриваемого продукта.

9.2    восстановление

9.2.1    В асептических условиях, используя стерильные щипцы (6.6). помещают мембрану (6.5) на сухую поверхность питательной среды MMGA каждой из двух подготовленных чашек Петри (согласно 5.2.1.3), принимая меры по предотвращению образования пузырьков воздуха под мембранами. При необходимости аккуратно разглаживают мембраны стерильным шпателем (6.12).

Используя стерильную пипетку (6.8), добавляют 1 см3 исследуемой пробы или исходной суспензии е центр каждой мембраны. Используя стерильный шпатель, равномерно распределяют инокулят по всей поверхности мембраны, избегая утечки за ее пределы.

9.2.2    При необходимости повторяют процедуру, как описано в 9.2.1. с последующими десятичными разведениями, используя другую стерильную пипетку и другой стерильный шпатель для каждого разведения.

9.2.3    Оставляют засеянные чашки Петри в горизонтальном положении при комнатной температуре приблизительно на 15 мин. пока инокулят не просочится через мембрану в агар. Инкубируют чашки с посевами в течение (4 ± 1)ч в инкубаторе (6.2) при температуре (37 ± 1)*С в таком положении, чтобы поверхность мембраны/агара находилась сверху.

9.3    Перемещение на селективную среду и инкубация

9.3.1    После восстановления, используя стерильные щипцы (6.6). переместить мембраны со среды MMGA (среда для восстановления) на чашки Петри со средой ТВХ (5.2.2.3).

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — влажная мембрана прилипает к поверхности агара. Избегайте образования пузырьков воздуха. Не используйте шпатель.

9.3.2    Инкубируют чашки Петри в течение 18—24 ч в инкубаторе (6.2), при температуре (44 ± 1 )*С. в таком положении, чтобы поверхность мембраны/агара находилась сверху. Не укладывать друг на друга более трех чашек.

9.4    Подсчет колоний (КОЕ)

После заданного периода инкубации (9.3.2) подсчитывают колонии (КОЕ) бета-глюкуронида-за-положительных Escherichia coli в каждой чашке, содержащей менее 150 типичных колоний (КОЕ) и менее 300 общих (типичных и нетипичных) колоний (КОЕ).

Чашки, не содержащие типичных колоний (КОЕ), должны быть учтены при вычислениях, приведенных в пункте 10.

ГОСТ ISO 16649-1—2015

10 Обработка результатов

10.1    Общие положения

8 ходе вычисления, приведенного в 10.2. принимаются во внимание случаи, наиболее часто встречающиеся при проведении испытаний в соответствии с надлежащей лабораторной практикой.

Могут возникнуть некоторые особые, маловероятные случаи (например, сильно отличающиеся количества колоний (КОЕ) между двумя чашками из одного разведения или пропорции, сильно отличающиеся от пропорции коэффициента разведения между чашками из двух последовательных разведений). В таком случае результаты подсчета должны быть переданы компетентному микробиологу для изучения, толкования и возможного отклонения.

10.2    Подсчет колоний

Для того чтобы результат был достоверным, как правило, необходимо подсчитать количество типичных колоний (КОЕ), по крайней мере в одной чашке, содержащей не менее 15 типичных колоний (КОЕ).

Рассчитывают N количество колоний (КОЕ) бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli. присутствующих в исследуемой пробе, на кубический сантиметр или на грамм как средневзвешенное для двух последовательных разведений, используя следующую формулу

У(л, *0.irt2)d'

где£а — сумма колоний КОЕ. подсчитанных на всехчашках. выбранных для подсчета из двух последовательных разведений, хотя бы одна из которых содержит не менее 15 типичных колоний (КОЕ);

V — объем инокулята, внесенного в каждую чашку, см3: о, — количество чашек, выбранных для подсчета из первого разведения; пг — количество чашек, выбранных для подсчета из второго разведения; d — коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению [d- 1.если исследовался нераэведенный жидкий продукт].

Округляют результаты до двух значащих цифр (см. ISO 7218).

За результат принимают количество бета-глюкуронидаза-лоложительных Escherichia со// на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), выраженное как целое число, округленное до двух значащих цифр (если ниже 100), или как число между 1.0 и 9.9. умноженное на 10 в соответствующей степени.

10.3 Расчет малых количеств

10.3.1 Если в двух чашках (с исследуемой пробой (жидкие продукты) или исходной суспензией (другие продукты) или первым засеянным разведением] содержится менее 15 типичных колоний (КОЕ), следует рассчитать Ы£, количество колоний (КОЕ) бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli. присутствующих в исследуемой пробе, как среднеарифметическое значение для двух параллельных чашек, используя следующую формулу

- I»

Vn-б

(2)

где У с — сумма типичных колоний КОЕ. подсчитанных на двух чашках;

V— объем инокулята, внесенного в каждую чашку, см3; п — количество анализируемых чашек (л = 2 в данном случае);

d — коэффициент разведения, соответствующий первому выбранному разведению [of = 1 в случае (жидкие продукты), когда исследовался неразведенный жидкий продукт].

Округляют результаты до двух значащих цифр (см. ISO 7218). Выражают результаты следующим образом;

• рассчитанное количество бета-глюкуронидаэа-лоложитепьных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты) Ne - Y.

S

ГОСТ ISO 16649-1—2015

10.3.2    Если в двух чашках [с исследуемой пробой (жидкие продукты} или исходной суспензией (другие продукты) или первым засеянным разведением) не содержатся типичные колонии КОЕ. выражают результаты следующим образом:

•    менее 1/d бета-глюкуронидаза-попожительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d — коэффициент разведения исходной суспензии или первого засеянного разведения [о! = 1. если исследовался неразделенный жидкий продукт].

10.3.3    Если для двух чашек с посевами из первого разведения d, общее количество типичных и нетипичных колоний (КОЕ) превышает 300 с видимыми типичными колониями (КОЕ) и если для двух чашек с посевами из последующего разведения d2. содержащих менее 300 колоний, не могут быть подсчитаны типичные колоний (КОЕ), результат выражают следующим образом:

-    менее 1/d2 и более 1/d, бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d, и d2 — коэффициенты разведения, соответствующие первому и второму выбранным разведениям.

10.3.4    Если для двух чашек с посевами из первого разведения d, общее количество типичных и нетипичных колоний (КОЕ) превышает 300 без видимых типичных колоний (КОЕ)и если для двух чашек с посевами из последующего разведения d2. содержащих менее 300 колоний, не могут быть подсчитаны типичные колонии (КОЕ), выражают результаты следующим образом:

-    менее 1/d2 колоний (КОЕ) бета-глюкуронидаэа-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d2 — коэффициент разведения, соответствующий второму разведению.

10.4    Метод подсчета

10.4.1    В случае, когда количество типичных колоний (КОЕ) превышает 150 для двух чашек с посевами из первого разведения d,. а количество типичных колоний (КОЕ) для двух чашекс посевами из последующего разведения d2 не превышает 15:

•    если количество типичных колоний (КОЕ) в каждой из двух чашек с посевами из разведения d, находится в диапазоне от 167 до 150 (верхняя часть доверительного интервала средневзвешенного значения равного 150 КОЕ), следует использовать метод расчета для общего случая (10.2);

-    если количество типичных колоний (КОЕ) вкаждой из двух чашек из разведения d, превышает 167 (верхний предел доверительного интервала средневзвешенного значения равного 150 КОЕ), следует принять во внимание только результат подсчетов разведения d2 и произвести подсчет малых коли* честв(Ю.З).

10.4.2    Если в ходе подсчета типичных колоний (КОЕ) в каждой чашке из всех засеянных разведений получено число, превышающее 150. выражают результат следующим образом:

-    более 150/d КОЕ бета-глюкуроиидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр (жидкие продукты) или на грамм (другие продукты), где d— коэффициент разведения, соответствующий последнему выбранному разведению.

10.4.3    Если только в двух чашках с посевами из наименьшего разведения (самая высокая концентрация) содержится менее 150 типичных колоний КОЕ. следует рассчитать количество N бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli, присутствующих в исследуемой пробе, как среднеарифметическое число колоний, подсчитанных в двух чашках, используя следующее уравнение

. 1с

-п-of'

(3)

где£с — сумма типичных колоний (КОЕ), подсчитанныхв двух чашках, водной из которых содержится не менее 15 типичных колоний (КОЕ);

V — объем инокулята, внесенного в каждую чашку, см3:

л — количество анализируемых чашек (п = 2 в данном случае);

d — коэффициент разведения, соответствующий выбранному разведению.

Округляют результаты до двух значащих цифр после запятой (см. ISO 7216).

10.5 Границы доверительного интервала

См. ISO 7218.

6

ГОСТ ISO 16649-1—2015

11 Протокол испытания

8 протоколе испытания необходимо указать:

•    асю информацию, необходимую для полной идентификации пробы:

•    использованный метод отбора проб, если известен;

•    использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

. все рабочие детали, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с деталями обо всех особых случаях, которые могли оказать влияние на результат(ы);

•    полученный(ые) результат(ы), четко указывающий(ие) на использованный для его выражения метод;

•    окончательный результат с учетом повторяемости, если она оценивалась.

7

ГОСТ ISO 16649-1—2015

Приложение ДА (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам

Таблице ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта

Степень с оо тест стоив

Обозначение и наименование соответствующего меж государственного стандарта

ISO 6887-1:1999

_

ISO 7218:2007

ют

ГОСТ ISO 7218—2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования к выполнению микробиологических исследований»

* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать официальный перевод не русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов. Для кормов рекомендуется использовать ГОСТ Р 51426—99.

Примечание — В настоящей таблице ветствия стандарта:

• ЮТ — идентичный стандарт.

использовано следующее условное обозначение степени соот-

8

ГОСТ ISO 16649-1—2015

Библиография

[1]    BLA2KO N. Evaluation of the |t-glucuronidese substrate 5-t>romo-4-chloro-3-indolyl-|VD-glucuronide in a 24 hour dreci plating method for Escherichia coir. J. Food Protection, SI, p. 402. (БЛАЗКО H. Оценка субстрата 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуронид8 для фермента бета-глюкуронидазы методом прямого 24-часового посева на чашквх Петри для Escherichia cob. J. Food Protection. 51. с. 402)

[2]    Oamare J.M.. Campbell O.F. and Johnson R.W. Simphhed direct plating method for enhanced recovery of Escherichia cob in food. Journal of Food Science. 50. 1985. pp. 1736—1737, 1746 (Двмаре ДЖ. M.. Кэмбелл Д.Ф. и Джонсон P. В. Упрощенный метод прямого посева не чашках Петри для ускоренного восстановления Escherichia col/а пищевых продуктах. Journal of Food Science. 50. 1985 г. с. 1736—1737,1746)

[3]    Dehsle GL.and Ley A. Rapid detection of Escherichia cob In urine samples by a new chromogenic |t-glucuronidese assay. J. Clin. Microbiol.. 27.1989. pp. 778—779 (Делиэл Г. Л. и Ли А. Ускоренное обнаружение Escherichia coll а пробах мочи посредством нового хроыогенного количественного анализа бета-глю-куронидазы. J. Clin. MicroPro/. 27. 1989 г., с. 778—779)

[4]    Killan М. and Bulow Р. Rapid diagnosis of Enterobacteneceae. Detection of bacterial glycosidases. Acte Pathol. Microbiol. Scand.. Sect. 8.84,1976. pp.245—251.{КильянМ.и БулоуЛ. Ускоренная диагностика энтеробактерий. Обнаружение бактериальных глюкозидвз. Acta Pathol. Microbiol. Scand., раздел 8. 84. 1976 г. с. 245—251)

[5]    Killan М. and 8uiow Р. Rapid identification of Enterobacteneceae. Use of a ft-glucuromdase detecting agar medium (PGUA agar) for the identification of Escherichia cob in primary cultures of unne samples. Acta Pathol. Microbiol. Scand.. Sect. B.87.1979. pp. 271—276. (Кильян M. и Булоу П Ускоренная идентификация энтеробактерий. Использование агаризоаанной среды для обнаружения бетв-глюхурокидвзы (агар PGUA) для идентификации Escherichia cob в первичных культурах проб мочи. Acta Pathol. Microbiol. Scand. раздел в. 87. 1979Г.С.271—276)

[6]    Ley A.N.. Bowers R.J. and Wolfe Б. indoxyl-p-D-glucuronide. a novel chromogenic reagent for the specific detection and enumeration of Eschenchia cob in environmental sample. Canadian Journal of Microbiology. 34. 1988. pp. 690—693 (Ли A. H.. Бауэрс P. ДЖ. и УЛЬФ С. Индоксил-бета-О-глюкуронид, новый хромогенный реагент для специфического обнаружения и подсчета Escherichia cob в пробе из окружающей среды. Canadian Journal of Microbiology, 34.1988 г., с. 690—693)

[7]    Manafi М. and Kneifel W. A combined chromogemc-fluorogemc medium for the simultaneous detection of total conforms and E. coll in water. Zentralbl. Hyg.. 189, 1989. pp. 225—234 (Манафи M. и Нифель 8. Комбинированная хромвгенно-флуорогеинвя среда для одновременного обнаружения общего содержания бактерий группы кишечной палочки и Eschenchia cob в воде. ZentralOI. Нуд.. 189, 1989 г., с. 225—234)

(6] Ogden l.D. and Watt A.J. An evaluation of fiuorogemc and chromogenic essays for the direct enumeration of Escherichia cob. Letters in Applied Microbiology. 13. 1991. pp. 212—215 (Огден И. Д. и Ватт А. ДЖ. Оценка флуорогенного и хромогенного анализов для прямого подсчета Escherichia cob. Letters in Applied Microbiology, 13.1991 r.. c. 212—215)

|9] Restalno L.. Frampton E.W. and Lyon R.H. Use of chromogenic substrate S-bromo-4-chtoro-3-indotyl-|t-D-giucuronide (X-GLUC) for enumeration of Escherichia cob on 24 hours from ground beef. J. Food Protection. 53 (6). 1990. pp. 508—510 (Рестэйно Л.. Фрэмлток И. В. и Лайон Р. X. Использование хромогенного субстрате 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-0-глюкуронида (X-GLUC) для подсчета Eschenchia cob в течение 24 ч в говяжьем фарше. J. Food Protection. 53 (6). 1990 г., с. 508—510)

[10] Watkins W.D.. Rippey S.C.. Clavet C.R. Kelly-ReiUD J. and Burkhardt W. Novel compound for identifying Escherichia cob. Appbed EnviromentalMtcrobtology. 54.1988. pp. 1874—1875 (Уоткинс В. Д.. Рипли С. К.. Клв-вет К. Р. Келли-Ритз Д. ДЖ. и Берхард В. Новые соединения для идентификации Eschenchia cob. Appbed Environmental Microbiology. 54. 1988г.с. 1874—1875)

9

ГОСТ ISO 16649-1—2015

УДК 579.67.087.1:006.35    МКС 07.100.30    IDT

Ключевые слова: микробиологий, пищевая продукция, корма, горизонтальный метод, кишечная палочка

Ю

Редактор Н.Н. Могумова Технический редактор в.Н. Прусакова Корректор И. А. Королева Компьютерная верстка И.А. Налеикиной

Сдано в набор 02.09.2016. Подписано о печать 07.09.2016. Формат 60-64Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1.66. Уч.-иэд. л. 1.60. Тираж 36 эка. Зек 2ЮЗ.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано ао ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ». 12399S Москва. Гранатный пер.. 4. www.90stinfb.1u